关键词： H3N2   猪流感   中药制剂   筛选  

摘要： 猪流感是由猪流感病毒引起的一种能够严重影响养猪业的呼吸系统疾病，目前，猪流感的分布涉及亚洲、美洲、欧洲和非洲，已成为规模化猪场的常发性传染病。研究表明：猪是人、禽和猪流感病毒通过基因重排，产生新的亚型流感病毒的“混合器”。故猪流感的研究具有深远而特别重要的公共卫生意义。使用疫苗或西药防治猪流感具有很大的局限性，中国的中草药具有资源丰富、有害残留少、毒副作用较小以及不易被病毒产生耐药性的优点，其在疫病防治中备受关注。 本试验目的为研究筛选具有抗猪流感病毒的中药，并初步比较部分中药不同制剂的抗病毒效果，以期为全面合理使用中药提供指导。选取金银花、山银花、板蓝根、苍术等9味原料中药，根据药性等采用水煎法、水煮醇沉法以及超临界CO2萃取法制备成10味中药制剂，以猪流感病毒为作用对象，利用MDCK细胞筛选模型，应用MTT法对先接病毒后加药物、先加药物后接病毒，病毒和药物作用2h后同时加入三种方式测定了苍术等中药和它们的不同制剂的体外抗H3N2型猪流感病毒的效果。 研究结果表明：除苍术油外，其他中药制剂的安全作用范围在0.1～1.95mg/mL，其中苍术红枣水煎液的安全浓度（TC0）最大为1.95mg/mL；苍术油的最小为0.77μg/mL。中药的半数毒性浓度（TC50）差别较大，最大的为苍术水煎28.66mg/mL，最小的为苍术油0.022mg/mL。药物的抗病毒效果结果表明：各药物均有一定的抗病毒作用，其中山根水煎液、青蒿艾叶水煎液和苦参水煎液的综合抗病毒效果较好，对病毒既有抑制、阻断作用，还有一定的直接灭活作用。

关键词： 中药提取物   壳聚糖   炎症后色素沉着   Q-开关Nd   YAG激光   氢醌  

摘要： 目的：通过动物实验研究，观察豚鼠治疗前后皮损的变化，探讨中药提取物联合壳聚糖对豚鼠炎症后色素沉着的疗效，为今后更深入的探索炎症后色素沉着的有效治疗方法提供依据和参考。 方法：本实验共15只健康棕黄色豚鼠，均由河北医科大学实验动物中心提供（实验动物合格证编号：1403134）。将豚鼠背部的棕色毛发剃除，暴露皮肤随机分为4个相隔区域，采用CO2点阵激光照射豚鼠背部皮肤，然后窄谱中波紫外线（波长311nm）照射，诱导炎症后色素沉着的实验动物模型。实验组采用中药提取物联合壳聚糖愈肤生物膜外敷，中药提取物是由“白茯苓、甘草、马齿苋”中提取，壳聚糖愈肤生物膜是天然的保湿剂（产品标准号：YZB/吉0033-2010），对照组采用Q-开关Nd：YAG激光（波长1064nm）照射、2%氢醌乳膏外涂以及不采取任何干预措施，观察不同方法对实验动物皮肤色素沉着的不同治疗作用。治疗8周后，经VISIA图像分析系统分析结果和组织病理分析，观察色素沉着的变化，分析不同的治疗方法对豚鼠色素沉着的改善情况。采用SPSS13.0统计软件对数据进行分析，P<0.05为有统计学意义。 结果：本研究共15只实验动物，每只豚鼠背部取4块相隔区域，随机分为四组，每组15例。经统计软件分析，四组棕色斑绝对值P>0.05，四组间无明显差异，均衡可比。干预8周后，分别记录中药提取物联合壳聚糖组、2%氢醌乳膏组、Q-开关Nd：YAG激光组及空白对照组豚鼠皮肤棕色斑绝对分值的变化情况。 1棕色斑绝对分值比较：干预8周后，豚鼠背部4个相隔区域皮肤颜色发生变化。4组间经方差分析，P<0.05，具有统计学差异。实验组与对照组比较：Q-开关Nd:YAG激光组与中药提取物联合壳聚糖组比较，P<0.05，有统计学差异；2%氢醌组与中药提取物联合壳聚糖组比较，P>0.05，无统计学意义，两者的治疗效果相当，且中药联合壳聚糖组无刺激，用药过程中皮肤没有出现明显的发红、脱皮现象；空白对照组8周后，豚鼠皮肤棕色斑绝对值未明显下降。 2组织病理学比较：经311nmNB-UVB三次照射后，豚鼠背部皮肤形成均匀且稳定的色素沉着，基底层可见大量黑素颗粒，棘层可见黑素颗粒呈帽状分布。治疗8周后，中药提取物联合壳聚糖组色素颗粒明显减少，基底层和棘层可见少量散在黑素颗粒；2%氢醌乳膏组色素颗粒也明显减少，基底层和棘层亦可见少量黑素颗粒；Q-开关Nd:YAG激光组基底层黑素颗粒略有减少，棘层仍可见黑素颗粒；空白对照组色素颗粒变化不明显。 结论：CO2点阵激光联合311nm窄谱紫外线可诱导豚鼠皮肤形成均匀、稳定的炎症后色素沉着；中药提取物联合壳聚糖可有效改善豚鼠皮肤炎症后的色素沉着，降低皮肤棕色斑的绝对分值，缩短色素沉着的消退时间,其短期效果和2%氢醌相近，且没有明显的副作用。

关键词： 黄曲霉毒素B1   免疫阻抗传感器   纳米复合物   纳米抗体   独特型抗体   噬菌体展示  

摘要： 黄曲霉毒素B1（Aflatoxin B1, AFB1）是由真菌代谢产生的具有强致癌性的剧毒物质，广泛存在于粮食、油料及坚果等食物中。鉴于AFB1的巨大危害，各国普遍加强对AFB1的监管。目前，用于检测AFB1的方法主要包括薄层层析法、高效液相色谱法、酶联免疫吸附法以及电化学传感器等。这些方法存在一定的不足，如灵敏度较低、检测成本较高、耗时长、检测结果可靠性较差以及检测试剂易对人体造成伤害和对生态环境造成污染等。针对上述不足，本研究制备了AFB1非标记免疫阻抗传感器，以期达到灵敏、快速、检测结果更加可靠的目的；同时，本研究将抗独特型纳米抗体应用于AFB1的分子模拟研究中，以期替代AFB1进行免疫学分析，防止AFB1对操作人员造成伤害和对环境造成污染。主要研究内容如下： 1AFB1非标记免疫阻抗传感器的研究 1.1采用电化学恒电流聚合法于玻碳电极表面合成纳米复合物PPy/PPa/rGO。优化了聚合电解质中Py、Pa单体和rGO的最佳浓度，分别为0.26M，0.065M和16μg/mL；最佳的电化学聚合时间为300s。分别通过循环伏安法、电化学阻抗谱、扫描电子显微镜等技术表征了纳米复合物PPy/PPa/rGO，结果表明，以最佳条件合成的纳米复合物PPy/PPa/rGO具有较好的电化学氧化还原活性、电化学稳定性和独特的形貌。 1.2采用EDC/NHS将抗AFB1单克隆抗体共价偶联于电极表面，制备了AFB1免疫阻抗传感器。该传感器不需要对抗原或抗体进行酶标记；检测时间为50min，最低检测限为8fg/mL，线性范围为10fg/mL-10pg/mL；与AFB2、AFG1、AFG2的交叉反应率分别为2%、27%和21%，与呕吐毒素、赭曲霉毒素A无明显交叉反应；对玉米样品的加标回收率为80.0±5.0%-112.0±2.5%。该结果表明，PPy、PPa和rGO三者的协同作用，增强了纳米复合物PPy/PPa/rGO的电化学活性和稳定性，提高了传感器的检测灵敏度；此外，该传感器在阻抗测试中，无需外源氧化还原探针，在PBS中即可进行电化学阻抗谱分析，使检测结果更加可靠。 2独特型纳米抗体应用于AFB1分子模拟的研究 2.1采用抗AFB1单克隆抗体F(ab′)2片段免疫羊驼，提取羊驼淋巴细胞总RNA，通过反转录PCR和巢式PCR构建了AFB1独特型纳米抗体文库。该文库目的基因插入率为90.9%，实际库容量达到1.8×108，文库多样性较好。辅助噬菌体救援后，噬菌体展示文库滴度达到1×1013cfu/mL，可以用于后续的亲和淘选。 2.2分别以抗AFB1单克隆抗体及其F(ab′)2片段为靶标进行固相亲和淘选。在以抗AFB1单克隆抗体全抗体为靶标淘选时，分别采用Gly-HCl (pH2.2)洗脱法和AFB1抗原竞争洗脱法洗脱特异性结合的噬菌体，其中采用Gly-HCl洗脱法的淘选中，第三轮验证结果显示特异性噬菌体的比例达到该轮验证总数的22.9%，而AFB1抗原竞争洗脱法第二轮得到的特异性噬菌体即达到该轮验证总数的27.1%，表明抗原竞争洗脱法在筛选抗独特型噬菌体时具有较高的效率。此外，以抗AFB1单克隆抗体F(ab′)2片段为靶蛋白进行亲和淘选，第二轮验证得到的特异性噬菌体占该轮验证总数的16.7%。多序列比对发现，得到的特异性噬菌体抗体氨基酸序列同源性较高。 2.3将独特型纳米抗体基因克隆至原核表达载体进行诱导表达，经蛋白质复性后得到可溶性抗体蛋白，分别采用竞争ELISA和生物学方法鉴定该抗体的生物学活性。结果表明，m7蛋白不但能与AFB1竞争结合抗AFB1单克隆抗体，还能诱发Balb/c小鼠产生抗AFB1多抗血清，因此，m7属于半抗原抑制型独特型抗体，有望替代AFB1进行免疫学研究。

关键词： 微乳   中药制剂   应用  

摘要： 目的：对微乳在中药制剂中的应用进行分析。方法在两步高压乳匀技术下，利用中药丹参酮ⅡA原料药等来制备丹参酮ⅡA微乳制剂，并回顾性分析所制备的丹参酮ⅡA微乳制剂性质的稳定性。结果本次研究中所制备的丹参酮ⅡA微乳制剂的平均粒径在186．4mm左右，平均Zeta电位在42．01mV左右，并将丹参酮ⅡA微乳制剂进行高速离心和长期试验之后，其性质仍旧保持均一稳定。结论微乳技术在我国中药制剂中的应用已十分广泛，而采用先进工艺所研制的丹参酮ⅡA等各种中药微乳制剂性质也非常稳定，在临床疾病的治疗中具有极高的应用价值。

关键词： 植物乳杆菌F22   黄曲霉毒素B1   肉鸡   血清   免疫器官   肝脏   肠道菌群  

摘要： 本论文以黄曲霉毒素B1 (Aflatoxin B1, AFB1)和植物乳杆菌F22 (Lactobacillus plantarum F22)为研究对象,研究其添加到日粮中对肉鸡生长性能、血清生化指标、免疫器官指数、肝肾抗氧化指标、肝脏酶活性以及肠道菌群指标的影响。试验选用1日龄健康艾维因肉鸡120只,随机均分为3组,每组设4个重复,每个重复10只,分别为对照组(基础日粮)、AFB1组(基础日粮+50μg/kgAFB1)和混合组(基础日粮+50μg/kgAFB1+1%植物乳杆菌F22),试验期28d。试验期间,在14日龄和28日龄时测定肉鸡生长性能,并于28日龄时,采集血清、肝脏、肾脏、脾脏、胸腺、法氏囊、十二指肠和盲肠内容物等样品进行相关指标的测定。试验结果如下：1.生长性能：14日龄时AFBl组和混合组的平均体重(AW)、平均日增重(ADG)、平均日采食量(ADFI)显著低于对照组(P<0.05),料肉比(F/G)显著高于对照组(P<0.05),AFB1组和混合组之间差异不显著(P>0.05)；28日龄时,AFB1组的AW、ADG、ADFI显著低于对照组和混合组(P<0.05),F/G显著高于对照组和混合组(P<0.05),混合组的AW、ADFI与对照组无显著差异(P>0.05)。2.血清生化指标：AFB1组的丙氨酸氨基转氨酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)活性显著高于对照组和混合组(P<0.05),混合组AST、 ALP与对照组无显著差异(P>0.05)；AFB1组的总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)含量显著低于对照组(P<0.05),尿素氮(BUN)含量显著高于对照组(P<0.05),混合组的TP、ALB有增加趋势,BUN有下降趋势,但与对照组和AFB1组无显著差异(P>0.05)。3.免疫器官指数：AFB1组法氏囊和胸腺器官指数显著低于对照组和混合组(P<0.05),混合组与对照组之间无显著差异(P>0.05)：AFB1组脾脏器官指数显著高于对照组和混合组(P<0.05),混合组与对照组之间无显著差异(P>0.05)。4.抗氧化指标：AFB1组血清超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性显著低于对照组和混合组(P<0.05),丙二醛(MDA)含量显著高于对照组和混合组(P<0.05),混合组与对照组之间无显著差异(P>0.05)。AFB1组肝脏的SOD、GSH-Px、过氧化氢酶(CAT)活性显著低于对照组和混合组(P<0.05),MDA含量显著高于对照组和混合组(P<0.05),混合组与对照组之间无显著差异(P>0.05)。AFB1组肾脏的SOD活性显著低于对照组(P<0.05),混合组的SOD活性与对照组和AFB1组无显著差异(P>0.05)；AFB1组的GSH-Px、CAT活性显著低于对照组和混合组(P<0.05),混合组的GSH-Px活性与对照组之间无显著差异(P>0.05)；AFB1组的MDA含量显著高于对照组、混合组(P<0.05),且混合组与对照组之间差异显著(P<0.05)。5.肝脏酶活性指标：AFB1组的胆碱酯酶(CHE)活性显著低于对照组、混合组(P<0.05),混合组仍显著低于对照组(P<0.05),AFB1组琥珀酸脱氢酶(SDH)活性显著低于对照组(P<0.05),混合组与对照组和AFB1组均无显著差异(P<0.05)；AFB1组的ALP活性显著高于对照组和混合组(P<0.05),混合组与对照组之间差异不显著((P>0.05)。6.肠道菌群指标：十二指肠内容物中,AFB1组的乳酸杆菌、双歧杆菌数量显著低于对照组和混合组(P<0.05),混合组乳酸杆菌、双歧杆菌数量低于对照组(P<0.05),AFB1组肠球菌、大肠杆菌的数量显著低于对照组和混合组(P<0.05),混合组与对照组之间无显著差异(P>0.05)。盲肠内容物中,AFB1组乳酸杆菌、双歧杆菌数量显著低于对照组和混合组,混合组与对照组之间无显著差异(P>0.05),AFB1组肠球菌、大肠杆菌的数量显著高于对照组和混合组(P<0.05),而混合组肠球菌、大肠杆菌的数量显著低于对照组(P<0.05)。对十二指肠和盲肠内容物进行DGGE指纹图谱和聚类分析可知,十二指肠和盲肠内容物各组之间的条带数无显著差异(P>0.05),不同肠道间菌群的相似性指数低；在十二指肠内容物中,各组之间菌群的相似性指数在89%-95%,在盲肠内容物中,各组之间菌群的相似性指数在88%～92%,十二指肠和盲肠内容物的菌群多样性未发生显著变化。综上所述,在肉鸡日粮中单独添加AFB1,肉鸡出现了典型的AFB1慢性中毒症状,同时添加AFB1和植物乳杆菌F22后,植物乳杆菌F22使肉鸡生长性能及肝脏功能相关指标在一定程度上得到

关键词： 中药制剂   药物制剂技术   方剂  

摘要： 中医药学在世界上首先发现了中药并首创了方剂,医方是"除疾保性命之术",而剂则有"调百药齐,和之所宜"之功。采用现代药物制剂技术重新研究并升华古典方剂之术,开创未来药物制剂技术和新剂型药物研究的全新思维和方向。

关键词： 皮试   中药制剂   护理  

摘要： 中药制剂的严重不良反应越来越引起社会的广泛关注,减少中药制剂不良反应的发生成为广大医药科技工作者所面临重要课题之一,通过皮试是有效防止药品不良反应发生的有效途径,本文通过总结注射用丹参多酚酸盐中药注射制剂皮试的护理体会,以供同行借鉴,促进护理质量的持续提高。

关键词： 中药制剂现代化   瓶颈   走向世界   策略  

摘要： 所谓中药制剂就是指以中医理论为指导，在中医方剂的基础上、以中药材为原料，经过炮制、提取、分离、醇化等过程获得半成品，再通过药剂学的方法加工制成各种剂型的制剂。中药制剂现代化是中药现代化发展和中药走向世界的关键，现今中药的发展既面临良好的机遇，也面临着严峻考验，目前中药制剂现代化发展的瓶颈越来越明显，问题越来越突出，如何在这些瓶颈及问题上采取合理的策略加以克服成为中药制剂现代化道路的关键。

关键词： 色谱联用技术   抗哮喘中药制剂   非法添加化学药物  

摘要： 中药制剂以其安全可靠的用药特点,成为临床治疗哮喘的常用药物。近年来,临床治疗哮喘的中药制剂中经常发现非法掺入化学类药物成分,给患者的用药安全带来严重威胁。本文分析了色谱联用技术在鉴定抗哮喘中药制剂中非法添加化学药物的应用进展,以期为临床检测提供参考。

关键词： 黄曲霉毒素B1   黄曲霉毒素M1   适配体传感器   RT-qPCR   饲料和食品安全  

摘要： 黄曲霉毒素B1（AFB1）是毒性最强的霉菌毒素之一，引起了全球在饲料和食品安全领域的关注。为了阻止污染的饲料和食品带来的食品安全恐慌和经济损失，开发AFB1快速，灵敏和特异性的检测方法显得极其重要。本文开发了一种简单，超灵敏和可靠的适配体传感器检测AFB1。该方法利用AFB1的适配体作为分子识别探针，与适配体互补的DNA作为实时定量聚合酶链式反应（RT-qPCR）的模板产生信号。优化条件下，该方法的检测范围为5.0×10-5～5.0ng·mL-1，极高的灵敏度为25fg·mL-1。本研究选择其他的八种霉菌毒素作为干扰物检测后Ct值没有明显的改变，表明适配体传感器对AFB1极好的特异性。同时该传感器也可以应用于实际样品羊草和婴幼儿米粉中AFB1的检测，获得满意的回收率分别为88%127%和94%119%。该方法在定量和高通量检测饲料和食品中的霉菌毒素方面有很大的潜在应用，并且检测的目标物还可以扩大到更大的范围。 AFB1可以直接污染食品，或者间接污染饲料，动物采食AFB1后，在奶中产生代谢物黄曲霉毒素M1（AFM1）[1,2]。AFM1被IARC归类为次级组致癌物质，其毒性比AFB1弱[3]。本研究旨在通过检测生鲜乳不同储存条件下黄曲霉毒素M1（AFM1）的残留水平分析AFM1的储存稳定性，储存条件包括储存温度，储存时间，复温温度、解冻次数和添加防腐剂等。研究结果表明，在不同的储存条件下，包括4℃冷藏保存，-20℃冷冻保存，-20℃冷冻保存24h后复温温度，反复冻融后解冻次数以及添加不同的防腐剂对生鲜乳中AFM1的残留量均无显著影响，回收率检测值均在80%110%范围内。目前牛奶储存前后其AFM1残留变化及降解率研究鲜有报道。本研究探讨了牛奶安全监测工作中AFM1的最佳储存条件，为保证牛奶监测结果的准确性提供理论支持。