关键词： 长江鲟   中华鲟   细胞组织切片   摄食偏好   嗅觉电生理  

摘要： 长江鲟(Acipenser dabryanus)和中华鲟(Acipenser sinensis)均为我国珍稀水生生物,受水利工程建设、船舶运行和污染物排放等人类活动的影响,其栖息地生境遭到严重破坏,两种鲟鱼自然种群资源急剧下降。通过增加增殖放流,提高人工繁育中华鲟、长江鲟野外生存能力,对于中华鲟、长江鲟保护具有重要意义。本研究主要通过组织细胞学、鱼类行为学和嗅觉电生理技术相结合的方法,比较中华鲟仔鱼与长江鲟仔鱼的嗅囊发育,探索水蚯蚓饵料和配合饲料投喂对长江鲟仔鱼重要摄食器官——嗅觉组织结构发育和嗅觉感知能力的影响,主要结果如下:1)比较5 d,7 d,14 d,24 d,44 d和64 d中华鲟、长江鲟的嗅囊发育组织切片,结果显示,两种鲟鱼的嗅觉上皮细胞结构相同。虽嗅觉上皮细胞发育趋势不同,长江鲟嗅上皮厚度随发育下降,而中华鲟呈上升趋势。但两组鲟鱼嗅觉发育过程总体相似,嗅板数量和初级嗅板高度均随嗅觉发育不断上升。2)比较44 d和64 d饲料组和水蚯蚓组的长江鲟仔鱼嗅觉组织发育。结果显示,同时期水蚯蚓投喂组的长江鲟仔鱼嗅觉上皮厚度小于饲料投喂组,初级嗅板高度要高于饲料投喂组(p(27)0.05),即同时期水蚯蚓投喂组的长江鲟仔鱼的嗅觉上皮表面积更大。同时,水蚯蚓组较饲料组嗅觉上皮细胞感觉细胞数量增加,纤毛层加厚。3)通过嗅觉电生理实验,比较饲料组和水蚯蚓组长江鲟仔鱼对浓度为10-2 g/L、10-3 g/L、10-4 g/L饵料(饲料和水蚯蚓)浸出液和浓度为10-2 mol/L、10-3 mol/L、10-4 mol/L、10-5 mol/L和10-6 mol/L的三种常见氨基酸(甘氨酸(Gly)、谷氨酸(Glu)、精氨酸(Arg))溶液的嗅觉响应强度。结果表明,水蚯蚓组的长江鲟对水蚯蚓研磨液具有较强的嗅觉响应强度,饲料组对于饲料研磨液有较大的响应强度(p(27)0.05)。水蚯蚓组对10-2 mol/L和10-3 mol/L的甘氨酸和10-5 mol/L和10-6mol/L的精氨酸的刺激液产生的响应强度明显高于饲料组(p(27)0.05)。两组鱼的嗅觉响应强度均随着氨基酸浓度升高而增加,且呈指数型增加。4)通过行为选择实验,研究饲料组和水蚯蚓组的长江鲟对配合饲料和水蚯蚓饵料的摄食偏好。结果表明,饲料组更偏好摄食配合饲料,水蚯蚓组更偏好选择水蚯蚓最为食物饵料,结果差异显著(p(27)0.05)。水蚯蚓组和饲料组的长江鲟对浓度为10 mol/L、10 mol/L、10 mol/L、10 mol/L和10 mol/L甘氨酸溶液的行为反应中,10 mol/L甘氨酸溶液对长江鲟具有驱斥作用,其余浓度具有诱导作用(p(27)0.05)。10 mol/L和10 mol/L的甘氨酸溶液对水蚯蚓组长江鲟仔鱼的驱斥或诱导作用较饲料组显著更强。综上,组织切片研究显示长江鲟和中华鲟的嗅觉系统发育过程相似和组织结构相同。选长江鲟作为代表性实验对象,研究水蚯蚓和饲料喂养对鲟仔鱼嗅觉结构和嗅觉功能产生的影响,结果显示44d水蚯蚓组长江鲟与同期饲料组相比,嗅觉上皮细胞表面积更大,感觉细胞数量更多,纤毛层更厚;水蚯蚓和饲料喂养的长江鲟均对各自饵料具有明显偏好;水蚯蚓组长江鲟仔鱼对于10 mol/L和10 mol/L的甘氨酸和10 mol/L和10 mol/L精氨酸的嗅觉敏感性较饲料组更大。

关键词： IFNf   中华鲟   重组蛋白   抗菌   抗病毒   表达模式  

摘要： Ⅰ型干扰素(TypeⅠInterferon,IFN-Ⅰ)是脊椎动物中一种重要的细胞因子,其主要参与抗病毒免疫反应。硬骨鱼类Ⅰ型干扰素的功能与哺乳类相比相对保守,能激活抗病毒相关信号通路,参与抗病毒反应。然而有研究表明硬骨鱼类的Ⅰ型干扰素能显著的提高鱼类的抗菌能力,展现出直接杀菌能力。目前对于鱼Ⅰ型干扰素抗菌抗病毒功能研究还比较缺乏,我们以中华鲟IFNf为研究对象展开研究。主要结果如下:1.中华鲟IFNf的克隆鉴定与特征通过中华鲟转录组筛选出IFNf c DNA序列,设计特异性引物从中华鲟脾脏细胞的c DNA模板中扩增出中华鲟IFNf序列并进行测序。随后将中华鲟IFNf序列进行系统进化树分析和多重序列比对,发现其与斑点雀鳝IFNf聚为一枝,同源性最高。同时我们对其基因结构和蛋白结构进行分析发现,中华鲟IFNf作为GroupⅡ成员只含有一对二硫键,二硫键存在于第2和第5外显子中,与GroupⅠ干扰素成员结构存在差异,这种二硫键模式与以往发现的硬骨鱼类干扰素不同。为了初步了解其功能,采用了免疫刺激物poly I:C和LPS孵育中华鲟脾脏原代细胞,IFNf基因能被poly I:C诱导上调,而不能被LPS显著诱导上调。2.中华鲟IFNf蛋白直接抗菌功能为了进一步了解中华鲟IFNf免疫功能,利用Alphafold软件对中华鲟IFNf蛋白结构进行预测,发现中华鲟IFNf蛋白三维结构比较保守,主要由5个α螺旋结构域组成,阳离子主要集中在α4结构域上,我们对α4结构域进行分析,发现其具有抗菌活性。为了验证中华鲟IFNf的抗菌作用我们构建了原核表达载体p Coldsumo-IFNf、p Cold-sumo-IFNf△α4、人工合成IFNfα4多肽,获得可溶性的重组蛋白。将表达的IFNf蛋白、IFNf△α4和人工合成的IFNfα4多肽与大肠杆菌和金黄葡萄球菌孵育20 min后用2.5%戊二醛固定,进行扫描电镜检测,发现IFNf蛋白和IFNfα4多肽对两种细菌的细胞膜有破坏作用,而缺失α4结构域的IFNf蛋白并不能对对这两种细菌的细胞膜产生破坏。为了了解IFNf和IFNfα4多肽对临床菌的作用,我们将带GFP标签的质粒电转至鲟源弗氏柠檬酸酸杆菌,将IFNf重组蛋白和IFNfα4多肽与标记有GFP的弗氏柠檬酸杆菌孵育20 min,发现IFNf重组蛋白和IFNfα4多肽能降低弗氏柠檬酸杆菌的数量。3.中华鲟IFNf蛋白具有较高的抗病毒感染能力为了了解中华鲟IFNf抗病毒感染能力,通过注射感染鲤春病毒,发现IFNf基因能被鲤春病毒显著上调表达,其可能参与抗病毒免疫过程。我们构建了鲤春病毒感染中华鲟鳍条细胞模型,比较了重组中华鲟IFNf和IFNe2蛋白抗病毒能力。构建p Cold-sumo-IFNe2重组表达质粒,表达出IFNe2重组蛋白,表达纯化方法同IFNf。将IFNf和IFNe2重组蛋白孵育鳍条细胞4 h后,检测其下游viperin和Mx基因表达情况。通过病毒感染实验,检测IFNf和IFNe2对中华鲟鳍条细胞抗鲤春病毒感染情况,结果显示IFNf和IFNe2蛋白均能提高鳍条细胞抗鲤春病毒感染,q PCR结果显示IFNf和IFNe2均能诱导下游抗病毒基因Mx和viperin上调表达。

摘要： ~~

摘要： 3月25日，由农业农村部长江流域渔政监督管理办公室、湖北省农业农村厅、宜昌市政府、中国三峡集团共同主办的2023年长江三峡中华鲟放流活动在湖北省宜昌市胭脂园长江珍稀鱼类放流点举行。首批10万尾中华鲟放归长江，为长江中华鲟物种资源再做补充。

摘要： 走进凤冈县进化镇沙坝村中华鲟养殖基地，清澈的泉水源源不断地涌入养殖池里，一群群色泽光亮、动作敏捷的鲟鱼在池子里游来游去，充满生机。基地负责人安文权正提着鱼饲料，沿着鱼池一边慢慢行走，一边抛撒饲料。进入秋冬季，鲟鱼陆续开始上市，安文权和工人每天都在基地核对出鱼的数量。“从10月份到现在，基地已经售出了20多万斤鲟鱼，销售额400多万元，其中有8万多斤销往了越南，也是我们基地的鲟鱼首次出口。”说起今年的销售情况，安文权非常有信心。

关键词： 中华鲟   环境DNA   长江   种群特征   环境因子  

摘要： 中华鲟（Acipenser sinensis）是我国长江流域的旗舰物种,在长江十年禁渔的大背景下,研究中华鲟无损化检测技术具有重要意义。环境DNA（eDNA）技术是一种环境友好型生物监测技术,可以在不直接观察或捕获生物体的情况下对物种进行检测。本研究尝试从文献中筛选出可以用于检测中华鲟eDNA的特异性引,于2020年长江丰水期中的7、8月在长江中心下游进行了共计44个点位的大范围采样,以及中华鲟繁殖期前后的2022年9月和2023年1月在长江中下游选取了4个中华鲟常出现的区域,进行了各断面立体式采样。共计采集了95个eDNA样品,使用筛选得到的引物进行了中华鲟eDNA的检测,以尝试利用eDNA探索中华鲟的分布特征。在检测长江中华鲟eDNA的同时,还同步检测了对应eDNA采样位点的水温、p H、溶解氧、电导率、浊度、氧化还原电位、总磷、总氮、氨氮、COD、叶绿素a、高锰酸盐指数、F-、NO2-、NO3-和总有机碳,共计16种环境因子。之后通过eDNA与环境因子相关性分析的方法,尝试分析得到与中华鲟eDNA相关性较为显著的环境因子,从而进一步分析中华鲟的分布特征。 本研究成功筛选到了1组可以检测中华鲟eDNA的引物,使用该引物成功检测到包括中华鲟在内的长江4种鲟类的eDNA。依据测序结果分析了不同断面检测到的中华鲟eDNA的差异,发现繁殖期后皆为宜昌断面中华鲟eDNA检出量最多,繁殖期前洞庭湖口断面最少,繁殖期后最少为入海口断面,该中华鲟eDNA的检测结果与中华鲟的历史调查和洄游特征较为吻合。在长江丰水期的检测中于其中38个点位检测到了中华鲟的eDNA,并发现了5个在长江丰水期中华鲟eDNA检出量较高的水域,猜测这些水域的生态环境可能适合中华鲟的栖息。且分析了繁殖期前后立体采样断面各点位中华鲟eDNA检出量之间差异后还发现,表层、中层和底层水样的中华鲟eDNA检出量并不相同,在不同水深条件下,中华鲟eDNA的检出量的差异性或许表明,在今后的调查中采用混合或者立体采样或许可以更加全面地进行中华鲟eDNA的检测。在环境因子于中华鲟eDNA的相关性分析中发现,宜昌断面种群eDNA受电导率和总氮的影响较大,鄱阳湖口断面和入海口断面种群eDNA受电导率和高锰酸盐指数影响较大。物种与环境因子相关性分析还发现,即使是相近物种如中华鲟与杂交鲟,它们的eDNA对于环境因子的偏好性并不相同。相关性分析还发现,中华鲟eDNA和化学需氧量呈正相关较明显,这可能表示化学需氧量较高的水域容易检测出较多的中华鲟eDNA。 综上所述,本研究利用eDNA检测了中华鲟的分布情况,并使用相关性分析方法探究了影响中华鲟eDNA分布的环境因子,从而利用eDNA研究中华鲟的分布特征。希望本研究所得结果可为完善长江中华鲟eDNA检测技术提供借鉴,同时为探究对中华鲟分布影响较大的环境因子提供帮助,为今后eDNA与其他方法结合更加全面研究长江中华鲟的分布情况提供参考。

摘要： 物种简史中华鲟（Acipenser sinensis）是一种大型溯河产卵洄游性鱼类，主要分布于东南沿海大陆架水域和长江中下游干流。其体型硕大，体长可达5米，体重可超千斤，寿命40龄以上，在长江中的洄游距离达2800公里以上。

关键词： 海水养殖   中华鲟   生长指标   血液生化指标   行为学指标   转录组分析  

摘要： 中华鲟(Acipenser sinensis)为江海洄游型的国家一级保护动物,当前主要以淡水养殖方式为主进行保种养殖,长期的淡水环境使其产生了一些生长与繁殖问题。中华鲟自然生活史中80%的时间生活在海洋,海洋生活史的保护是物种延续的关键环节之一,开展海水养殖中华鲟亚成体生理和行为学特征研究,可为“陆-海-陆”中华鲟保种养殖模式提供理论指导,为中华鲟的海洋生活史保护提供基础数据。为掌握海水养殖中华鲟的生理特征,利用室内海水养殖系统,养殖了中华鲟亚成体521天,统计了存活率(SR)、体质量特定生长率(SGR)、体长特定生长率(SGRL)、日增重(DWG)、日增长(DLG)、初始肥满度(CF_初)和最终肥满度(CF_终)等生长指标,并与淡水养殖402天中华鲟亚成体的生长指标做了比较;同时,采集了中华鲟亚成体的血液,检测了31项常规血清生化指标,并对海水与淡水养殖中华鲟亚成体的各血清生化指标进行了显著性差异分析,采用Illumina平台进行了转录组测序(RNA-Seq)。为探索海水养殖环境下中华鲟的行为特征,通过在凌晨、早上、中午和晚上对海水养殖中华鲟亚成体定时观察记录,统计出中华鲟亚成体的浮出水面频率、翘头频率、尾摆频率、游泳速度、游泳距离和改变方向频率。获得的主要研究结果与结论如下: 1、在海水驯养中华鲟亚成体生长特征研究中,中华鲟亚成体的全长、体长与体重均增大,且海水驯养成活率为100%;与淡水养殖中华鲟亚成体相比,海水养殖中华鲟亚成体的SGR、SGRL与DLG均极显著增大,DWG差异不显著;海水养殖中华鲟亚成体的CF_初和CF_终差异不显著,淡水养殖亦是如此。中华鲟海水驯养成活率高,说明该驯养方法比较科学;中华鲟亚成体的SGR、SGRL与DLG在海水养殖条件下极显著增大,说明海水条件更有利与中华鲟的生长,可能海水中的盐度刺激有利于中华鲟生长因子的产生或促进生长因子发挥作用;在海水和淡水养殖条件下CF_初和CF_终差异均不显著,可能与中华鲟亚成体饲料营养与养殖方法较为一致有关。 2、在海水养殖中华鲟亚成体血清生化特征研究中,中华鲟亚成体GGT、IgG、IgM、C3与C4均未检出,IgA检出浓度较低,CR、K、Na、Cl、Ca、LDH与IgA等7项血清生化指标的变异系数≤0.2,其它指标变异系数大于0.2,说明中华鲟亚成体大部分血液生化指标不稳定,具体原因需要进一步研究。相比淡水养殖,海水养殖中华鲟亚成体血清的TBIL与IDBIL显著或极显著低于淡水养殖中华鲟亚成体,IDBIL是由红细胞分解产生,肝脏对其摄取、结合,转化为DBIL,DBIL无显著性差异,可能海水环境下,中华鲟亚成体红细胞脆性小或数目更少;UA、UREA与LDH显著或极显著高于淡水养殖中华鲟亚成体,UA,UREA与肾脏代谢密切相关,LDH在肾脏中含量丰富,可能中华鲟在其适应高渗环境中,其肾脏代谢可能产生适应性变化;海水养殖中华鲟亚成体血清TG显著高于淡水养殖,LDL-C显著低于淡水养殖中华鲟亚成体,可能海水环境下中华鲟亚成体的脂肪代谢有所调节;CK显著高于淡水养殖,监测中华鲟心肌状况时,要考虑养殖环境;K与Na显著或极显著低于淡水养殖中华鲟亚成体,血清离子并无增大,说明中华鲟亚成体渗透压调节能力较强。海水与淡水养殖中华鲟亚成体DBIL、CR、TBA、GLU、TC、HDL-C、Cl、Ca、AST、ALT、ALP、AMY、ALT/AST、TP与CRP等血清生化指标无显著性差异,实验中华鲟亚成体健康,检测的生化指标的值可以为基础血清指标的健康参数范围提供一定参考。 3、在海水养殖中华鲟亚成体血液转录组分析研究中,中华鲟亚成体全血从头组获得162212条unigenes,244525个Transcript,测序质量值30(Q30)最低为93.32%,测序结果可信度较高。对拼接组装的序列进行显著差异表达基因(DEGs)筛选,共获得海水养殖环境下中华鲟亚成体4811个DEGs,其中,显著上调的有957个,显著下调的有3854个。对筛选出的显著差异表达基因进行GO功能注释与富集和KEGG代谢通路注释与富集分析,结果显示,筛选出的DEGs在GO功能注释与与富集分析时,主要被注释在细胞氧化剂解毒、核小体和蛋白质DNA复合物和染色质结构成分等功能中;DEGs在KEGG代谢通路注释与富集分析时,在甘油磷脂代谢(Glycerophospholipid metabolism)、乙醚脂质代谢(Ether lipid metabolism)、亚油酸代谢(Linoleic acid metabolism)与α-亚麻酸代谢(alpha-Linolenic acid metabolism)等脂肪代谢信号通路中得到显著富集。研究结果表明,中华鲟亚成体差异基因显著富集氧化解毒与物质合成等功能,可能存

关键词： 中华鲟   特有物种   鲟鱼   极度濒危   长江鲟   灭绝  

摘要： 在长江特有物种白鲟灭绝之后,中国现存本士鲟鱼由原来的8种变成7种,其中生活在长江的只剩下2种,即长江和中华鲟。长江鲟已经野外灭绝,中华鲟如今也处于极度濒危状态,频危程度仅次于长江鲟。