关键词： 氨甲酰磷酸合成酶1   黄曲霉毒素B1   互作蛋白   肝癌  

摘要： 氨甲酰磷酸合成酶1是尿素循环的第一个限速酶,在机体解毒氨中起着重要作用,在肝细胞癌中发生了下调。尿素循环的产物血胺在肝癌和肝癌诱发剂黄曲霉毒素B1(AFB1)处理的肝细胞及组织中都出现了下调。但还没有证据说明AFB1参与了肝癌中CPS1表达的调控。本实验首先揭示了 CPS1在小鼠不同组织和人源细胞中的表达情况,发现其主要表达在肝脏中,小肠里面也有少量的表达;然后依据CPS1在不同物种中的进化分析揭示了 CPS1的高度保守性。并证明了 AFB1下调CPS1的表达,且有时间和浓度的依赖性。接着分析了两种CPS1下调的途径:DNA甲基化和Y-boxing binding protein上调,发现它们并未参与AFB1导致的CPS1下调。同时,过表达和干扰CPS1的表达,发现CPS1的干扰抑制了细胞的增殖活性,细胞出现了凋亡,说明CPS1在细胞中非常重要。为了探索CPS1下调的机制,利用内源性免疫共沉淀结合质谱找到了 5个CPS1的互作蛋白(DSP、HSJUP、KRT1、ALB和UBC),并分析了这些互作蛋白与CPS1和AFB1之间的调控关系。接着采用蛋白分子对接及免疫共定位进一步分析了他们的互作关系,发现角蛋白1是最有可能的CPS1的互作蛋白。CPS1和角蛋白都在细胞分化中扮演着重要的角色,他们之间的互作很可能为分析CPS1在肝癌的形成及肝细胞的分化过程中的作用提供新的线索。

关键词： 黄曲霉毒素B1   膜结合蛋白   40S核糖体蛋白A   雌二醇β脱氢酶5  

摘要： 黄曲霉毒素B1(Aflatoxin B1,AFB1)是目前已知霉菌中毒性最强的物质。AFB1不仅能引起急性中毒和慢性中毒,还有致癌、致畸、致突变的三致作用,严重危害人类和各种动物的健康。一直以来关于真菌的产毒机理、毒素的致毒机理已有大量研究,但由于该毒素是小分子化合物,针对该毒素如何被动物细胞吸收的机理研究很少。本研究设计了一种以固相亲和层析技术为基础筛选AFB1结合蛋白的方法,并对筛选出的蛋白进行分析验证。该方法首先制备了AFB1偶联蛋白复合物(AFB1-BSA),然后将AFB1-BSA与小鼠的总蛋白孵育、经非特异性洗涤和特异性洗脱、SDS-PAGE分析、质谱分析鉴定等步骤,一共得到雌二醇β脱氢酶5(Akr1c6)、果糖二磷酸醛缩酶B(ALDOB)、40S核糖体蛋白A(Rpsa)等8个可能的AFB1结合蛋白。在进一步的生物信息学分析后,本研究进一步分析验证Akr1c6和Rpsa蛋白与AFB1的相互作用。其中,Rpsa蛋白是层粘连蛋白、阮病毒、细菌等的膜结合蛋白。随后,本研究成功克隆出rpsa和akr1c6两个基因,将基因分别构建到原核表达载体pET28a上并转化到*** BL21(DE3)宿主菌中,然后通过IPTG诱导蛋白的表达和Ni柱进行纯化。本研究中通过酶联免疫分析法,以AFB1-BSA包被96孔板,分别和纯化的Rpsa和Akr1c6蛋白孵育后,用抗HIS抗体检测,证实了 Rpsa和Akr1c6蛋白与AFB1间确实存在体外结合作用。本研究还通过荧光共定位的方法,我们在细胞水平上观察Rpsa与AFB1是否存在作用关系;结果发现,在HELA细胞中,二者存在共定位现象,即Rpsa蛋白和AFB1存在着基于细胞类型的相互作用。本研究还利用纯化的Rpsa和Akrlc6蛋白对Balb/c小鼠进行皮下多点注射,成功制备了 Rpsa和Akr1c6蛋白的多克隆抗体,为进一步的细胞水平上的蛋白功能研究打下了基础。本研究筛选并验证了两个AFB1的结合蛋白:Rpsa和Akr1c6。目前正进行细胞内它们与AFB1的吸收和分布等相关生物学功能的进一步分析,以期能为AF1如何进入动物细胞的研究打下基础。

关键词： 中药   奶牛乳腺上皮细胞   增殖   总蛋白   β-酪蛋白  

摘要： 本研究通过培养奶牛乳腺上皮细胞,并以该细胞为研究对象,研究中药复方透皮贴剂和中药复方灌注液对奶牛乳腺上皮细胞增殖、总蛋白含量以及β-酪蛋白含量的影响。从奶牛乳房无菌采取乳腺组织,通过体外原代培养、分离纯化以及传代等方法建立稳定的奶牛乳腺上皮细胞系。倒置显微镜下对奶牛乳腺上皮细胞进行观察,做形态学鉴定；绘制细胞生长曲线；通过SDS-PAGE电泳鉴定奶牛乳腺上皮细胞所分泌的p-酪蛋白。制备中药复方透皮贴剂及其主要成分的单味中药提取物和中药复方灌注液及其主要成分的单味中药提取物,添加到奶牛乳腺上皮细胞培养液中,研究其对奶牛乳腺上皮细胞增殖、总蛋白以及p-酪蛋白含量的影响。试验结果如下：本试验中,通过组织块培养法可获得奶牛乳腺细胞,通过胰蛋白酶多次消化的方法可基本去除奶牛乳腺细胞中的成纤维细胞,获得较为纯化的奶牛乳腺上皮细胞；经过传代以后,奶牛乳腺上皮细胞的形态以及生理功能不发生改变,从而建立了稳定的奶牛乳腺上皮细胞系。采用不同浓度的中药复方灌注液及其单味中药的提取液处理奶牛乳腺上皮细胞1d后,在浓度为10 mg·mL-1时OD值最大,但促进细胞增殖的效果不显著(P>0.05)。采用10 mg·mL-1的中药提取物处理乳腺上皮细胞6 d,与对照组相比,紫花地丁和黄芪对乳腺上皮细胞增殖作用不明显(P>0.05)；泽兰和鸡血藤在第3 d时即能极显著促进细胞增殖(P<0.01),而中药灌注液在第5 d时能极显著促进细胞增殖(P<0.01)。采用不同浓度的中药复方灌注液及其单味中药的提取液处理奶牛乳腺上皮细胞1d后,在浓度为15 mg·mL-1时细胞总蛋白含量最大。15 mg·mL-1的中药提取物处理乳腺上皮细胞6 d,与对照组相比,紫花地丁提取物对细胞总蛋白含量无显著影响(P>0.05)；泽兰、鸡血藤提取物和复方灌注液在第1 d时对细胞总蛋白含量有显著影响,且随时间延长总蛋白含量增加,差异极显著(P<0.01)；诃子提取物在第1 d时极显著促进细胞分泌总蛋白(P<0.01),第3 d与第1 d总蛋白含量相比,极显著下降(P<0.01),第5 d同第3 d相比,细胞总蛋白含量极显著增加(P<0.01)。采用不同浓度的中药复方灌注液及其单味中药的提取液处理奶牛乳腺上皮细胞1 d后,在浓度为10 mg·mL-1时p-酪蛋白含量最大。10 mg·mL-1的中药提取物处理奶牛乳腺上皮细胞6 d,与对照组相比,在第1 d时,紫花地丁、黄芪、泽兰、诃子以及复方灌注液组能够极显著促进细胞β-酪蛋白的分泌(P<0.01),鸡血藤能够显著促进p-酪蛋白的分泌(0.010.05)；第5 d与第3 d相比,灌注液组差异极显著(P<0.01),黄芪、泽兰、诃子组差异显著(0.010.05)。采用不同浓度的中药复方透皮贴剂及其单味中药的提取液处理奶牛乳腺上皮细胞1 d后,在浓度为10 mg·mL-1时OD值最大,但促进细胞增殖的效果不显著(P>0.05)。10 mg·mL-1的中药提取物处理乳腺上皮细胞6 d,与对照组相比,重楼组在第5 d能够显著促进细胞增殖(0.010.05)。采用不同浓度的中药复方透皮贴剂及其单味中药的提取液处理奶牛乳腺上皮细胞1 d后,在浓度为10 mg·ML-1时总蛋白含量最大。10 mg·mL-1的中药提取物处理奶牛乳腺上皮细胞6 d,与对照组相比,重楼组在第5 d能够极显著促进细胞β-酪蛋白分泌(P<0.01),黄连组、马兰组、透皮贴剂组在第1 d时就能够极显著提高细胞p-酪蛋白含量(P<0.01),木芙蓉组在第3 d能够极显著提高细胞β-酪蛋白含量(P<0.01)。采用不同浓度的中药复方透皮贴剂及其单味中药的提取液处理奶牛乳腺上皮细胞1 d后,在浓度为10 mg·mL-1时β-酪蛋白含量最大,但促进作用不显著(P>0.05)。10 mg·mL-1的中药提取物处理乳腺上皮细胞6 d,与对照组相比,在第1 d时,重楼组、木芙蓉组和透皮贴剂组p-酪蛋白含量有所增加,但差异不显著(P>0.05)。第3 d和第1 d相比,β-酪蛋白含量增加,差异极显著(P<0.01);第5 d和第3 d相比,p-酪蛋白含量增加,差异极显著(P<0.01)。黄连组、马兰组p-酪蛋白含量变化不明显(P>0.05)。试验证实,采用适宜浓度的中药提取物处理奶牛乳腺上皮细胞,可以显著促进细胞增殖和总蛋白以及β-酪蛋白的分泌,表明中药复方灌注液以及透皮贴剂可以通过修复损伤乳腺细胞从而改善奶牛乳房炎的症状。

关键词： 霉菌毒素   产毒真菌   黄曲霉毒素B1   玉米赤霉烯酮   呕吐毒素   霉变率   多重PCR  

摘要： 霉菌毒素能够降低饲料的饲喂价值,影响畜禽的生产性能,对动物组织机能、健康产生不利影响,甚至导致畜禽死亡。黄曲霉毒素B1(AFB1)、玉米赤霉烯酮(ZEN)、呕吐毒素(DON)是被大众广泛研究的三种霉菌毒素,也是污染最为普遍的三种毒素。霉菌毒素可以不同的剂量对动物和人的健康造成不同程度的威胁。因此,对于霉菌毒素以及产毒霉菌的检测显得至关重要。目前常用的霉菌毒素检测方法有薄层层析、液相色谱、免疫化学分析等几种方法,主要基于霉菌毒素的理化性质,无法检出己被产毒真菌污染但尚未产毒的高风险样品。多重PCR检测方法,可在单一泳道反应体系中同时检测多个DNA模板或同一模板的不同区域,具有快捷、高效、低成本等优点,被广泛应用于有害微生物检测。 本课题调研了我省2012年秋季玉米中黄曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮、呕吐毒素的污染情况,对三类霉菌毒素与玉米籽粒水分含量、破损率、霉变率之间的相关性进行了分析。以产毒真菌黄曲霉、镰刀菌的基因组DNA为模板,根据AFB1、ZEN、DON三种毒素生物合成中关键基因的序列设计引物,构建了能够从样品中快速灵敏检测潜藏性产毒真菌的多重PCR检测体系。1)课题从我省各地采集了87份玉米样品,利用ELISA试剂盒对各样品中黄曲霉毒素B1(AFB1)、玉米赤霉烯酮(ZEN)、呕吐毒素(DON)的含量进行检测。结果表明,AFB1、***的检出率分别为98.85%、100%、100%; ZEN超标率最高,达到12.64%,DON超标率次之,为6.90%,AFBl超标率最低为3.45%；对三种毒素含量之间的相关性进行分析,结果发现ZEN与DON之间存在着极显著的线性相关性(p=0.0008),相关系数为0.1368。 2)根据国标GB13078-2001规定,对各个样品的水分含量,采用统计方法对各个样品籽粒破损率、霉变率进行检测,所得各项数据与AFB1、ZEN、DON的含量进行相关性分析。结果表明,所有玉米样品中自由水、结合水、总水含量最高值分别为14.06%、5.95%、19.24%,最低值分别为4.79%、1.11%、9.46%,平均含量分别为9.44%、4.02%、13.46%；平均霉变率、残破率分别为5.08%、6.08%,霉变率最严重的样品达到27.20%,残破率最严重的为31.80%；霉变率与ZEN含量呈极显著相关性(P=0.0058),与残破率呈显著相关性(P=0.0354)。 3)本课题分别根据AFB1、ZEN、DON生物合成中的调控基因aflR、PKS13、tri5的序列以及真菌共有的P-Tubulin基因序列设计出四对引物,用于构建快速、灵敏检测饲料用玉米中潜藏性的产毒素真菌的多重PCR反应体系。经过逐步的体系优化,初步建立了一个多重PCR检测方法,可对四个基因进行扩增,扩增的四个片段分别为400bp(aflR)、658bp (tri5)、537bp (β-Tubulin)、192bp (PKS13);从玉米样品中提取到的真菌DNA经多重PCR扩增,目的条带均较为清晰。

关键词： 黄曲霉毒素B1   黄曲霉毒素M1   杂色曲霉毒素   高灵敏度   高特异性   单克隆抗体   酶联免疫吸附测定（ELISA）  

摘要： 随着经济的快速发展，生活质量的不断改善，真菌毒素污染等对农产品及食品安全产生的影响已成为近几年以来政府重视、社会关注、世界瞩目的热点问题。其中黄曲霉毒素是威胁农产品及食品安全的毒性最强的一类真菌毒素，黄曲霉毒素及其生物合成前体物杂色曲霉毒素的污染，不仅严重威胁人民的身体健康和生命安全，而且对我国的经济贸易有巨大的负面影响。因此，研究建立准确、灵敏、便捷的黄曲霉毒素和杂色曲霉毒素免疫分析技术势在必行。 抗体是免疫分析的关键核心试剂，靶标免疫分析灵敏度直接取决于其特异性抗体的特性。本课题组前期研制出了居国际领先水平的系列黄曲霉毒素单克隆抗体，其中黄曲霉毒素B1和黄曲霉毒素M1单克隆抗体与国内外抗体同比特异性最高。然而，黄曲霉毒素B1迄今特异性最强的单克隆抗体3G1仍与黄曲霉毒素B2有6.4%的交叉反应，且灵敏度有待大幅度提高；黄曲霉毒素M1迄今特异性最强的单克隆抗体2C9灵敏度仍有待提高。杂色曲霉毒素作为黄曲霉毒素的合成前体物，制备抗杂色曲霉毒素的单克隆抗体，可将其作为一种黄曲霉毒素前体物通用抗体探明黄曲霉毒素发生积累标志分子，从而为风险评估和污染防控提供理论依据，然而，国内外杂色曲霉毒素抗体研制方面鲜有报道。因此，研制同时具备高灵敏度和高特异性的黄曲霉毒素及其前体杂色曲霉毒素单克隆抗体，研发基于该抗体的免疫快速检测技术和产品，对于农产品质量安全风险评估及预警，保障人民的农产品、食品消费安全，促进农业产业的可持续发展，打破贸易技术瓶颈均具有重要的意义。 针对上述黄曲霉毒素及其前体杂色曲霉毒素高灵敏高特异性抗体缺乏的关键性技术难题，本论文的主要研究内容和创新点如下： 1.选育出黄曲霉毒素B1抗体杂交瘤细胞株1B5等，研制出高灵敏高特异性黄曲霉毒素B1单克隆抗体，灵敏度提高了100倍以上。制备高质量抗体的关键是制备高质量的人工抗原，人工抗原制备最关键的是半抗原结构的设计，本研究参考Christian Cervin所述方法，并在此基础上进行改进，合成了一种新的黄曲霉毒素完全抗原AFB2-GA-BSA；同时，按照经典肟化方法合成了AFB1-BSA。AFB2-GA-BSA按传统免疫剂量（50μg/次）免疫小鼠，AFB1-BSA按照加大剂量(150μg/次)免疫小鼠，均通过细胞融合、半固体培养基培养、两步梯度法筛选，最终，利用加大剂量的AFB1-BSA免疫小鼠，选育出了4株性能良好的单克隆细胞株，分别是1F11、2F12、2C7、1B5。采用间接竞争ELISA测定系列抗体的灵敏度，并计算交叉反应率，抗体针对黄曲霉毒素B1反应灵敏度高，与B2，G1，G2的几乎不存在交叉反应。并且以灵敏度和特异性为综合分析点，与国内外同类抗体对比后可以发现，1B5是迄今最好的针对黄曲霉毒素B1的单克隆抗体。以单克隆抗体1B5为基础，研究建立了AFB1间接竞争酶联免疫吸附分析技术（Enzyme-linkedimmunosorbent assay, ELISA）。其中包被抗原AFB2-GA-BSA的浓度为0.0625μg/mL，1B5单克隆抗体稀释度为1:20000。并对封闭试剂、pH值、盐离子浓度等理化参数进行了优化。 2.选育出黄曲霉毒素M1抗体杂交瘤细胞株LM13等，研制出高灵敏高特异性黄曲霉毒素M1单克隆抗体，灵敏度均提高了2倍以上。为获得更高灵敏度，高特异性AFM1抗体，在前期基础上，加大了免疫剂量，延长了免疫周期。通过细胞融合技术，半固体培养基基，两步梯度法筛选最终获得9株抗AFM1单克隆细胞株，分别命名为LM47、LM15、LM16、LM54、LM13、LM32、LM44、LM48、LM46，采用间接竞争ELISA对上述纯化抗体进行灵敏度检测，并计算交叉反应率，结果显示，所得抗体灵敏度均比2C9抗体提高2倍以上，大部分抗体与AFB1，AFB2，AFG1，AFG2交叉反应较低。以灵敏度最高的单克隆抗体LM13为基础，研究建立了AFM1间接竞争ELISA方法。其中包被抗原AFM1-BSA的浓度为0.0625μg/mL，LM13单克隆抗体稀释度为1:120000。并对封闭试剂、pH值、盐离子浓度等理化参数进行了优化。 3.选育出能稳定分泌抗杂色曲霉毒素单克隆抗体的杂交瘤细胞株ST3等，研制出高灵敏高特异性杂色曲霉毒素单克隆抗体。本研究通过打开ST分子结构中双呋喃环的双键与蛋白实现偶联，并将ST人工抗原进行紫外扫描，结果表明其特征吸收峰与BSA和ST的特征吸收峰有明显差异，BSA与ST成功偶联。利用新合成的ST完全抗原免疫小鼠，通过细胞融合、半固体培养基培养、两步梯度法筛选，最终筛选得到3株性能良好的单克隆细胞株，分别是ST3，ST4，ST6。采用间接竞争ELISA测定系列抗体的灵敏度，并计算交叉反应率，灵敏度均很高，且不与AFB

关键词： 中药制剂   充血性心力衰竭   脑钠肽   血管紧张素Ⅱ  

摘要： 目的：本实验通过结扎大鼠左冠状动脉前降支制备心肌梗死后心衰模型，观察中药制剂参麦宁心合剂对慢性充血性心力衰竭（CHF）大鼠血浆中脑钠肽（BNP）和血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)的影响，探讨该方药在治疗充血性心力衰竭中神经内分泌激素的作用，为临床中医药治疗慢性心力衰竭的应用提供理论依据。 方法：选取60只SPF级健康雄性Wistar大鼠，体重200～250g，由山东鲁抗统一提供。将这些大鼠随机分为假手术组8只和模型组52只，针对模型组分别中医证候气阴两虚，血瘀水停证和心肌梗死后心衰大鼠模型的制备。2周后进行心脏彩色多普勒超声检查，将造模成功的实验组大鼠随机分为模型对照组、西药观察组和中药观察组。模型对照组和假手术组分别给予生理盐水，西药观察组给予培哚普利和美托洛尔基础药物治疗，中药观察组给予中药制剂参麦宁心合剂灌胃治疗，连续灌药8周后再次进行心脏彩色多普勒超声评价，并按照要求取材，从大鼠腹主动脉取血，冷冻保存后立即送往郑州金域检验中心由专业技师进行检测，观察大鼠血浆中BNP和AngⅡ的水平，并进行统计分析。 结果： 1.与假手术组相比，模型对照组大鼠的左心室射血分数（LVEF）水平显著降低（p<0.05），血浆中BNP、AngⅡ的水平均显著升高（p<0.05）； 2.与模型对照组相比，中药观察组和西药观察组大鼠的LVEF的水平显著提高（p<0.05），血浆中BNP、AngⅡ的水平均显著降低（p<0.05）； 3.中药观察组和西药观察组大鼠的LVEF，血浆中BNP、AngⅡ的水平均无统计学意义（p>0.05）。 结论： 1.研究结果提示，利用结扎大鼠左冠状动脉前降支的方法复制大鼠心肌梗死后充血性心力衰竭的方法是可行的； 2.参麦宁心合剂可明显提高充血性心力衰竭大鼠的LVEF，减缓大鼠心衰的发展进程； 3.参麦宁心合剂可明显降低充血性心力衰竭大鼠血浆中BNP、AngⅡ的水平，从而达到治疗慢性充血性心衰大鼠的目的，为中医药在心衰治疗的应用中提供客观的理论依据。

关键词： 凡纳滨对虾   黄曲霉毒素B1   生化指标   肝胰腺显微结构  

摘要： 试验设置黄曲霉毒素B1（AFB1）为0μg/kg（对照组）、400μg/kg、800μg/kg、1200μg/kg，1600μg/kg、2000μg/kg6组饲料，饲养初始体重为（0.3±0.02g）的凡纳滨对虾，将对虾随机分配于18个水族箱内（6组，每组3个重复），每个水族箱放养30尾对虾，投饲率为每箱试验虾体重的6%-7%，每14天根据体重的变化调整投喂量。本研究旨在观察饲料中AFB1对凡纳滨对虾生长、体营养成分、血淋巴和肝胰腺生化指标及肝胰腺显微结构的影响。试验周期共8周。试验结果表明：随着饲料中AFB1含量的增加，各试验组全虾粗蛋白量与对照组无显著性差异，1600μg/kg组和2000μg/kg组的全虾粗脂肪量高于其他组。AFB1为1200μg/kg时对虾增重率最低（304.67%），2000μg/kg时增重率显著高于其他组，但成活率最低（58.33%）。随着饲料中AFB1的升高酶活性普遍呈下降趋势。2000μg/kg组肝胰腺中总抗氧化能力（T-AOC）显著下降（P<0.05），1600μg/kg组肝胰腺中谷胱甘肽S转移酶（GST）、超微量ATP酶和超氧化物歧化酶（SOD）活力最低，但血淋巴中GST显著高于其他各组（P<0.05）。与对照组相比饲料中AFB1为1600μg/kg时，凡纳滨对虾血细胞总数（THC）显著降低（P<0.05）。1600μg/kg和2000μg/kg组血淋巴谷丙转氨酶（GPT）和谷草转氨酶（GOT）以及肝胰腺中GOT活性最高，2000μg/kg组肝胰腺GPT显著高于其他各组（P<0.05）。各试验组的肝胰腺谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）活性随着饲料中AFB1的增加逐渐降低，AFB1为2000μg/kg时GSH-PX酶活性最低。各试验组血淋巴中丙二醛（MDA）含量之间无显著性差异（P>0.05）但均显著高于对照组（P<0.05），2000μg/kg组肝胰腺MDA含量与对照组之间无显著性差异（P>0.05），其他试验组MDA含量与对照组相比显著增加（P<0.05）。通过凡纳滨对虾肝胰腺组织病理切片可观察到，摄食高含量AFB1饲料对虾的肝胰腺受损伤程度更高。试验对虾肝胰腺中AFB1的残留量随着饲料中AFB1含量的增加而逐渐增加，其中对虾肝胰腺中AFB1含量最高的是2000μg/kg组（95.49μg/kg），各试验组肌肉中无AFB1残留。由此得出，饲料中AFB1含量越高对凡纳滨对虾非特异性免疫和抗氧化能力的影响越大，AFB1在对虾肝胰腺中残留贮存，在肌肉中未检测出，虾肉可安全食用。

关键词： 花生粕   黄曲霉毒素B1   电子束辐射   降解产物  

摘要： 花生是我国主要的油料作物，产量居于各种油料之首。我国每年用于榨油的花生约有800万吨，榨油后得到花生粕300多万吨。花生粕营养丰富，但花生极易感染真菌，产生黄曲霉毒素，严重限制了花生粕的应用。电子束（EB）加速辐照技术作为一种去除黄曲霉毒素的新方法，具有高效、环保、安全、对降解体系影响小等优点，广泛应用于食品及环境中的杀菌、脱毒与保鲜等。该技术在去除简单体系中黄曲霉毒素的有效性已得到证实，但应用到花生粕中黄曲霉毒素去除的有效性、降解机理、安全性及对花生粕品质的影响等方面仍有待研究。本课题以黄曲霉毒素B1（简称AFB1）为研究对象，研究其在水以及花生粕中的降解行为、降解产物、路径等机理，并通过鼠伤寒沙门氏菌回复突变试验和细胞毒理实验对降解产物的致突变性和细胞毒性进行了研究，同时评估了EB去毒工艺对花生粕品质的影响。 首先，研究花生粕中不同辐照剂量、不同初始浓度、不同物料厚度、不同水分含量等因素对AFB1电子束降解行为的影响。结果表明，花生粕中AFB1的降解效果与辐照剂量有关，受初始浓度、固体粕厚度和水分含量影响。AFB1水溶液在4kGy时降解率达80%，8kGy时达92%。在实验范围内，随着辐照剂量、初始浓度和固体粕中水分含量的增加，花生粕中AFB1的降解效果增强;固体粕厚度增加降解率降低。 然后，运用UPLC-Q-TOF/MS技术鉴定出水中五种降解产物分别为P1（C16H12O7）、P2（C16H16O6）、P3（C17H14O8）、P4（C15H12O6）和P5（C17H12O7），降解过程首先由AFB1在C（6a）-O（7）处发生分子间氢提取反应，并在C（1）-C（2）处和C（3）-C（3a）处发生消去反应生成P4，AFB1同时也在C（8）-C（9）处发生加成反应生成P3，P3再发生消去反应、还原反应等生成P1、P2和P5。五种EB降解产物结构与AFB1类似，只在部分基团稍有不同。花生粕中AFB1电子束降解反应剧烈，AFB1经过电子束辐照以后，迅速发生氧化反应，断裂为小分子物质。 此外，应用Ames和细胞毒理实验研究水、花生粕两种体系中AFB1降解产物的致突变性和细胞毒性。结果表明：阳性对照AFB1对鼠伤寒沙门氏菌组氨酸缺陷型菌株和HepG2细胞毒性强烈，导致细胞活性降低72.44%。经过EB去除两种体系中AFB1后，辐照降解产物致突变性和细胞毒性已大幅度降低（p＜0.001），其中水中EB降解产物致突变性降低50%以上，细胞活性降低18.61%，花生粕中降解产物已无毒性（p＜0.001）。 最后，在降解有效性的基础上以花生粕为原料，选取粗脂肪、粗蛋白、氨基酸、总糖、还原糖、总黄酮、灰分和脂肪酸含量等几个重要营养指标为检测对象，研究不同辐照剂量下，EB降解花生粕中AFB1对花生粕品质的影响。结果表明：在实验剂量范围内，随辐照剂量增加，花生粕中还原糖、总黄酮、棕榈酸、亚油酸、油酸含量有少量增加，花生酸含量降低，粗脂肪、粗蛋白、氨基酸总量、总糖和灰分含量等无显著变化（p＞0.05）。应用EB辐射技术去除花生粕中AFB1对花生粕品质影响较小。

关键词： 天士力   中药提取物   竞争战略   营销战略  

摘要： 目前植物提取物行业已发展成为以中药提取物为核心，涵盖各种天然植物为提取原料的现代产业。近年来，伴随着人们对“回归自然”“绿色消费”认可度的提升，植物提取物受到特别的关注与认可。中药提取物作为我国中药行业的一个新兴产业快速发展起来，已成为中药现代化与国际接轨的有效途径。同时，我国虽然是植物提取物主要供应国，但主要还是对本土自然资源的输出，仍处于产业链低端。作为一家专业从事提取生产的企业，现代中药资源公司根据天士力集团的战略部署，在保障“内供”的基础上，新增外销业务。为此定制植提物营销战略是决定我们能否被市场接受被顾客认同的关键，也是中药现代化国际化之重要组成。 本文以天津天士力现代中药资源有限公司为研究对象，研究了现代资源公司中药提取物产品营销战略问题。首先本文以环境分析入手，分析了国内国际植物提取物的行业发展现状和发展前景以及环境情况对现代资源公司的影响，然后对企业内部经营条件进行了分析，界定了企业的资源能力。其次运用(Porter)泼特行业竞争理论分析了植物提取物行业的竞争情况和现代资源公司主要竞争对手情况。运用竞争战略选择分析理论制定现代资源公司的集中化竞争战略。通过STP战略研究，确定现代资源公司的目标市场和市场定位，并选择了公司进入植提物市场的模式，最后本文以品牌营销为理论基础，从营销组合战略、文化营销战略、绿色营销战略三方面规划了现代资源公司的营销战略。 本文通过对现代资源公司植提物营销战略的研究，将对我国同类中药、植提物企业进行市场营销战略的制定具有指导意义。

关键词： 中药制剂   不良反应   防范措施  

摘要： 目的 探讨中药注射剂的不良反应及解决、防范措施,确保其用药安全性.方法 通过对我院2009年2月至2013年2月收治的100例接受中药注射剂治疗患者做回顾性分析,总结不良反应的发生因素,定制相应的防范对策.结果 中药注射剂引发不良反应的原因多样、复杂,需从加工、设备、中药质量等多方面严格把关,确保中药制剂的效果.结论 加强对中药注射剂原材料、加工过程的整体管理,将中药注射剂质量做规范化管理标准,可将其安全性显著提高.