关键词： 黄曲霉毒素   肝癌细胞   生物物理学特性   细胞骨架  

摘要： 目的研究黄曲霉毒素B1(AFB1)对人肝癌细胞(HCCs)生物物理学特性及细胞骨架结构的影响。方法利用0、0.01、0.1、1、5、10μmol/L AFB1分别处理HepG2细胞24 h和48 h,采用CCK-8试剂盒检测细胞活力。在此基础上,分析10μmol/L AFB1对细胞渗透脆性、膜流动性、细胞电泳率和F-actin骨架结构的影响。随后,提取细胞总RNA,通过实时荧光定量PCR检测12种主要细胞骨架结合蛋白的转录水平变化。结果AFB1处理48 h时HepG2细胞的活力呈剂量依赖性增强。10μmol/L AFB1处理能够增强HepG2细胞抗低渗能力及细胞电泳率,细胞骨架F-actin含量明显增加,主要细胞骨架结合蛋白的mRNA表达发生改变。结论AFB1能够影响HepG2细胞的生物物理学特性、细胞骨架结构及其结合蛋白,这可能与其毒性作用直接相关。

关键词： 药品   高质量发展   中药制剂   原料  

摘要： 目的:为中药制剂监管检查更好地服务于行业高质量发展提供参考。方法:归纳中药制剂原料质量控制存在的问题,分析产生问题的原因。结果:现行GMP没有完全对焦中药制剂主要矛盾,对高质量发展关注不够。结论:中药制剂应该探索均一化投料,完善原料质量控制,加强原料供应保障,建议完善GMP中药制剂相关内容,强化投料前质量控制,细化内控质量标准要求,加强原料供应体系审计要求,突出原料供应的稳定性和保障能力,建立基础数据库,助力中药行业发展。

关键词： 粮油食品   黄曲霉毒素B1   酶联免疫法  

摘要： 本文分析了粮油食品中适用于黄曲霉毒素B1检测的具体方法。利用酶联免疫法分析其中黄曲霉毒素B1的具体含量。在检测过程中严格按照相关规定要求进行,并在分析检测结果时按照所规定的判定标准进行研究,验证粮油食品中是否含有黄曲霉毒素B1。

关键词： 探索性研究   中药制剂   质量控制   上市许可持有人   源头控制   全过程控制   整体质量控制  

摘要： 中药制剂成分复杂,其质量控制一直是中药制剂研究、生产、监管关注的重点和难点。通过分析、总结中药制剂质量控制的特点,梳理近年来国家药品抽检对中药材及饮片、中成药所开展的探索性研究取得的工作成果,探讨探索性研究对中药制剂质量控制研究的意义以及中药制剂质量控制研究思路,认为目前中药制剂质量控制研究应是一个随着技术水平的发展、研究的不断深入而不断进行质量设计、质量完善的过程;探索性研究为中药制剂质量控制提供了有效的技术支撑,对探索性研究成果的利用有助于提高中药制剂质量控制水平;药品上市许可持有人应利用国家药品探索性研究成果,研究建立全过程质量控制体系,重视对药材源头的质量控制,重视全过程质量控制及相关研究,加强中药制剂整体质量表征和多途径控制研究,以提高中药制剂质量控制水平,提升中药制剂质量。

关键词： 猪   皮炎   西药制剂   中药制剂   复合制剂  

摘要： 猪皮炎的成因多样复杂,病程长短不一,皮炎深浅程度不一,病症类型多样,用药需求也有所不同。常见的猪皮炎类型包括细菌性、病毒性、寄生虫感染型、过敏型、日光型、过敏型、蚊虫叮咬型等。猪皮炎的治疗包括外用和内服2种。其中,外用型药物包括西药制剂型、中药制剂型及中西复合制剂型。文章针对常见的猪皮炎类型,探讨了常见猪皮炎的用药治疗。旨在为猪养殖生产中皮炎的防治提供一些参考。

关键词： 消化科   中药制剂   风险评估管理模式   应用效果  

摘要： 目的:探讨消化科中药制剂应用风险评估管理模式的体会。方法:将2020年2月—2022年7月接受康复新液中药制剂治疗的88例消化科患者作为研究对象,分为对照组和观察组,每组44例。对照组采用常规管理,观察组采用风险评估管理方法进行干预,比较两组中药制剂管理指标、中药制剂管理不合理情况及患者医疗服务满意度。结果:观察组的调配准确率、审核正确率高于对照组,复核差错率低于对照组(P<0.05)。观察组中药制剂管理不合理总发生率低于对照组(P<0.05)。观察组患者风险管控满意度评分、用药说明满意度评分、基础干预满意度评分均高于对照组(P<0.05)。结论:医院消化科中药制剂应用风险评估管理方法后取得了显著的效果,可以促进中药制剂管理水平提升的同时能够提高患者的医疗服务满意度,并且减少中药制剂管理不合理的情况发生。

关键词： 过敏性休克   用药者   过敏反应   过敏体质   中药煎剂   肌肉注射   体质差异   中药制剂  

摘要： 在生活中,中药的过敏反应常被人们忽视,不少人以为中药是天然的、无副作用,且药性温和。殊不知,中药与西药一样可以引起过敏反应,有的过敏反应还相当严重,甚至因过敏性休克而致死亡。中药致过敏反应与用药者的体质差异有关。若患者属于过敏体质,则无论中药煎剂、中成药,还是外用、肌肉注射的“合成”性中药制剂,都可能引起过敏反应。

关键词： 仓储稻谷   黄曲霉   黄曲霉毒素B1   ISSR分子标记   生物防治  

摘要： 稻谷是我国重要的储备粮食,尤其在我国南方,稻谷是人们的第一主食,然而由于南方地区高温和高湿的气候条件,稻谷很容易受到黄曲霉的侵染并产生黄曲霉毒素,对人们的健康构成威胁。因此本文对中国南方仓储稻谷中黄曲霉的流行特征进行研究,探讨其在不同生态环境下的分布规律和产毒特征;分析黄曲霉分离株的生物多样性,评估多样性对黄曲霉产毒能力的影响;以不产毒黄曲霉作为生物防控手段系统探究了其对产毒黄曲霉的抑制效果。主要研究结果如下:1.对采自我国南方稻谷主产区（江苏、浙江、湖南、湖北、安徽、江西、福建）的315份稻谷样品中的菌株进行了分离纯化,基于形态学特征以及Ca M测序,共鉴定出81株黄曲霉分离株,黄曲霉分离株主要来自湖南省和江西省,江苏省和浙江省黄曲霉分离株分布较少。通过超高效液相色谱法（HPLC-FLD）对黄曲霉分离株产毒力的分析,其中有56株黄曲霉分离株被检测到可产生黄曲霉毒素B1（AFB1）。产毒黄曲霉分离株和不产毒黄曲霉分离株在7个省份的分布差异较大,随着7个采样省份平均温度的降低,产毒黄曲霉菌株的百分比逐渐增加。地理区域以及温湿度的差异影响黄曲霉分离株的分布和产毒能力。2.通过对黄曲霉分离株菌核大小的测定发现S型（菌核直径<400μm）黄曲霉分离株AFB1产量较高,而L型（菌核直径>400μm）黄曲霉分离株中AFB1产量低或者不产AFB1。PCR方法鉴定AFB1生物合成关键基因,结果表明所有产毒黄曲霉分离株都存在afl R基因,而不产毒黄曲霉分离株在AFB1生物合成基因簇的区域存在关键基因的缺失。同时利用ISSR分子标记对黄曲霉分离株的遗传多样性进行了研究,81株黄曲霉分离株基因型之间存在显著的遗传差异,遗传相似系数为0.53～1.00,当遗传相似系数为0.61时,黄曲霉分离株可以分成7个主要聚类。使用来自同一粮库的产毒黄曲霉分离株和不产毒黄曲霉分离株进行共培养试验,结果表明在粮库储存环境中,不产毒黄曲霉分离株的存在能够降低储藏过程中的AFB1污染风险。3.对不产毒黄曲霉对对产毒黄曲霉的抑制规律进行了研究,实验结果表明不产毒黄曲霉通过抑制产毒黄曲霉的产孢量和菌落的径向生长来抑制黄曲霉毒素产量。在单株不产毒黄曲霉与产毒黄曲霉体外共培养实验中,当以1:50的孢子浓度比例延迟1天接种不产毒黄曲霉时,抑制产毒效果达到了最佳。而在混合不产毒黄曲霉与混合产毒黄曲霉共培养实验中,当以1:2的孢子浓度比例同时接种混合不产毒黄曲霉与混合产毒黄曲霉时,抑制产毒效果达到了最佳。以稻谷和花生为培养基质进行原位培养试验,不产毒黄曲霉对产毒黄曲霉的生长以及产毒量均表现出抑制效果。结果表明,当少量不产毒黄曲霉存在时,即可对产毒黄曲霉产生较好的生物防控效果,本研究为防治黄曲霉毒素的污染提供理论依据。

关键词： 黄曲霉毒素B1   Burkholderia sp.D6   降解机理   转录组   固态发酵  

摘要： 黄曲霉毒素B1（AFB1）是一种次级代谢产物,具有高度的肝毒性、肾毒性和免疫毒性。AFB1以其毒性、致癌和致畸突变作用而闻名,被世界卫生组织归类为I类致癌物。花生是最容易被黄曲霉毒素浸染的作物之一,花生脱脂后的副产物花生粕富含花生蛋白,但因毒素含量超标使其在饲料和食品领域的应用受限。因此AFB1的脱除成为研究的热点。目前AFB1的脱除方法主要分为物理、化学和生物脱毒法,生物脱毒法因具有效率高、能耗低、绿色环保等优点,受到人们的青睐。因此本研究选用生物法脱除AFB1,采用香豆素为唯一碳源,以AFB1降解率为指标,从不同原料中筛选出AFB1高效降解菌株Burkholderia sp.D6,并对其降解AFB1的产物结构和毒性进行表征,探究Burkholderia sp.D6对AFB1的降解机制;结合转录组技术对优势菌株Burkholderia sp.D6中的黄曲霉毒素降解酶及其相关基因进行挖掘,并揭示其对AFB1的代谢途径;最后将Burkholderia sp.D6应用于花生粕中AFB1的降解,生产饲用发酵花生粕并分析花生粕品质。主要研究结果如下:选取土壤、花生、花生粕和羊粪等原料为筛菌来源,进行富集培养,经过初筛和复筛后挑选出高效降解AFB1的菌株,并对发酵条件进行优化。经以香豆素为唯一碳源的摇瓶培养和平板初筛,获得90株生长状态良好的细菌。加入AFB1标准溶液进行复筛后得到16株可有效脱除AFB1的菌株,筛选AFB1降解率（66.93%）最高的D6为优势菌株,经菌株鉴定确定D6为伯克霍尔德属（Burkholderia）,并对Burkholderia sp.D6的生长曲线进行测定,结果表明Burkholderia sp.D6在LB培养基孵育18 h后进入对数生长期。以AFB1脱除率为指标,通过正交优化实验得到Burkholderia sp.D6脱除黄曲霉毒素B1的最佳条件为:发酵时间为84 h,发酵温度为37℃,接种量为10%,初始p H为7.0,在此条件下AFB1脱除率为（87.91±2.32）%。选用不同方式处理发酵液组分,确定D6对AFB1的生物脱除方式,通过UPLC-MS/MS和NMR表征AFB1的降解产物,并通过MTT法检测降解产物的细胞毒性。以细菌发酵液、发酵液的上清液和菌体悬浮液分别降解AFB1,发酵液和上清液的效果分别为87.91%和89.12%,无显著性差异（P>0.05）。上清液的降解率远高于菌悬液,表明Burkholderia sp.D6脱除AFB1的方式为生物降解。使用UPLC-MS/MS、1HNMR、COSY等检测方法,鉴定出三种AFB1的降解产物分别为P1:C8H4O3;P2:C9H10O3;P3:C14H16N2O2,并推测出其结构式。使用Hep G2检测降解产物的细胞毒性,发现降解产物共培养的细胞状态优于AFB1共培养的细胞,表明降解产物的细胞毒性与AFB1相比显著降低。采用转录组学技术对Burkholderia sp.D6中黄曲霉毒素降解酶基因及差异表达基因进行剖析。以不加AFB1的样品为对照,研究Burkholderia sp.D6降解AFB1过程中转录组的差异表达情况。结果表明,检测到的总基因数目为3541个,与对照相比,D6菌株显著差异基因有116个,其中显著上调差异基因51个,显著下调差异基因65个。GO富集分析发现,在生物过程中上调表达最多的基因主要涉及单有机体过程、代谢过程、细胞过程和本地化。细胞组分中上调基因主要集中在细胞、细胞部分、膜、膜部分、以及大分子复合物。分子功能中上调基因主要与催化活性、结合和运输活性有关。KEGG富集分析和Pathway代谢通路分析发现,Burkholderia sp.D6中存在大量AFB1降解过程直接相关的酶类,如氧化还原酶、脱氢酶、过氧化氢酶和双加氧酶等,以及一些可能与AFB1降解相关的酶的编码基因。此外还发现参与蛋白输出和细菌分泌系统的sec D、sec E、sec F、sec G、sec Y、yaj C和yid C等基因表达上调了1-3倍,cat、pca、paa等与芳香化合物代谢相关的基因显著上调。因此,推测Burkholderia sp.D6降解AFB1的整个过程可能为:Burkholderia sp.D6受到AFB1的刺激,AFB1降解相关酶（氧化还原酶、过氧化氢酶等）上调表达,AFB1在胞外被分解P1、P2、P3等产物。随后产物在双加氧酶和酯酶的作用下裂解为邻苯二酚、香草醛和苯甲酸等小分子芳香化合物,并被膜蛋白转运至细胞内部转化为乙酰辅酶A或草酰乙酸,最终进入TCA循环,为机体代谢利用。对Burkholderia sp.D6发酵花生粕的条件进行优化,并对发酵花生粕的品质进行分析。研究Burkholderia sp.D6固态发酵花生粕过程中,发

关键词： 纳米抗体   免疫层析试纸条   黄曲霉毒素B1   金纳米花   生物素-链霉亲和素   磁珠  

摘要： 黄曲霉毒素B1（Aflatoxin B1,AFB1）是黄曲霉和寄生曲霉的次级代谢产物,分布广,毒性强,危害极大,严重威胁人类和动物健康,被世界卫生组织列为I类致癌物。因此,建立一种高效、灵敏和实现现场检测的方法用于AFB1检测对保障人类健康具有重要意义。免疫层析试纸条（Immunochromatographic test strips,ICTS）是一种简单、快速的检测方法,其操作简便、检测快速、特异性强、稳定性好且携带方便,已广泛应用于食品安全、临床诊断、环境监测等领域。然而,传统免疫层析试纸条大多数以单克隆抗体为识别元件,由于其制备过程复杂、无法大批量生产、价格昂贵等缺点,限制试纸条的开发与应用。纳米抗体（Nanobody,Nb）来源于骆驼血清中存在的仅重链抗体,是目前体积最小的基因工程抗体,可通过原核表达进行大批量生产,稳定性强,易于表达形成具有多功能的融合蛋白。近年来,其已被广泛应用于食品安全检测领域。本研究以纳米抗体作为识别元件,以不同粒径金纳米花（Gold Nanoflowers,Au NFs）和磁珠（Magnetic Bead,MB）作为信号标签,利用纳米抗体的高特异性和稳定性与纳米材料良好的光学特性、较大的比表面积和超顺磁性,构建了高效、灵敏的免疫层析试纸条检测方法,实现对食品中AFB1的快速和现场实时检测。具体研究内容如下:1.本实验将对AFB1具有高特异性与敏感性的纳米抗体G8（Nb-G8）与抗地高辛抗体融合构建重组载体p ET25b-G8-DIG,将其转化至*** BL21中并进行表达,最终得到分子量约为30 KDa的纳米抗体G8-DIG,通过间接竞争酶联免疫吸附试验（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay,ELISA）对蛋白活性进行测定。将G8-DIG作为识别元件,既能特异性识别AFB1,又能特异性识别地高辛抗原（Digoxin,DIG）,利用地高辛抗原替代传统纳米抗体免疫试纸条所用的Anti-His-m Ab二抗,提高试纸条稳定性且节约成本。制备粒径为110 nm的Au NFs,通过静电吸附与纳米抗体G8-DIG偶联制备信号探针,构建基于金纳米花纳米抗体免疫层析试纸条检测AFB1。对Au NFs与G8-DIG偶联最佳p H、G8-DIG最佳添加量、最佳检测时间与温度、甲醇耐受性、最佳喷金量、AFB1-BSA浓度和DIG-BSA浓度进行优化,并在最佳实验条件下建立标准曲线。该方法检测AFB1的线性范围(IC20～IC80)为1.02～27.86 ng/m L,最低检测限（Limits of Detection,LOD）为0.1 ng/m L,加标回收率在91%～100%之间。此外,该纳米抗体免疫层析试纸条具有良好的分析性能,成功应用于标准玉米质控样品的分析,为实际样品中AFB1的检测提供了方法。2.为提高信号标签的光学特性进一步提升试纸条检测灵敏度,本研究基于纳米抗体和生物素-链霉亲和素系统构建了双探针信号放大免疫层析试纸条检测AFB1。首先,利用化学法对Nb-G8进行生物素化,优化Nb-G8与生物素最佳摩尔比为1:20。其次,制备两种粒径的Au NFs,粒径为65 nm的Au NFs与G8-Bio偶联作为信号探针,粒径为110 nm的Au NFs与链霉亲和素（Streptavidin,SA）偶联作为信号放大探针,分别喷涂在金标垫和扩大垫上,利用生物素-链霉亲和素之间的高亲和力进行信号放大,并与未信号放大生物素化纳米抗体ICTS进行比较。实验结果表明,在最佳实验条件下,未进行信号放大生物素化纳米抗体ICTS的检测范围为0.76 ng/m L～85.26 ng/m L,LOD为0.12 ng/m L,而双探针信号放大ICTS的检测范围为0.2 ng/m L～119.4 ng/m L,LOD为0.03 ng/m L,试纸条灵敏度提高了4倍,且具有更宽的检测范围。最后,对玉米实际样品进行加标回收实验,加标回收率在100%～102%之间。3.为进一步提高信号探针的稳定性和实现利用纳米抗体免疫层析试纸条对具有较深颜色实际样品中AFB1高灵敏检测,本实验利用生物素链霉亲和素相互作用,将生物素化的纳米抗体G8与链霉亲和素磁珠（Magnetic beads Streptavidin,MB-SA）进行偶联制备信号探针。MB-SA具有较高光学特性和超顺磁性,即使在复杂的样品机制下,MB-SA-G8-Bio也对AFB1表现出显著的结合、分离和富集能力。在最佳检测条件下,该方法的LOD为0.063 ng/m L,检测范围为0.36 ng/m L～39.74 ng/m L。并将该基于磁分离技术纳米抗体免疫层析试纸条应用于酱油中AFB1的检测,其IC10为0.069 ng/m L,与标准测试基本相同