关键词： 黄曲霉毒素   鸡肝细胞   硒   荧光定量PCR   CYP450 1A5   CYP450 3A37  

摘要： 黄曲霉毒素可由多种曲霉属真菌产生,主要为黄曲霉和寄生曲霉。黄曲霉毒素,尤其是黄曲霉毒素B1(AFB1),是包括人类,鸟类,猪,鱼类和啮齿类动物等许多动物的强力致毒物质。肝脏是AFB1损害最为重要的靶器官,AFB1诱导肝脏细胞损害和其中的DNA、蛋白质及脂质的损伤,并导致癌症发生,由AFB1引起的氧化应激可能是其中一个潜在机制之一。关于硒对于黄曲霉毒素致机体损伤的缓解作用,学界已进行了一些体内实验研究并取得了很多重要成果。但是对于硒对动物黄曲霉毒素中毒的缓解作用及机理仍有待进一步研究。本文在建立了鸡原代肝脏细胞培养方法的基础上,研究了黄曲霉毒素致鸡原代肝细胞的损伤作用,并进一步研究了不同浓度的亚硒酸钠、硒蛋氨酸对黄曲霉毒素损伤细胞的影响,同时从黄曲霉毒素代谢角度对硒缓解中毒细胞损伤的机理进行了探讨。具体研究内容如下:1.建立鸡原代肝脏细胞的培养方法。优化了传统的胶原酶灌注消化法,改良了灌流液配方和成分,使用循环灌流方法,对成年黄羽鸡进行肝细胞分离,用台盼蓝拒染法观察并计算肝细胞总数和实时存活率。使用了 Williams'medium E、DMEM、1640和L-15四种基础培养基进行培养和对比,以5×105个/ml的密度接种于96孔细胞板,在37℃C C02培养箱中进行培养,并观察细胞形态,使用Mtt法测定肝细胞生长曲线。结果显示,每个肝脏获得的肝细胞总量为(9.2±0.2)×108个,以台盼蓝拒染实验得到肝细胞实时存活率为93%±1%;不同的培养基相比较,发现Williams' medium E培养基贴壁情况最好,DMEM和L-15次之,1640略差;在长期培养过程中发现DMEM培养基中细胞稳定周期长,可长期培养2-3周;通过MTT法得到8天内细胞的生长曲线,肝细胞接种48h后趋于稳定,并在72-120h区间内保持良好的细胞活性,适于进行药物代谢及毒性实验。2.探索黄曲霉毒素致鸡原代肝细胞损伤作用及硒对毒素损伤原代肝细胞的影响。分离的肝细胞以5×105个/ml的密度接种于96孔细胞板,48h后用含0、0.01、0.02、0.05、0.1、0.2、0.4、0.8、1.6ug/mlAFB1的培养液换液,培养24h后,分别收集各个组培养液,测定ALT、AST,并用MTT法测定细胞增殖情况。并用MTT法摸索两种硒的安全浓度及硒对毒素损伤细胞活率的影响。结果显示,综合AST、ALT及Mtt结果,0.05μg/ml的毒素浓度作为诱导肝细胞损伤的最佳剂量;Na2Se03浓度达到5μmol/L时,对鸡肝细胞的生长产生了显著的抑制,SeMet则安全许多,当浓度提升至20μmol/L时,才对肝细胞的生长产生显著抑制;1、2μmol/L浓度的Na2Se03和2、4μmol/L浓度的SeMet能够显著提高毒素损伤细胞活率。3.研究了 Na2Se03及SeMet对AFB1致损伤鸡肝细胞氧化还原指标的影响。细胞以5×105cell/ml接种于6孔细胞培养板,培养48h后,使用含0、0.5、1、2、4μmol/L Na2Se03或SeMet的培养液换液,培养24h后,换含0.05 ug/ml AFB1的培养液,培养24h,收取细胞,测定胞内SOD、GSH、MDA水平。结果显示,0.5、1μmol/L的Na2Se03能够显著提高毒素损伤肝细胞的SOD水平,2、4mol/L的Na2Se03对毒素损伤细胞的SOD水平并无显著影响。而0.5、1、2、4 μmol/L的SeMet均对毒素损伤细胞的SOD水平有显著的升高作用;无论Na2Se03还是SeMet,与对照组相比较,也能引起细胞内GSH水平的下降。两种硒预处理的AFB1损伤组的GSH同AFB1损伤组亦有显著下降;单独加入Na2Se03,细胞内MDA含量并无显著变化。加入AFB1后,Na2Se03预处理的细胞内MDA含量与毒素对照组比较,除1μmol/L浓度组外也没有显著差异。而对于SeMet预处理的毒素组,其MDA含量在SeMet浓度为2μmol/L和4μmol/L时,与毒素对照组相比,MDA含量显著下降。4.对不同硒源对AFB1诱导的鸡肝细胞损伤的缓解作用机理进行了探讨。同氧化还原指标测定相同设计和分组,采用荧光定量PCR检测CYP450 1A5和CYP450 3A37 mRNA的表达。Western blot检测SeMet对肝细胞及毒素损伤肝细胞中CYP450 1A5蛋白表达水平的影响。结果显示,加入不同浓度的硒均能使CYP450 1A5mRNA水平下降,且SeMet下调效果更稳定,而对于CYP450 3A37 mRNA的表达,硒无明显影响;各个浓度的SeMet均能引起肝细胞内CYP450 1A5蛋白表达的下降,SeMet对毒素损伤细胞内CYP450 1A5蛋白表达也具有显著下调作用,其中,2μmol/L

关键词： 中药制剂   安全   有效   方便  

摘要： 当前,中医药发展正处于良好的战略机遇期,如何让中药制剂安全、方便、有效是从事中医药专业人士需要研讨的课题。本文就如何让中药制剂达到安全、有效、方便服用的效果,有如下体会。

关键词： 中药制剂   美容   应用  

摘要： 中药制剂不仅是使用药物存在的必要载体,同时也是药物进入体内吸收,转运,发挥药效的唯一载体.选择适宜的剂型,不仅可以充分提取药物的有效成分,合理利用药物成分的多效性,提高药效,而且还能改善药剂质量,便于使用,携带,使其发挥更好的社会效益和经济效益.因此,美容中药剂型的应用对美容中药的发展显得尤为重要.现代美容中药的制剂既突出传统美容制剂的特色,又具有现代美容佳品的特点.目前美容中药制剂在种类上已相当丰富,大体可分为内服和外用两种剂型.

关键词： 帕金森病   抗震胶囊   中药制剂   临床疗效   安全性  

摘要： 目的:通过评价中药制剂—抗震胶囊治疗帕金森病的临床疗效和安全性，探讨中药治疗帕金森病的疗效和优势，为帕金森病治疗提供更有效的药物。　　方法:本研究为随机对照双盲试验，使用CHISS统计学软件随机分配系统将符合纳入标准的并知情同意的患者60例分为治疗组30例，给于口服抗震胶囊+美多芭片，对照组30例口服美多芭片+安慰剂胶囊，疗程3个月。各组由经过专门量表培训的神经内科医师分别在治疗前和治疗后采用统一帕金森病评定量表(UPDRS)Ⅱ、Ⅲ部分、便秘患者生存质量量表、中医症候评分量表进行评分，分别记录并严格按照要求对治疗前后日常生活能力、运动功能、便秘状况改善、中医症候等情况进行评价.结果采用sas9.2统计软件进行分析。各组结果以均值±标准差（(x)±s）表示，正态性检验应用Shapiro-Wilk法，方差齐性分析用Levene检验，组内及组间均数组间比较用t检验;以α=0.05为检验水准。　　结果:治疗组及对照组病例均顺利完成，无脱失。治疗前两组病例的一般资料包括年龄、性别、病程、美多芭用量、Hoehn&Yahr分级比较，在分组上差异均无显著性意义(P＞0.05)，具有可比性。　　经该方案治疗后，对照组与治疗前日常生活活动能力、运动功能比较差异无统计学意义(P＞0.05)，治疗组较治疗前评分改善，提示患者日常生活活动能力、运动功能治疗后得到改善，差异有统计学意义(P＜0.05)。治疗后两组组间比较，治疗组较对照组更能改善患者日常生活活动能力和运动功能，差异具有统计学意义(P＜0.05)。　　在便秘状况方面，与治疗前比较，对照组治疗后差异无统计学意义(P＞0.05），治疗组较治疗前评分改善，提示治疗后帕金森病便秘生活状况有所改善，差异有统计学意义(P＜0.05)。两组治疗前后评分差值组间比较，治疗组较对照组更能改善患者便秘生活状况，差异具有统计学意义(P＜0.05)。　　在中医症候改善方面:　　与治疗前比较，对照组治疗后各项中医症候评分在肢体颤振、言语蹇涩方面有改善，差异有统计学意义(P＜0.05);但在肢体拘痉、颈肩僵直、肢体少动、表情呆板、活动笨拙、智力减退、口角流涎方面无改善(P＞0.05)。　　治疗组治疗后中医症候评分在肢体颤振、肢体拘痉、言语蹇涩、表情呆板、活动笨拙、智力减退、口角流涎方面有改善，差异有统计学意义(P＜0.05)，但在颈肩僵直、肢体少动方面比较差异无统计学意义(P＞0.05)。　　两组治疗前后中医症候评分差值组间比较，治疗组较对照组更能改善肢体颤振、肢体拘痉、言语蹇涩、表情呆板、活动笨拙、口角流涎的症候评分，差异有统计学意义（P＜0.05或P＜0.01）。　　结论:　　(1)具有熄风止痉、柔肝止痛、化湿解困作用的抗震胶囊治疗帕金森病有一定的临床疗效。(2)抗震胶囊与美多芭联用在改善帕金森病患者的运动功能、便秘状况、日常生活能力、中医症候方面优于单用西药。(3)治疗前后患者检测三大常规、肝、肾功能、凝血功能、心电图，均未见异常改变，未发生不良反应。

关键词： 技能培训   “三位一体”教学法   实训教学模式  

摘要： "三位一体"教学法是指"三位:教、学、做"和"一体:一体化教学相结合"的教学方法。将该教学法应用于中药制剂技术实训教学,可对学生进行全方位的技能培训,全面提高学生的动手操作能力,并全程对学生进行药品质量及药厂生产规范的培养。

关键词： 湖南省教育厅   产学研合作   产学研一体化   制药工程   中药制剂   示范基地   质量  

摘要： 为进一步促进湖南省高校服务地方经济社会发展,加快构建产学研相结合的技术创新体系,湖南省教育厅启动了省内高校与地方企业合作组建产学研合作示范基地项目,以带动省内高校加强与地方企业的产学研合作,推进企业的技术创新。"中药制剂工程与质量控制"湖南省高校产学研合作示范基地,由怀化学院牵头联合湖南正清制药集团共同组建,于2010年申请获批立项建设。2014年1月通过湖南省教育厅组织的专家组验收。基地通过三年的建设,已初具规模,聚集起一批制药工程、化学、药学等学科领域中的专门人才,现有专兼职科技人员40人,其中正高13人,副高13人,博士18人。

关键词： AFB1   AFM1   季节性   瘤胃发酵   霉菌毒素吸附剂   奶牛   抗氧化能力   转化率   生产性能  

摘要： 针对当前奶牛养殖过程中奶牛采食黄曲霉毒素B1(Aflatoxin ***1)污染饲料带来的牛奶和奶制品黄曲霉毒素M1(Aflatoxin Ml, AFM1)的污染问题,本文研究了日粮中AFB1到牛奶的转化率、牛奶中AFM1的清除规律,以及AFBl对奶牛生产性能和健康的影响。同时,评价了吸附剂Solis Mos (SM)的添加效果。具体研究内容与获得的结果如下。 1、长三角地区奶牛场日粮中AFB1和原料奶AFM1的季节性变化(试验一) 本试验调研了长三角地区18家奶牛场全混合日粮(Total Mixed Ration, TMR)中AFB1和原料奶AFM1在4个季节的发生率和污染程度。每个季节收集15份TMR样本,4个季节共采集60份TMR样本;而每个季节从奶缸中采集18份混合牛奶样,4个季节共采集72份原料奶样。TMR中AFB1测定应用HPLC-FLD方法(检出限为0.3μg/kg),牛奶AFM1测定应用LC-MS/MS方法(检出限为0.01μg/L)。应用SAS9.2(SAS Institute Inc., Cary, NC)单因素方差分析程序检验4个季节的TMR AFB1和牛奶AFM1的浓度差异。AFB1在28份TMR样本(46.7%)中被检出,AFB1浓度范围0.332-4.040ug/kg。冬季TMR中AFB1浓度显著高于春季和秋季(P<0.05),但与夏季没有显著差别。总共72份奶样中有43份牛奶样检测出AFM1(59.7%),其浓度范围为0.01-0.42μg/L。冬季原料奶中AFM1浓度(0.123μg/L)显著高于其他季节,春季(0.029μg/L)、夏季(0.032μg/L)与秋季(0.032μg/L)牛奶样AFM1浓度差异不显著(P>0.05)。本试验结果显示,TMR中AFB1以及牛奶中AFM1的污染呈现季节性差异,冬季和夏季饲料易致AFB1污染,而冬季牛奶污染AFM1风险最高,因此对牧场饲料和牛奶的AFs管理中需要考虑季节性因素。 2.日粮AFB1向牛奶的转化以及日粮中添加SM的效果(试验二) 本研究的目的是研究日粮AFB1到乳AFM1的转化率和乳中AFM1的清除规律,并评价SM对摄入不同剂量AFB1的奶牛乳中AFM1、奶牛血液生化指标和瘤胃发酵参数的影响。选择24头泌乳后期经产荷斯坦奶牛(泌乳天数271±29d;奶产量21.6±3.1kg/d),随机分为3组,每组8头。3组奶牛被安排进行3个小试,每个小试含2个处理,每个处理4头牛,采用交叉试验设计。小试1、2、3中奶牛分别采食含AFB1含量为0、20、40μg/***的日粮,每个小试中,奶牛接受对照组或添加0.25%的SM处理组。每个小试分为两个连续的时期,每期含有4d预试期(d1-4)、7d AFB1饲喂期(d5-11)和5d清除期(d12-16)。完成第一期试验后,将对照组和处理组对换,进入第二期试验。在每期试验第1、2和10-14d,采集TMR和牛奶样本;d1、11和14的晨饲前,通过尾静脉采集10mL血液至肝素管;d1和11晨饲后2h,通过口腔瘤胃导管采集50mL瘤胃液。结果发现,采食基础日粮奶牛乳中AFM1的本底水平是0.003gg/L;采食含20μg/kg AFB1日粮的奶牛乳中AFM1均值为0.105μg/L,日粮AFB1到牛奶的转化率为0.56%;采食含40μg/kg AFB1日粮的奶牛乳中AFM1均值为0.209μg/L,日粮AFB1到牛奶的转化率为0.59%。当奶牛停止采食AFB1污染日粮3d后,乳中AFM1即可清除。添加SM到含20μg/kg AFB1的日粮中能够显著减少奶中AFM1浓度(0.105vs.0.088μg/L, P<0.05),降低AFB1向牛奶中的转化率(0.56vs.0.46%,P<0.05);但在含40μg/kg AFB1日粮中添加SM并不能降低牛奶中AFM1浓度。在基础日粮中添加SM能够增加总挥发性脂肪酸(VFA)浓度(99.6vs.94.2mM, P<0.05)、微生物蛋白(MCP)含量(3.3vs.2.9mg/mL, P<0.05)以及羧甲基纤维素酶(CMCase)活性(0.34vs.0.26U, P<0.05);在含20μg/kgAFB1日粮中添加SM能增加总VFA浓度(99.8vs.93.4mM, P<0.05), MCP含量(3.2vs.2.7mg/mL, P<0.05)以及CMCase活性(0.28vs.0.22U, P=0.07);但是,在含40μg/kg AFB1日粮中添加SM并未改变瘤胃发酵参数。无论是在基础日粮,还是在AFB1污染日粮中添加0.25%的SM,均不影响奶牛泌乳性能、肝功能和体液免疫,但可降低机体氧化应激。 本试验结果表明,日粮中AFB1转化为乳AFM1的比率为0.46

关键词： 黄曲霉毒素B1   人工抗原   抗体   胶体金   试纸条  

摘要： 黄曲霉毒素B1广泛存在于粮食作物和饲料中，是迄今为止发现的最强的致癌物质之一，其毒性要远远高于氰化物、有机农药等，严重威胁了人类和动物的生命安全。目前黄曲霉毒素B1检测方法大多依靠液相色谱等昂贵的仪器来进行，不利于现场检测，而且需要专业的检测人员来操作仪器，花费时间久且检测费用高。因此，研究出适合现场检测且时间短、费用低的检测方法具有重要的意义。 黄曲霉毒素B1属于小分子化学物，不能采用直接免疫动物的方法来获取多克隆抗体。抗原合成首先利用羧甲基羟胺半盐酸盐进行黄曲霉毒素B1的改造，使其在碳三位置连接上羧基。2mg AFB1于2mL吡啶甲醇（V/V1:3）溶液中直接在室温下进行反应，生成肟化物AFB1-O，利用薄层层析、紫外扫描和质谱进行AFB1-O的鉴定，得到其紫外吸收峰为209、220、264、360nm，AFB1的利用率为85.7%。AFB1-O在EDC或者DCC的作用下与牛血清白蛋白、鸡蛋清白蛋白进行偶联，得到免疫原AFB1-O-BSA和包被原AFB1-O-OVA。 利用免疫原AFB1-O-BSA免疫小鼠，得到多抗血清，利用辛酸-硫酸铵盐析及透析法进行纯化，纯化后血清经过SDS-PAGE电泳显示为2条带。采用间接ELISA方法测定血清效价，6只小鼠的效价均在6000以上，其中3号小鼠的效价为10000以上，抗体浓度为1.37mg/mL，IC-ELISA标准曲线为y=-43.50x+99.37(R2=0.988)，IC50为12.59ng/mL。 以柠檬酸钠还原氯金酸来制备胶体金。以反应时间、反应pH、转速进行50mL0.01%氯金酸中加入1%柠檬酸钠2mL进行正交实验，得出最优反应条件为不加入酸碱物质，转速为100r/min，沸腾后反应10min条件下制备出来的胶体金良好，电镜下观察粒子平均直径为14.6nm，紫外吸收峰为518.5nm。通过计算得到粒子浓度为6.8×1010个/cm3，摩尔浓度为1.13×10-10mol/L，每个胶体金粒子中含有9.64×105个金原子，其胶体金临界絮凝浓度为0.8g/mL。 试纸条主要由样品垫、金标垫、NC膜和吸水纸等组成。利用目测法和光电比色法确定了最适抗体标记量和最适pH，稳定1mL胶体金最适抗体稳定量为55.2μg，1mL胶体金中加入12μL浓度为0.1mol/L碳酸钾时为最适pH。制备好的金标探针进行可见光扫描，其吸收峰为528.5nm。采用浸金法制备金标垫，检测线划上浓度为1mg/mLAFB1-O-OVA，质控线划上浓度为1.2mg/mL羊抗鼠二抗。组装试纸条后经过测定，得到组装后的试纸条的灵敏度为150ng/mL。

关键词： 降糖重要制剂   高校液相色谱法(HPLC)   化学药品  

摘要： 目的：对同时检测降糖类中药制剂中盐酸二甲双胍等6种化学药品的高校液相色谱法（HPLC）进行探究。方法色谱柱采用Hypersil BDS C18，其规格为（200mm ×4．6mm，5um）；取1．4ml三乙胺加入到0．5g的庚烷磺酸钠中，加水定容至1000ml，再用磷酸调节PH至3．5±0．05配成离子对试液；再以甲醇为流动相进行梯度洗脱，流速控制为1．0ml/min；检测波长为233nm。结果降糖类中药制剂中的6种化学药品分离良好，且在一定的进样量范围内呈现良好的现行。结论本实验采用的HPLC简便快速，能够对6种不同的化学药品进行定量及定性的分析，因而，可作为降糖中药制剂中是否添加化学药品的鉴定方法。

关键词： 表面活性剂   中药制剂   应用  

摘要： 目前,表面活性剂在中药制剂中的作用主要为润湿、乳化和增溶.在中药的各种剂型中如口服液、注射液、滴丸、气雾剂、膏剂、滴眼剂等,表面活性剂都有应用.本文主要对近五年来表面活性剂在中药制剂中的应用进展进行汇总分析综述.