关键词： 小儿手足口病   热毒宁注射液   中药制剂   网状Meta分析  

摘要： 目的:系统评价热毒宁注射液联合西药治疗组、喜炎平注射液联合西药治疗组、小儿豉翘清热颗粒联合西药治疗组、痰热清注射液联合西药治疗组、炎琥宁注射液联合西药治疗组、蒲地蓝口服液联合西药治疗组、蓝芩口服液联合西药治疗组及甘露消毒丹联合西药治疗组八种中药制剂联合西药对比西药的有效性和安全性，并通过网状Meta分析对其治疗小儿手足口病的功效优劣对比排序，为临床医生治疗小儿手足口病提供参考依据。　　方法:利用中国学术期刊全文数据库(CNKI)、万方数据库(WanfangData)、维普数据库(VIP)、中国生物医学文献服务系统数据库(SinoMed)、中国科学引文数据库(CSCD)、CochraneLibrary、WebofScience及PubMed等中英文数据库进行检索，筛选到2023.01.31公布的临床研究，收集喜炎平注射液联合西药、热毒宁注射液联合西药、小儿豉翘清热颗粒联合西药、痰热清注射液联合西药、炎琥宁注射液联合西药、蒲地蓝口服液联合西药、蓝芩口服液联合西药、甘露消毒丹联合西药的任意一种方案治疗儿童手足口病的随机对照试验，结局指标以临床有效率及不良反应发生率为主要结局指标，次要结局指标为退热时间、皮疹消退的时间、口腔疱疹的消退时间、入院时间等，运用Stata16进行直接Meta分析，然后用ADDIS1.6.6软件对八种中药制剂与西药联合治疗组和西药组进行网状Meta分析。　　结果:共纳入195项临床研究，23532例受试者，直接Meta分析结果显示在提高临床总有效率，降低退热时间，减少皮疹、口腔疱疹消退时间和缩短住院时间等疗效指标上，中药制剂联合西药治疗较单纯常规西药治疗更有优势，间接比较的网状Meta分析结果提示不同中药制剂联合西药的功效优劣排序为:①总有效率方面:热毒宁注射液联合西药＞炎琥宁注射液联合西药＞痰热清注射液联合西药＞喜炎平注射液联合西药＞蒲地蓝消炎口服液联合西药＞蓝芩口服液联合西药＞小儿豉翘清热颗粒联合西药＞甘露消毒丹联合西药＞西药;②缩短退热时间方面:热毒宁注射液联合西药＞喜炎平注射液联合西药＞小儿豉翘清热颗粒联合西药＞痰热清注射液联合西药＞蓝芩口服液联合西药＞蒲地蓝消炎口服液联合西药＞炎琥宁注射液联合西药＞甘露消毒丹联合西药＞西药;③缩短口腔疱疹消退时间方面:蓝芩口服液联合西药＞小儿豉翘清热颗粒联合西药＞热毒宁注射液联合西药＞痰热清注射液联合西药＞喜炎平注射液联合西药＞蒲地蓝消炎口服液联合西药＞炎琥宁注射液联合西药＞甘露消毒丹联合西药＞西药;④缩短皮疹消退时间方面:喜炎平注射液联合西药＞蓝芩口服液联合西药＞热毒宁注射液联合西药＞蒲地蓝消炎口服液联合西药＞小儿豉翘清热颗粒联合西药＞痰热清注射液联合西药＞炎琥宁注射液联合西药＞甘露消毒丹联合西药＞西药;⑤缩短住院时间方面:喜炎平注射液联合西药＞热毒宁注射液联合西药＞炎琥宁注射液联合西药＞蓝芩口服液联合西药＞小儿豉翘清热颗粒联合西药＞痰热清注射液联合西药＞西药。　　不良反应发生率的比较中，小儿豉翘清热颗粒联合西药组及炎琥宁注射液联合西药组分别低于西药组，其比较存在统计学意义OR=0.39，95％CI(0.16，0.91)、OR=0.47,95％CI(0.27，0.82)，其他组间比较没有统计学意义。　　结论:在提高临床总有效率，降低退热时间，减少皮疹、口腔疱疹消退时间，缩短住院时间等疗效指标上中药制剂联合西药治疗小儿手足口病较单纯常规西药治疗更有优势。运用直接Meta分析和网状Meta分析，根据整合的随机对照实验直接证据和间接证据的结果，可进一步得出热毒宁注射剂联合西药的疗效最显著，可为临床用药首选方案。口服液方面，小儿豉翘清热颗粒、蒲地蓝消炎口服液及蓝芩口服液疗效较显著。

关键词： 黄曲霉毒素B1   免疫层析方法   金纳米粒子   量子点荧光微球   聚集诱导发光微球  

摘要： 霉菌是丝状真菌的总称,常见的霉菌包括曲霉菌（Aspergillus）、镰刀菌（Fusarium）、青霉菌（Penicillium）和交链孢霉（Alternaria）,在合适的生存条件下,霉菌会侵染各种食品,导致其产生腐败和品质劣变。真菌毒素是真菌的代谢产物,当摄入或通过皮肤吸收真菌毒素时,会导致人类或畜禽生病或死亡,因此被认为是最具危险性的食品污染物之一。真菌毒素的污染会严重危害到我国的食品安全,并且制约我国的食品对外贸易。黄曲霉毒素（Aflatoxins,AFs）是黄曲霉菌和寄生曲霉菌产生的代谢物,被认为是致癌性最强的一类化合物,在目前已经发现的AFs中,黄曲霉毒素B1（Aflatoxin B1,AFB1）的毒性最大,致癌性最强,且在自然界中分布广泛。发酵食品主要采用霉菌、酵母菌和细菌等多种微生物发酵而得到。常见的发酵食品包括发酵豆制品（豆酱、酱油等）以及谷物发酵品（食醋、白酒和黄酒等）,能够产生AFB1的黄曲霉菌和寄生曲霉菌在多种豆类、谷物及发酵食品中都有发现。发酵食品在制作、储存和运输过程中有可能被AFB1污染。因此,有必要建立快速、灵敏、准确的方法用于发酵食品中AFB1的检测。基于免疫学原理,本研究建立了三种免疫层析方法用于快速检测AFB1。分别是以传统的胶体金纳米粒子（Gold nanoparticles,Au NPs）为信号标记材料的双T线免疫层析方法,用于AFB1的定性检测;以新型的量子点微球（Quantum dot nanobeads,QBs）为信号标记材料的免疫层析方法,用于常见发酵食品中AFB1的定量检测;以最新的聚集诱导发光微球（Aggregation-induced emission fluorescent microsphere,AIEFM）为信号标记材料的免疫层析方法,尝试用于常见发酵食品中AFB1的定量检测。主要研究方法和结论如下:（1）基于免疫学原理建立了一种胶体金免疫层析方法（Gold nanoparticles-Lateral flow immunoassay,Au NPs-LFIA）,该方法采用两条检测线的读取模式,可用于AFB1的定性检测。通过柠檬酸钠还原法合成了Au NPs,对偶联单克隆抗体（Monoclonal antibody,m Ab）的p H、m Ab标记量、检测线上AFB1-BSA的浓度、Au NPs-m Ab探针添加量、免疫反应时间进行了优化,建立了双T线Au NPs-LFIA,并对本方法的灵敏度进行了评价。在最佳条件下双T线Au NPs-LFIA检测AFB1时,检测限分别为0.125 ng/m L和0.5 ng/m L。双T线Au NPs-LFIA可作为初步的快速筛查手段用于AFB1的检测,能够区分出实际发酵食品中的弱阳性样本（国家最低限量标准）和强阳性样本,从而降低检测的假阳性率。（2）为了能够快速定量检测发酵食品中的AFB1,本方法基于QBs建立了一种荧光定量免疫层析方法,对偶联m Ab的p H、EDC用量、m Ab标记用量、检测线上AFB1-BSA的浓度、QBs-m Ab探针添加量和免疫反应时间进行了优化。在最优条件下,本方法在缓冲液中的标准曲线的线性方程为y=-1.9303 lg（x）–0.7847（R2=0.994）,IC50为0.044 ng/m L,线性范围在0.01-0.2 ng/m L;在基质混合液中标准曲线的线性方程为y=-2.0374 lg（x）–0.7519（R2=0.994）,IC50为0.0487μg/kg,线性范围在0.01-0.2μg/kg。通过选取10种发酵食品进行加标回收实验,加标浓度均为5μg/kg,加标回收实验的结果显示,加标回收率为74.53%-117.73%,变异系数（Coefficient of variation,CV）为1.55%-9.54%,10种加标食品样本的回收率平均值为102.59%,因此本研究建立的QBs-LFIA方法适用于多种发酵食品中AFB1的定量测定。并且,特异性实验结果表明,本方法对于其他5种真菌毒素的交叉反应率均较低,加速保存实验结果显示,本方法的检测结果比较稳定。因此,本研究所建立的QBs-LFIA方法的灵敏度高、特异性好、检测结果的准确性和稳定性均能满足实际应用需求,有很好的应用前景。（3）以QBs为信号标记材料的LFIA方法已经较为成熟,本研究尝试将最新的具有优异光学性能的AIEFM材料应用于AFB1的快速检测,这可以为AIEFM的实际应用奠定基础。本方法分别对偶联m Ab的p H、EDC用量、m Ab标记用量、检测线上AFB1-BSA的浓度、AIEFM-m Ab探针的添加量和免疫反应时间等条件进行了优化。在最佳条件下,建立了定量标准曲线,其中,在缓冲液中的标准曲线的线性方程为y=-1.5255

关键词： 黄曲霉毒素B1   荧光适配体传感器   核酸外切酶Ⅲ   树枝状DNA纳米结构   比率型传感器   金钯纳米颗粒   无标记探针  

摘要： 黄曲霉毒素B1（AFB1）是一种典型的真菌毒素,在农产品中极易残留,当蓄积到一定量时对人类和动物都有巨大的威胁。因此,准确、快速地测定AFB1对环境分析和食品安全至关重要。本课题利用荧光传感器操作简单、成本低、稳定性好等优势,结合适配体的高亲和力和特异性,并引入磁珠（MBs）、DNA纳米结构、核酸外切酶Ⅲ（Exo Ⅲ）和催化发夹自组装等不同的传感策略,构建了三种用于检测AFB1的DNA荧光适配体传感器。具体研究内容如下:1.合成了一种新型氮掺杂碳负载钯（C-N-Pd）材料,并首次将其作为荧光适配体传感器的能量受体。以C-N-Pd为新型猝灭材料,Exo Ⅲ辅助信号放大,构建了用于检测AFB1的荧光传感器。与不加酶相比,添加Exo Ⅲ的传感器的荧光响应值提高了74.7%。该荧光传感器对AFB1具有良好的选择性,检出限（LOD）低至9 pg/m L。将本传感器对玉米、花生和葡萄酒样品中的AFB1进行了检测,LOD分别为15 pg/m L、13 pg/m L和18 pg/m L。此外,将本方法与高效液相色谱法（HPLC）进行了比较,t值为1.588,小于理论t值4.303,表明在95%的置信区间下两者具有较好的一致性。该方法不仅操作简单,并且从传感器的制备到实现检测仅需2 h,在快速检测方面具有较高的潜力。2.经前期研究发现,单信号在受到环境影响下可能会产生假阳性。且基于Exo Ⅲ的辅助信号放大策略容易受到温度和p H的影响。而本实验设计了一种基于荧光共振能量转移（FRET）的比率型传感器,以两个不同波长下的荧光强度比值作为响应信号,可以极大地减弱复杂环境对荧光的负面影响,达到内部校正的效果。同时辅以无酶扩增催化发夹自组装实现信号放大,用于食品中AFB1的特异性检测。与单信号模式相比,基于FCy3/FCy5的比率型信号模式对AFB1的检测具有更宽的线性范围（0.1-100 ng/m L）和更高的相关系数（R2=0.991）。对于花生、大豆和葡萄酒样品的加标实验,以FCy3、FCy5和FCy3/FCy5等3条标准曲线回收率的平均值为参考值,比率型信号比单信号具有更高的精度。同时,树枝状支架的存在不仅提高了传感器的稳定性,而且提高了FRET的效率。在整个检测过程中,有树枝状DNA纳米结构的响应信号差是无树枝状DNA纳米结构的5.7倍。此外,引入催化发夹自组装这一无酶扩增策略,通过适配体互补链（c-DNA）的循环实现信号扩增。3.经前期研究发现,基于比率型的传感器具有更高的准确性,且自主合成的DNA纳米结构可以提高FRET的效率。本实验引入了具有发夹结构的h-DNA,并首次将金钯纳米颗粒（Au-Pd NPs）作为荧光猝灭基底,自主合成了碳点（CDs）,同时引入SYBR Green I（SG I）染料,构建了以FCDs/FSG I为信号的比率型传感器用于食品中AFB1的特异性检测。h-DNA的加入,极大地提高了其负载适配体（Apt）的效率。Au-Pd NPs对CDs的猝灭效果分别是Au NPs、Pd NPs的1.4倍和3.4倍。与标记型探针相比,本传感器所用的自主合成的CDs和无标记探针SG I具有节省成本的优势。在1-100 ng/m L范围内,FCDs/FSGI与AFB1的浓度对数具有良好的线性关系,LOD低至0.07 ng/m L。同时,本传感器对花生和葡萄酒样品中的AFB1进行了加标检测,回收率在91%-115%之间,表明本传感器在实际样品检测中具有较高的应用潜力。

关键词： 中药提取物   荜茇   胡椒碱   抑菌活性   抑菌机理  

摘要： 化学合成农药是现代农业生产的重要组成部分,合理地施用可保障粮食的产收,但在使用不当的情况下很容易导致环境的污染和人员的伤害。我国是农业大国,农业种植面积广阔,农药用量也相对较大,因此我国面临的农药生态环境问题愈发严峻。开发研究安全高效的绿色农药是目前国内外的主要发展方向之一。我国拥有庞大的用于人体抗菌、抗病毒的中草药库。这些中草药中的一些有效成分很可能对防治农业病害同样具有防治效果,是筛选绿色农药的重要来源。本研究选取了37种中国传统中草药为研究材料,4种重要植物病原菌（灰葡萄孢菌Botrytis cinerea、立枯丝核菌Rhizoctonia solanum、链格孢菌Alternaria alternata和尖孢镰刀菌Fusarium oxysporum）为活性测试对象,对中药的粗提物进行了植物病原菌抑菌活性初步筛选。初筛试验中,荜茇粗提物表现出的抑菌活性最好,采用生物活性追踪法对荜茇提取物进行了色谱分离并获得活性单体成分。结合UPLC、HRMS、1H-NMR和13C-NMR检测分析,确定活性单体成分的化学结构。对活性单体成分进行室内毒力测定、活体抑菌研究及初步抑菌机理研究。研究结果如下:（1）采用菌丝生长速率法对37种中草药乙醇提取物的抑菌活性进行了初步筛选。在500μg/m L浓度下,筛选出荜茇乙醇提取物抑菌活性最强。（2）进一步对荜茇乙醇提取物进行室内毒力测定,实验结果显示,荜茇乙醇提取物对立枯丝核菌、灰葡萄孢、链格孢菌和尖孢镰刀菌的EC50分别为156.56μg/m L、262.74μg/m L、293.89μg/m L和320.71μg/m L。（3）采用水蒸馏提取法提取了荜茇的挥发油。经GC-MS分析,荜茇挥发油的主要成分为石竹烯（Caryophyllene,9.83%）、葎草烯（Humulene,7.22%）、大根香叶烯D（Germacrene D,9.92%）、萘（Naphthalene,2.31%）、1-4-（1,5-二甲基-1,4-己二烯基）环己烯(4-（1,5-dimethyl-1,4-hexadienyl）-1-methyl-cyclohexene,1.79%)、β-没药烯（β-bisabolene,5.42%）、马榄烯（Maaliene,1.75%）、氧化石竹烯（Caryophyllene oxide,1.23%）。以链格孢菌为指示菌株,测定了荜茇挥发油对其抑菌活性。实验结果显示,荜茇挥发油没有显著的抑菌活性。说明荜茇的活性成分存在于乙醇提取物当中。（4）采用柱层析色谱分离技术和生物活性追踪技术,以链格孢菌为指示菌株,对荜茇乙醇提取物进行生物活性追踪分离。获得了一个高抑菌活性单体成分。采用高分辩质谱（HRMS）、核磁共振氢谱（1H-NMR）和核磁共振碳谱(13C-NMR),解析了该活性单体成分的化学结构,确定该抑菌活性成分为（E,E）-1-[5-（1,3-苯并二氧戊环-5-甲基）-1-氧代-2,4-戊二烯基]-哌啶,又称胡椒碱。采用菌丝生长速率法对胡椒碱的抑菌毒力进行测定。实验结果显示,胡椒碱对灰葡萄孢菌、立枯丝核菌、链格孢菌和尖孢镰刀菌的EC50值分别为38.54μg/m L、41.50μg/m L、33.54μg/m L和95.17μg/m L。同时,发现胡椒碱对灰葡萄孢菌的孢子萌发具有明显的抑制作用,其EC50达到0.45μg/m L。（5）通过测定胡椒碱对供试菌株的活体抑菌活性发现,经胡椒碱处理过的植物体表面,能有效阻止对应病菌对植物体的进一步侵染。其抗侵染效果优于阳性对照组。（6）通过测定胡椒碱对供试菌株的各项生理指标的影响发现,胡椒碱的抑菌机理是通过抑制供试菌株的CAT、SOD、SDH和MDH活性;降低供试菌株的可溶性蛋白含量;增加供试菌株的细胞膜通透性;增加供试菌株MDA含量;使供试菌株的菌丝形态产生皱缩且表面变得粗糙,从而抑制病原菌的正常生长。研究结果表明,胡椒碱作为荜茇的主要成分,对供试菌株具有较好的室内抑菌活性及活体抑菌活性,在农作物预防病害侵染或是果蔬保鲜方面,具有一定的开发潜力。

关键词： 桃蛀螟   黄曲霉毒素B1   细胞色素P450   酶活性   实时荧光定量PCR   RNA干扰  

摘要： 桃蛀螟Conogethes punctiferalis是近年来在我国夏玉米田严重为害的主要害虫之一。除直接蛀食玉米籽粒、穗轴和茎秆外,桃蛀螟幼虫为害玉米雌穗造成的伤口还易遭受穗腐病病菌的侵染,从而引起穗腐病发生加重,严重影响玉米产量和品质。在我国,玉米穗腐病致病菌的优势种之一便是黄曲霉菌Aspergillus flavus,该致病菌不仅能引起玉米穗腐病发生,还能产生黄曲霉毒素（Aflatoxins,AFs）并存留于玉米籽粒中,成为粮食、饲料、食品中常见的有毒污染物,严重威胁人畜健康,是影响玉米食用和饲用安全的重要制约因子。研究表明,AFs的多种同分异构体中,以AFB1毒性最强,具有很强的致癌、致畸和致突变作用,会导致人和动物免疫受到抑制、不孕、先天畸形、内分泌紊乱等,在国际上被列为Ⅰ类致癌物。本课题组前期研究发现,桃蛀螟幼虫对不同寄主的适应性较强,即使在穗腐病发生严重的玉米上也能够很好地完成生长发育,说明其对穗腐病玉米具有较强的适应能力。本文利用室内毒力测定、生命表、酶活检测等方法,探明AFB1对桃蛀螟的生长发育和体内相关解毒酶活性的影响。之后从课题组前期转录组测序结果中挑选出两条细胞色素P450基因CYP321F5和CYP9A79进行基因克隆,并对其进行表达量分析及RNA干扰,分析相关P450基因在桃蛀螟适应AFB1的过程中的作用。期望能够阐明桃蛀螟幼虫耐受AFB1的内在机理,为后期进一步探究桃蛀螟对AFB1解毒代谢的分子机制奠定基础。主要研究结果如下:（1）利用饲料混毒法测定了AFB1对桃蛀螟初孵幼虫和3龄幼虫的毒力水平。结果表明桃蛀螟初孵幼虫和3龄幼虫对AFB1具有较强的耐受性,该毒素对桃蛀螟初孵幼虫的LC50为37.381mg/kg,3龄幼虫的LC50为101.996 mg/kg。（2）采用生命表试验研究不同浓度AFB1对桃蛀螟生长发育的影响。当饲料中AFB1浓度≥4mg/kg时,随着AFB1浓度的升高,桃蛀螟幼虫的发育历期明显延长,且化蛹率和蛹重明显降低;当饲料中AFB1浓度≤1 mg/kg时,与对照相比,桃蛀螟幼虫仍能完成正常的生长发育。说明桃蛀螟幼虫能够耐受一定范围内的AFB1,该耐受剂量显著高于玉米中AFB1的国家安全标准检测。（3）利用生命表试验研究饲料中添加P450抑制剂PBO后,对AFB1对桃蛀螟毒性的影响。发现当桃蛀螟取食同时含有PBO和AFB1的饲料时,与取食只加相同剂量的AFB1饲料相比,其生长发育受抑制情况更为显著,显著增强了AFB1对桃蛀螟的毒性。表明该虫体内细胞色素P450酶对AFB1的代谢作用强于活化作用。（4）利用酶活性检测试剂盒分析了AFB1对桃蛀螟中肠内细胞色素P450酶（CYP450s）、谷胱甘肽-S-转移酶（GSTs）和羧酸酯酶（Car E）活性的影响。发现桃蛀螟3龄幼虫取食添加LC50剂量的AFB1饲料24 h、48 h、72 h和96 h后,其中肠内的CYP450s和GSTs酶活性均明显高于取食对照饲料的幼虫;取食48 h、72 h和96 h时,其中肠内的Car E的酶活性显著上升,说明CYP450s、GSTs和Car E可能参与了桃蛀螟对AFB1的解毒代谢过程。（5）通过PCR技术成功克隆出了桃蛀螟体内受AFB1影响较大的两个CYP450s基因CYP321F5和CYP9A79。结果显示,CYP321F5基因ORF全长1377 bp,编码458个氨基酸,蛋白质分子量约为52.635 k Da,等电点为8.42,在Gen Bank上核苷酸登录号为OQ406257.1,氨基酸登录号为WCQ76343.1,系统发育分析表明,其与稻纵卷叶螟CYP321F5的亲缘关系较近,氨基酸同源性为73.58%;CYP9A79基因ORF全长1467 bp,编码488个氨基酸,蛋白质分子量约为56.360 k Da,等电点为6.45,在Gen Bank上的核苷酸登录号为OQ406258.1,氨基酸登录号为WCQ76342.1,系统发育分析表明,与稻纵卷叶螟CYP9A79的亲缘关系较近,氨基酸同源性为71.17%。CYP9A79氨基酸序列含有P450的五大保守结构域,但CYP321F5缺失了位于螺旋I区的保守序列A/GG×D/ETS/T,并且位于血红素结合区的特征序列被FGYGQRATRD替代。（6）采用Real-time PCR技术对AFB1处理后桃蛀螟中CYP321F5和CYP9A79基因的表达情况进行了分析。结果显示,桃蛀螟3龄幼虫取食添加了AFB1(饲料中AFB1浓度为其LC50)的饲料24 h、48 h、72 h、96 h后,CYP321F5的表达量均明显高于对照组,其中,幼虫取食96 h时,对该基因表达量的影响最为强烈,处理组的表达量是对照组的3.31倍;CYP9A79的表达量也在幼虫取食A

关键词： 农产品   盐酸克伦特罗   黄曲霉毒素B1   试纸卡筛选   快速检测   安全管理对策  

摘要： 胶体金快检试纸卡已被广泛应用于基层农产品中盐酸克伦特罗、黄曲霉毒素B1等有害物质残留检测,有效提升了检测质量和效率。乐山市市中区市场监管局于2018年开始将辖区内猪肉、羊肉等生鲜肉类和粮谷类等农产品有害物质快速检测纳入日常食品安全监管工作。本研究采集了市面上4个不同厂家的盐酸克伦特罗和黄曲霉毒素B1快检试纸卡,对其灵敏度、操作简便程度等方面进行了综合考评。结果表明B厂家生产的盐酸克伦特罗试纸卡,D厂家生产的黄曲霉毒素B1试纸卡综合得分最高,作为本次调查使用的试纸卡。使用筛选出的试纸卡对乐山市市中区11个超市和21个农贸市场中的4个批次194份猪肉、羊肉样品进行了盐酸克伦特罗检测,对252份粮谷样品(大米、玉米、花生、大豆)进行了黄曲霉毒素B1检测。采样点覆盖5个街道、9个乡镇。检测结果表明,采集的猪肉和羊肉样品中盐酸克伦特罗检测结果均为阴性;粮谷类样品黄曲霉毒素B1超市样品检测结果均为阴性,5份农贸市场销售的粮谷类样品检测结果为阳性,黄曲霉毒素B1检出率约为1.9%,其中花生样品居多,经高效液相色谱验证其含量均低于国标中明确规定的限量值。春夏两季相对容易发生黄曲霉毒素B1污染,应加大对农贸市场粮谷检测力度。发现农贸市场粮谷类样品有黄曲霉毒素检出后,对550份农户进行了问卷调查,结果显示乡镇从事粮谷种植销售农户的年龄结构以51-60岁为主。存在种植和销售粮谷类人员年龄普遍偏大且防霉意识弱、部分粮谷储藏条件和方式不利于霉菌的控制、基层宣传不到位等问题。针对本次检测和问卷调查结果,对黄曲霉毒素B1防治提出以下安全管理对策:(1)强化农户认知教育;(2)改善农户粮谷储存条件;(3)多角度开展知识宣讲;(4)适当提高检测频率。多措并举提升市中区粮食谷物安全管理水平。

关键词： 医疗机构中药制剂   医疗机构制剂   DEMATEL-ISM模型   发展影响因素  

摘要： 医疗机构中药制剂是我国临床用药重要组成部分,也是我国中药新药研发的一条重要路径。安徽省作为中医药资源大省,中医药历史悠久,近年来鼓励医疗机构中药制剂发展。因此本文全面了解安徽省医疗机构中药制剂基本现状,深入挖掘制约制剂发展的影响因素及存在主要问题,并基于调研结果提出相应解决方案。本研究基于安徽省医疗机构中药制剂发展现状,分别从制剂研发、注册、配制、使用、监管五个阶段,对影响因素进行全面有效识别,构建影响因素集并验证,最终确立了19个影响因素指标体系。用决策实验室法(DEMATEL)来构建影响因素间的关系,识别出重要影响因素,在DEMATEL的基础之上引入解释结构模型(ISM)分析各层级影响因素之间的影响关系,并提出改进措施。通过影响因素识别出2个根源层影响因素,14个中间层影响因素,3个表象层影响因素,其中监管责任、监管能力为根源层关键影响因素,医院对制剂研发工作的重视程度、制剂研发的积极性、制剂注册政策要求、监管力度为中间层关键影响因素。根据各层级关键影响因素,提出安徽省医疗机构中药制剂可持续性发展路径,即强化协同联动,明确监管责任;多措并举,提高监管能力;拓展开发模式,增强重视程度;搭建研发平台,促进多方积极合作;结合实际情况,优化配套政策规定;健全配套制度,加大监管力度等措施。

关键词： 体外发酵   AFB1   群体感应   瘤胃细菌   内毒素  

摘要： 诸多研究证实霉菌毒素会对瘤胃微生物产生不利影响,同时瘤胃微生物细胞间普遍存在着群体感应(Quorum sensing,QS)效应,但是霉菌毒素是否会通过QS对微生物及内毒素生成产生影响尚不明确。本研究利用新型双外流连续培养瘤胃模拟发酵技术,基于优化后的QS信号分子自体诱导物2(Autoinducer-2,AI-2)及酰基高丝氨酸内酯类信号分子(Acyl-homoserine lactone,AHL)定量检测方法,研究黄曲霉毒素B1(Aflatoxins B1,AFB1)对肉牛瘤胃体外发酵、瘤胃细菌QS、内毒素生成及菌群组成与代谢的影响。旨在以QS为介入点,探讨AFB1对瘤胃细菌QS作用机制和内毒素生成的影响,为防控反刍动物日粮霉菌毒素污染提供参考依据。本试验使用新型双外流连续培养瘤胃模拟设备,共有12个发酵罐,采用4×4拉丁方试验设计,分为4个处理组:对照组(CON组),AFB1低剂量组(AFB1L组,20μg/kg),AFB1中剂量组(AFB1M组,40μg/kg)和AFB1高剂量组(AFB1H组,60μg/kg)。试验分为4期,每期10天,其中前3天为适应期,后7天为试验期。试验结果主要有: 1、AFB1对发酵底物干物质、粗蛋白、有机物消失率均无显著影响(P>0.05),中性、酸性洗涤纤维消失率呈显著线性降低。与CON组相比,AFB1M组和AFB1H组p H显著升高(P<0.05);AFB1L组和AFB1M组氨态氮含量显著升高(P<0.05);AFB1H组中总挥发性脂肪酸含量显著降低(P<0.05),其中乙酸摩尔比显著升高(P<0.05),但异丁酸、异戊酸比例显著降低(P<0.05);AFB1L组、AFB1M组和AFB1H组丙酸比例均显著升高;AFB1L组和AFB1M组丁酸比例显著升高(P<0.05)。 2、利用实时荧光定量PCR技术检测10种瘤胃微生物数量,结果显示:与CON组相比,AFB1H组中真菌(Fungus)数量显著降低(P<0.05);AFB1L组中甲烷菌(Methanogens)数量较显著降低(P<0.05);AFB1H组中黄色瘤胃球菌(Ruminobacter flavefaciens)数量显著降低(P<0.05)。 3、利用柱前衍生高效液相色谱及高效液相色谱-串联质谱法分别对发酵液中AI-2及AHLs进行定量检测。结果显示:与CON组相比,AFB1H组中AI-2含量显著降低(P<0.05);AFB1L组、AFB1M组及AFB1H组中C4-HSL和C6-HSL含量均显著降低(P<0.05);AFB1H组中3-oxo-C6-HSL含量显著降低(P<0.05)。3-oxo-C8-HSL在各组间含量差异不显著(P>0.05)。C8-HSL、C10-HSL、3-oxo-C10-HSL和3-oxo-C12-HSL四种信号分子在本次试验中未检出,各组间的内毒素及微生物蛋白含量无显著差异(P>0.05)。 4、针对瘤胃体外发酵液的16S rRNA全长测序结果显示:与对照组发酵液(CONL)相比,除中剂量组发酵液(AFB1M-L)Coverage指数显著降低(P<0.05)外,各组瘤胃微生物Alpha和Beta多样性没有显著变化;高剂量组发酵液(AFB1H-L)厚壁菌门(Firmicutes)相对丰度显著提高(P<0.05);AFB1M-L和AFB1H-L中的普雷沃氏菌属(Prevotella)相对丰度显著降低(P<0.05);AFB1H-L中的溶纤维丁酸弧菌(Butyrivibrio＿fibrisolvens)相对丰度显著提高(P<0.05),AFB1M-L中的Prevotella＿ruminicola相对丰度显著降低(P<0.05)。 针对瘤胃体外发酵食糜的16S rRNA全长测序结果显示:与对照组食糜(CON-S)相比,除中剂量组食糜(AFB1M-S)Shannon指数显著降低(P<0.05)外,各组瘤胃微生物Alpha和Beta多样性无显著变化;低剂量组食糜(AFB1L-S)厚壁菌门相对丰度显著提高(P<0.05),拟杆菌门(Bacteroidota)相对丰度显著降低(P<0.05);高剂量组食糜(AFB1H-S)脱硫菌门(Desulfobacterota)相对丰度显著降低(P<0.05);AFB1LS、AFB1M-S及AFB1H-S中的克里斯滕森菌科R-7群和瘤胃球菌科NK4A214群(Ruminococcaceae＿NK4A214＿group)相对丰度显著降低(P<0.05);AFB1H-S中的Prevotellaceae＿UCG＿001相对丰度显著提高(P<0.05)。 5、代谢组学分析表明,鉴定出的各类代谢物占比排名前三的是:脂质和类脂分子(40.562%),有机酸及其衍生物(17.001%),

关键词： 茶轮斑病   博落回   抑菌活性   血根碱  

摘要： 茶轮斑病是一种由拟盘多毛孢属（Pestalotiopsis）引起的危害茶树叶片的重要病害,茶轮斑病侵染后,茶树叶片表现出轮斑症状,该病害主要危害老叶的叶尖、叶缘,也对嫩叶和嫩梢有一定影响,可引起叶片的大量脱落,导致茶树经济产量降低并严重危害了茶农了经济效益。本研究以10种常见的中药草为研究对象,评价了其提取物对茶轮斑等8种农业上常见病原菌的抑菌活性,并进一步对抑菌活性最好的博落回抑菌活性成分进行了研究。主要研究结果为以下三个方面:1.采用生长速率法测试了10种中药[紫菀（Aster tataricus）、博落回（Macleaya cordata）、木姜子（Litsea pungens）、茜草（Rubia cordifolia）、鸡血藤（Spatholobus suberectus）、爵床草（Rostellularia procumbens）、香薷（Elsholtzia ciliata）、吴茱萸（Euodia rutaecarpa）、白术（Atractylodes macrocephala）和清江枳壳（Citrus aurantium）]甲醇提取物对8种真菌[暹罗炭疽菌（Colletotrichum siamense）、果生刺盘孢（Colletotrichum fructicola）、茶拟盘多毛孢（Pestalotiopsis theae）、胶孢炭疽菌（***）、链格孢菌（Alternaria alternata）、尖孢镰刀菌（Fusarium oxysporum）、共享镰刀菌（Fusarium commune）和葡萄座腔菌（Botryosphaeria dothidea）的抑制效果,结果显示,在浓度为2 mg/m L时抑制率大于70%的有:博落回提取物对茶拟盘多毛孢抑制率为79.37%下,木姜子提取物对茶拟盘多毛孢和尖孢镰刀菌抑制率为89.93%和72.92%,香薷提取物对茶拟盘多毛孢、胶孢炭疽菌和暹罗炭疽菌抑制率分别为89.07%、81.37%和76.00%,其余提取物对8种病菌的抑制率均小于70%。2、以抑菌效果较好的4种中药提取物为研究对象,进行了抑菌毒力测定。测试结果显示,香薷提取物对茶拟盘多毛孢的EC50为2848.15μg/m L,博落回提取物对茶拟盘多毛孢的EC50为391.20μg/m L,木姜子提取物对尖孢镰刀菌的EC50为1415.46μg/m L,清江枳壳提取物对共享镰刀菌的EC50为11621.34μg/m L。其中,博落回提取物对茶拟盘多毛孢EC50值最小,为391.20μg/m L。此外,清江枳壳提取物对共享镰刀菌孢子萌发抑制率为26.55%,博落回对茶拟盘多毛孢孢子萌发抑制率为10.04%。3、以博落回为研究对象,通过液质联用对其代谢产物进行了分析鉴定,共鉴定出482种化合物。其中各类成分占比非别为:脂质和类脂质成分占31.61%,苯丙类和聚酮类占11.17%,有机酸类占11.17%,苯环型占13.35%,有机氧化合物占12.81%,有机酸种类占11.17%,生物碱类占0.82%。进一步以博落回中代表性成分血根碱为研究对象,采用菌丝生长速率法和孢子萌发法测试了其对茶拟盘多毛孢的抑菌活性,并通过光学显微镜观察了其菌丝形态,通过电导率测试了其细胞通透性及还原性糖含量。结果显示,血根碱对茶拟盘多毛孢的EC50为5.93μg/m L,血根碱影响茶拟盘多毛孢使其相对于对照组电导率增加,还原糖含量增加,还原糖含量变化趋势为48小时之前缓慢减少,48小时后骤增。以上结果表明,血根碱可能是通过破坏菌丝细胞膜来影响病原菌的正常生长,从而达到抑菌的效果。