关键词： 中药生物药剂学   生物有效性评价体系   整合药代动力学   “银翘”药对   Drug-drug interaction   ∑PK-PD   化学计量学   生物效应放大   肠吸收屏障  

摘要： 中药复方制剂由于多组分产生的多靶点生物效应特点使其生物有效性难以评价,剂型设计与技术应用更难以进行,建立与中药制剂效应相关的可量化的生物有效性综合评价体系及合适的制剂学技术应用不仅是中药制剂基本科学问题,更是中药现代化研究的关键。 中药制剂生物有效性综合评价体系的建立及制剂学应用存在以下技术瓶颈：①以网络效应形式表达的中药制剂功效所对应的多组分活性成分及其构效与量效关系的复杂性使得与中药制剂生物有效性表达相关的活性成分群难以辨识；②中药制剂多组分体内过程及其相互影响规律难以阐明,综合体系难以构建；③中药活性成分群及伴生物质群理化性质的复杂性使得中药制剂剂型设计、技术选择陷入困窘。如何运用合适的手段快速、正确的辨识活性成分群,打破中药制剂过程质量控制标准不完善的技术瓶颈?如何表征中药制剂生物药剂学的综合评价体系,打破中药制剂剂型改革与技术应用量化标准不完善的技术瓶颈?针对活性成分群整合药代动力学-Integrated AUC氏,如何选择适合的药剂学技术提高Integrated AUC?等等关键问题均有待进一步研究。 因此,本课题以生物药剂学与药代动力学为基础,选择临床配伍最小单位“药对”—“银翘”为研究对象。作者针对活性成分群难以辨识,创新性地提出'Drug-drug interaction结合ΣK-PD相关性辨识‘银翘,药对主要活性成分”及“‘生物效应放大,佐证‘银翘,药对中金银花、连翘主要活性成分”等思路来辨识、佐证“银翘”药对主要活性成分,通过“‘抗病毒效价-IC50’分析研究‘银翘’药对整合药代动力学-Integrated AUC的思路来评价“银翘”药对生物有效性,针对中药制剂剂型设计、技术选择等瓶颈,作者选择简单的药剂学手段—吸收促进剂技术,并通过‘"Integrated AUC研究调控市售‘银翘’制剂抗病毒生物活性”的思路成功应用于市售四种制剂(双黄连口服液、银翘解毒片、复方芩兰口服液、清热解毒口服液),显著提高了制剂的抗病毒疗效。 UHPLC-LTQ-Orbitrap-MS结合UPLC-ESI-MS/MS定性、定量“银翘”药对体内外化学成分的研究结果表明,利用UHPLC-LTQ-Orbitrap-MS,共检测体外化合物35种,包括了酚酸类7种(新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、3,5-二咖啡酰奎宁酸、3,4-二咖啡酰奎宁酸、奎宁酸、咖啡酸),苯乙醇苷5种(异连翘酯苷、连翘酯苷A、连翘酯苷B、连翘酯苷D、连翘酯苷E),黄酮类7种(芦丁、异槲皮苷、金丝桃苷、紫云英苷、木犀草苷、槲皮素、木犀草素),异黄酮类2种(染料木苷、染料木素),木脂素类9种(牛蒡子苷、连翘苷、松脂素-β-D-glucoside、牛蒡子苷元、松脂素、连翘脂素、表松脂酚、表松脂酚-β-D-glucoside、松脂素单甲基醚),皂苷类2种(灰毡毛忍冬皂苷乙、川续断皂苷乙),环烯醚萜类3种(马钱苷、当药苷、Centauroside)。纵观国内外文献及现有对照品信息,创新性的开发了一种UPLC-ESI-MS/MS同时快速定量“银翘”药对26种指标性成分的方法。并利用UHPLC-LTQ-Orbitrap-MS分析了“银翘”药对血中“移行成分”,结合体外分析结果,共检测体内化学成分32种,其中包括29种原形化合物,分别为酚酸类7种(新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、3,5-二咖啡酰奎宁酸、3,4-二咖啡酰奎宁酸、奎宁酸、咖啡酸),苯乙醇苷5种(异连翘酯苷、连翘酯苷A、连翘酯苷B、连翘酯苷D、连翘酯苷E),黄酮类7种(芦丁异槲皮苷、金丝桃苷、紫云英苷、木犀草苷、槲皮素、木犀草素),异黄酮类2种(染料木苷、染料木素),木脂素类7种(连翘苷、松脂素-β-D-glucoside、牛蒡子苷元、松脂素、连翘脂素、表松脂酚、表松脂酚-β-D-glucoside),环烯醚萜类1种(马钱苷)。且通过MetWorks软件及文献的比对,发现3种代谢产物,根据其质谱裂解规律,分别为A1#(松脂酚-o-glucuronide),A2#(表松脂酚-o-glucuronide),A3#(连翘脂素-o-glucuronide)。基于“入血物质才可能为活性成分”,以上29种化合物可作为体内研究对象,并作为指标性成分来代表“银翘”药对,但限于现有对照品缘故,且①松脂素、连翘脂素、表松脂酚在“银翘”提取液中含量甚低；②表松脂酚-β-D-glucoside、松脂素-β-D-glucoside虽为同分异构体,质谱显示其具有相同的裂解规律(相同的母离子、子离子),但UPLC-ESI-MS/MS分析“银翘”药对药代动力学时,发现血中只检测到松脂素-β-D-glucoside,并未见表松脂酚-β-D-glucoside;(③具有类似母核的化合物具有相同的吸收机制,如：苯乙醇苷类,通过研究异连翘酯苷、连翘

关键词： 中药制剂   新一代测序   生物成分   HPLC指纹图谱   化学成分  

摘要： 中药制剂是在中医理论指导下，按照“君臣佐使”的组方原则，选择适宜的药味和剂量，制成随时可以取用的现成药品。目前，我国中药制剂并不被欧美国家所认可，主要原因之一在于其质量评价体系不完善。建立科学、合理的中药制剂质量评价体系是实现中药现代化、产业化和国际化的关键之一。中药制剂传统质量评价方法(显微鉴别，TLC鉴别和HPLC含量测定等)的局限性在于难以区分形状相似的近缘物种及含有相同主要化学成分的物种，不能检测制剂中的未知生物成分，这些瓶颈制约着中药制剂走向国际化。基于新一代高通量测序技术的元基因组研究方法是目前认识、分析生物混合体系结构和功能最有效、最重要的方法之一。本课题选择六味地黄丸作为研究对象，尝试将高通量元基因组研究思路与技术应用于中药制剂研究中，即对中药制剂的全部生物成分进行定性分析，然后结合传统HPLC评价方法，以期建立一种全面、准确、有效的中药制剂质量评价新方法。 目的：使用新一代测序技术以及高效液相色谱指纹图谱技术对不同厂家、不同批次的六味地黄丸样品进行质量评价。 方法：采用新一代测序技术对六味地黄丸样品中的处方物种和杂质物种进行鉴定，以转录间隔区ITS2基因和质体trnL基因的p-loop区作为分子标记片段，对9个市售样品和一个自制样品进行扩增和测序，共得到了90,000多条高质量的序列。此外，通过HPLC指纹图谱技术对不同六味地黄丸样品的化学组成进行了分析和比较。 结果：基于新一代测序技术的方法，确定了六味地黄丸中的部分处方物种成分以及杂质成分，并发现不同厂家的六味地黄丸的质量存在差异；HPLC指纹图谱的结果进一步表明，不同厂家六味地黄丸样品的一致性有一定的区别，两种方法的质量评价结果一致。 结论：新一代测序方法可以有效的鉴定六味地黄丸中的生物成分。中药制剂的质量评价应既包含化学成分的分析，又包括物种成分的鉴定。因此，将基于新一代高通量测序技术的物种成分鉴定法与化学成分分析法相结合，将进一步提高中药制剂成分分析和质量评价的准确性。

关键词： 糖尿病   中药   二甲双胍   随机对照实验   真实世界研究  

摘要： 目的：通过观察中药箭羽糖康片联合二甲双胍治疗2型糖尿病对糖尿病及其并发症相关各项指标的影响，和中药注射剂注射用丹参多酚酸盐在住院糖尿病患者中的应用情况，探讨中药制剂用于糖尿病治疗的作用机制和临床效果。 方法：1、采用随机盲法对照实验的方法，将112例予二甲双胍治疗的2型糖尿病患者随机分为治疗组与对照组，治疗组59例加用箭羽糖康片，对照组53例加用安慰剂，服药26周。在治疗前和治疗第9、18、26周时分别测量两组患者的血糖水平、血脂水平、肝肾功能、血液指标、炎性指标、氧化应激和血管内皮功能相关指标，并进行组内和组间比较。2、采用真实世界研究方法，追踪记录2012年8月至2013年1月我院应用注射用丹参多酚酸盐的住院糖尿病患者的一般资料、诊断信息、医嘱信息、实验室与辅助检查记录及不良反应情况等临床资料并进行分析。 结果：1、治疗组经箭羽糖康片联用二甲双胍治疗26周后，空腹血糖（FPG）、糖化血红蛋白（HbAlc）、总胆固醇（Tch）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、脂质比值（Tch/HDL-C、LDL-C/HDL-C）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）、丙二醛（MDA）、总超氧化物歧化酶（T-SOD）、血管内皮生长因子（VEGF）的水平均比治疗前以及对照组（二甲双胍加安慰剂治疗）有明显改善（P<0.05）。2、共有345例住院糖尿病患者纳入观察，多为超重的中老年人，入住科室主要为在心内科和血管外科，合并病症主要为冠心病与高血压。注射用丹参多酚酸盐用药情况基本符合药品说明书要求且安全性良好，合并用药以心血管系统和血液系统药物为主，患者糖尿病相关临床指标在用药后有所改善。 结论：1、箭羽糖康片联合二甲双胍治疗2型糖尿病的效果优于单用二甲双胍，不仅患者的血糖水平得到了更有效的控制，同时患者的脂代谢紊乱、炎症与氧化应激状态和血管内皮功能障碍均有改善。结果表明采用中西医结合方案治疗2型糖尿病具有独特的优势，中药制剂所具有的全面改善患者身体状况、调节代谢平衡的作用，能够协同增加西药的降血糖作用，更有效的防治糖尿病及其并发症。2、采用真实世界研究方法观察中药的临床疗效评估具有实用意义。注射用丹参多酚酸盐在我院的使用安全、规范，相关临床指标的改善趋势说明，其对于糖尿病患者及并发症可能具有有益影响。本研究为临床合理用药调研积累经验，为糖尿病的中西医防治提供了一定的参考依据。

关键词： 黄曲霉毒素B1   伏马菌素B1   HepG2细胞   联合毒性   细胞凋亡  

摘要： 黄曲霉毒素、伏马菌素是谷物中常见的两种真菌毒素，其中，黄曲霉毒素B1（AFB1）是由黄曲霉菌与寄生曲霉菌产生的一类次级代谢产物，被认为是当前已知毒性最强的真菌毒素，能够通过DNA损伤而引起突变，并能导致诱发性肝癌;伏马菌素B1（FB1）为伏马菌素的主要组分，具有肝毒性和肾脏损害作用，同时与人类食道癌的发病率具有一定的关系。鉴于两种毒素经常共存于各种谷物及其制品中，且靶细胞都是肝细胞，本实验采用人肝癌细胞HepG2为对象，研究了AFB1与FB1的联合毒性，探讨了两种毒素单独与混合作用于HepG2时的凋亡途径。为深入研究多种真菌毒素共存时对总体毒性的影响及其联合作用机制提供基础，并为危险性的评价提供参考。主要研究结果如下： 以处在对数生长期的HepG2细胞为研究对象，采用不同浓度梯度的AFB1（0.1、10、50、100μmol/L）和FB1（0.1、7、14、70μmol/L）进行单独或者混合处理，通过测量细胞活性、ATP含量、DNA受损程度、线粒体膜通透性以及活性氧含量的变化，分析这两种毒素对HepG2细胞联合作用的类型。结果显示，在SRB实验中，混合毒素对于HepG2细胞抑制率的理论加和值与实际测量值的比值大都接近于1，其他四个指标的理论加和值与实际值相比，无显著性差异（p＞0.05），且两种毒素对细胞的混合毒效应均高于单独作用组。故得到结论，黄曲霉毒素B1和伏马菌素B1对人肝癌HepG2细胞的联合毒性作用为加和作用。 选取AFB1、FB1及AFB1+FB1三个毒素组中对HepG2抑制率分别达到10%、30%、50%时对应的浓度，与细胞作用48h后，观察HepG2细胞核形态、凋亡率、周期分布及线粒体膜电位的改变。结果显示，与AFB1及FB1各浓度组毒素反应48h后，共聚焦显微镜观察到， HepG2细胞核出现碎块状致密浓染或半月形凝聚等凋亡现象;在细胞凋亡率的测定中，AFB1、FB1混合及单独组均能引起HepG2不同程度的凋亡，与对照组相比均存在极显著性差异（p＜0.01），且各组的凋亡率与毒素呈现出浓度依赖关系;细胞周期测定结果表明，FB1主要影响G0/G1期，AFB1及AFB1+FB1主要影响S期;JC-1测量线粒体膜电位的结果显示，在两毒素单独及混合作用于HepG2细胞48h后，细胞内线粒体膜电位与对照组相比都出现不同程度的降低，且同一组中，膜电位下降的程度随着毒素浓度的增加而增大。经独立样本T检验分析，三个毒素组导致的细胞凋亡率及线粒体膜电位的下降程度均无显著性差异（p＞0.05），进一步验证了两种毒素的联合作用为加和作用。 采用免疫组化法测定了caspase-3、caspase-8、caspase-9、bcl-2、bcl-x及p53等细胞凋亡相关蛋白的表达，并分析了三组毒素导致HepG2凋亡的分子机理，结果显示，AFB1、FB1及AFB1+FB1均是在p53蛋白的调控下，一方面利用死亡受体激活凋亡启动子caspase-8和执行子caspases进入凋亡程序;另一方面，毒素刺激会导致HepG2细胞内促凋亡蛋白Bax表达增加，抗凋亡蛋白Bcl-2表达下降，线粒体膜电位下降，释放细胞色素C并活化启动子caspase-9及执行子，最终通过蛋白酶水解而使细胞崩溃。

关键词： 中药制剂   牛贝消核   免疫   一般药理学   急性毒性反应  

摘要： 目的： 了解抗结核中药制剂牛贝消核水提取物(3号)及乙醇提取物(4号)的免疫学、一般药理学作用及其安全性,为其制备成中成药制剂提供可靠的实验基础。 方法： (1)牛贝消核的免疫学研究：①牛贝消核水提取物及乙醇提取物对正常小鼠免疫学作用的研究：将BALB/c小鼠64只随机分为空白组、微卡菌苗组、牛贝消核3号低剂量组、牛贝消核3号中剂量组、牛贝消核3号高剂量组、牛贝消核4号低剂量组、牛贝消核4号中剂量组、牛贝消核4号高剂量组。按上述分组以蒸馏水、牛贝消核3号药物及牛贝消核4号药物连续灌胃小鼠6周,其中微卡菌苗组每2周1次肌肉注射微卡,空白组每2周1次肌肉注射生理盐水,共注射3次。实验结束后,摘眼球采血并取小鼠脾脏,通过流式细胞术检测正常小鼠全血中CD3+、CD4+、CD8+T淋巴细胞比例及细胞因子IL-4、IL-6、IFN-γ. TNF-α、IL-17A、IL-10水平,评估小鼠脾脏指数及胸腺指数,通过MTT的方法测定小鼠脾淋巴细胞增殖反应,应用ELISA方法检测脾淋巴细胞培养上清中细胞因子IFN-γ、IL-4的水平,评价牛贝消核对正常小鼠免疫功能的影响。②牛贝消核水提取物及乙醇提取物对小鼠腹腔巨噬细胞的影响：将56只BALB/c小鼠随机分为空白组、牛贝消核3号低剂量组、牛贝消核3号中剂量组、牛贝消核3号高剂量组、牛贝消核4号低剂量组、牛贝消核4号中剂量组、牛贝消核4号高剂量组,按上述分组用蒸馏水、牛贝消核3号药物及牛贝消核4号药物给小鼠连续灌胃4周后,杀鼠收集腹腔巨噬细胞,以EIISA法检测巨噬细胞培养上清中IL-1β、TNF-α、IL-6水平；通过PCR方法检测巨噬细胞吞噬卡介菌的能力,从而评估牛贝消核对小鼠腹腔巨噬细胞功能的影响。(2)牛贝消核水提取物及乙醇提取物的一般药理学研究：①牛贝消核水提取物及乙醇提取物对小鼠神经系统的影响：将KM小鼠随机分为空白组、牛贝消核3号低剂量组、牛贝消核3号中剂量组、牛贝消核3号高剂量组、牛贝消核4号低剂量组、牛贝消核4号中剂量组、牛贝消核4号高剂量组,按上述分组用牛贝消核3号药物及牛贝消核4号药物给小鼠连续灌胃7天,最后1次灌胃后30min,分别通过对小鼠一般行为、翻正反射、睡眠时间、镇痛等神经系统的表现观察,从而评价牛贝消核水提取物及乙醇提取物对小鼠神经系统的影响；②牛贝消核水提取物及乙醇提取物对小鼠肝功能的影响：将KM小鼠随机分为空白组、牛贝消核3号低剂量组、牛贝消核3号中剂量组、牛贝消核3号高剂量组、牛贝消核4号低剂量组、牛贝消核4号中剂量组、牛贝消核4号高剂量组,按上述分组用牛贝消核3号药物及牛贝消核4号药物给小鼠连续灌胃7天,最后1次灌胃前,小鼠禁食不禁水8h,最后1次灌胃后30min,摘除眼球法采血,于3000rpm离心5min分离血清,检测小鼠血清中谷丙转氨酶、谷草转氨酶、总胆红素、直接胆红素、总蛋白、白蛋白、碱性磷酸酶和谷氨酰基转移酶的水平,了解肝功能；③牛贝消核水提取物及乙醇提取物对小鼠肾功能的影响：将KM小鼠随机分为空白组、牛贝消核3号低剂量组、牛贝消核3号中剂量组、牛贝消核3号高剂量组、牛贝消核4号低剂量组、牛贝消核4号中剂量组、牛贝消核4号高剂量组,按上述分组用牛贝消核3号药物及牛贝消核4号药物给小鼠连续灌胃7天,最后1次灌胃后,将小鼠置于代谢笼,收集灌胃给药后240min内的尿液,记录尿液容量,进行尿钠、钾分析,然后用摘除眼球法采血,于3000rpm离心5min分离血清,检测血清中肌酐和尿素氮的水平,分析尿钠、钾,了解肾功能；从而评价牛贝消核水提取物及乙醇提取物对小鼠肾功能的影响。(3)牛贝消核的急性毒性试验研究：将KM小鼠随机分为空白组、牛贝消核3号5倍剂量组、牛贝消核3号10倍剂量组、牛贝消核3号20倍剂量组、牛贝消核4号5倍剂量组、牛贝消核4号10倍剂量组、牛贝消核4号20倍剂量组,以牛贝消核的5倍、10倍、20倍临床剂量灌胃小鼠,给药后连续观察14天,通过观察小鼠体重及一般行为的变化,对心、肝、脾、肺、肾形态学变化及其脏器指数的评估,研究牛贝消核的急性毒性。 结果： (1)牛贝消核的免疫学研究：①牛贝消核水提取物及乙醇提取物对正常小鼠的免疫学作用：各组小鼠脾脏器指数与胸腺脏器指数,与空白组比较无显著性差异(P>0.05)；各组小鼠脾淋巴细胞经PHA. BCG刺激培养48小时后,各药物组小鼠脾淋巴细胞增殖指数与空白对照组比较均无显著性差异；各组小鼠脾淋巴细胞经PHA刺激培养72小时后,各药物组与空白对照组比较脾淋巴细胞培养上清中IFN-γ、IL-4水平均无统计学差异；各药物组与空白对照组比较全血中CD3+、CD4+、CD8+T淋巴细胞百分比及细胞因子IL-4、IL-6、IFN-γ、TNF-α、IL-17A. IL-10均无统计学

关键词： 慢性萎缩性胃炎   中药   疗效   系统评价   Meta分析  

摘要： 目的：评价中药制剂治疗慢性萎缩性胃炎有效性及安全性。方法：按照系统评价方法,检索成都中医药大学网上图书馆提供的维普中文科技期刊数据库(VIP)；万方数据库；清华同方CNKI系列数据库中的中国知识资源总库；西文生物医学期刊数据库及Cochrane Library临床试验数据库。并手工检索了部分中文核心期刊,运用百度、google搜索引擎,医学论坛等查找相关参考-文献。时间限制在2013年以前。制定纳入及排除标准筛选文献,对符合的文献按照相关的质量评价标准进行评价,提取数据,用RevMan5.2软件对数据进行Meta分析。 结果：共纳入17个研究,1549例慢性萎缩性胃炎患者,研究方法学质量均较低下。Meta分析的结果显示：较之对照组,治疗组显示了更好的临床总疗效[RR=1.30,95%CI(1.20,1.41),P<0.00001],能更好改善CAG患者的总体症状体征[RR=1.14,95%CI[1.02,1.27],p<0.02]、胃脘胀满[MD=0.92,95%CI[0.57,1.26], p<0.00001]、胃痛[MD=0.59,95%CI[0.36,0.82],p<0.00001]、食欲减退[MD=0.61,95%CI[0.24,0.99],p=0.001]、暖气症状[MD=0.40,95%CI[0.11,0.69],p=0.006],改善患者胃镜表现[RR=1.79,95%CI(1.27,2.53),P=0.0009]及病理总体情况[RR=2.16,95%CI(1.67,2.79),P<0.00001]、粘膜萎缩[RR=1.68,95%CI(1.44,1.96),P<0.00001]、肠上皮化生[RR=4.68,95%CI(2.24,9.78),P<0.0001]、异型增生情况[RR=2.46,95%CI(1.34,4.51),P=0.004]。对HP感染阳性的CAG患者,两组根除HP疗效无统计学差异。13个研究进行了不良反应的观察,其中4个研究观察到发生不良反应,主要有过敏、头晕、恶心、口干、口腔溃疡、舌边尖糜烂、失眠、皮疹、荨麻疹、大便稀溏及其他消化道症状,经比较组间无统计学差异。 结论：此次研究提示在一般治疗基础上使用中药制剂治疗慢性萎缩性胃炎较使用西药在症状体征、胃镜表现及病理改善方面更能提高其疗效,临床综合疗效更高；根治HP方面与西药疗效无明显差异。但因纳入研究的质量均较低下,存在讨论中所提及的各种不足与问题,因而根据现有证据尚且不能充分证明中药制剂治疗慢性萎缩性胃炎的疗效及其安全性。故对以上结果应持谨慎态度。因此有必要进行高质量的临床随机对照试验予以证实。

关键词： 稻米   深加工   黄曲霉毒素B1   消减技术  

摘要： 稻米在生产、收获、储藏、加工和销售的过程中，常因管理不善而造成黄曲霉和寄生曲霉等霉菌的生长繁殖，导致黄曲霉毒素（AFs）污染稻米。因此，在加工过程中，有效消减AFs将有助于稻米资源的有效利用。本论文以受黄曲霉毒素B1（AFB1）污染的稻米为原料，在研究提取蛋白的传统碱法和制备淀粉糖的喷射液化法对AFB1消减效果的基础上，重点研究了传统碱法制备米蛋白和喷射液化法制备淀粉糖的工艺改进对AFB1的消减效果，分析了AFB1的微波辅助碱法降解产物结构，并通过细胞毒理实验对米蛋白的安全性进行了评估，最后对米蛋白、淀粉糖的品质以及米蛋白结构变化进行了考察，以确保改进后的工艺有效、安全、可行。 以米蛋白的回收率和纯度为指标，优化传统碱法提取蛋白的工艺，得到最佳工艺条件为NaOH浓度0.06mol/L、料液比1:8和搅拌时间60min。在此条件下米蛋白的回收率76.83%，纯度94.55%，米淀粉的回收率92.32%，纯度95.81%;传统碱法工艺能部分消减AFB1，当稻米原料的AFB1初始浓度为100μg/kg时，蛋白产品中AFB1残留量为33.91μg/kg，淀粉产品中AFB1残留量为3.47μg/kg;微波辅助处理显著影响蛋白中AFB1的消减效果，单位体积微波功率的增加和微波处理时间的延长均能有效提高AFB1的降解率，单位体积微波功率750W/L处理7min，AFB1降解率88.51%，米蛋白中AFB1残留量7.33μg/kg，符合国标（≤10μg/kg）;微波辅助碱法降解AFB1符合一级动力学特征，且AFB1初始浓度对降解速率常数k的影响不显著，根据回归方程计算出的微波处理理论最短时间t≤10μg/kg随着AFB1初始浓度的增大（20~100μg/kg）而延长（0.2~8.6min）。 研究喷射液化法制备淀粉糖过程中吸附剂对AFB1吸附率的影响。结果表明，喷射液化法能够部分消减AFB1，需要采用脱毒活性炭的稻米原料的AFB1污染临界点为17.0μg/kg;筛选出对AFB1具有高吸附性能的活性炭ACJ1，其吸附AFB1的最佳条件为pH4.0、温度45℃、时间60min;ACJ1对AFB1的吸附符合Langmuir模型，回归方程为y=（0.00114x1.913）/（1+0.000676x1.913），R2=0.978，通过该方程可计算出不同AFB1初始浓度时ACJ1的理论最小添加量;经验证，采用ACJ1理论最小添加量，能有效消减淀粉糖中的AFB1，使其符合国标。 采用UPLC Q-TOF MS检测与MassLynx V4.1分析，得到微波辅助碱法降解AFB1后降解产物的分子结构及其参数信息，表明AFB1降解产物的毒性结构二氢呋喃环双键被破坏，根据分子结构-毒性理论（QSAR），初步推断AFB1降解产物毒性较AFB1有所降低。此外，采用HepG2人肝癌细胞评估了微波辅助碱法制备米蛋白的体外毒性，表明随着AFB1浓度增大和给药时间延长，AFB1对HepG2细胞的毒害作用增强，可降低细胞存活率，减少ROS、ATP及DNA含量和P53蛋白表达量;与对照组相比，微波辅助碱法制备米蛋白的细胞毒性显著降低。 微波辅助处理对米蛋白回收率及纯度的影响不大，但是对其品质及结构的影响显著。随着微波处理时间的延长，米蛋白的溶解性、起泡性、持油性和体外消化性显著提高，乳化性先提高后下降，而持水性呈下降趋势;总巯基、二硫键含量增多，表面疏水性显著性增强，自由巯基含量减少，表明微波辅助处理可能首先诱导部分米蛋白发生聚集形成可溶性大分子聚集体，但随着微波处理时间的进一步延长，米蛋白聚集体发生解聚形成小分子蛋白。此外，采用脱毒活性炭脱毒处理对淀粉糖的品质未造成明显的改变。

关键词： 黄曲霉毒素B1   抗独特型抗体   单链抗体   蛋白表达  

摘要： 真菌毒素（mycotoxins）是真菌在生长繁殖过程中产生的有毒次生代谢产物。其中，黄曲霉毒素B1（aflatoxinB1，AFB1）是公认的毒性最大的真菌毒素。它主要由产毒黄曲霉（Aspergillusflavus），寄生曲霉（***）以及集峰曲霉（***）产生。AFB1毒性强，危害大，可以在采收、贮藏、运输和销售等环节污染农产品，而且在现有生产力水平下要完全杜绝污染是不可能的，因此进行农产品、食品和饲料中AFB1检测与分析技术的研究是非常重要和必要的。　　关于AFB1分析检测方法的研究报道很多，归纳起来，主要是理化分析法和免疫学分析法。免疫学分析法因具有快速、简单、灵敏、价格低等优点一直是研究热点。　　在AFB1的检测和研究中需要使用AFB1标准品，由于其强致癌性，对操作人员心理上会造成压力。另外，AFB1标准品的生产主要集中在欧美等发达国家，由于严峻的国际反恐形势，各国加强了对AFB1等毒素标准品的出口控制，这在一定程度上制约了AFB1的获得，从而给研究和检测带来诸多不便。根据Jerne的免疫网络学说，抗独特型抗体（anti-idiotypicantibody，Ab2）是针对抗体（Ab1）的独特位产生的抗体，它分为Ab2α、Ab2β、Ab2γ和Ab2δ四种类型。其中Ab2β是针对Ab1上的抗原结合位点产生的抗体，它与抗原在空间构象上存在内影像关系，即它与抗原决定簇在空间结构上是一致的。因此，抗AFB1抗抗体Ab2β型可以替代AFB1标准品用于AFB1的无毒检测分析（无需使用AFB1标准品的分析检测方法）。尽管关于Ab1与Ab2反应的研究和应用已有很多报道，但是关于它们的反应机制与本质仍不是很清楚。　　另外，对于免疫学分析法而言，抗体是其核心试剂。随着分子生物学技术的快速发展，重组抗体，尤其是单链抗体（singlechainFvfragmentantibody，scFv），因其制备过程简单，产量高，易于改造而获得了研究者的广泛关注。关于抗AFB1scFv的研究较多，但研究者多采用噬菌体展示技术筛选scFv基因，并将其在大肠杆菌（Escherichiacoli，***）中表达。　　本课题以兔抗AFB1多克隆抗体（Ab1）为原料，通过酶切法制备Ab1的F(ab’)2片段，免疫BALB/c小鼠，制备了抗AFB1抗抗体Ab2，并以ELISA对其反应特性开展研究。在此基础上，利用圆二色谱仪和荧光光谱仪分析了AFB1、F(ab’)2片段和Ab2三者相互作用，探讨抗原抗体反应机制。同时，以课题组已制备的抗AFB1单克隆抗体细胞株2E6为材料，采用分子生物学技术克隆了其重链可变区（heavychainvariableregion，VH）和轻链可变区（lightchainvariableregion，VL）基因，并以不同VH和VL顺序组装成scFvs，在***21(DE3)中表达，比较不同VH/VL顺序scFv的生物活性和产量区别。研究还将scFv在昆虫Sf9细胞中表达，探讨了不同表达宿主中scFv生物活性的差别。最后通过在scFv基因的C端加一段能与亲水性聚苯乙烯特异性结合的标签PStag，并将其可溶性表达于***21(DE3)中，以此为基础建立了双抗体夹心ELISA检测AFB1的方法。具体研究结果如下：　　1AFB1、F(ab’)2片段和Ab2相互作用的光谱学分析　　采用金黄色葡萄球菌（Staphylococcusaureus）蛋白A（SPA）亲和层析柱法纯化兔抗AFB1多克隆抗体（Ab1），然后将纯化的抗体在pH2.7溶液中酸化处理，经pH4.3的NaAc缓冲液透析后，37℃下以胃蛋白酶酶切4h，最后酶切体系经SPA亲和层析柱、SephadexG150填充柱以及Eppendorf超滤管纯化，获得F(ab’)2片段。以纯化的F(ab’)2片段免疫了3只BALB/c小鼠（编号分别为1-3），制备多克隆抗抗体Ab2。应用间接非竞争ELISA分析各小鼠Ab2产生进程，结果显示，各小鼠均对免疫原F(ab’)2产生明显的免疫反应。以间接竞争ELISA证明了Ab2、AFB1与F(ab’)2片段反应的竞争关系，结果表明AFB1与F(ab’)2片段的结合能力强于Ab2。Ab2的灵敏度为131.8μg/mL，竞争抑制曲线的线性方程为Y=-18.89x+90.06，R2=0.9894，线性范围是1～1000μg/mL。这些结果表明，Ab2与AFB1可能存在镜像关系，可进一步研究其作为AFB1的替代品。　　在此基础上，采用圆二色光谱分析法和荧光光谱分析法研究了Ab2、AFB1与F(ab’)2片段三者相互作用的机理。圆二色光谱分析表明，在AFB1对F(ab’)2片段的作用过程中，随着AFB1的增加，F(a

关键词： 中药制剂   西药   合用   配伍应用  

摘要： 中西医结合中怎样联用中西药增强疗效、避免不良反应,达到合理用药目的是临床药师研究的重要内容[1]。本文就中西药联用时药物的药效和毒性变化进行讨论。

关键词： 玉米   紫外线   黄曲霉毒素B1   呕吐毒素  

摘要： 本实验旨在探索利用高压紫外线在极短时间内处理霉变玉米，对玉米霉菌毒素达到所期望的杀灭率，以实现能在实际生产中应用的效果。试验从饲料厂仓库选取正常玉米60kg，分成四份A、B、C、D，其中B、C、D进行霉变处理，在B霉变程度为20%、C霉变程度为40%、D霉变程度为60%时，分别在A、B、C、D中采样抽取500g标记为A1、B1、C1、D1，然后B、C、D用紫外线灯进行不同时间的照射处理，照射2s的标记为B2、C2、D2，照射7.5s的标记为B3、C3、D3，照射15s的标记为B4、C4、D4，照射30s的标记为B5、C5、D5。分别对A1、B1、C1和D1进行常规营养的测定，包括能量、粗蛋白和粗脂肪的测定，然后进行对比观察前后营养变化量。对B1、B2、B3、B4、B5、C1、C2、C3、C4、C5、D1、D2、D3、D4、D5进行黄曲霉毒素B1和呕吐毒素的测量，观察紫外线的对霉菌毒素的杀灭效果。结果发现霉变情况不同粗蛋白、脂肪和能量均表现为差异性显著，且随霉变程度升高蛋白含量表现为先降低后增加，脂肪一直降低。在30s内随着照射时间的增加，黄曲霉毒素先增加后减少；在30s内随着照射时间的增加，呕吐毒素先减少后增加，最后再减少，其中2s的时候杀毒效果最好。