关键词： 黄曲霉毒素B1   花生油   酶联免疫法   辐照降解   Ames实验  

摘要： 黄曲霉毒素(Aflatoxin, AFT)是一类由黄曲霉(Aspergillus flavus)和寄生曲霉(Aspergillus parasiticus)等真菌在一定条件下产生的次级代谢产物,其中以黄曲霉毒素B1的毒性最强,具有致癌、致畸、致突变作用,被国际癌症研究机构赋予“一级致癌物质”称号。AFT污染是影响花生及其制品消费安全和出口贸易的主要原因,寻找一种快速检测技术和去毒方法有较强的实际应用价值。本课题的研究对象为花生油中的黄曲霉毒素B1,寻求建立一种酶联免疫快速检测技术,同时比较用60Co辐照和微波辐照手段对黄曲霉毒素B1的去毒效果,并对处理后的花生油的主要理化指标和降解产物的安全性进行评价。影响AFB1-O合成主要影响因子的单因素实验和正交试验结果表明：在起始质量比匕AFB1/CMO=1:2、反应时间5h、反应温度65℃条件下肟化率最高可达96.7%；影响肟化率的强弱因素依次为：AFB1/CMO起始质量比>反应时间>反应温度。AFB1-BSA(即完全抗原)的最佳合成条件为：AFB1-O/BSA起始摩尔比为30：1,23℃振摇避光反应20h。AFB1-OVA(即包被抗)原最佳合成条件为：交联剂起始摩尔比EDC/NHS=4:1,23℃避光反应12h。用人工合成抗原免疫小鼠而得到抗体,测定多抗血清效价为1：3200;半抑制浓度为/C50=3.25ng/mL;与AFM1的交叉反应率为3.1%,玉米赤酶烯酮、呕吐毒素的交叉反应率均小于0.28%。将得到的抗体适当稀释,用棋盘滴定法测得最适工作浓度为：抗体稀释13000和酶标抗原稀释16000倍。由实验得出黄曲霉毒素B1酶联免疫试剂盒最佳工作条件参数为：抗体包被时间为4℃下包被12h,明胶封闭时间为4℃下封闭12h,抗原抗体特异性反应温育时间为避光反应30min,显色时间为室温下反应10min。加速破坏性实验证明：该试剂盒在4℃条件下至少可以保存30天,ELISA试剂盒与HPLC检测结果相比无显著性差异。样品前处理方法简单有效,经有机溶剂提取,测定结果与国标法相近。黄曲霉毒素B1的降解实验结果证明：随60Co辐照剂量的增大,降解率随之增加；当AFBt的初始含量小于25ppb时,10kGy的辐照剂量可以完全去除花生油中AFB1。微波辐照降解经单因素实验和响应面实验结果可知：各因素对AFB1降解率影响程度依次为：微波作用时间>微波功率>AFB1初始含量,三因素都达到了极显著水平。根据响应面实验分析得出降解AFB1最佳条件参数为：AFB1初始含量为13.72ppb、微波功率803.98W、微波作用时间10.27min,得到AFB1降解率的的预测值为96.0055%。在微波降解AFB1最佳处理条件下,检测花生油主要理化指标酸值、碘值、过氧化值、维生素E和反式脂肪酸均未发生显著变化,符合国家相关标准。经Ames实验可知：添加S9代谢活化系统的阳性对照组(即未降解的AFB1)菌落回复突变数与AFB1剂量间存在显著的剂量-反应关系；而阳性对照组(即未降解的AFB1)只有在加入S9代谢活化系统时,菌落回复突变数与自发回复突变组相比,除5ng剂量组外,差异达到显著(a<0.01)或极显著(b<0.01)。无论是否添加S9代谢活化系统,阳性组(即AFB1微波降解产物)在不同剂量下诱发的菌落回复突变数与自发回复突变组相比,无显著差异(p>0.05)。说明微波辐照降解花生油中AFB1所产生的降解产物毒性完全消失。由此可知：AFB1经微波降解后,其降解产物对TA98、TA100和TA102菌株均不呈现剂量-反应关系,说明微波辐照AFB1的降解产物对组氨酸营养缺陷性鼠伤沙门氏菌无致突变性。

关键词： 兔螨病   中药制剂   杀螨试验   疗效对比  

摘要： 兔螨病是由疥螨(Sarcoptes scabiei)及痒螨(Psoroptes cuniculi)引起家兔的一种常见体表寄生虫病,呈世界性分布,不但影响家兔的生产性能和产品质量,甚至可在兔场爆发性流行而导致大批家兔死亡,造成巨大经济损失,给养兔业带来严重威胁。目前药物防治是螨病防治的主要手段,伊维菌素、莫西菌素、色拉菌素等化学治疗药物由于疗效高、作用快和使用方便等特点而得到广泛应用,但由之带来的药物残留、环境危害和耐药性等问题已不容小视。在人们追求绿色环保的今天,植物源药物以其不易产生耐药性,可在环境中自行降解,不会在畜产品中蓄积或通过食物链富集,对人畜及环境相对安全等特点而备受关注。因此,研究高效低毒、价格低廉、使用方便的螨虫防治药物成了当前的热点。本研究正是以此为出发点比较了花椒制剂、苦参水煎剂、苦楝皮水煎剂、明雄散、擦疥散五种外用中药制剂对离体螨虫的抑杀作用和对兔螨病的治疗效果,取得了以下结果。 1、五种中药制剂对离体螨虫的抑杀试验：采用药物与家兔离体疥螨(Sarcoptes scabiei)直接接触法比较观察了花椒制剂、苦参水煎剂、苦楝皮水煎剂、明雄散、擦疥散五种外用中药制剂对离体螨虫的抑杀作用效果。试验结果表明,五种中药制剂对离体螨虫都具有很好的抑杀效果,并且其杀螨活性随着药物浓度的升高而增强。其中花椒制剂抑杀效果最好,20%、10%、5%三种浓度的供试药物,除5%的明雄散外,其他试验组药物都能在24小时内杀死全部供试螨虫。 2、五种中药制剂对兔螨病的临床对比治疗试验：患部去痂皮处理后,每组试验兔分别外用花椒制剂、苦参水煎剂、苦楝皮水煎剂、明雄散、擦疥散,3天1次,连用三周,观察比较治疗效果。试验结果表明,对于有效率,除明雄散试验组和擦疥散试验组分别为80%和90%外,其余试验组均为100%,治愈率除明雄散试验组为70%外,其余试验组均为80%,其中花椒制剂治愈所需时间最短,平均为12.32小时,治疗效果最好。 综上诉述,五种中药制剂中,花椒制剂对兔离体疥螨的抑杀作用和对兔螨病的治疗效果最好。

关键词： AFB1   Se   沸石   氧化应激   Nrf2   肉鸡  

摘要： 黄曲霉毒素中毒是畜禽养殖行业常见的问题,动物误食含黄曲霉毒素的饲粮后会对生产性能和繁殖性能造成不良影响,且残留在动物肌肉和组织中的毒素能够进一步对人体产生损害作用。黄曲霉毒素引起机体损伤的原因之一是它能够诱导细胞产生活性氧簇(ROS),从而对机体产生氧化应激反应,当氧化应激作用超出机体所能承受的抗氧化能力时,便会造成损伤。沸石作为霉菌毒素吸附剂的应用早有研究,且其作用机制也已明确;硒(Selenium, Se)是机体必需的营养元素,也是一种有效的抗氧化剂,作为许多抗氧化酶和Ⅱ相解毒酶的组成部分,它在抗氧化应激反应中起了重要作用,Se用于缓解霉菌毒素的研究报道也有许多,但其作用机制并不清楚。研究表明,Se缺乏时会诱导胞质Nrf2解耦连后入核,启动其调控的下游Ⅱ相酶和抗氧化酶基因的表达,因而,我推测Se在黄曲霉毒素B1(AFB1)毒性效应缓解过程可能与Nrf2抗氧化通路相关。主要研究结果如下：1.硒和沸石对AFB1暴露肉鸡肝脏氧化损伤的保护作用为了研究Se和沸石对AFB1暴露肉鸡肝脏氧化损伤的缓解作用。选取1日龄AA肉鸡150只,随机分为5个处理组：A.对照组(基础饲粮),***1组(基础饲粮+100μg/kg AFB1), C.沸石组(基础饲粮+100ng/kg AFB1+3%沸石),***组(基础饲粮+100 μg/kg AFB1+0.3 mg/kg Se), E.沸石+Se组(基础饲粮+100μg/kg AFB1+3%沸石+0-3 mg/kg Se),试验期为42 d。结果表明：AFB1组与对照组相比,肉鸡肝脏重显著降低(P<0.05),平均日采食量和料重比有所升高,平均日增重略有降低;血清谷草转氨酶(GOT,P>0.05)和谷丙转氨酶(GPT,P<0.05)活性升高;肝脏丙二醛(MDA)和过氧化氢(H202)含量显著升高(P<0.05),总超氧化物歧化酶(T-SOD)、谷胱甘肽(GSH)和谷胱甘肽过氧物酶(GSH-Px)水平则显著降低(P<0.05);肝脏组织病理切片观察到多处出血位点及肝细胞坏死和萎缩。Se组与AFB1组相比,肉鸡平均采食量和料重比有所降低(P>0.05),肝脏重则显著增加(P<0.05),与对照组无显著差异(P>0.05);血清GOT和GPT活性减弱;肝脏GSH-Px和T-SOD活性显著升高(P<0.05),MDA含量显著降低(P<0.05),三者都恢复到对照组水平,H202含量有所减低;肝脏损伤得到缓解。与AFB1组相比,沸石组ADFI、ADG、F/8G并未得到良好改善,但3%的沸石降低了肉鸡的死淘率,显著增加了肝脏重(P<0.05);Se与沸石联合组ADG、F/G和死淘率得到一定改善(P>0.05),肝脏重也显著增加(P<0.05);沸石组、沸石+Se组GSH水平并无改善(P>0.05),但沸石+Se组GSH-Px和T-SOD活性显著升高(P<0.05),恢复到了对照水平。沸石组和沸石+Se组的GOT、GPT活性得到一定降低(P>0.05),但并未恢复至对照水平,三组之间差异不显著;肝脏损伤得到恢复。由此可见,Se和沸石能够缓解AFB1引起的肉鸡肝脏氧化损伤,增加肉鸡抗氧化能力,但Se和沸石联系作用效果并不好于单独使用时的效果。2.硒和沸石及其联合对AFB1暴露肉鸡睾丸氧化损伤的保护作用本试验旨在研究Se和沸石对AFB1暴露肉鸡睾丸氧化应激反应的缓解作用。试验分组同上文。结果表明：AFB1、Se、沸石及其联合对睾丸重和睾丸器官指数的影响差异并不显著(P>0.05)。饲粮添加AFB1能够显著降低***和GSH-Px的酶活性(P<0.05),同时增加H2O2(P>0.05)和MDA(P<0.05)含量。与AFB1组相比,沸石组GSH水平恢复到对照组水平,沸石组、Se组和沸石+Se组的其他抗氧化指标有所改善,但差异并不显著(P>0.05)。对照组睾丸组织正常,AFB1组和沸石组睾丸略有萎缩：组织形态学切片结果显示,对照组曲细精管形态完好,间质细胞和精原细胞细胞清晰,细胞核位于细胞中间,AFB1组曲细精管间的间隙有所增加,但并不明显,其他各组的睾丸形态也较为正常。由此可见,Se和沸石能够缓解AFB1引起的肉鸡睾丸氧化应激反应,从组织形态学看出,AFB1对睾丸并未产生实质性损伤。3.硒对AFB1暴露肉鸡肝脏和睾丸氧化损伤保护作用的可能机制本试验旨在研究Se在缓解AFB1毒性效应过程中,肝细胞和睾丸细胞内Nrf2和caspase-3表达的变化。选用1日龄AA肉鸡90只,随机分为3组：基础饲粮(对照组),基础饲粮+100 μg/kg AFB1(AFB1组),基础饲粮+100μg/kg AFB1+0.3 mg/kg Se(Se组),试验期42 d。结果表明：免疫组化和蛋白印迹分析发现转录因子NF-E2

关键词： 喷雾干燥   粘壁   得粉率   辅料   混料设计   均匀设计  

摘要： 目的：本课题对物料基本性质进行分类研究，探讨适合于喷雾干燥的基本条件，为二种中药制剂喷雾干燥防粘壁关键技术研究奠定基础；筛选合适的辅料及其配比关系，并在此基础上优化喷雾干燥的设备参数，得到最佳喷雾干燥工艺，以改善粘壁情况，为生产实践提供科学依据。 方法：根据二种制剂组方药物的性质进行分组和归类，1.①在对中药制剂的自身性质研究中，对制剂处方进行成分分析并分组。以喷雾干燥得粉率为指标，相对密度、黏度、软化点、含固量为考察因素，对不同分组的实验数据和黏度-含固量-得粉率三者关系的柱线图进行直观分析，比较影响因素大小，以确定影响喷雾干燥的物料主要性质；②对多种具有不同防粘壁原理的代表性的辅料进行单因素实验筛选，每个辅料4个比例：5%、10%、15%、20%，以得粉率为指标，综合分析黏度、软化点，通过对分组数据、黏度对比线、比例-得粉率变化趋势图、比例-软化点-得粉率三者关系的柱线图分析比较，筛选出能有效改变制剂得粉率的辅料。2.①顿咳颗粒：依据辅料筛选结果，对具有防粘壁作用较好的三种辅料作为研究对象，通过混料设计，以得粉率为指标，优选三种辅料与药液的最优配比，通过均匀实验U36(6)选定进风温度、供液温度、泵速三个为考察因素，以得粉率为指标对数据进行多元回归处理，优选喷雾干燥参数。②降糖通络颗粒：依据辅料筛选结果，对具有防粘壁作用较好的三种辅料作为研究对象，通过混料设计，以得粉率为指标，优选三种辅料与药液的最优配比，通过均匀实验U36(6)选定进风温度、供液温度、泵速三个为考察因素，以得粉率为指标对数据进行多元回归处理，优选喷雾干燥参数。 结果：1.①药材分组情况如下：顿咳颗粒分为2组：黏液质类、其他；降糖通络颗粒分为4组：多糖类、淀粉类、动物类和其他。影响因素中，相对密度影响最大，顿咳颗粒相对密度1.10，降糖通络颗粒相对密度1.08。②选定糊精、β-环糊精、可溶性淀粉、微粉硅胶、微晶纤维素、乳糖、麦芽糊精七种辅料作为考察对象。顿咳颗粒：对粘壁性改善效果为微粉硅胶≥麦芽糊精＞糊精＞β-环糊精＞微晶纤维素＞可溶性淀粉＞乳糖；降糖通络颗粒：对粘壁性改善效果为β-环糊精≥微粉硅胶＞麦芽糊精＞糊精＞微晶纤维素＞可溶性淀粉≥乳糖2.①顿咳颗粒：混料设计回归方程（Y=113.01498X1+6.76286X2-155.16588X3-23.10390X4+994.73454X3X4，P=0.0027），均匀设计回归方程（Y=143.331-0.350X1-0.935X2-0.627X23+0.007X1X2，R=0.9999），优化结果为：浓缩液中固形物含量WSC：糊精DT：微粉硅胶AS：麦芽糊精MD=0.85：0.05：0.05：0.05，进风温度165℃,进液温度90℃,泵速20%。②降糖通络颗粒：混料设计回归方程（Y=68.00766X1+60.17601X2-110.83021X3+92.68675X4+349.55249X1X3+163.84269X2X3+280.56318X3X4，P=0.0027），均匀设计回归方程（Y=73.412-0.909X1+0.500X2+0.008X1X2-0.013X2X3，R2=0.9999），优化结果为：浓缩液中固形物含量WSC：β-环糊精β-CD：微粉硅胶AS：麦芽糊精MD=0.500：0.05：0.188：0.262，进风温度为150℃,进液温度为100℃,泵速为10%。 结论：1.药物自身的物料性质是影响喷雾干燥得粉率的一个重要原因。顿咳颗粒不同组分得粉率：黏液质类＞多糖类；相同相对密度条件下，降糖通络颗粒得粉率从高到低为：蛋白类、黄酮类、苷类等＞多糖类、鞣质类。2.①同一种辅料对不同提取物的防粘壁效果不同；同一种辅料能提高相同提取物的软化点，辅料比例越大，软化点越高；对于同一提取物，在一定范围内，软化点和得粉率成一定的正相关性；进液温度越高，得粉率越大。②提取物中黏液质类含量越高，进液温度越大，越利于喷雾干燥；多糖类含量高，则进风温度不宜过高；淀粉类物质应避免高温软化；蛋白类含量高，则有利于喷雾干燥效率的提高。

关键词： 黄曲霉毒素B1   黄曲霉毒素M1   杂色曲霉毒素   高灵敏度   高特异性   单克隆抗体   酶联免疫吸附测定(ELISA)  

摘要： 随着经济的快速发展,生活质量的不断改善,真菌毒素污染等对农产品及食品安全产生的影响已成为近几年以来政府重视、社会关注、世界瞩目的热点问题。其中黄曲霉毒素是威胁农产品及食品安全的毒性最强的一类真菌毒素,黄曲霉毒素及其生物合成前体物杂色曲霉毒素的污染,不仅严重威胁人民的身体健康和生命安全,而且对我国的经济贸易有巨大的负面影响。因此,研究建立准确、灵敏、便捷的黄曲霉毒素和杂色曲霉毒素免疫分析技术势在必行。 抗体是免疫分析的关键核心试剂,靶标免疫分析灵敏度直接取决于其特异性抗体的特性。本课题组前期研制出了居国际领先水平的系列黄曲霉毒素单克隆抗体,其中黄曲霉毒素B1和黄曲霉毒素M1单克隆抗体与国内外抗体同比特异性最高。然而,黄曲霉毒素B1迄今特异性最强的单克隆抗体3G1仍与黄曲霉毒素B：有6.4%的交叉反应,且灵敏度有待大幅度提高;黄曲霉毒素M1迄今特异性最强的单克隆抗体2C9灵敏度仍有待提高。杂色曲霉毒素作为黄曲霉毒素的合成前体物,制备抗杂色曲霉毒素的单克隆抗体,可将其作为一种黄曲霉毒素前体物通用抗体探明黄曲霉毒素发生积累标志分子,从而为风险评估和污染防控提供理论依据,然而,国内外杂色曲霉毒素抗体研制方面鲜有报道。因此,研制同时具备高灵敏度和高特异性的黄曲霉毒素及其前体杂色曲霉毒素单克隆抗体,研发基于该抗体的免疫快速检测技术和产品,对于农产品质量安全风险评估及预警,保障人民的农产品、食品消费安全,促进农业产业的可持续发展,打破贸易技术瓶颈均具有重要的意义。 针对上述黄曲霉毒素及其前体杂色曲霉毒素高灵敏高特异性抗体缺乏的关键性技术难题,本论文的主要研究内容和创新点如下：1.选育出黄曲霉毒素B1抗体杂交瘤细胞株185等,研制出高灵敏高特异性黄曲霉毒素B1单克隆抗体,灵敏度提高了100倍以上。制备高质量抗体的关键是制备高质量的人工抗原,人工抗原制备最关键的是半抗原结构的设计,本研究参考Christian Cervin所述方法,并在此基础上进行改进,合成了一种新的黄曲霉毒素完全抗原AFB2-GA-BSA;同时,按照经典肟化方法合成了AFB1-BSA。AFB2-GA-BSA按传统免疫剂量(50μg/次)免疫小鼠,AFB1-BSA按照加大剂量(150μg/次)免疫小鼠,均通过细胞融合、半固体培养基培养、两步梯度法筛选,最终,利用加大剂量的AFB1-BSA免疫小鼠,选育出了4株性能良好的单克隆细胞株,分别是1F11、2F12、2C7、1B5.采用间接竞争ELISA测定系列抗体的灵敏度,并计算交叉反应率,抗体针对黄曲霉毒素B1反应灵敏度高,与B2,G1,G2的几乎不存在交叉反应。并且以灵敏度和特异性为综合分析点,与国内外同类抗体对比后可以发现,185是迄今最好的针对黄曲霉毒素B1的单克隆抗体。以单克隆抗体185为基础,研究建立了AFB1间接竞争酶联免疫吸附分析技术(Enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)。其中包被抗原AFB2-GA-BSA的浓度为0.0625μg/mL,1B5单克隆抗体稀释度为1：20000。并对封闭试剂、pH值、盐离子浓度等理化参数进行了优化。 2.选育出黄曲霉毒素M1抗体杂交瘤细胞株LM13等,研制出高灵敏高特异性黄曲霉毒素M1单克隆抗体,灵敏度均提高了2倍以上。为获得更高灵敏度,高特异性AFM1抗体,在前期基础上,加大了免疫剂量,延长了免疫周期。通过细胞融合技术,半固体培养基基,两步梯度法筛选最终获得9株抗AFM1单克隆细胞株,分别命名为LM47、LM15、LM16、LM54、LM13、 LM32、LM44、LM48、LM46,采用间接竞争ELISA对上述纯化抗体进行灵敏度检测,并计算交叉反应率,结果显示,所得抗体灵敏度均比2C9抗体提高2倍以上,大部分抗体与AFB1, AFB2,AFG1,AFG2交叉反应较低。以灵敏度最高的单克隆抗体LM13为基础,研究建立了AFM1间接竞争ELISA方法。其中包被抗原AFM1-BSA的浓度为0.0625μg/mL, LM13单克隆抗体稀释度为1：120000。并对封闭试剂、pH值、盐离子浓度等理化参数进行了优化。 3.选育出能稳定分泌抗杂色曲霉毒素单克隆抗体的杂交瘤细胞株ST3等,研制出高灵敏高特异性杂色曲霉毒素单克隆抗体。本研究通过打开ST分子结构中双呋喃环的双键与蛋白实现偶联,并将ST人工抗原进行紫外扫描,结果表明其特征吸收峰与BSA和ST的特征吸收峰有明显差异,BSA与ST成功偶联。利用新合成的ST完全抗原免疫小鼠,通过细胞融合、半固体培养基培养、两步梯度法筛选,最终筛选得到3株性能良好的单克隆细胞株,分别是ST3, ST4, ST6。采用间接竞争ELISA测定系列抗体的灵敏度,并计算交叉反应率,灵敏度均很高,且不与A

关键词： 黄曲霉毒素B1   三维纳米阵列电极   化学修饰电极   免疫传感器   模拟  

摘要： 本文综述了纳米阵列电极以及黄曲霉毒素电化学生物传感分析的国内外研究现状和进展。制备出三维纳米阵列电极（3DNEEs）并对其进行了表征，建立模型对有序3DNEEs的电极过程和动力学参数进行了模拟。构建了基于聚邻苯二胺（PoPD）修饰3DNEEs（PoPD/3DNEEs）的高灵敏度的无标记阻抗型AFB1免疫传感器。 通过正交实验对聚碳酸酯滤膜上金的化学沉积条件进行了优化。采用SEM、EDX和XRD对3DNEEs的形貌和成分进行表征。结果表明3DNEEs为纯金，纳米线直立平行排布。在H2SO4溶液和K3Fe（CN）6/K4Fe（CN）6溶液中对3DNEEs进行表征，3DNEEs的真实面积大于其几何面积，3DNEEs上扩散层发生较大重叠，主要为线性扩散，也存在部分径向扩散。 采用Comsol Multiphysics4.4多物理场模拟软件建立了有序3DNEEs的模型，首次系统地对不同半径、长度及间距的3DNEEs的循环伏安行为和阻抗谱进行了模拟。循环伏安曲线模拟结果表明，在3DNEEs上存在一个临界间距dmin，只有纳米柱间距大于该值时才可能在一定扫速下出现S形曲线。当纳米柱直径为100nm，纳米柱长度从200nm00nm变化时，dmin与纳米柱的表面积具有线性关系，而固定纳米柱的长径比为3:1，直径在50nm00nm变化时，dmin与纳米柱的半径具有线性关系。通过阻抗谱模拟和拟合，计算出电极活性面积、传荷阻抗以及表观速率常数等参数。计算结果与参数设置基本一致。3DNEEs上的阻抗谱在低频区出现一段圆弧，表明纳米柱上的传质过程受阻挡层扩散的影响。 本文制备出梯形和苯胺式两种不同结构的PoPD/3DNEEs，研究了其在传感器组装和检测中不同溶液中的稳定性，结果表明梯形结构PoPD/3DNEEs具有更好的稳定性。本文首次构建了基于PoPD/3DNEEs的电化学免疫传感器对AFB1进行分析。对免疫传感器分子识别膜组装过程中的聚合条件、交联时间和BSA封闭时间，以及传感器的测定体系、pH值、免疫反应时间进行了优化。构建分子识别膜模型并建立等效电路对阻抗谱进行拟合。结果表明本文构建的AFB1免疫传感器具有较宽的工作范围和较低的检测限，工作区间为3.0×10-9～1.0×10-7g/mL，检测限为1.5×10-9g/mL，低于欧盟规定的最低限量标准。与其他研究者构建的无标记阻抗型AFB1免疫传感器相比也具有明显优势。

关键词： 黄曲霉毒素B1   玉米赤霉烯酮   降解   安全性评价  

摘要： 受生长环境、加工和储藏环境的影响，食品中真菌毒素如黄曲霉毒素B1（AFB1）、玉米赤霉烯酮（ZEN）的含量一直居高不下，大量真菌毒素的残留严重危害动物和人类健康，如何降解食品中的真菌毒素受到了社会的广泛关注。本论文主要研究了臭氧、二氧化氯和微波技术对食品中AFB1和ZEN降解率和最优降解条件，分析降解产物，基于小鼠模型和Ames模型，评价真菌毒素降解前后的毒性和致突变性。具体的实验内容如下： （1）探讨了臭氧降解花生粕中AFB1的降解率、最优降解条件，分析降解产物并对其毒性进行评价。臭氧降解花生粕中的AFB1的最佳条件为：臭氧处理时间12min，花生粕的质量与反应容器的体积之比为5:500g·mL-1，花生粕水分含量15%;在该实验条件下，AFB1的降解率高达85.01%。通过液质联用发现臭氧完全降解AFB1最终产生3个氧化产物，。小鼠试验结果表明，食用经臭氧处理的花生粕组小鼠的血液常规指标、血液生化指标，肝脏、肾脏、胸腺、脾脏的指数和病理切片与空白组小鼠相比无显著差异。Ames试验结果表明，臭氧降解AFB1的产物刺激沙门氏菌组氨酸缺陷菌株，菌株没有发生突变形成菌落，臭氧降解AFB1产物不具有致突变性。 （2）研究了臭氧降解玉米浆中ZEN的降解率、降解产物及降解机制，并对降解产物的毒性进行评价。臭氧降解玉米浆中ZEN的最佳条件为：臭氧处理时间45min，玉米浆与加水量体积之比为20:30mL·mL-1，玉米浆与反应容器体积之比为17:500mL·mL-1;在该实验条件下，ZEN降解率达到92.41%。通过液质联用发现臭氧完全降解ZEN最终产生3个氧化产物。小鼠试验结果表明，食用经臭氧处理的玉米浆组小鼠的血液常规指标、生化指标，肝脏、肾脏、胸腺及脾脏病理切片与空白组小鼠相比无显著差异，没有发生AFB1病变。Ames试验结果表明，臭氧降解ZEN的产物刺激沙门氏菌组氨酸缺陷菌株，菌株没有发生突变形成菌落，臭氧降解ZEN产物不具有致突变性。 （3）研究了二氧化氯降解玉米浆中ZEN的降解率、降解产物及降解机制，并对降解产物的毒性进行评价。二氧化氯降解玉米浆中ZEN的优化最佳工艺条件为，二氧化氯处理时间150min、二氧化氯浓度160μg·mL-1、处理温度30℃时，ZEN降解率达到97.01%。通过液质联用发现二氧化氯完全降解ZEN最终产生2个氧化产物。小鼠试验结果表明，食用经二氧化氯处理的玉米浆组小鼠的血液常规指标、生化指标，肝脏、肾脏、胸腺及脾脏病理切片与空白组小鼠相比无显著差异，没有发生ZEN病变。Ames试验结果表明，二氧化氯降解ZEN产物刺激沙门氏菌组氨酸缺陷菌株，菌株没有发生突变形成菌落，臭氧降解ZEN产物不具有致突变性。 （4）研究了微波降解玉米浆中ZEN的降解率、降解产物及降解机制，并对降解产物的毒性进行评价。微波降解玉米浆中ZEN毒素的最佳工艺条件为，微波处理时间180s、玉米浆与加水量体积之比为10:5mL·mL-1、微波频率550w时，ZEN降解率达到85.05%。通过液质联用发现微波完全降解ZEN最终产生5个氧化产物。小鼠试验结果表明，食用经微波处理的玉米浆组小鼠的血液指标、四种脏器病理切片与食用未经微波处理玉米浆组小鼠相比差异非常显著，没有发生ZEN病变。Ames试验结果表明，臭氧降解ZEN产物刺激沙门氏菌组氨酸缺陷菌株，菌株没有发生突变形成菌落，微波降解ZEN产物不具有致突变性。

关键词： 正清风痛宁   中药制剂   关节炎   药效评价   产品研发   国家科学技术进步奖   科技进步奖   创新   质量  

关键词： 丹参注射液   三联疗法   四联疗法   活动期胃溃疡  

摘要： 目的：了解中药制剂丹参结合三联疗法与四联疗法治疗活动期胃溃疡的临床效果。方法回顾性分析我院2011年12月～2013年12月收治的120例活动性胃溃疡患者的临床资料。结果于治疗后7d内，两组患者临床症状得分无明显变化（P＞0．05），于治疗6周后实验组临床症状得分显著低于对照组（P＜0．05），且患者胃溃疡愈合率明显优于对照组（P＜0．05）。结论中药制剂丹参结合三联疗法与四联疗法在活动期胃溃疡治疗中具有重要的应用价值，值得推广与应用。

关键词： 中药提取物   舒张血管   颈动脉内膜中层增厚   抗炎作用   蛋白表达   免疫组化   动物模型  

摘要： 目的:\n 考察中药提取物舒张血管作用及机制和抗炎作用并考察中药提取物能否降低颈动脉内膜中层增厚。\n 方法:\n 在利用大孔树脂、硅胶色谱柱等方法提取得到各中药提取物的基础上，利用Power Lab血管功能评价系统，以雄性SD大鼠离体大鼠胸主动脉环为考察对象，考察中药提取物的舒张血管作用及机制。并以RAW264.7细胞株为研究对象，利用LPS(100μg/ml)和INF-γ(10U/ml)协同刺激巨噬细胞建立炎症模型，筛选中药是否具有抗炎作用，并应用MTT法考察他们对巨噬细胞活力的影响。综合中药抗炎和舒张血管作用，挑选出3个中药提取物，考察他们对结扎大鼠左侧颈总动脉分支造成的颈动脉内膜中膜增厚是否具有降低作用。利用PCR技术进一步考察颈总动脉细胞中iNOS、VCAM-1、IL-1β、eNOS mRNA的表达情况，并利用免疫组化技术考察中药提取物对iNOS蛋白表达的影响。\n 结果:\n 通过大鼠离体胸主动脉环实验，结果发现苏木70％醇洗脱部位、夏枯草70％醇洗脱部位、鸡血藤50％醇洗脱部位、半枝莲50％醇洗脱部位、芫花70％醇洗脱部位、前胡乙酸乙酯提取物具有较好的舒张血管作用。同时通过巨噬细胞炎症模型发现这几个药物具有不同程度的抗炎作用。用NOS抑制剂(L-NAME)、环氧和酶抑制剂(Indomethacin)孵育血管环，发现L-NAME可以阻断苏木70％醇洗脱部位、夏枯草70％醇洗脱部位、芫花70％醇洗脱部位和半枝莲50％醇洗脱部位这四个药物舒张血管作用，而Indomethacin不能阻断其舒张血管作用，接着用鸟苷酸环化酶的抑制剂(ODQ)预先处理血管环后，中药提取物舒张血管作用被抑制，因此可以推测这几个中药提取物舒张血管作用主要是通过NO-cGMP途径来实现的。SD大鼠左侧颈总动脉结扎术后四周，与模型组相比，给予各组药物干预后，复方高剂量组、苏木70％醇洗脱部位的高剂量组、鸡血藤50％醇洗脱部位的低剂量组能较好的降低大鼠左侧颈总动脉内膜-中膜增厚和管腔面积减小。与模型组相比，辛伐他汀组、复方高、低剂量组、鸡血藤50％醇洗脱部位低剂量组及苏木70％醇洗脱部位高、低剂量组可以降低左侧颈总动脉iNOS mRNA的表达;辛伐他汀组、复方低剂量组、鸡血藤50％醇洗脱部位低剂量组及苏木70％醇洗脱部位低剂量组可以降低左侧颈总动脉VCAM-1mRNA的表达;辛伐他汀组、复方高、低剂量组、鸡血藤50％醇洗脱部位低剂量组可以降低左侧颈总动脉IL-1β mRNA的表达。辛伐他汀组、复方高低剂量组、鸡血藤50％醇洗脱部位低剂量组可以降低血流剪切力引起的左侧颈总动脉iNOS蛋白的表达，提示上述药物具有抗炎作用。\n 结论:\n 1.苏木70％醇洗脱部位、夏枯草70％醇洗脱部位、鸡血藤50％醇洗脱部位、半枝莲50％醇洗脱部位、芫花70％醇洗脱部位、前胡乙酸乙酯提取物具有较好的舒张血管作用，并具有一定的抗炎作用。\n 2.苏木70％醇洗脱部位、夏枯草70％醇洗脱部位、芫花70％醇洗脱部位和半枝莲50％醇洗脱部位舒张血管租用主要是通过NO-cGMP途径来实现的。\n 3.与模型组相比，给予各组药物干预后，复方高剂量组、苏木70％醇洗脱部位的高剂量组、鸡血藤50％醇洗脱部位的低剂量组能较好的降低大鼠左侧颈总动脉内膜-中膜增厚和管腔面积减小，其机制可能与抗炎和舒张血管有关。