关键词： 中华鲟幼鱼   听性脑干反应   听觉阈值   船舶噪声   阈值变化  

摘要： 中华鲟（Acipenser sinensis）,我国国家一级重点野生水生保护动物。近年来,由于水电运行、航道整治、船舶航行等人类活动的影响,中华鲟野外种群数量急剧下降。2017至2021年间,中华鲟自然繁殖已连续5年中断,野外种群生存状况形势十分严峻,面临灭绝风险。长江作为世界“黄金水道”,繁忙的航运带来的水下噪声污染也在日益加剧,给中华鲟等鱼类的栖息和繁殖势必会产生一定不利影响,但船舶噪声对中华鲟产生的具体影响程度尚无相关报道。因此,本文通过研究中华鲟的听觉能力,分析中华鲟重要栖息地水域的船舶噪声背景情况,探究船舶噪声对中华鲟幼鱼的听觉阈值是否产生影响,为掌握水域噪声对野外中华鲟及其他鱼类的影响提供一项基础参考,对中华鲟等重要水生动物的保护具有重要作用。1.运用听性脑干反应技术（Auditory Brainstem Response,ABR）,测量了中华鲟幼鱼的听觉阈值（Auditory threshold）。通过电极接入的方式,记录了15尾中华鲟幼鱼的短纯音听觉诱发电位。试验结果表明,中华鲟幼鱼的听频范围较窄,敏感频率为100～500 Hz范围内,最敏感频率为250 Hz,听觉阈值为129.5 d B。将采集到的每一频率下的数据进行分析,得出每一频率下的最低阈值,经统计处理,绘作出中华鲟幼鱼的听力图。试验环境下,中华鲟幼鱼的听力图近似“U”型,与匙吻鲟和湖鲟的听力曲线相似,听频范围狭窄,阈值较高,属于听力不敏感型鱼类。2.通过对长江宜昌中华鲟自然保护区内录制的船舶噪声进行分析处理,利用Adobe Audition CC软件截取了中华鲟幼鱼听觉阈值相近的船舶噪声频段进行回放,研究了不同时程船舶噪声刺激对中华鲟幼鱼听觉阈值的影响情况。将25尾中华鲟幼鱼分别暴露于不同时长（1、2、4、8、16 h）船舶噪声下,噪声刺激结束后立即运用ABR法对试验鱼进行听觉阈值测定,并与对照组（未受船舶噪声刺激）进行比较。试验结果表明,1 h和2 h船舶噪声刺激组中,中华鲟幼鱼的听觉阈值与对照组相比较没有出现变化;4 h刺激组中,中华鲟听觉阈值在频率200 Hz处开始出现变化,此试验组变化最大出现在频率250 Hz处,测得阈值为131 d B（对照组250 Hz 129.5 d B）;8 h噪声刺激组中,阈值变化最为明显,最明显在频率250 Hz处阈值与对照组相比较上升了3.5 d B（试验组250 Hz 133d B,对照组250 Hz 129.5 d B）;16 h噪声刺激组中阈值也出现变化,与4 h、8 h刺激组比较没有出现继续上升的趋势。总体来看,受不同时长船舶噪声刺激后的中华鲟幼鱼听觉阈值偏移较小。

关键词： 子二代中华鲟   花生四烯酸   性类固醇   转录本   脂质组   卵细胞  

摘要： 鲟形目（Acipenseriformes）鱼类是硬骨鱼纲中唯一现存的大型软骨硬鳞鱼类,有体型硕大、寿命长、发育周期长等特点。我国河北北部的晚侏罗纪或早白垩纪地层中就曾发现鲟类化石,这预示着鲟鱼的部分生理特性可能保持了1亿年以上,具有极高的科研价值。由于涉水工程修建、人为捕捞、航运、污染等多种活动叠加干扰影响,全球27种鲟鱼中大部分种类处于不同等级的濒危状态;享有“水中大熊猫”之称的中华鲟已成为极危物种。连续5年（2017～2021年）未监测到自然繁殖行为发生,洄游到葛洲坝下的产卵群体不足50尾,野外种群濒临灭绝。人工迁地保护措施下保育的中华鲟已突破人工繁殖,但雌性发育周期过长且成熟困难,导致可用于人工繁殖的亲体数量有限,限制了种群恢复速度。基于此,本论文在人工养殖环境条件下,创造长江中华鲟生活的非生物环境条件（河床质、流速、坡度）及构建合适的水环境条件（水温、溶氧、浊度）,在人工可控微型流水养殖池用实验饲料在体投喂子二代四龄中华鲟22周,考察花生四烯酸否具有调控中华鲟固醇激素合成的作用及可能存在调控机制,以及花生四烯酸是否对养殖中华鲟生长、存活、机体安全与健康有损伤;离体条件下进一步考察花生四烯酸是否具有调控卵细胞活力、激素合成及固醇激素代谢通路相关基因转录影响及可能存在调控机制;本论文研究结果将非生物环境、水环境及中华鲟安全进行了有机整合,研究结果有助于了解中华鲟性腺发育的内分泌调控机制,为鲟鱼卵巢发育调控提供理论基础和技术支撑。本论文的主要结果归纳如下:（1）通过配制不同水平的花生四烯酸饲料（ARA）养殖性腺发育处于II期的四龄中华鲟22周,考察不同水平的ARA饲料（0.0%、0.5%、1.0%与2.0%ARA）对其生长性能、形态学参数、营养组成、组织ARA代谢酶活力、组织ARA代谢物质含量、组织激素与卵黄蛋白原含量等指标的影响。结果表明:饲料ARA含量对子二代中华鲟增重率、饲料系数、成活率、肝体比、脏体比、肥满度与性腺指数等指标不产生显著影响（P>0.05）;肌肉粗蛋白质、粗脂肪、粗灰分与水分等营养成分不受饲料ARA含量影响（P>0.05）;肝脏水分与粗脂肪含量不受饲料ARA含量的影响（P>0.05）,2.0%ARA组肝脏粗蛋白质含量显著高于0.0%ARA组（P<0.05）,与0.5%、1.0%ARA组之间无显著性差异（P>0.05）。肝脏、肌肉、性腺组织中的ARA含量随饲料ARA水平升高而显著升高（P<0.05）;肝脏组织中0.0%ARA组的环氧合酶-1（COX1）、环氧合酶-2（COX2）脂氧合酶（LOX）与细胞色素氧化酶(CYP450)活力显著低于2.0%ARA组（P<0.05）;性腺组织中0.0%ARA组的COX1、COX2、LOX与CYP450活力显著低于1.0%与2.0%ARA组（P<0.05）;肌肉组织中1.0%ARA组的COX1、COX2、LOX活力显著高于2.0%ARA组（P<0.05）;肌肉组织中1.0%ARA组的CYP450活力显著高于0.0%ARA组（P<0.05）;性腺与肝脏组织中前列腺素（PGE2）、5羟-二十碳四烯酸（5-HETE）含量随饲料ARA水平升高而显著升高（P<0.05）;肌肉组织中1%ARA组的PGE2与5-HETE含量显著高于0.0%与2.0%ARA组（P<0.05）;0.0%ARA组性腺组织雌二醇（E2）、睾酮（T）含量含量显著低于2.0%ARA组（P<0.05）;性腺组织卵黄蛋白原（Vtg）含量随饲料ARA水平升高而显著升高（P<0.05）;0.0%ARA组肝脏组织中E2、T与Vtg含量显著低于1.0%和2.0%ARA组;1.0%ARA组的血清E2含量显著高于0.0%ARA组（P<0.05）;血清T含量在各组之间无显著差异（P>0.05）;0.0%ARA组的血清Vtg含量显著低于各ARA组（P<0.05）;以上结果表明饲料中添加一定量的ARA后对子二代中华鲟不同组织ARA沉积、不同组织ARA代谢酶活力、不同组织ARA代谢物质含量、不同组织激素合成、不同组织卵黄蛋白原含量等指标产生了显著影响;综合ARA效果与经济成本考虑,建议饲料中添加1%含量的ARA是最合适的。（2）为探究22周ARA投喂养殖后子二代雌性中华鲟对饲料中不同水平ARA的应答机制,拟对子二代中华鲟卵巢组织与血液组织分别进行了转录本与脂质代谢物质分析及对肝脏脂肪代谢酶分析。结果表明,0.5%与0.0%ARA组之间鉴别到1018个差异表达基因（DEGs）,1.0%与0.0%ARA组之间鉴别到853个DEGs,2.0%与0.0%ARA组之间鉴别到2680个DEGs,1.0%与0.5%ARA组之间鉴别到303个DEGs,2.0%与0.5%ARA组之间鉴别到1185个DEGs,2.0%与1.0%ARA组之间鉴别到409个

关键词： 中华鲟   海分枝杆菌   分离工艺   种类鉴定   致病性  

摘要： 中华鲟作为国际濒危物种和国家一级保护动物，我国一直致力于增加其野外种群数量。自2009年突破淡水人工繁育技术后，摆脱了依赖自然亲本繁育束缚，但随着保育工作的不断发展，淡水养殖中华鲟爆发了各种细菌性疾病，影响种群数量和质量。近几年最引人注意的是分枝杆菌病，该病具有潜伏期长的特点，发病时以体表症状非特异性（无症状或肌肉溃烂）、腹腔积液、肉芽肿结节、肝脏灰色等为病变特征，主要集中于中华鲟亚成鱼或成鱼，一般病鱼死亡后才发现，影响极其恶劣。2020年7月15日在死亡中华鲟体内发现了分枝杆菌，并对其病原学、病理学和免疫学进行了详细研究。本研究旨在鉴定分枝杆菌的种类，探讨分枝杆菌的致病性，并研究鲟鱼感染该病原菌后的自身免疫保护作用，从而为生产上有效控制该病提供科学依据。　　从中华鲟的腹腔积液中成功分离出分枝杆菌，将其命名为ASmyco。对该菌的菌落形态检测表明，其为缓慢生长型的光产色分枝杆菌。在黑暗条件下，菌落呈白色、表面粗糙、菌落无规则及具有粘性等特点;在光照一段时间后，菌落颜色变为黄色。采用NJ法，以该菌的16SrRNA序列构建进化树，菌株ASmyco与海分枝杆菌聚为一簇，同源性为99%。根据形态特点和进化关系将其鉴定为海分枝杆菌。　　对人工感染海分枝杆菌的中华鲟进行了系统的病理学研究，结果表明该菌感染中华鲟的主要临床症状为注射孔处肌肉糜烂，腹腔积液，脾脏肿大或出血，肝脏灰白色或出血等。病鱼各个组织（除脾脏外）没有形成分枝杆菌病典型的肉眼可见的肉芽肿结节。病理组织学上，肝脏、脾脏、肾脏和注射孔处肌肉均有肉芽肿结构，伴有大量淋巴细胞浸润现象。脾脏结节数量最多，结节类型相对完整，有Ⅰ型、Ⅱ型和Ⅲ型;肾脏中结节中心坏死区域直径最大，存在较多肉芽肿包膜融合成肉芽肿团现象，结节主要为Ⅰ型和Ⅱ型;肝脏中结节数量相对较少，间质中大量黑色素巨噬细胞中心发育或分布于结节周围，主要为Ⅰ型和Ⅱ型结节。所有组织中尚未发现有Ⅳ型结节。各个组织除含有肉芽肿病理结构外，还具有明显的炎症反应。肝脏细胞出血，铁血黄素大量沉积，细胞核崩解，结缔组织纤维化;病鱼脾脏细胞空泡化严重，白髓和红髓结构紊乱，细胞核渗透出血，有少量黑色素巨噬细胞，有大量红细胞堆积;肾小管形状不规则，失去原有结构，甚至有的基底膜分离，肾小管中的上皮细胞排列紊乱，细胞间界限不明或间隙增大。肾小球萎缩变形甚至崩解，肾小囊腔扩大。　　对海分枝杆菌体外和体内感染中华鲟实验进行了相关免疫基因IFNe1、IFNγ、TNFα1、TNFα2、IL-1β和IL-6基因mRNA水平表达研究。体外感染实验发现，随着刺激时间的延长，IFNe1、TNFα1、TNFα2和IL-6基因表达量呈先上升后下降趋势;IFNγ基因表达量持续增加;IL-1β基因表达量持续下降。体内感染实验发现，15d实验组与15d对照组相比，血液、脾脏、肝脏和头肾中IFNe1、IL-6、IFNγ、TNFα1和TNFα2基因表达量均升高，IL-1β基因表达量基本维持在正常水平。30d实验组与30d对照组相比，血液、脾脏、肝脏和头肾中IL-1β基因表达量升高。30d实验组与15d的实验组相比，血液、脾脏、肝脏和头肾中IFNe1、IL-6、IFNγ、TNFα1和TNFα2基因表达量均降低，IL-1β基因表达量均升高。

关键词： 中华鲟   海水适应   血液生理生化   免疫特性  

摘要： 中华鲟（Acipenser sinensis）是我国长江特有物种,属于国家一级重点保护野生动物,2010年被IUCN红色名录列为极危（CR）级物种。受人类活动的影响（过度捕捞和水利建设等）,每年参与自然繁殖的中华鲟野外种群数量逐渐减少,且已经连续5年未监测到中华鲟的自然繁殖活动,人工保种成为防止中华鲟物种灭绝的重要手段,而长期的淡水圈养环境使中华鲟性成熟个体小、雌雄性成熟比例失调、繁殖能力下降等问题逐渐显现。中华鲟作为溯河产卵洄游型鱼类,生活史中90%的时间在海洋中度过,海水环境对中华鲟生长发育等生理特性起到至关重要的作用,因此,海水养殖是中华鲟海洋保种过程中不可缺少的环节。为探究中华鲟在自然海水环境下的免疫特性,本实验以淡水养殖的4龄中华鲟为研究对象,经海水驯化后于海水中养殖5个月。在海水驯化阶段淡水（约0‰）、半咸水（约12‰）、海水（约24‰）及海水养殖阶段第2、5个月5个时间点采集样品,用于分析中华鲟亚成体在海水适应过程中血液生理生化指标、免疫组织结构和免疫基因表达的变化。主要研究结果如下:1.海水适应过程中中华鲟血细胞参数的变化在海水驯化过程中,红细胞数（RBC）、血红蛋白（HB）、红细胞比容（HCT）有下降趋势,白细胞数（WBC）先下降后显著升高（P<0.05）;在海水养殖过程中,血红蛋白（HB）、红细胞比容（HCT）、红细胞数（RBC）显著升高（P<0.05）,白细胞数（WBC）保持稳定;各类白细胞占比在整个实验过程中无显著变化（P>0.05）。2.海水适应过程中中华鲟血浆生化指标的变化在海水适应过程中,钙离子(Ca2+)和磷离子(P3+)水平显著升高（P<0.05）;盐度变化对碱性磷酸酶（AKP）、酸性磷酸酶（ACP）、丙二醛（MDA）、葡萄糖（GLU）没有显著影响。在海水驯化过程中,白蛋白（ALB）无明显变化,超氧化物歧化酶（SOD）、总蛋白（TP）呈上升的趋势,高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、溶菌酶（LZM）水平显著升高（P<0.05）;谷草转氨酶（AST）、总胆固醇（TC）、葡萄糖（GLU）呈下降的趋势,免疫球蛋白M（Ig M）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、甘油三酯（TG）、谷丙转氨酶（ALT）显著下降（P<0.05）;在海水养殖过程中,白蛋白（ALB）、总蛋白（TP）显著升高（P<0.05）,高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）显著下降（P<0.05）,免疫球蛋白M（Ig M）水平显著升高（P<0.05）,超氧化物歧化酶（SOD）、溶菌酶（LZM）、谷草转氨酶（AST）、谷丙转氨酶（ALT）、甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、葡萄糖（GLU）无显著变化。3.海水适应过程中中华鲟免疫组织结构的变化利用组织切片技术对免疫组织（胸腺、头肾、脾脏）的观察发现,4龄中华鲟的胸腺未出现退化现象;经海水养殖后,头肾组织和脾脏组织的细胞形态饱满、排列整齐,头肾组织中的粒细胞、血管周围的黑色素巨噬细胞中心明显增多;脾脏组织中淋巴细胞聚集,排列紧密,细胞密度明显增加;而胸腺组织结构未观察到明显的变化。4.海水适应过程中中华鲟免疫组织中3种免疫相关基因的表达MHCⅡ、CD40L、LTBR在免疫组织中均有表达,表达量为:MHCⅡ>CD40L>LTBR,其中,MHCⅡ在脾脏的表达量最高。在整个实验期间,胸腺中MHCⅡ、LTBR表达量有所降低,CD40L的表达量有所增加;脾脏中MHCⅡ的表达量、脾脏和头肾中CD40L的表达量、脾脏中LTBR的表达量变化趋势一致,均为先降低后增加再降低,头肾中MHCⅡ的表达量先降低后增加,在一定范围波动,但均无显著差异（P>0.05）;在半咸水时,头肾中的LTBR显著升高（P<0.05）,之后恢复与淡水时的表达量相近,并在海水养殖阶段保持稳定。综上所述,海水驯化阶段是调整渗透压与应激的过程,在该阶段中华鲟的抗氧化能力、代谢能力有所增强;在海水养殖阶段,由于机体建立了新的平衡体系,Ca2+、P3+浓度、HB、HCT、TP水平显著增多,大多数血液生化指标保持稳定;在海水适应过程中,中华鲟亚成体生理机能保持正常状态,头肾、脾脏组织结构细胞密度增大、形态饱满,长期海水养殖对中华鲟的造血和免疫功能有一定的增强作用。本研究结果将为中华鲟资源修复提供基础,对中华鲟的繁殖和迁地保护具有重要的指导意义。

关键词： 生态环境评价   珍稀鱼类   极度濒危   保护措施   中华鲟  

摘要： 繁殖群体数量是中华鲟能否成功繁殖的重要影响因子,建议作为长江生态考核的重要评价指标。根据重要种群参数和历史数据,基于稳态转换理论和方法,确定中华鲟繁殖群体数量指标的评估基准值和等级,670尾以上为“优”、400-670尾为“良”、200-400尾为“中”、50-200尾为“差”、50尾以下为“极差”。水声学探测结果显示,1998-2001年中华鲟繁殖群体数量指标评级为“良”;2004-2012年三峡工程蓄水后至向家坝蓄水前评级为“中”;2013-2020年评级为“极差”。为了复壮中华鲟野生种群,建议修复葛洲坝下中华鲟产卵场功能,大规模放流性成熟亲鱼和大规格个体,建立国家级中华鲟保育中心。

关键词： 环保督察   长江岸线   监督保障   整体搬迁   长效机制   湖北省宜昌市   中华鲟   化工企业  

摘要： 为深入贯彻落实习近平总书记关于"把修复长江生态环境摆在压倒性位置,逐步解决长江生态环境透支问题"的重要指示精神,湖北省宜昌市持续治理长江岸线,守护一江清水,推动化工企业"关改搬转治绿",并取缔、拆除216个长江岸线码头。该市纪检监察机关将监督保障长江大保护长效机制执行作为重要政治职责,持续督促相关部门和单位落实中央生态环保督察整改责任,推动中华鲟长江自然保护区核心区内的王家河油库码头整体搬迁,为珍稀保护动物中华鲟、江豚等"让路",守护长江水清岸绿。

关键词： 中华鲟   长江口   标志放流   降海洄游   分布特征  

摘要： 中华鲟(Acipenser sinensis)为国家一级重点保护野生动物。2004—2014年在长江口水域标志放流中华鲟12570尾,标志回捕中华鲟24尾次,接收18枚落式卫星数据回收标志(PAT)信息。本研究根据标志放流信息,分析研究长江口标志放流中华鲟降海洄游和分布特征。研究结果表明:(1)长江口标志放流中华鲟分布于经度跨度7°,纬度跨度9°的长江口水域和东海及黄海海域,主要聚集分布区为长江口水域和舟山群岛海域;(2)标志放流中华鲟具有显著的降海洄游趋势,放流后短期滞留在长江口淡水环境,7d后具有进入海洋的行为;(3)长江口标志放流中华鲟进入海洋后,其迁移方向会出现随机性,在迁移过程中具有折返、转向、停滞的特征。本研究通过对长江口增殖放流的中华鲟标志回捕信息开展研究,旨在揭示中华鲟降海洄游和分布特征,为中华鲟资源保护提供科学依据。

关键词： 花生四烯酸   中华鲟   生长   存活   抗氧化能力   花生四烯酸代谢酶   菌群多样性  

摘要： 本试验旨在探究饲料花生四烯酸(ARA)含量对子二代中华鲟成活与生长、抗氧化能力、组织ARA代谢酶活性及肠道菌群组成的影响。通过在基础饲料中添加0、0.5%、1.0%和2.0%的ARA纯化油(ARA占总脂肪酸的44.88%),制成4种等氮等能的试验饲料,饲料ARA含量分别为0.18%、0.53%、0.96%和1.89%。用4种试验饲料投喂初始体质量为(4.17±0.22)kg的子二代中华鲟22周,每种饲料投喂3个重复,每个重复18尾鱼。结果表明:试验鱼的增重率与成活率不受饲料ARA含量的显著影响(P>0.05)。肝脏超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)与谷胱甘肽硫转移酶(GST)活性随饲料ARA含量的升高而升高,丙二醛(MDA)含量随饲料ARA含量的升高而下降。血清SOD、CAT、GST活性与MDA含量不受饲料ARA含量的显著影响(P>0.05)。性腺中,1.89%ARA组环氧合酶-2(COX-2)与细胞色素氧化酶P_(450)(CYP _(450))活性显著高于0.18%与0.53%ARA组(P<0.05),与0.96%ARA组无显著差异(P>0.05);0.96%ARA组环氧合酶-1(COX-1)活性显著高于0.18%与0.53%ARA组(P<0.05);1.96%ARA组脂氧合酶(LOX)活性显著高于0.18%ARA组(P<0.05)。肝脏中,COX-1、COX-2与LOX活性均以1.89%ARA组最高,与0.96%ARA组无显著差异(P>0.05);0.18%ARA组CYP _(450)活性显著低于0.96%与1.89%ARA组(P<0.05)。0.18%ARA组Chao1指数、ACE指数、Shannon指数与Observed-species数量显著高于0.53%ARA组(P<0.05),与0.96%及1.89%ARA组无显著差异(P>0.05)。Simpson指数与PD-whole tree指数不受饲料ARA含量的显著影响(P>0.05)。上述结果表明,饲料中添加1.0%的ARA纯化油使饲料ARA含量为0.96%时对子二代中华鲟的生长与存活无显著影响,但能增强鱼体的抗氧化能力、组织中ARA代谢酶活性及调控肠道菌群多样性。