关键词：
中华鲟
史氏鲟
达氏鳇
血清
免疫球蛋白
摘要：
该文对健康非免疫状态下3~4龄中华鲟(*** Gray,Chinese sturgeon)、2~3龄史氏鲟(*** Brandt,Amur sturgeon)和3龄达氏鳇(*** Georgi,Huso sturgeon)血清蛋白及血清中的免疫球蛋白进行了研究.采用聚丙烯酰胺凝胶电泳的方法分析了这3种鲟鱼的血清蛋白.依据哺乳类的血清蛋白分类方法将3种鲟鱼的血清蛋白分为白蛋白和球蛋白(包括α、β、γ-球蛋白);3种鲟鱼血清蛋白在PAGE电泳胶板上可明显的区分为7个主要带区,中华鲟、史氏鲟和达氏鳇的血清蛋白谱带分别为7条、11条和8条,血清蛋白的总浓度分别为18.7 mg·ml<\'-1>、21.25mg·ml<\'-1>和24.6mg·ml<\'-1>;3种鲟鱼血清蛋白的相似系数表明在生物进化中华鲟与史氏鲟亲缘关系比达氏鳇与史氏鲟亲缘关系近.采用饱和硫酸氨分步沉淀、sephadex-G200凝胶柱层析的方法纯化制备了三种鲟鱼的血清免疫球蛋白并对其部分特性进行了分析.实验结果如下:1.免疫印迹法证实所提纯的蛋白为三种鲟鱼血清免疫球蛋白IgM,其重链也具有抗体活性,而轻链的免疫印迹检测结果为阴性.聚丙烯酰胺凝胶电泳测得的中华鲟、史氏鲟和达氏鳇血清Ig的相对分子量分别为892kDa、867kDa和924kDa.采用降解SDS-PAGE测得三种鲟鱼血清Ig重链亚基相对分子量都约为88kDa,中华鲟和史氏鲟的Ig轻链亚基相对分子量为29kDa;达氏鳇的Ig轻链亚基为两种,相对分子量分别为29kDa和26kDa.2.在37℃,0.05mol·L<\'-1>Cys和0.002mol·L<\'-1>EDTA-Na<,2>的实验条件下作用24h,中华鲟、史氏鲟和达氏鳇的血清IgM可被木瓜蛋白酶酶解,经Sephadex G-100分离、纯化后获得了均一性较好的IgFab和IgFc重链片段,并经免疫印迹法得到验证.SDS-PAGE的结果表明,3种鲟鱼血清的IgFab和IgFc重链的相对分子量相同,分别约为66kDa和44kDa.3.双抗体夹心ELISA法测定了上述规格实验鱼的血清免疫球蛋白浓度.中华鲟血清中Ig的平均浓度为0.739mg·ml<\'-1>,史氏鲟为0.974mg·ml<\'-1>,达氏鳇为1.045mg·ml<\'-1>.4.采用免疫扩散法对中华鲟、史氏鲟和达氏鳇血清Ig的同源性及其与鲤的血清Ig同源性的比较分析表明,中华鲟、史氏鲟和达氏鳇的血清Ig在结构和序列上具有高度的同源性,与鲤血清Ig的同源性很低.
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