关键词： 多变拟威克酵母   黄曲霉毒素B1   胞内酶   去除机制   转录组学  

摘要： 本研究通过筛选获得可去除真菌毒素黄曲霉毒素B1(aflatoxin B1,AFB1)的多变拟威克酵母(Wickerhamiella versatilis),对其进行AFB1去除条件优化,并结合转录组学数据分析该菌株较为重要的生理代谢过程。单因素试验结果表明pH值、温度和接种量对AFB1去除率影响最大,采用响应面优化试验得到最优去除条件为pH 5.6、温度30℃、接种量10%,最优条件下AFB1去除率为96.01%。转录组学结果显示,在AFB1胁迫下共有525个差异表达基因,其中上调基因397个,下调基因128个,基因注释到碳代谢和磷脂酰肌醇3-激酶-蛋白激酶B信号通路尤为显著,这些基因中脂氧合酶、谷胱甘肽-S-转移酶、腺苷同型半胱氨酸酶、芳香转氨酶I、S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶等基因促进了AFB1-exo-8,9-epoxide-还原型谷胱甘肽偶联物的生成,破坏了AFB1的呋喃环双键,降低了毒性。质谱检测数据分析表明,在AFB1的存在下该菌株的谷胱甘肽合成过程加快,中间物质乙酰高丝氨酸大量生成。综上,多变拟威克酵母具有去除AFB1能力,能够丰富减除真菌毒素的菌种库。本研究解析了多变拟威克酵母去除AFB1的作用机制,对胞内去除AFB1的研究具有现实意义。

关键词： 黄曲霉毒素B1   人工抗原   高敏感性和高特异性单克隆抗体   dcELISA   免疫分析  

摘要： 研究旨在制备黄曲霉毒素B1(AFB1)高敏感性和高特异性单克隆抗体(mAb),建立AFB1直接竞争酶联免疫吸附试验(dcELISA)检测方法。试验选用自制人工抗原AFB1-BSA免疫Balb/c小鼠,通过细胞融合和阳性杂交瘤筛选技术建立AFB1 mAb杂交瘤细胞株,体内诱生腹水法制备AFB1 mAb,对其免疫学特性进行鉴定;应用AFB1 mAb建立AFB1 dcELISA检测方法,对其性能进行测定。结果表明,筛选出AFB1 mAbs 1F6-3C8和3G9-2B6 2株杂交瘤细胞株,其中1F6-3C8敏感性更高、特异性更好,间接非竞争ELISA(inELISA)细胞培养上清液和腹水效价分别为1∶(6.4×10^(3))和1∶(1.28×10^(6)),对AFB1的半数抑制浓度(IC_(50))为1.32μg/L,除与黄曲霉毒素B2(AFB2)有15.37%的交叉反应率(CRR)外,与黄曲霉毒素(AFs)其他同系物的CRR均小于3.0%,与其他霉菌毒素的CRR小于0.02%;在优化的条件下,AFB1 dcELISA的检测限(LOD)为0.11μg/L,检测范围为0.15~7.01μg/L;玉米粉、豆饼粉、猪饲料和蛋鸡饲料的批内平均回收率分别为89.07%、86.58%、89.35%和93.62%,批间平均回收率分别为89.97%、88.07%、91.35%和92.48%,批内平均变异系数(CVs)值分别为11.08%、11.67%、11.45%和10.40%,批间平均CVs值分别为11.37%、12.61%、11.87%和10.94%,AFB1 dcELISA具有较好的准确性和稳定性;用AFB1 dcELISA和LC-MS/MS检测40个实际样品和6个已知阳性样品,两者的检测结果一致,符合率为100%,AFB1 dcELISA具有较好的可靠性。

关键词： Wilson病   肝纤维化   姜黄素   线粒体   凋亡   中药提取物  

摘要： 目的 观察姜黄素是否通过抑制线粒体凋亡途径改善Wilson病肝纤维化。方法 将30只Wistar大鼠随机分为正常组、模型组及姜黄素中、高剂量组,除正常组外,其余各组大鼠以硫酸铜饲料(1 g/kg)和硫酸铜水(0.185%)喂养12周。姜黄素中、高剂量组分别予100、200 mg/(kg·d)灌胃,连续6周。采用微板法检测血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST),铜离子试剂盒检测肝铜含量,组织病理染色观察肝脏铜盐和纤维化沉积情况,透射电镜观察超微结构,定磷法检测肝脏Na^(+)-K^(+)-ATP酶活性,流式细胞术检测活性氧(ROS)和线粒体膜电位(MMP)水平,Western Blot法检测Bcl-2相关X蛋白(Bax)、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、胱天蛋白酶3(Caspase-3)表达。结果 与正常组比较,模型组大鼠血清ALT、AST升高(P<0.01);肝脏结构显著破坏,纤维条索较粗,胶原纤维大量增生;肝组织中铜盐沉积明显增多(P<0.01);肝组织中Na^(+)-K^(+)-ATP酶活性降低,ROS升高,MMP降低(P<0.01);线粒体数量明显减少,嵴结构稀疏不清;肝组织中Bax和Caspase-3表达上调,Bcl-2表达下调(P<0.01)。与模型组比较,姜黄素中、高剂量组血清ALT、AST水平降低(P<0.01);肝脏结构部分恢复,胶原纤维减少;肝组织中铜盐沉积明显减少(P<0.01);肝组织中Na^(+)-K^(+)-ATP酶活性升高,ROS降低,MMP水平升高(P<0.01);线粒体数量增多,嵴结构部分恢复;肝组织中Bax和Caspase-3表达下调,Bcl-2表达上调(P<0.01)。结论 姜黄素可减轻铜负荷大鼠肝脏铜沉积,改善肝脏线粒体功能,抑制线粒体相关途径细胞凋亡,缓解铜负荷大鼠肝纤维化。

关键词： 卵巢癌   中药提取物   中药单体   抗肿瘤机制  

摘要： 卵巢癌发病隐匿,早期诊断困难,确诊时往往已处于晚期,是女性生殖系统中致死率最高的疾病。卵巢癌的主要治疗方法是瘤体减灭术配合化疗,化疗药物具有毒性大、易复发、易耐药等特点,因而研究新药以辅助或替代化疗成为当今热点。多项研究表明,中药提取物具有抑制卵巢癌细胞增殖、侵袭、转移的作用。中药提取物联合化疗能够提高化疗有效性、减轻化疗的副作用、降低耐药性。本综述将中药提取物分为中药单体、单味中药提取物和复方中药提取物,并按作用机制将其归类,以期为卵巢癌的中西医结合治疗提供参考。

关键词： 中药制剂技术   虚实结合   实验教学   层次化  

摘要： 中药制剂实验是连接中药制剂技术理论与实践的桥梁,对学生综合技能培养和提升发挥着至关重要的作用。通过整合虚拟仿真实验项目,将虚拟仿真实验与实体实验相结合,构建了基于虚实结合的中药制剂技术实验教学体系。该教学体系以虚实结合、以虚补实、以虚促实的层次化实验教学理念,通过构建“以虚补实-以虚促实-虚实协同”的三阶培养模型,系统阐述该体系的理论基础与实践框架。研究从可行性论证、价值分析、架构设计、实施效果四个维度展开深度解析,最终形成实施路径。该教学体系能够加深学生对中药制剂理论知识的理解和掌握,有效激发学生的学习兴趣与创新潜能,对中医药职业教育发展具有积极推动作用,推动中药制药教育教学的进步与发展。

关键词： 仙葛足浴散   痹证   外用   中药制剂  

摘要： 目的探讨仙葛足浴散对痹证患者的治疗效果及其安全性。方法本研究为一项单中心的临床观察研究,共纳入2020—2024年112例来自贵州中医药大学第二附属医院肾内科门诊诊断为痹证的患者。按疾病类型分为风湿性关节炎、类风湿关节炎、痛风、骨关节炎四组。所有患者均接受仙葛足浴散外用治疗,疗程结束后评估其症状体征变化。结果经仙葛足浴散治疗后,总有效率为90.2%,其中临床控制率23.2%,显效率24.1%,有效率42.9%。治疗前后比较,各症状体征评分显著改善(P<0.001)。结论仙葛足浴散能显著改善痹证患者的临床症状体征,是一种安全有效的中药制剂,值得临床推广使用。

关键词： 气相色谱   风油精   仪器分析实验   定性定量方法  

摘要： 本文改进了一个用气相色谱法分离分析中药制剂中五种主要成分桉叶油醇、樟脑、薄荷醇、水杨酸甲酯、丁香酚含量的本科仪器分析实验。提出同时用内标法、外标法、归一化法对同一组数据文件进行定量并判断定量结果的准确性，使学生能在有限的教学时间内掌握色谱基础的定性定量方法，了解不同定量分析方法的适用范围，学会计算理论塔板数及分离度等。本实验将基本的色谱理论知识融入生活用品风油精等中药制剂的主成分分析中，使学生真切感受学以致用，且绿色环保，有利于培养学生分析实验数据的能力。

关键词： 流行性感冒   临床症状   中药制剂   肺感颗粒   前瞻性观察研究  

摘要： 目的:评估中药制剂肺感颗粒联合西医常规治疗改善流行性感冒(简称流感)患者短期症状的临床疗效.方法:采用前瞻性观察研究设计,纳入2024年2月至3月在浙江大学医学院附属第一医院发热门诊就诊的流感患者.按照是否使用肺感颗粒分为观察组(肺感颗粒联合西医常规治疗)和对照组(西医常规治疗).采用中医症状评分量表,分别于患者就诊第1天和接受治疗后的第3天评估患者发热、咳嗽、咽痛等主要症状,以及胸闷、食少、肌肉酸痛、口干等次要症状.通过配对秩和检验比较不同组别治疗前后中医症状量表评分的改善程度,通过Wilcoxon检验比较观察组与对照组在总体症状、主要症状和次要症状改善程度的差异.结果:共纳入217例流感患者.治疗后,两组症状评分均较治疗前明显改善(均P＜0.01).其中,观察组与对照组在治疗前后的主要症状评分中位数差值分别为7分(95％CI:6.0～8.0)与6分(95％CI:6.0～8.0),次要症状评分的中位数差值均为3分(95％CI:2.0～4.0),总分的中位数差值分别为9分(95％CI:8.0～10.5)与8分(95％CI:7.0～10.0).在初始咳嗽评分2分以上的亚组中,观察组总体疗效、主要症状和次要症状改善的总有效率(分别为97.06％、95.59％和92.31％)均优于对照组(分别为92.59％、90.74％和85.11％),其中总体疗效和次要症状的改善情况两组间差异有统计学意义(均P＜0.05).结论:肺感颗粒联合西医常规治疗可改善流感患者的临床症状,且在咳嗽症状较重患者中具有更大的优势.

关键词： 流行性感冒   中药制剂   肺感颗粒   临床观察研究  

摘要： 目的:评估中药制剂肺感颗粒联合西医常规治疗改善流行性感冒（简称流感）患者短期症状的临床疗效。方法:采用前瞻性观察性研究设计，纳入2024年2月至2024年3月期间在浙江大学医学院附属第一医院发热门诊就诊的流感患者。按照是否使用肺感颗粒分为观察组（肺感颗粒联合西医常规治疗）和对照组（西医常规治疗）。采用中医症状评分量表，分别于患者就诊第1天和接受治疗后的第3天评估患者发热、咳嗽、咽痛等主要症状，以及胸闷、食少、肌酸、口干等次要症状。通过配对秩和检验比较不同组别治疗前后中医症状评分的改善程度，通过Wilcoxon检验比较观察组与对照组在总体症状、主要症状和次要症状改善程度的差异。结果:共纳入217例流感患者。治疗后，两组症状评分均较治疗前明显改善（均P<0.05）。其中，观察组与对照组在治疗前后的主要症状评分中位数差值分别为7分（95%CI:6.0～8.0）与6分（95%CI:6.0～8.0），次要症状评分的中位数差值均为3分（95%CI:2.0～4.0），总分的中位数差值分别为9分（95%CI:8.0～10.5）与8分（95%CI:7.0～10.0）。在初始咳嗽评分2分以上的亚组中，观察组总体症状（分别为97.06%和92.59%）、主要症状（分别95.59%和90.74%）和次要症状（分别为92.31%和85.11%）改善的总有效率均优于对照组，其中总体症状和次要症状的改善情况两组间差异有统计学意义（均P<0.05）。结论:肺感颗粒联合西医常规治疗可改善流感患者的临床症状，且在咳嗽症状较重患者中具有更大的优势。本研究已在国际传统医学临床试验平台注册（ITMCTR2025000162）。

关键词： 铁死亡   GPX4   NAFLD   中药  

摘要： 非酒精性脂肪性肝病（non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD）是目前全球最常见的慢性肝病，严重威胁人类健康，但其发病机制尚不完全清楚，调节性细胞死亡的研究为疾病治疗提供了新思路。铁死亡是一种依赖铁的非凋亡细胞死亡方式，铁代谢紊乱、氧化还原失衡和脂质过氧化积累均可导致铁死亡。由于肝脏在铁储存和脂质代谢中起关键作用，近年来的研究表明，铁死亡与NAFLD紧密相关。细胞内脂质异常堆积引起氧化还原失衡，可能成为脂质代谢紊乱的一个重要原因，因此，抑制铁死亡成为NAFLD的潜在治疗新策略。谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione peroxidase 4,GPX4)是铁死亡的重要调控蛋白，能够与谷胱甘肽结合，降解活性氧和过氧化氢，从而减少脂质过氧化所造成的损伤。目前研究发现，黄芪、绿茶、黄连等中药的活性成分通过多个靶点可调节GPX4，从而影响NAFLD。文章探讨了铁死亡途径中GPX4的作用机制，并寻找通过GPX4治疗NAFLD的中药提取物。