关键词： 中药代谢   血塞通制剂   龙血竭皎囊   黄藤素片和盐酸小檗碱片   HPLC-DAD   大鼠  

摘要： 中药应用于临床已经有几千年的历史,但是用现代医药学方法研究中药的作用机理开始于上世纪20年代。通过中药药理的研究,不仅可以很好的验证传统中医药理论,还对深化和发展中药功效,使其更合理安全的应用于临床有很重要的意义。药物代谢研究在药物研究与开发上占有举足轻重的地位,中药成分代谢研究近几年也越来越引起人们的重视。中药成分代谢研究对中药作用机制探讨,中药新药研究,中药质量评价和临床用药等都具有指导和推动作用,已成为中药现代化研究的重要切入点之一。现代中药制剂是中药现代化的体现,而中药制剂的现代化不仅表现为制剂技术的“现代化”,更重要的是剂型选择的理论基础、处方筛选、工艺优化及质量评价中的评价方法与指标的“现代化”。药代动力学和药理学是研究药物体内规律的学科,通过研究药物在体内的吸收、分布、代谢和排泄过程,阐明药物剂型因素、生物因素与药物效应问的关系。 高效液相色谱技术(HPLC)具有成本低、灵敏度高、专属性强、样品的处理简便等特点,特别适合研究高极性、分子量高和挥发度性低的有机化合物。高效液相色谱技术被广泛应用于中医药成分的各项研究,对于推动现代中医药的代谢研究具有重要的实用性价值。 本文中我们分别以四种中药制剂(血塞通系列制剂、龙血竭胶囊、盐酸小檗碱片和黄藤素片)中主要成分：三七总皂苷(panax notoginseng saponins)、龙血素A和龙血素B (loureirin A and loureirin B)、盐酸巴马汀和盐酸小檗碱(palmatine hydrochloride and berberine hydrochloride)为研究对象。应用高效液相色谱法(HPLC),分别对上述四种中药制剂,大鼠口服后的主要代谢物,生物样品处理、药理学等方法的研究。具体研究思路如下： 1.大鼠口服血塞通系类制剂后,运用HPLC/DAD (High Performance Liquid Chromatography)方法对三七总皂苷在大鼠血浆和脑组织中代谢含量检测； 2.离心辅助CPC-HPLC-DAD (Column Partition Chromatography-High Performance Liquid Chromatography)技术对大鼠口服龙血竭胶囊后,其血浆和尿液中龙血素A与龙血素B的检测； 3. HPLC/DAD方法检测大鼠同时口服黄藤素片和盐酸小檗碱片后,在大鼠尿液,粪便,胆汁和血浆中两种制剂药理作用的差异研究。

关键词： 医院   中药制剂   质量   因素  

摘要： 随着我国医疗改革事业的不断发展,对医院中药制剂的质量控制上提出了更高的要求,医院必须加推进医院中药制剂的质量,使得中药质量向标准化、科学化、信息化、规范化的方向发展,从而使医院中药制剂能有效保证临床用药的安全性.。本文分析了影响医院中药制剂质量的因素,探讨如何提高中药制剂的质量的有效措施。

关键词： 原发肾病综合征   病理分型   中药制剂  

摘要： 目的： 通过回顾性分析我院PNS患者的病理分型、症状、实验室检查以及预后缓解情况,统计PNS的构成比例同时比较不同治疗方案的优势,特别是中医药治疗本病的优势所在,为今后临床医师对本病的诊断以及开展中医药治疗PNS的规范化研究提供前期依据。 方法： 采用回顾性分析的临床研究方法,以我院病理科、住院及门诊系统数据库为依托,依照统一的诊断标准、纳入标准及排除标准,按照其用药方案,共纳入314例原发肾病综合征患者,其中免疫抑制剂组83例,中成药干预组231例,采集患者信息,观测患者用药后6个月、1年、2年的血清白蛋白、24小时尿蛋白定量、血肌酐、甘油三酯及临床症状的发展情况。 结果： 1.统计广东省中医院原发肾病综合征的患者病理类型分布情况,结果发现纳入的314例PNS患者中,膜性肾病(NM)患者占据比例最多,共105例(33.22%),其次依次为微小病变性肾小球肾病(MCD)90例(28.71%),局灶节段性增生肾小球肾病(FSGS)68例(21.70%),系膜增生性肾小球肾病(MsPGN)22例(7.03%),IgA肾病具备肾病综合征临床症状患者21例(7.04%),系膜毛细血管性肾小球肾病(MPGN)6例(1.91%),其他原发性肾小球疾病表现为肾病综合征2例(IgM肾病等),比例不足0.50%。研究所得原发肾病综合征病例构成比例基本与相关专著相符。 2.中成药干预组与免疫抑制剂组在不同时间点的白细胞计数、血清白蛋白、血肌酐、总胆固醇改善上无明显差异(P>0.05),且治疗后各疗效指标都有所改善。 3.我院原发肾病综合征患者于自然病程中存在24例进入慢性肾脏病终末阶段,比例为7.5%,其中系膜毛细血管性肾小球肾病预后最差,3例(50.00%)患者进入肾衰竭,其次为膜性肾病12例(11.05%),IgA肾病1例(4.54%),局灶节段性增生性肾病和微小病变各4例(5.88%,4.44%),系膜增生性肾小球肾病0例(0.00%)。与现有的相关统计基本相符。中药干预组在治疗6个月时的24小时尿蛋白定量下降均优于免疫抑制剂组(P<0.05)。 4.比较单纯使用黄葵胶囊、三芪口服液以及两种中成药结合治疗患者的24h尿蛋白,血清白蛋白以及预后缓解情况可发现,两种中成药联合使用的患者肾病综合征的缓解情况明显较两种成药单独使用较优。 结论： ***是我国临床上最常见的肾小球疾病之一,统计我院统一病理科医师阅片7年所有的肾病综合征患者的病理分型以及预后情况可发现临床PNS最多见的为膜性肾病与微小病变,其次为局灶节段性增生肾小球肾病;预后方面为系膜毛细血管性肾小球肾病最为凶险,余病理类型预后存在差异,但差异不大。为临床医师提供活检前的基本诊断依据以及活检后的治疗方案的选择建议。 2.临床根据辨证使用中成药治疗原发肾病综合征具有良好疗效,具有缓解临床症状、减少蛋白尿、减少肌酐上升、提升血清白蛋白、降脂等作用,对早期减少尿蛋白排泄具有明显优势,缩短原发肾病综合征患者暴露于大量蛋白尿时间,能在一定程度上减轻了患者由于西药免疫抑制疗法所带来的副作用,值得临床实施及推广

关键词： 液质联用技术   中药制剂   化学成分   定量分析  

摘要： 液质联用技术（HPLC-MS）兼具高效液相色谱的分离功能和质谱的定性分析能力，专属性较强、灵敏度高等优点，在复杂体系的分析中优势更为明显。中药制剂具有成分复杂、多变的特点，对其化学成分的定量和定性分析应采用专属性好、灵敏度好的方法。本研究即以两种中药复方制剂白蒲黄片和通窍鼻炎片为研究对象，探索HPLC-MS技术在中药复方制剂体系中化学成分同时定量分析的应用。　　第一部分 HPLC-MS法同时测定白蒲黄片中7种五环三萜皂苷类化学成分　　目的:建立白蒲黄片中7种五环三萜皂苷类成分白头翁皂苷A3(1)、白头翁皂苷B4(2)、23-羟基白桦脂酸(3)、白头翁皂苷B(4)、白头翁皂苷C(5)、刺人参苷S(6)和齐墩果酸(7)的HPLC-MS法。　　方法:色谱柱采用Diamonsil ODS C18（250 mm×4.6 mm，5μm）;流动相为A（水）-B（甲醇）分别含0.1％甲酸，梯度洗脱程序为0 min(25％A),0-6 min(5％ A)，6-14 min(5％ A)，回至25％A并持续6 min。流速为0.8 mL·min-1。柱温为30℃。离子源为ESI源;采用正离子和负离子模式同时监测。正离子和负离子监测模式下源喷射电压分别为5500 V和-4500V。离子源温度为650℃。碰撞气(CAD，N2)压力为medium;Q1和Q3分辨率均为UNIT。雾化气(Gas1):50 psi，加热气(Gas2):60 psi，接口持续加热，帘气25 psi，全程氮气通入状态。　　结果:在14 min内白蒲黄片中7种有效成分白头翁皂苷A3(1)、白头翁皂苷B4(2)、23-羟基白桦脂酸(3)、白头翁皂苷B(4)、白头翁皂昔C(5)、刺人参苷S(6)和齐墩果酸(7)被完全分离;峰面积与其浓度呈良好的线性;平均回收率范围为95.11％-107.31％，RSD为0.86％-3.26％。　　结论:该方法简便、可靠、重现性好、专属性高，可为白蒲黄片质量控制提供一个强有力的工具。　　第二部分 HPLC-MS法同时测定通窍鼻炎片中7种香豆素类成分的含量　　目的:建立HPLC-MS法测定通窍鼻炎片中东莨菪亭(1)，补骨脂素(2)，异茴芹内酯(3)，氧化前胡内酯(4)，戊烯氧呋豆素(5)，蛇床明素(6)和异欧前胡素(7)含量的方法。　　方法:采用Diamonsil ODS C18柱(150 mm×4.6 mm，5μm);柱温30℃;甲醇-0.1‰甲酸水溶液(72∶28)为流动相，以800μL·min-1等度洗脱;质谱条件:ESI源采用正离子模式检测，多反应监测模式(MRM)用于定量测定。　　结果:在14min内清眩片中7个香豆素类有效成分完全分离;各化合物的峰面积与浓度均呈良好的线性关系;加样回收率(n=3)分别为101.6％,99.72％,99.20％,99.90％,98.96％,101.4％和100.2％。 RSD值分别为1.11％，1.75％，1.77％，1.72％，0.95％，1.85％和1.61％。　　结论:该方法简便，准确，重现性好，专属性高，可用于通窍鼻炎片的质量控制。

关键词： 中药提取物   共混   抗菌   保健   高效液相色谱  

摘要： 将具有抗菌功能的植物中药提取物溶液加入到粘胶纺丝液中共混纺丝,制成具有植物中药抗菌保健功能的粘胶纤维。 首先,测试了植物中药提取物的粒径范围,在50微米以上的占12%、在3微米到50微米之间的占8%、在3微米以下的占80%,证明植物中药提取物溶于水后会产生颗粒沉淀,有20%不能用于纺丝。 其次,测试了在相同体积的纺丝液中添加不同浓度相同体积的植物中药提取物溶液后纺丝液粘度的变化,结果表明随着植物中药提取物溶液的加入共混纺丝液的粘度比纯粘胶纺丝液的粘度降低,同时随着添加的植物中药提取物浓度增高,共混纺丝液的粘度先减小后增大；测试了在相同体积纺丝液中加入相同浓度不同体积的植物中药提取物溶液后的粘度变化,从而可知植物中药提取物溶解液的加入降低了共混纺丝液的粘度,且加入的植物中药溶液越多,共混纺丝液的粘度下降的越大。 再次,测试了在相同体积的纺丝液中添加不同浓度相同体积的植物中药提取物溶液后形成的共混膜的物理性质,得出随着植物中药提取物添加量的增加,共混膜断裂强力、断裂伸长等物理指标逐渐下降；测试了相同体积纺丝液中加入相同浓度不同体积的植物中药提取物溶液后形成的共混膜的物理性质,得出随着溶液体积的增加,共混膜的断裂强力、断裂伸长等物理性能逐渐下降但下降幅度较小。采用高效液相色谱法,测出了膜的酒精提取物中含有有效成分蛇床子素、仙茅苷,证明可以纺出具有保健功能的植物中药粘胶纤维。 然后,采用湿法纺丝成功纺出植物中药粘胶纤维,并采用相关设备测试了纤维的内部结构及其他相关性能,通过与普通粘胶纤维对比可知,植物中药粘胶纤维的结晶度变大,取向度减小,断裂强度和断裂伸长降低,回潮率升高。并且使用高效液相色谱法定量检测了植物中药纤维中有效成分的溶出量,其中蛇床子素为5.12mg/kg,仙茅苷为0.6mg/kg。 最后,测试了植物中药纤维的抗菌性能,实验结果证明,其对金黄色葡萄球菌的抗菌率为98.9%,对大肠杆菌的抗菌率为98.8%,对白色念珠菌的抑菌率为89.00%。说明其抗菌性超过了国家相关的标准。

关键词： 霉菌毒素   产毒真菌   黄曲霉毒素B1   玉米赤霉烯酮   呕吐毒素   霉变率   多重PCR  

摘要： 霉菌毒素能够降低饲料的饲喂价值,影响畜禽的生产性能,对动物组织机能、健康产生不利影响,甚至导致畜禽死亡。黄曲霉毒素B1(AFB1)、玉米赤霉烯酮(ZEN)、呕吐毒素(DON)是被大众广泛研究的三种霉菌毒素,也是污染最为普遍的三种毒素。霉菌毒素可以不同的剂量对动物和人的健康造成不同程度的威胁。因此,对于霉菌毒素以及产毒霉菌的检测显得至关重要。目前常用的霉菌毒素检测方法有薄层层析、液相色谱、免疫化学分析等几种方法,主要基于霉菌毒素的理化性质,无法检出己被产毒真菌污染但尚未产毒的高风险样品。多重PCR检测方法,可在单一泳道反应体系中同时检测多个DNA模板或同一模板的不同区域,具有快捷、高效、低成本等优点,被广泛应用于有害微生物检测。 本课题调研了我省2012年秋季玉米中黄曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮、呕吐毒素的污染情况,对三类霉菌毒素与玉米籽粒水分含量、破损率、霉变率之间的相关性进行了分析。以产毒真菌黄曲霉、镰刀菌的基因组DNA为模板,根据AFB1、ZEN、DON三种毒素生物合成中关键基因的序列设计引物,构建了能够从样品中快速灵敏检测潜藏性产毒真菌的多重PCR检测体系。1)课题从我省各地采集了87份玉米样品,利用ELISA试剂盒对各样品中黄曲霉毒素B1(AFB1)、玉米赤霉烯酮(ZEN)、呕吐毒素(DON)的含量进行检测。结果表明,AFB1、***的检出率分别为98.85%、100%、100%; ZEN超标率最高,达到12.64%,DON超标率次之,为6.90%,AFBl超标率最低为3.45%；对三种毒素含量之间的相关性进行分析,结果发现ZEN与DON之间存在着极显著的线性相关性(p=0.0008),相关系数为0.1368。 2)根据国标GB13078-2001规定,对各个样品的水分含量,采用统计方法对各个样品籽粒破损率、霉变率进行检测,所得各项数据与AFB1、ZEN、DON的含量进行相关性分析。结果表明,所有玉米样品中自由水、结合水、总水含量最高值分别为14.06%、5.95%、19.24%,最低值分别为4.79%、1.11%、9.46%,平均含量分别为9.44%、4.02%、13.46%；平均霉变率、残破率分别为5.08%、6.08%,霉变率最严重的样品达到27.20%,残破率最严重的为31.80%；霉变率与ZEN含量呈极显著相关性(P=0.0058),与残破率呈显著相关性(P=0.0354)。 3)本课题分别根据AFB1、ZEN、DON生物合成中的调控基因aflR、PKS13、tri5的序列以及真菌共有的P-Tubulin基因序列设计出四对引物,用于构建快速、灵敏检测饲料用玉米中潜藏性的产毒素真菌的多重PCR反应体系。经过逐步的体系优化,初步建立了一个多重PCR检测方法,可对四个基因进行扩增,扩增的四个片段分别为400bp(aflR)、658bp (tri5)、537bp (β-Tubulin)、192bp (PKS13);从玉米样品中提取到的真菌DNA经多重PCR扩增,目的条带均较为清晰。

关键词： 中药   制剂   稳定性   安全  

摘要： 目的本文简要针对中药制剂的稳定性及安全性进行分析与探究。方法结合我院的具体情况,探究了中药制剂的稳定性及安全性,由影响成因、两者关系及对策等角度进行研究,增强了中药制剂运用的安全性。结果经过分析发现,影响中药制剂稳定性及安全性的因素包含药材自身、相关人员与药房方面等,唯有对多方面都进行控制,才能够确保中药制剂的稳定及安全。结论中药制剂的稳定特征及安全特性与多种因素存在关联,在生产、存储、应用期间,应进行科学管理,从而有助于确保药剂运用的安全性,预防出现差错,具有较高的临床价值。

关键词： 有机磷类农药   有机氯类农药   拟除虫菊酯类农药   中药制剂   超声波辅助提取   一步萃取   分散固相萃取   气相色谱   气相色谱串联质谱  

摘要： 中药制剂是以中草药为基础发展起来的药物制剂，是我国的国粹与瑰宝。近年来，中药制剂以其成分天然、作用温和有效、副作用小等特点，在临床上得到了广泛的应用。同时，中药制剂的质量安全问题也引起了广泛的关注。 中药制剂需求量的持续增长使得中草药采用人工种植的方式增产，种植过程中需要利用不同的有机农药来防治病虫害。然而，中草药在种植、储存、加工的过程中均有可能受到有机农药的污染，而由其制成的中药制剂可能存在有机农药残留，严重危害人类的健康。所以，建立快速、简便、有效、灵敏度高的中药制剂中有机农药残留的分析方法具有十分重要的现实意义。 本文采用气相色谱及气相色谱串联质谱技术，构建了不同中药制剂中有机农药多残留的分析新方法，并将其应用于实际样品的检测，取得了良好的效果。主要研究成果如下： 1.建立了湿毒清片中14种有机磷农药多残留同时检测的分析新方法。样品采用乙酸乙酯提取，通过石墨化碳黑净化，利用气相色谱-火焰光度法（GC-FPD）进行检测。在0.1mg/kg、0.5mg/kg两个加标水平下，除乐果外，其余13种有机磷农药的回收率范围为80.4～114.5%，相对标准偏差在0.6～12.4%之间，检测限为0.03～0.05mg/L。方法满足农残分析的要求，可用于市售湿毒清片中14种有机磷农药残留量的检测。 2.建立了双黄连口服液和抗病毒口服液中11种有机磷农药多残留同时测定的分析新方法。实验采用丙酮-正己烷的混合溶剂对口服液样品进行一步萃取，提取液无需净化，浓缩定容后即可用GC-MS/MS进行定量和定性分析。11种有机磷农药在0.01～0.2mg/L浓度范围表现出了良好的线性，其线性相关系数大于0.9997。11种有机磷农药在双黄连口服液中的检测限可达0.04～1.22μg/L。在10，20，50μg/L三个水平的加标回收实验中，大部分有机磷农药的回收率在70～120%之间，相对标准偏差小于13.3%。实验结果符合农残分析要求，表明此方法能应用于双黄连口服液和抗病毒口服液中11种有机磷农药残留的日常分析。 3.建立了六味地黄丸和逍遥丸中有机氯类和拟除虫菊酯类农药残留同时测定的新方法。方法采用乙酸乙酯提取，石墨化炭黑净化，利用气相色谱串联质谱法进行检测，18种有机农药在六味地黄丸中的检测限为0.02～8.82μg/kg。在低、中、高三个水平的加标回收实验中，除六氯苯外，其余17种有机农药的回收率在75.5～114.6%之间，RSD值小于10.0%。方法满足农残分析要求，可用于市售六味地黄丸和逍遥丸中有机氯类和拟除虫菊酯类农药残留的日常分析。

关键词： miR-24   肝细胞癌   预后   肿瘤发生   黄曲霉毒素B1  

摘要： 目的：MicroRNA-24(miR-24)可能参与了肿瘤的演进过程，尽管国内外对其研究甚多，也证实了miR-24与肝癌有关，但其在黄曲霉毒素B（1AFB1）相关性肝细胞癌（HCC）中的作用尚未有文献报道。本研究通过检测207例来自AFB1高暴露地区患者的肝癌组织以及肝癌细胞株SMMC-7721中miR-24的表达情况并判断其是否与HCC临床病理特征和预后有关。 方法：（1）收集来自AFB1高暴露地区TNM分期为Ⅰ-Ⅱ期HCC患者（207例）的手术切除标本，分别取肿瘤组织及其相邻的癌旁组织（至少距肿瘤边缘5厘米）用于后续的检测分析。 （2）通过TaqMan-PCR技术检测miR-24在癌组织、癌旁组织、肝癌细胞株以及非肝癌细胞株QSG-7701中的表达情况，通过竞争性酶联免疫吸附测定检测肿瘤组织中AFB1-DNA加合物的水平并根据AFB1-DNA加合物水平确定AFB1的暴露水平； （3）收集患者的相关临床病理资料，包括性别、年龄、种族、肝炎病毒感染情况、肿瘤大小、肿瘤分期等信息，并且对所有病人进行生存随访。通过Cox回归模型及Logistic回归模型分析miR-24表达与HCC临床病理学特征的关系，并研究miR-24表达与AFB1-DNA加合物水平是否影响HCC患者预后。 （4）通过细胞学实验分析miR-24过表达及抑制后对肝癌细胞株增殖和凋亡的影响。 （5）通过HCC临床样本及细胞毒性实验分析miR-24表达与AFB1-DNA加合物形成的关系。 结果：（1）AFB1影响HCC的预后。高AFB1暴露的患者1年、3年、5年生存率均明显低于低AFB1暴露者；高AFB1暴露会增加患者的死亡风险（HR=2.12，95%CI=1.463.08）及肿瘤复发风险（HR=2.40，95%CI=1.493.88）。 （2）与癌旁组织相比，miR-24在HCC癌组织中的表达水平上调，细胞学实验有类似发现。 （3）高miR-24表达影响HCC5年期总体生存期（HR=3.58，95%CI=2.345.46）及肿瘤无复发生存期（HR=4.75，95%CI=2.668.47）。 （4）MiR-24表达水平与HCC患者临床病理特征有关，高miR-24表达的患者肿瘤体积更大(OR=2.01)、微血管密度增高(OR=2.63)且肿瘤分化程度降低(OR=2.10)。 （5）miR-24在肝癌细胞中过表达可促进细胞增殖，并抑制细胞凋亡；反之，抑制miR-24表达后，细胞增殖受到抑制，而细胞凋亡加速。 （6）AFB1毒性实验表明高miR-24表达的患者AFB1-DNA加合物水平也高，miR-24转染细胞后验证也可得到相似的结果。 结论：miR-24表达影响AFB1相关HCC的预后及肿瘤化过程，是一个潜在的肿瘤治疗靶点。

关键词： 中药制剂   新理论   新技术   质量控制  

摘要： 随着国内医药产业的不断发展,行业内外均对中药制剂在理论与实践提出了更高的要求,由此,相关理论成果与技术逐渐被应用于中药制剂的相关领域中,如组方分子理论、SCF萃取技术及中药指纹图谱技术等。基于此,本研究对中药制剂在理论、提取技术及质量控制技术等方面的研究进展进行探讨。