关键词： 中华鲟   海水适应   生长   生理特性  

摘要： 中华鲟(Acipenser sinensis Gray),大型溯河产卵洄游性鱼类,属于国家一级保护动物。目前,中华鲟的自然繁殖活动已连续三年未监测到,自然资源急剧衰退,而中华鲟全人工繁殖技术的成功,使得不同年龄梯度的中华鲟初具规模,但中华鲟的保种养殖均以淡水为主,长期的淡水环境使中华鲟面临性成熟个体比例低、成熟个体小、繁殖力低、繁殖后代个体质量下降等诸多问题。由于中华鲟的生活史大部分在海水中,海水盐度对其生长发育的影响不容忽视。因此,海水养殖可能是中华鲟迁地保护的必然过程。为了揭示中华鲟幼鱼在自然盐度环境下的适应性和生理特性,以1.5龄中华鲟为试验材料,进行了为期120天的模拟降河与如海洄游试验,包括25天的海水驯化和95天的后续海水(25‰)养殖。在海水驯化过程中取4个时间点(第0、9、17、25天)和海水养殖过程中1个时间点(第120天)进行样品的采集,用于研究海水适应过程中中华鲟幼鱼生长性能、血液学参数、血清生理特征和组织器官结构的适应性变化,旨在获得中华鲟海水保种养殖的基础参数。主要研究结果由以下四部分构成:1.海水驯化和海水养殖过程中中华鲟幼鱼的生长性能在整个实验过程中,个体没有表现出明显的应激反应或异常行为。在海水组(SW)中观察到100%的存活率,而在淡水组(FW)中有一尾鱼死亡,表明人工繁殖的中华鲟具有一定的耐盐性。盐度对饵料系数(FCR)和肥满度(CF)的影响不显著(P>0.05),在海水驯化过程中,中华鲟的体重在海水组和淡水组两组中均逐渐增加,特定生长率在两组间差异不显著(P>0.05),然而,经过大约3个月的海水养殖,两组间的平均重量和特定生长率(SGR)有显著差异(P<0.05)。2.海水驯化和海水养殖过程中中华鲟幼鱼血液学参数的变化盐度对红细胞(RBC)数量的影响不显著(P>0.05)。但经过3个月的海水养殖后,海水组白细胞(WBC)数量明显增加(P<0.05),但淋巴细胞(LY)百分比在两组间的差异无统计学差异(P>0.05)。3.海水驯化和海水养殖过程中中华鲟幼鱼血清生化的变化随着海水盐度的变化,血清渗透压立即升高,在第9天时,血清渗透压首次显著升高,随后保持稳定。海水养殖3个月后,海水组血清渗透压明显高于淡水组(P<0.05)。Na和Cl的血清浓度变化规律和渗透压相似,而Ca和K的血清浓度变化不明显。海水组鱼的血清皮质醇浓度在盐度为9‰时达到最高值,随后下降到淡水水平,并保持在一个相对较低的水平,与随后海水养殖中的淡水组相似。盐度升高的过程中,生长激素(GH)含量没有明显的变化,但在17‰盐度后,海水组的含量增加得更大,并保持高于淡水组的水平在海水驯化过程中,海水组总蛋白(TP)含量逐渐降低,但经过3个月的海水养殖后,其总蛋白含量有所增加且高于淡水组。在整个实验过程中,血清总抗氧化能力(T-AOC)、总超氧化物歧化酶(T-SOD)和免疫球蛋白M(IgM)水平上均表现出相似的变化规律。海水驯化期间,两组间这三个指标水平上无显著性差异,但经过3个月海水养殖后,海水组总抗氧化能力和免疫球蛋白M水平显著性高于淡水组(P<0.05)。于此相反,海水组的总超氧化物歧化酶水平显著性低于淡水组(P<0.05)。4.海水适应过程中中华鲟幼鱼组织器官结构的适应性变化通过组织学观察发现,中华鲟幼鱼海水适应过程中,随着盐度的升高,鳃组织上的鳃小片宽度显著减小(P<0.05),相邻鳃小片间距、泌氯细胞直径显著增加(P<0.05);肾脏组织中的肾小球长径显著减小(P<0.05),同时数量也略有降低;而肠道组织结构未观察到明显的变化;脾脏组织中出现淋巴细胞聚集和黑色素巨噬细胞中心增多;肝脏组织中肝细胞胞质空泡化逐渐增多。

关键词： 中华鲟   青鱼   细胞系   dazl   PGCs   卵巢  

摘要： 鱼类细胞系作为理想的体外研究模型,已经成为鱼类生物学研究不可或缺的工具,各个物种不同组织特异性细胞系的分离将为该物种生理学、毒理学、病毒学、基因功能分析、种质资源保护及转基因等领域研究提供特异的、基础的、低成本的研究材料。中华鲟(Acipenser sinensis)是鲟属鱼类中个体最大,生活纬度最南的江海洄游性鱼类,由于过度捕捞、筑坝、航运和污染等人为活动导致中华鲟数量急剧减少,已濒临灭绝。此外,由于其体型巨大,生长缓慢,性成熟周期长等生物学特性导致其种群难以恢复。目前对中华鲟的研究主要集中在形态学、资源生态学和生殖生物学等方面,而在细胞生物学方面研究较少。建立中华鲟组织细胞系有两个重要原因:第一,在细胞水平上保护中华鲟种质资源,第二,中华鲟组织细胞系可作为体外研究模型,支持中华鲟细胞遗传学和生物学等方面的研究。本研究建立了青鱼(Mylopharyngodon piceus)鳍条及中华鲟精巢、肌肉、皮肤、肝脏、鳍条5种组织细胞系,分别命名为MPF、AST、ASM、ASSK、ASL和ASF。目前,MPF传至81代,5种中华鲟组织细胞系均传代到60代,6种细胞的适宜生长温度为28℃,均生长在含有10%FBS、10 ng/m Lβ-FGF、鱼血清和鱼类胚胎提取液的DMEM全培养基中,生长状态良好,MPF的细胞类型为上皮样细胞,中华鲟细胞类型主要为成纤维样细胞和上皮样细胞。染色体分析结果显示青鱼MPF染色体众数为48,属于正常的二倍体细胞;中华鲟细胞染色体众数为264,为多倍体细胞。MPF细胞系的线粒体16s r RNA序列分析结果与NCBI中青鱼的16s r RNA序列相似度高于99%。中华鲟细胞系的18s r RNA序列分析结果与NCBI中中华鲟的18s r RNA序列相似度也均高于99%,这些结果证明了细胞系的来源;通过脂质体转染法、杆状病毒转导法和电穿孔法测试了MPF、AST和ASM 3种细胞的转染效率:MPF的脂质体转染法和电穿孔法的瞬时转染效率分别为8%和24%;脂质体转染法和杆状病毒转导法对中华鲟细胞无效而电穿孔法有效,击穿电压200 V并且击穿时间10 ms时,对中华鲟细胞损伤最小且瞬时转染效率为15%。另外,利用睡美人转座子系统成功构建了转基因AST和ASM细胞系。对青鱼细胞系MPF,进行了基因表达检测和病毒敏感性分析,结果显示,在MPF细胞中存在干细胞标记因子nanog和oct4的表达,说明MPF可能为青鱼鳍条成体干细胞系;MPF细胞对鲤春病毒血症病毒(SVCV)病毒敏感,能产生病变效应,且SVCV可在MPF细胞中大量增殖。青鱼鳍条细胞系的建立不仅可作为研究青鱼基因功能和病毒致病机制的体外工具,为大型淡水鱼类的研究提供理想的体外模型,或许还可以为鱼类干细胞相关基因的功能研究提供材料。通过建立中华鲟细胞系,在细胞水平上保护了珍稀物种中华鲟的种质资源,通过筛选出中华鲟细胞最优的外源基因导入方法,使中华鲟细胞成为研究中华鲟基因功能的理想体外模型。生殖细胞的发育是生物生长发育、繁殖延续的一个重要且复杂的过程,对生殖细胞增殖分化的分子学机理的研究一直是生命科学的重要课题。Dazl是DAZ家族的重要成员,是生殖细胞的重要标记基因,其在大部分脊椎动物的两性生殖细胞中特异表达,其编码的RNA结合蛋白在生殖细胞的发育和分化过程中发挥着重要作用。青鱼是我国传统的“四大家鱼”之一,其体型大、生长快、口感好且营养价值高,是我国重要的人工养殖品种,但青鱼性成熟周期长,且人工繁殖难度较高。因此对青鱼生殖细胞标记基因dazl的鉴定,为研究青鱼生殖细胞的发育和性腺分化提供重要的工具和参考。本研究通过RACE技术在青鱼中克隆了dazl c DNA,序列全长2013 bp,编码216个氨基酸。蛋白序列比对结果显示,其含有RRM(RNA recognition motif)保守区域和一个DAZ重复序列,青鱼Dazl与斑马鱼(Danio rerio)的Dazl序列相似度最高,为85%。通过构建青鱼Dazl重组表达载体诱导Dazl蛋白并制备了兔抗Dazl多克隆抗体,经过验证Dazl抗体可以特异性的识别青鱼Dazl原核表达蛋白、卵巢组织内源蛋白和真核表达蛋白。在组织中,dazl只在青鱼的性腺中表达,组织原位杂交和免疫荧光结果均表明dazl在青鱼的早期卵母细胞中表达,主要分布在I、II和III期卵母细胞的细胞质中。在胚胎发育过程中,dazl在早期胚胎中表达量较高,随着胚胎的发育表达量逐渐降低,到原肠期几乎检测不到表达。整胚原位杂交结果显示dazl在早期胚胎的各个细胞中均表达。通过Tail-PCR技术扩增出1612 bp的青鱼dazl基因5’侧翼区启动子序列,并构建启动子不同区段的荧光素酶报告系统psi-CHECK-1612、psi-CHECK-938和psi

关键词： 长江鲟   中华鲟   细胞系   TLR1   TLR4   cathelicidin   NK‐lysin   表达模式  

摘要： 中华鲟(Acipenser sinensis)、长江鲟(Acipenser dabryanus)、白鲟(Psephuyrus gladius)是长江流域特有的鲟鱼,其中白鲟已宣告灭绝,中华鲟、长江鲟也处于不同程度的濒危状态。虽然人工繁殖有突破,但随着养殖规模的扩大,中华鲟、长江鲟在养殖过程中主要受到细菌性疾病的困扰,然而我们对抵御这些病原菌的免疫反应所涉及的分子机制知之甚少,也为鲟鱼的保护研究增加了一定的难度。作为国家保护动物,中华鲟、长江鲟资源数量较少,能作为科研用鱼更是有限。细胞系是研究免疫基因和免疫机制的有效途径之一,本研究针对上述问题,首先开展了中华鲟脾脏、肾脏和长江鲟鳍条组织细胞系的建立工作,在此基础上,对长江鲟免疫相关基因TLR1、TLR4和NK-Lysin、cathelicidin两种抗菌肽的克隆与表达模式进行了研究。取得的结果如下:(1)鲟细胞系的建立本研究分离培养了三种鲟组织细胞,能够连续传代,其中中华鲟脾脏组织细胞达到25代、肾脏组织细胞达25代、长江鲟鳍条组织细胞到67代。简要摸索了鲟细胞最适培养条件,其适宜温度为25℃,最佳培养基为M199。细胞的成功培养为后续相关实验开展提供了宝贵的材料,进一步达到保护鲟鱼资源的目的。(2)长江鲟TLR1和TLR的克隆与表达模式TLR(Toll-like receptor,Toll样受体)是硬骨鱼天然免疫系统中一类重要的PRR(pattern recognition receptor,模式识别受体)。然而关于TLRs的信息在最原始物种长江鲟中报道较少。本研究利用RT-PCR和RACE-PCR技术克隆了长江鲟TLR1和TLR4的全长基因。获得的TLR1全长2957bp,编码767个氨基酸,TLR4 c DNA全长2902bp,编码830个氨基酸。TLR1和TLR4都有几个典型的TLRs基序,包括信号肽、富含亮氨酸重复序列(LRR)基序、跨膜结构域和TIR基序。此外,TLR4在其TIR基序中含有3个保守域,参与TLRs信号转导。在TLR4中还发现了一个对识别哺乳动物TLR4的LPS很重要的脯氨酸。并分析了TLR1和TRL4的理化特性。实时荧光定量PCR结果显示,两种转录本均在11种正常组织中普遍表达,但表现出不同的表达模式,其中TLR1在心脏中高表达,TLR4在皮肤中高表达。此外,TLR1和TLR4基因在LPS和Poly I:C刺激后在头肾白细胞中表达上调,表明这两个基因都参与了长江鲟对LPS和Poly I:C的免疫应答,为进一步阐明鱼类TLRs的配体特异性和信号转导途径提供了基础。(3)Cathelicidin、NK-Lysin两种抗菌肽的克隆与表达模式抗菌肽(AMPs)是许多物种天然免疫反应的保守成分。在本研究中,从长江鲟中克隆了两个AMPs(分别为1576和606 bp)的c DNA序列。系统发育分析表明,这两个AMP与其他鱼类的同源蛋白序列聚在一起。NK-Lysin在胚胎发育早期高表达,表明存在母源表达。组织分布分析表明,cathelicidin在肝脏中表达最高,NKLysin在脾脏中表达最高。Poly I:C处理后,cathelicidin在诱导后12小时和24小时表达上调,而在72小时表达下调,NK-Lysin表达增加,在24小时达到高峰。LPS处理后,在6、24、48小时明显上调cathelicidin的表达,在6、12小时显著上调NK-Lysin的表达。这些结果提示,两种AMPs可能参与了Poly I:C或LPS刺激诱导的免疫应答。

摘要： 4月22日,在湖北省宜昌市的长江珍稀鱼类放流点,10000尾大大小小的子二代中华鲟回归长江怀抱,对自然环境中的中华鲟物种资源再做补充。这是自1984年首次放流以来,三峡集团中华鲟研究所连续实施的第62次中华鲟放流活动,也是自2009年首次开展中华鲟子二代放流以来,

关键词： 中华鲟   种群资源   遗传多样性   繁殖策略   增殖放流  

摘要： 中华鲟(Acipenser sinensis Gray，1835)是一种大型的溯河洄游性鱼类，近年来其野生种群数量急剧下降，对该物种的生存造成了严重威胁。特别是葛洲坝、三峡大坝等大型水电工程的修建，显著地改变了下泄江水的流量大小、水位涨落、水温升降等环境要素的自然节律，致使中华鲟繁殖需求的水文条件及产卵场栖息环境等遭到了破坏，再加上电捕等人为活动的影响，中华鲟的繁殖活动受到强烈的抑制。特别是在2013、2015、2017、2018，甚至2019年，葛洲坝下产卵场均未监测到中华鲟自然繁殖，中华鲟的繁殖状况令人担忧。目前，对中华鲟研究主要集中于种群资源调查，以及少数的家系遗传评估及个体生理生化水平工作，缺乏对中华鲟连续长期的遗传学监测研究，其个体繁殖成功率、交配体系等繁殖策略也缺乏研究。本研究采用微卫星、线粒体DNA分析，结合基础生物学资料，系统地对连续多年采集的中华鲟幼鲟样本进行遗传多样性及变化趋势分析，同时推测中华鲟的繁殖群体的动态变化及繁殖策略。此外，本研究还通过微卫星标记和环境DNA技术对中华鲟增殖放流状况及产卵场附近该物种的时空分布及活动特征进行了评估。主要研究结果如下:　　(1)测定了出生于2014年的15尾中华鲟幼鲟线粒体(mtDNA)全基因组，其序列全长为16524bp-16688bp，在不同个体间存在由重复序列差异引起的长度多态性。共检测到8个单倍型，单倍型多样性和核苷酸多样性较高(H:0.8760±0.0035)，π:0.0011±0.0010）。基于线粒体Cytb、COI基因的群体遗传多样性分析显示，2006-2015年度捕获的216尾中华鲟幼鱼的单倍型多样性和核苷酸多样性较低(H:0.392±0.037;π:0.0010±0.0057)。基于20对微卫星(SSR)分子标记对2006-2015年捕获的216尾野生幼鱼进行遗传多样性分析，结果表明，共获得等位基因228个，不同年度种群间的等位基因数量为4.0-9.55，平均值为8.19±1.94;基因型丰度平均值为96.94±0.077;不同年度观测杂合度及期望杂合度普遍高于0.7，表明中华鲟群体整体具有较高的遗传多样性。　　(2)基于20对SSR分子标记对2006-2015年误捕的216尾中华鲟幼鱼进行个体间亲缘关系鉴定，共检测出56对全同胞关系，15对半同胞关系。基于个体间亲缘关系及统计学分析发现，个体间繁殖成功率在2005-2009年，没有稳定性规律性表现，2010-2014年，为均匀性的繁殖成功。此外，同胞关系分析揭示了中华鲟为重复生殖的物种，其生殖间隔为2-6年。半同胞关系结合线粒体基因分析表明，中华鲟在交配制度上为多夫多妻的混交多配制。中华鲟现阶段的繁殖策略有利于维持其种群的遗传多样性。　　(3)依据2006-2015年误捕的中华鲟幼鱼样本，采用微卫星分析的方法，对实际繁殖群体数量(Nc')及有效繁殖群体大小(Nb)和有效群体大小(Ne)进行了估算。结果表明，有效繁殖群体大小(Nb:9-48)、有效群体大小(Ne:39-182)及实际繁殖群体数量(Nc':10-57)均较小。此外，动态变化结果分析显示2005-2014年中华鲟的繁殖群体大小与综合适宜度具有密切的关系。繁殖群体大小处于波动下降过程，实际繁殖群体大小下降61.40％。同时，基于同胞法估算的有效繁殖群体大小(Nbsib)与基于水声学调查的繁殖群体大小（Nc）比值范围为0.227～0.615，平均值为0.391;基于连锁不平衡法校正估算的有效群体大小（NeAdj）与基于水声学调查的繁殖群体大小（Nc）比值范围为0.236～2.528，平均值为1.151。　　(4)基于中华鲟线粒体全基因组序列，设计了一对可以用于水环境DNA(eDNA)监测的中华鲟引物，并使用数字PCR(DDPCR)建立了用于定量检测中华鲟eDNA的标准，其最小检测极限为0.17copy/μl。基于eDNA技术对葛洲坝江段中华鲟产卵场附近30km水域进行监测。结果发现，葛洲坝下、夷陵长江大桥、胭脂坝及古老背四个采样点均能检测到中华鲟的eDNA。基于线性混合模型对中华鲟产卵场的eDNA进行时空分布分析，结果表明，季节是影响其结果的最主要因素。eDNA浓度在8～9(10)月呈上升趋势，其中葛洲坝和夷陵长江大桥的eDNA浓度在9月达到高峰，胭脂坝和古老背的eDNA浓度在10月达到高峰。所有采样点的eDNA浓度在11-12月都迅速下降。此外，eDNA监测与水声学调查结果具有一致性(r=0.994)，均暗示了中华鲟种群数量较小。　　(5)基于微卫星数据发现，2016-2019四个年度增殖放流种群仍旧具备较高的遗传多样性，杂合度较高（He:0.785±0.095;Ho:0.721±0.178）。但增殖放流群体的整体平均等位基因数(p＜0.

关键词： 中华鲟   IFN-γ   免疫调控   生物学功能  

摘要： 为了解中华鲟IFN-γ的免疫调控作用,实验通过中华鲟转录组获得IFN-γcDNA序列,构建重组表达质粒pTRI-st-IFNγ,原核表达IFN-γ蛋白,检测其在病毒和细菌感染过程中的免疫调控作用。SDS-PAGE显示,中华鲟IFN-γ重组蛋白大小为19.17 ku,以可溶性表达为主,浓度为0.998 mg/mL;荧光定量PCR显示,IFN-γ蛋白能够诱导中华鲟肾脏细胞中下游相关抗病毒基因Mx、Viperin和CXCL家族中CXCL11-L1、CXCL11-L2表达;与EPC细胞共孵育能够有效抑制鲤春病毒血症病毒(spring viraemia of carp virus,SVCV)引起的细胞病变和增殖,并对SVCV病毒的G、P、N 3个基因表达量呈现出极显著性下调;在体外能够调控抑制嗜水气单胞菌、中间产气单胞菌和维氏气单胞菌并对其生长表现出明显的抑制作用。

关键词： 长江口   中华鲟   种群特征   标志放流   洄游   鱼类种间共现  

摘要： 本研究对长江口中华鲟自然种群特征、降海洄游习性,及其栖息地鱼类群落关系等方面开展长期跟踪监测和科学研究,并以此为基础,进行中华鲟标志放流、人工驯养、海洋中华鲟洄游及分布等保护研究,保护长江口中华鲟种群和海洋中华鲟种群,以延续中华鲟种群。主要研究内容和结果如下:1.人工驯养中华鲟野生幼鱼能够实现中华鲟个体救护、活体基因留存、种群多样性保存的中华鲟保护目的。2006年和2015年对误捕于长江口的160尾中华鲟野生幼鱼,开展人工驯养环境下的生物学特征研究。结果显示,2006年实验中华鲟,6～8月平均体长和平均体重分别从15.4±0.64cm和26±1.34g,增加到29.2±0.75cm和108±3.87g,日均增长1.54mm,日均增重0.9g。2015年实验中华鲟,经过3个月的人工驯养,平均体长和平均体重分别由14.90±0.22cm和22.25±1.34g,增加到28.32±0.84cm和148.65±3.02g,日均增长1.49mm,日均增重1.40g。拟合中华鲟幼鱼的体长与体重的关系分别为:W2006=0.1215L2.0313（R2=0.9457）、W2015=0.0086L2.9051（R2=0.996）,2015年人工驯养中华鲟幼鱼生长好于2006年的。当实验池水体水温超过24℃时,中华鲟幼鱼瞬时增长（重）率随水温升高而降低。人工驯养的野生中华鲟幼鱼个体体长、体重变异系数小,平均低于2.60%和3.66%,表明个体生长速度快、差异小、大小规格整齐,也说明了人工驯养的野生中华鲟幼鱼没有因为环境、饵料等变化而造成生长的停滞或缓慢。与同期野生环境下的中华鲟幼鱼比较,两者的生长存在差异性。总体上人工驯养环境下的野生中华鲟幼鱼生长状况要好于自然生长的。另外,实验中华鲟死亡率为5.0%,致死疾病包括肠炎、水霉病和细菌性烂鳃病。研究表明,野生中华鲟幼鱼对人工驯养环境具有较强的适应能力,生长速度快,便于驯化养殖,说明人工驯养野生中华鲟幼鱼有助于中华鲟的保护。2.2004-2018年,在长江口采样固定监测网监测和全年的随机调查的方式,共计监测到中华鲟幼鱼6600尾,中华鲟成体（年龄>8岁）有10尾,中华鲟亚成体（年龄为2-8岁）74尾。监测结果表明,2004-2018年长江口中华鲟幼鱼补充量呈连续下降的趋势,2014年后出现补充量断裂的现象。2014、2016、2018年均未监测到中华鲟幼鱼,从而更加证实了中华鲟自然繁殖行为从连续转为偶发的变化。2015-2018年中华鲟幼鱼在长江口的时空分布特征则与文献记载有所变化,出现了首现时间提前（近一个月）,终现时间延迟（约一个月）和出现时长由每年的5月到9月,变化成不连续年份的4月到10月的新特点,推论长江中可能形成新的产卵场,且距离长江口更近,或者中华鲟自然产卵时间提前。长江口中华鲟幼鱼多年平均体长为22.7cm,多年平均体重为99.0g,两者均呈逐年减少的趋势;长江口中华鲟幼鱼肥满度的变化规律和生长指数b的变化呈显著关系。从网具对中华鲟幼鱼的损害性分析,致死率由高到低的网具分别为定置张网（24.84%）、刺网（18.45%）、浮动张网（9.33%）、插网（3.05%）。通过长江口中华鲟幼鱼补充量、时空分布、生长特征等方面的变化研究,为长江口及长江流域中华鲟保护和管理提供了方向。3.2004年至2014年在长江口水域标志放流中华鲟12570尾,开展中华鲟降海洄游习性和海洋中分布的研究,以提高海洋中华鲟种群的保护能力。标志放流野生中华鲟872尾,人工繁育F1中华鲟11698尾,年龄包含1～25龄中的11个年龄段。2004-2009年以放流1龄人工繁育F1中华鲟为主,2010年以后逐步以放流大规格的6龄人工繁育F1中华鲟为主。放流前1个月开始对中华鲟实施盐度、摄食和波浪驯化,并逐步植入标志。放流中华鲟均进行了体内体外双重标志,标志类型包括射频综合标志（Passive Integrated Transponder tags,PIT）、体外银牌（Silver brand tag,SBT）、飘带（Plastic streamer tag,PST）、骨板标志（Plastic bone armor tag,PBT）、锚标（Plastic tipped dart tag,PDT）5种常规标志,以及脱落式卫星数据回收标志（POP-UP satellite archival tag,PAT）1种卫星标志。运输过程中,放流中华鲟采用单体充氧打包运输,放流时,使用连续活水放流槽和滑梯投放中华鲟,以减少中华鲟的伤害。研究结果显示:（1）共收集到24尾次常规标志中华鲟回捕信息,以及18尾PAT标志中华鲟的标志信息,常规标志回捕率为0.19%,PAT标志回收率为52.9%。（2）标志回捕或标志信息回收的时间在1～198

关键词： 中华鲟   免疫器官   发育   socs1   表达特征  

摘要： 中华鲟(Acipenser sinensis)是长江的旗舰物种,1988年被列为国家一级水生野生保护动物。近年来,由于人类活动影响,自然种群呈逐渐衰退趋势,繁殖群体数量逐年下降,2010年世界自然保护联盟(IUCN)将其评估为极危(CR)物种。人工养殖是中华鲟迁地保护的基础。鲟鱼免疫器官主要包括头肾、胸腺和脾脏器官,免疫淋巴组织包括脑膜髓样组织、心包组织、皮肤黏膜组织、鳃组织和肠道黏膜组织(尤其是螺旋瓣淋巴黏膜组织)等,鲟鱼类免疫器官及组织的高度多样性和良好发育是其免疫机制有效发挥的基础。本文通过解剖学、组织学和分子生物学等方法研究了中华鲟免疫器官(头肾、胸腺和脾脏)的早期发育过程和免疫基因细胞因子信号抑制因子1(socs1)的表达模式分析,将加深对中华鲟免疫系统的了解,丰富中华鲟免疫系统的基础资料,为中华鲟苗种的健康养殖和疾病预防提供参考。中华鲟免疫器官发育研究利用形态解剖、连续石蜡切片和透射电镜技术研究了中华鲟仔鱼、稚鱼和幼鱼头肾、胸腺和脾脏器官的形态结构、早期发育规律和组织学超微结构。主要研究结果和结论如下:1.解剖学观察结果表明,中华鲟头肾位于心脏腹隔膜前背方,肾管向前延伸至最前端的膨大部位,左右两叶呈对称分布,为表面覆盖胶原纤维的红褐色扁平器官,组织早期呈弥散状,后期发育为实质状;胸腺1对,位于第2鳃弓的背侧,前端伸入鳃盖深处,后端延伸至鳃腔背角,左右对称分布,为表面光滑、质地松软的乳白色半透明薄片状实质器官;脾脏位于胃和十二指肠之间的系膜上,早期包裹在胰脏组织内,后期分离出来逐渐移动至鱼体腹部,为表面光滑、覆盖基膜的暗红色实质器官,主体部分为前部条带状和后部蝴蝶状两叶。2.连续石蜡切片和HE染色观察结果表明,中华鲟免疫器官原基出现顺序为头肾、胸腺和脾脏,淋巴化顺序为胸腺、头肾和脾脏。头肾原基3 dph可见,15 dph开始淋巴化,39 dph肾小管出现退化,150 dph发育为完全的淋巴造血组织;胸腺原基7 dph可见,12 dph开始淋巴化,20 dph结缔组织和毛细血管入驻胸腺实质,26 dph皮髓质分区;脾脏原基9 dph可见,33 dph开始淋巴化,92 dph出现红白髓分区。仔鱼期可见头肾和胸腺间具有淋巴细胞“桥”连接现象,180 dph胸腺内可见哈氏小体结构,头肾、胸腺和脾脏内含黑色素细胞或黑色素巨噬细胞中心(MMCs)。中华鲟免疫器官发育具有原基出现时间早、发育速度慢和发育周期长的特点。3.超薄切片和透射电镜观察结果表明,中华鲟头肾、胸腺和脾脏器官均为网状细胞连接的淋巴样器官。头肾结构最为复杂,细胞分布以颗粒细胞和红细胞为主,细胞种类最多;脾脏器官其次,红髓内红细胞为主,白髓内白细胞居多,可见多种形态的红细胞和颗粒细胞分布;胸腺结构相对简单,网状支架内以淋巴细胞填充为主,观察到不同形态淋巴细胞、网状上皮细胞和成纤维细胞。透射电镜下各组织超微结构与石蜡切片结果保持一致。中华鲟免疫基因socs1表达特征研究细胞因子信号抑制因子(suppressors of cytokine signaling,SOCS)是一类重要的细胞因子信号转导抑制剂,在各类细胞因子参与的免疫系统调控中起着重要的负调控作用。socs1作为该家族的重要成员,参与T淋巴细胞的分化、成熟与功能调控,在JAK/STAT信号通路中起负调控作用。本研究通过对中华鲟socs1基因的编码区cDNA序列特征、系统进化关系和表达模式特点进行了分析。主要研究结果和结论如下:1.对中华鲟的socs1基因研究发现,socs1基因cDNA序列长度为639 bp,编码212个氨基酸。将中华鲟socs1基因同其他脊椎动物对比发现,中华鲟socs1基因与其他脊椎动物类似,有一个高度保守的中央SH2结构域、一个相对保守的C端SOCS box结构域,以及一个低复杂度的N端结构域。系统进化分析的结果显示,中华鲟socs1与其他鱼类物种共同聚为一支,两栖类、爬行类、鸟类和哺乳类聚为另外一支,中华鲟与小体鲟的socs1基因的同源一致性最高。2.表达模式分析结果显示,中华鲟socs1基因在检测的肝脏、脾脏、胸腺、头肾、中肾、鳃、肠和皮肤等8种组织中均有表达,其中在鳃中表达量最高,胸腺其次,肠和头肾相对较低,其他组织表达水平接近;在嗜水气单胞菌和poly(I:C)感染下,socs1基因在脾脏细胞中的表达水平均显著升高;不同发育时期的中华鲟幼鱼头肾、胸腺和脾脏组织中socs1基因表达呈先上升后下降趋势。

关键词： 个体体重   硬骨鱼纲   杂交鲟   鲟鱼养殖   鲟形目   中华鲟   抗病力  

摘要： 鲟鱼是指鲟形目的鱼类。鲟鱼隶属于硬骨鱼纲、辐鳍亚纲、软骨硬鳞总目、鲟形目。鲟鱼是现存起源最早的脊椎动物之一。因地域或品种不同又有中华鲟、中国鲟、鳇鱼、苦腊子、鳣等名称,成年个体体重68~250 kg不等。目前中国无论是在北方,还是南方,许多鲟鱼养殖企业用不同种类的鲟鱼不断杂交得到杂交鲟,杂交鲟具有亲本双方的共同优点,且抗病力强、生长快,成为养殖企业重点养殖的对象。

关键词： 三峡   蓝家寨遗址   春秋时期   中华鲟   骨板  

摘要： 蓝家寨遗址位于重庆市巫山县大昌镇兴胜村(31°15'95"N,109°48'23"E),自然地貌特征为长江三峡北岸大宁河中游的一级阶地。2012年,在对蓝家寨春秋时期(距今2489多年前)古文化遗址考古发掘中,出土了1件保存较好的中华鲟骨鳞板,该枚骨鳞板长64 mm,宽35 mm;骨板平面最大厚度5 mm,骨板尾端高度为16 mm。根据该标本生长形态和中华鲟骨鳞板排列规律,可以确定该标本为中华鲟背鳍前部的最后一块骨鳞板。中华鲟是鲟形目中在地球上分布最南端的种类,主要生活于亚洲东部沿海大陆架水域和中国长江干流,是起源于白垩纪(恐龙时代)残留至今最为古老的现生鱼种之一。中国长江三峡地区,是世界上唯一发现有中华鲟考古材料的地区。中华鲟体内骨骼以软骨为主,自然状态下很难在土壤中保存,并且其体内软骨自古被人们视为名馔珍肴,所以考古发掘中迄今没有发现中华鲟体内骨骼。中华鲟体表分布有5列骨质鳞板,由于鳞板形态近似,数目较多,并且骨鳞板埋在地层中极易破碎,所以此前考古发现的零散骨鳞板,均未能鉴定出其具体生长体位。本文报道的重庆巫山县蓝家寨遗址考古发掘中,出土了迄今保存最为完整的1件骨鳞板,也是我国考古工作中首次发现可以确认具体生长体位的中华鲟骨骼。三峡地区大巴山、巫山、武陵山巨岭交错,陡峡深谷,其特殊地理位置、地貌特征及特色资源,使该地区形成富有特色的各种经济文化交流圈。史前时期,该地有盐业经济圈、太阳崇拜文化圈等。蓝家寨遗址中华鲟标本及其相关研究,使我们认识到春秋时期(距今2489多年前),三峡地区长江干流沿岸生活有专门捕捞中华鲟的渔民,这些沿岸渔民以中华鲟等渔获物与周围山区古居民进行物质交流,至少在沿江两岸35 km的直线范围内,还存在有以中华鲟为重要交换物的经济文化交流圈。中华鲟生存、演化了约1亿5千万年。但现代长江是在约100多万年前三峡贯通后才形成。现代长江形成后,中国海岸线海侵及长江河道改变等也曾经历过很大变化。所以,在现代长江形成之前和之后,中华鲟已在中国海域和河流经历过很多生态变化。在中国地貌环境巨大变化过程中,中华鲟始终适应并以较大种群在中国近海和长江流域生存下来。但是,现代人们在长江三峡地区的大江截流(1981年葛洲坝截流),是人类行为在短时间内突然强制性改变中华鲟繁衍生态,并且在筑坝过程中对中华鲟集中、过度捕捞。针对此情况,人类必须采取补救措施,严禁捕捞和增殖放流,帮助中华鲟适应新繁殖栖息环境。蓝家寨遗址中华鲟标本的发现及研究,对科学论证长江流域中华鲟资源价值、生态演化,以及深度剖析历史时期三峡古居民生业模式和文化交流等具有重要意义。