关键词： 表面活性剂   中药制剂   应用  

摘要： 目前,表面活性剂在中药制剂中的作用主要为润湿、乳化和增溶.在中药的各种剂型中如口服液、注射液、滴丸、气雾剂、膏剂、滴眼剂等,表面活性剂都有应用.本文主要对近五年来表面活性剂在中药制剂中的应用进展进行汇总分析综述.

关键词： 医院   中药制剂   质量   因素  

摘要： 随着我国医疗改革事业的不断发展，对医院中药制剂的质量控制上提出了更高的要求，医院必须加推进医院中药制剂的质量，使得中药质量向标准化、科学化、信息化、规范化的方向发展，从而使医院中药制剂能有效保证临床用药的安全性。。本文分析了影响医院中药制剂质量的因素，探讨如何提高中药制剂的质量的有效措施。

关键词： 黄曲霉毒素B1   伏马菌素B1   HepG2细胞   联合毒性   细胞凋亡  

摘要： 黄曲霉毒素、伏马菌素是谷物中常见的两种真菌毒素，其中，黄曲霉毒素B1（AFB1）是由黄曲霉菌与寄生曲霉菌产生的一类次级代谢产物，被认为是当前已知毒性最强的真菌毒素，能够通过DNA损伤而引起突变，并能导致诱发性肝癌;伏马菌素B1（FB1）为伏马菌素的主要组分，具有肝毒性和肾脏损害作用，同时与人类食道癌的发病率具有一定的关系。鉴于两种毒素经常共存于各种谷物及其制品中，且靶细胞都是肝细胞，本实验采用人肝癌细胞HepG2为对象，研究了AFB1与FB1的联合毒性，探讨了两种毒素单独与混合作用于HepG2时的凋亡途径。为深入研究多种真菌毒素共存时对总体毒性的影响及其联合作用机制提供基础，并为危险性的评价提供参考。主要研究结果如下： 以处在对数生长期的HepG2细胞为研究对象，采用不同浓度梯度的AFB1（0.1、10、50、100μmol/L）和FB1（0.1、7、14、70μmol/L）进行单独或者混合处理，通过测量细胞活性、ATP含量、DNA受损程度、线粒体膜通透性以及活性氧含量的变化，分析这两种毒素对HepG2细胞联合作用的类型。结果显示，在SRB实验中，混合毒素对于HepG2细胞抑制率的理论加和值与实际测量值的比值大都接近于1，其他四个指标的理论加和值与实际值相比，无显著性差异（p＞0.05），且两种毒素对细胞的混合毒效应均高于单独作用组。故得到结论，黄曲霉毒素B1和伏马菌素B1对人肝癌HepG2细胞的联合毒性作用为加和作用。 选取AFB1、FB1及AFB1+FB1三个毒素组中对HepG2抑制率分别达到10%、30%、50%时对应的浓度，与细胞作用48h后，观察HepG2细胞核形态、凋亡率、周期分布及线粒体膜电位的改变。结果显示，与AFB1及FB1各浓度组毒素反应48h后，共聚焦显微镜观察到， HepG2细胞核出现碎块状致密浓染或半月形凝聚等凋亡现象;在细胞凋亡率的测定中，AFB1、FB1混合及单独组均能引起HepG2不同程度的凋亡，与对照组相比均存在极显著性差异（p＜0.01），且各组的凋亡率与毒素呈现出浓度依赖关系;细胞周期测定结果表明，FB1主要影响G0/G1期，AFB1及AFB1+FB1主要影响S期;JC-1测量线粒体膜电位的结果显示，在两毒素单独及混合作用于HepG2细胞48h后，细胞内线粒体膜电位与对照组相比都出现不同程度的降低，且同一组中，膜电位下降的程度随着毒素浓度的增加而增大。经独立样本T检验分析，三个毒素组导致的细胞凋亡率及线粒体膜电位的下降程度均无显著性差异（p＞0.05），进一步验证了两种毒素的联合作用为加和作用。 采用免疫组化法测定了caspase-3、caspase-8、caspase-9、bcl-2、bcl-x及p53等细胞凋亡相关蛋白的表达，并分析了三组毒素导致HepG2凋亡的分子机理，结果显示，AFB1、FB1及AFB1+FB1均是在p53蛋白的调控下，一方面利用死亡受体激活凋亡启动子caspase-8和执行子caspases进入凋亡程序;另一方面，毒素刺激会导致HepG2细胞内促凋亡蛋白Bax表达增加，抗凋亡蛋白Bcl-2表达下降，线粒体膜电位下降，释放细胞色素C并活化启动子caspase-9及执行子，最终通过蛋白酶水解而使细胞崩溃。

关键词： 中药制剂   牛贝消核   免疫   一般药理学   急性毒性反应  

摘要： 目的： 了解抗结核中药制剂牛贝消核水提取物(3号)及乙醇提取物(4号)的免疫学、一般药理学作用及其安全性,为其制备成中成药制剂提供可靠的实验基础。 方法： (1)牛贝消核的免疫学研究：①牛贝消核水提取物及乙醇提取物对正常小鼠免疫学作用的研究：将BALB/c小鼠64只随机分为空白组、微卡菌苗组、牛贝消核3号低剂量组、牛贝消核3号中剂量组、牛贝消核3号高剂量组、牛贝消核4号低剂量组、牛贝消核4号中剂量组、牛贝消核4号高剂量组。按上述分组以蒸馏水、牛贝消核3号药物及牛贝消核4号药物连续灌胃小鼠6周,其中微卡菌苗组每2周1次肌肉注射微卡,空白组每2周1次肌肉注射生理盐水,共注射3次。实验结束后,摘眼球采血并取小鼠脾脏,通过流式细胞术检测正常小鼠全血中CD3+、CD4+、CD8+T淋巴细胞比例及细胞因子IL-4、IL-6、IFN-γ. TNF-α、IL-17A、IL-10水平,评估小鼠脾脏指数及胸腺指数,通过MTT的方法测定小鼠脾淋巴细胞增殖反应,应用ELISA方法检测脾淋巴细胞培养上清中细胞因子IFN-γ、IL-4的水平,评价牛贝消核对正常小鼠免疫功能的影响。②牛贝消核水提取物及乙醇提取物对小鼠腹腔巨噬细胞的影响：将56只BALB/c小鼠随机分为空白组、牛贝消核3号低剂量组、牛贝消核3号中剂量组、牛贝消核3号高剂量组、牛贝消核4号低剂量组、牛贝消核4号中剂量组、牛贝消核4号高剂量组,按上述分组用蒸馏水、牛贝消核3号药物及牛贝消核4号药物给小鼠连续灌胃4周后,杀鼠收集腹腔巨噬细胞,以EIISA法检测巨噬细胞培养上清中IL-1β、TNF-α、IL-6水平；通过PCR方法检测巨噬细胞吞噬卡介菌的能力,从而评估牛贝消核对小鼠腹腔巨噬细胞功能的影响。(2)牛贝消核水提取物及乙醇提取物的一般药理学研究：①牛贝消核水提取物及乙醇提取物对小鼠神经系统的影响：将KM小鼠随机分为空白组、牛贝消核3号低剂量组、牛贝消核3号中剂量组、牛贝消核3号高剂量组、牛贝消核4号低剂量组、牛贝消核4号中剂量组、牛贝消核4号高剂量组,按上述分组用牛贝消核3号药物及牛贝消核4号药物给小鼠连续灌胃7天,最后1次灌胃后30min,分别通过对小鼠一般行为、翻正反射、睡眠时间、镇痛等神经系统的表现观察,从而评价牛贝消核水提取物及乙醇提取物对小鼠神经系统的影响；②牛贝消核水提取物及乙醇提取物对小鼠肝功能的影响：将KM小鼠随机分为空白组、牛贝消核3号低剂量组、牛贝消核3号中剂量组、牛贝消核3号高剂量组、牛贝消核4号低剂量组、牛贝消核4号中剂量组、牛贝消核4号高剂量组,按上述分组用牛贝消核3号药物及牛贝消核4号药物给小鼠连续灌胃7天,最后1次灌胃前,小鼠禁食不禁水8h,最后1次灌胃后30min,摘除眼球法采血,于3000rpm离心5min分离血清,检测小鼠血清中谷丙转氨酶、谷草转氨酶、总胆红素、直接胆红素、总蛋白、白蛋白、碱性磷酸酶和谷氨酰基转移酶的水平,了解肝功能；③牛贝消核水提取物及乙醇提取物对小鼠肾功能的影响：将KM小鼠随机分为空白组、牛贝消核3号低剂量组、牛贝消核3号中剂量组、牛贝消核3号高剂量组、牛贝消核4号低剂量组、牛贝消核4号中剂量组、牛贝消核4号高剂量组,按上述分组用牛贝消核3号药物及牛贝消核4号药物给小鼠连续灌胃7天,最后1次灌胃后,将小鼠置于代谢笼,收集灌胃给药后240min内的尿液,记录尿液容量,进行尿钠、钾分析,然后用摘除眼球法采血,于3000rpm离心5min分离血清,检测血清中肌酐和尿素氮的水平,分析尿钠、钾,了解肾功能；从而评价牛贝消核水提取物及乙醇提取物对小鼠肾功能的影响。(3)牛贝消核的急性毒性试验研究：将KM小鼠随机分为空白组、牛贝消核3号5倍剂量组、牛贝消核3号10倍剂量组、牛贝消核3号20倍剂量组、牛贝消核4号5倍剂量组、牛贝消核4号10倍剂量组、牛贝消核4号20倍剂量组,以牛贝消核的5倍、10倍、20倍临床剂量灌胃小鼠,给药后连续观察14天,通过观察小鼠体重及一般行为的变化,对心、肝、脾、肺、肾形态学变化及其脏器指数的评估,研究牛贝消核的急性毒性。 结果： (1)牛贝消核的免疫学研究：①牛贝消核水提取物及乙醇提取物对正常小鼠的免疫学作用：各组小鼠脾脏器指数与胸腺脏器指数,与空白组比较无显著性差异(P>0.05)；各组小鼠脾淋巴细胞经PHA. BCG刺激培养48小时后,各药物组小鼠脾淋巴细胞增殖指数与空白对照组比较均无显著性差异；各组小鼠脾淋巴细胞经PHA刺激培养72小时后,各药物组与空白对照组比较脾淋巴细胞培养上清中IFN-γ、IL-4水平均无统计学差异；各药物组与空白对照组比较全血中CD3+、CD4+、CD8+T淋巴细胞百分比及细胞因子IL-4、IL-6、IFN-γ、TNF-α、IL-17A. IL-10均无统计学

关键词： H3N2   猪流感   中药制剂   筛选  

摘要： 猪流感是由猪流感病毒引起的一种能够严重影响养猪业的呼吸系统疾病，目前，猪流感的分布涉及亚洲、美洲、欧洲和非洲，已成为规模化猪场的常发性传染病。研究表明：猪是人、禽和猪流感病毒通过基因重排，产生新的亚型流感病毒的“混合器”。故猪流感的研究具有深远而特别重要的公共卫生意义。使用疫苗或西药防治猪流感具有很大的局限性，中国的中草药具有资源丰富、有害残留少、毒副作用较小以及不易被病毒产生耐药性的优点，其在疫病防治中备受关注。 本试验目的为研究筛选具有抗猪流感病毒的中药，并初步比较部分中药不同制剂的抗病毒效果，以期为全面合理使用中药提供指导。选取金银花、山银花、板蓝根、苍术等9味原料中药，根据药性等采用水煎法、水煮醇沉法以及超临界CO2萃取法制备成10味中药制剂，以猪流感病毒为作用对象，利用MDCK细胞筛选模型，应用MTT法对先接病毒后加药物、先加药物后接病毒，病毒和药物作用2h后同时加入三种方式测定了苍术等中药和它们的不同制剂的体外抗H3N2型猪流感病毒的效果。 研究结果表明：除苍术油外，其他中药制剂的安全作用范围在0.1～1.95mg/mL，其中苍术红枣水煎液的安全浓度（TC0）最大为1.95mg/mL;苍术油的最小为0.77μg/mL。中药的半数毒性浓度（TC50）差别较大，最大的为苍术水煎28.66mg/mL，最小的为苍术油0.022mg/mL。药物的抗病毒效果结果表明：各药物均有一定的抗病毒作用，其中山根水煎液、青蒿艾叶水煎液和苦参水煎液的综合抗病毒效果较好，对病毒既有抑制、阻断作用，还有一定的直接灭活作用。

关键词： 稻米   深加工   黄曲霉毒素B1   消减技术  

摘要： 稻米在生产、收获、储藏、加工和销售的过程中，常因管理不善而造成黄曲霉和寄生曲霉等霉菌的生长繁殖，导致黄曲霉毒素（AFs）污染稻米。因此，在加工过程中，有效消减AFs将有助于稻米资源的有效利用。本论文以受黄曲霉毒素B1（AFB1）污染的稻米为原料，在研究提取蛋白的传统碱法和制备淀粉糖的喷射液化法对AFB1消减效果的基础上，重点研究了传统碱法制备米蛋白和喷射液化法制备淀粉糖的工艺改进对AFB1的消减效果，分析了AFB1的微波辅助碱法降解产物结构，并通过细胞毒理实验对米蛋白的安全性进行了评估，最后对米蛋白、淀粉糖的品质以及米蛋白结构变化进行了考察，以确保改进后的工艺有效、安全、可行。 以米蛋白的回收率和纯度为指标，优化传统碱法提取蛋白的工艺，得到最佳工艺条件为NaOH浓度0.06mol/L、料液比1:8和搅拌时间60min。在此条件下米蛋白的回收率76.83%，纯度94.55%，米淀粉的回收率92.32%，纯度95.81%;传统碱法工艺能部分消减AFB1，当稻米原料的AFB1初始浓度为100μg/kg时，蛋白产品中AFB1残留量为33.91μg/kg，淀粉产品中AFB1残留量为3.47μg/kg;微波辅助处理显著影响蛋白中AFB1的消减效果，单位体积微波功率的增加和微波处理时间的延长均能有效提高AFB1的降解率，单位体积微波功率750W/L处理7min，AFB1降解率88.51%，米蛋白中AFB1残留量7.33μg/kg，符合国标（≤10μg/kg）;微波辅助碱法降解AFB1符合一级动力学特征，且AFB1初始浓度对降解速率常数k的影响不显著，根据回归方程计算出的微波处理理论最短时间t≤10μg/kg随着AFB1初始浓度的增大（20~100μg/kg）而延长（0.2~8.6min）。 研究喷射液化法制备淀粉糖过程中吸附剂对AFB1吸附率的影响。结果表明，喷射液化法能够部分消减AFB1，需要采用脱毒活性炭的稻米原料的AFB1污染临界点为17.0μg/kg;筛选出对AFB1具有高吸附性能的活性炭ACJ1，其吸附AFB1的最佳条件为pH4.0、温度45℃、时间60min;ACJ1对AFB1的吸附符合Langmuir模型，回归方程为y=（0.00114x1.913）/（1+0.000676x1.913），R2=0.978，通过该方程可计算出不同AFB1初始浓度时ACJ1的理论最小添加量;经验证，采用ACJ1理论最小添加量，能有效消减淀粉糖中的AFB1，使其符合国标。 采用UPLC Q-TOF MS检测与MassLynx V4.1分析，得到微波辅助碱法降解AFB1后降解产物的分子结构及其参数信息，表明AFB1降解产物的毒性结构二氢呋喃环双键被破坏，根据分子结构-毒性理论（QSAR），初步推断AFB1降解产物毒性较AFB1有所降低。此外，采用HepG2人肝癌细胞评估了微波辅助碱法制备米蛋白的体外毒性，表明随着AFB1浓度增大和给药时间延长，AFB1对HepG2细胞的毒害作用增强，可降低细胞存活率，减少ROS、ATP及DNA含量和P53蛋白表达量;与对照组相比，微波辅助碱法制备米蛋白的细胞毒性显著降低。 微波辅助处理对米蛋白回收率及纯度的影响不大，但是对其品质及结构的影响显著。随着微波处理时间的延长，米蛋白的溶解性、起泡性、持油性和体外消化性显著提高，乳化性先提高后下降，而持水性呈下降趋势;总巯基、二硫键含量增多，表面疏水性显著性增强，自由巯基含量减少，表明微波辅助处理可能首先诱导部分米蛋白发生聚集形成可溶性大分子聚集体，但随着微波处理时间的进一步延长，米蛋白聚集体发生解聚形成小分子蛋白。此外，采用脱毒活性炭脱毒处理对淀粉糖的品质未造成明显的改变。

关键词： 黄曲霉毒素B1   抗独特型抗体   单链抗体   蛋白表达  

摘要： 真菌毒素（mycotoxins）是真菌在生长繁殖过程中产生的有毒次生代谢产物。其中，黄曲霉毒素B1（aflatoxinB1，AFB1）是公认的毒性最大的真菌毒素。它主要由产毒黄曲霉（Aspergillusflavus），寄生曲霉（***）以及集峰曲霉（***）产生。AFB1毒性强，危害大，可以在采收、贮藏、运输和销售等环节污染农产品，而且在现有生产力水平下要完全杜绝污染是不可能的，因此进行农产品、食品和饲料中AFB1检测与分析技术的研究是非常重要和必要的。　　关于AFB1分析检测方法的研究报道很多，归纳起来，主要是理化分析法和免疫学分析法。免疫学分析法因具有快速、简单、灵敏、价格低等优点一直是研究热点。　　在AFB1的检测和研究中需要使用AFB1标准品，由于其强致癌性，对操作人员心理上会造成压力。另外，AFB1标准品的生产主要集中在欧美等发达国家，由于严峻的国际反恐形势，各国加强了对AFB1等毒素标准品的出口控制，这在一定程度上制约了AFB1的获得，从而给研究和检测带来诸多不便。根据Jerne的免疫网络学说，抗独特型抗体（anti-idiotypicantibody，Ab2）是针对抗体（Ab1）的独特位产生的抗体，它分为Ab2α、Ab2β、Ab2γ和Ab2δ四种类型。其中Ab2β是针对Ab1上的抗原结合位点产生的抗体，它与抗原在空间构象上存在内影像关系，即它与抗原决定簇在空间结构上是一致的。因此，抗AFB1抗抗体Ab2β型可以替代AFB1标准品用于AFB1的无毒检测分析（无需使用AFB1标准品的分析检测方法）。尽管关于Ab1与Ab2反应的研究和应用已有很多报道，但是关于它们的反应机制与本质仍不是很清楚。　　另外，对于免疫学分析法而言，抗体是其核心试剂。随着分子生物学技术的快速发展，重组抗体，尤其是单链抗体（singlechainFvfragmentantibody，scFv），因其制备过程简单，产量高，易于改造而获得了研究者的广泛关注。关于抗AFB1scFv的研究较多，但研究者多采用噬菌体展示技术筛选scFv基因，并将其在大肠杆菌（Escherichiacoli，***）中表达。　　本课题以兔抗AFB1多克隆抗体（Ab1）为原料，通过酶切法制备Ab1的F(ab’)2片段，免疫BALB/c小鼠，制备了抗AFB1抗抗体Ab2，并以ELISA对其反应特性开展研究。在此基础上，利用圆二色谱仪和荧光光谱仪分析了AFB1、F(ab’)2片段和Ab2三者相互作用，探讨抗原抗体反应机制。同时，以课题组已制备的抗AFB1单克隆抗体细胞株2E6为材料，采用分子生物学技术克隆了其重链可变区（heavychainvariableregion，VH）和轻链可变区（lightchainvariableregion，VL）基因，并以不同VH和VL顺序组装成scFvs，在***21(DE3)中表达，比较不同VH/VL顺序scFv的生物活性和产量区别。研究还将scFv在昆虫Sf9细胞中表达，探讨了不同表达宿主中scFv生物活性的差别。最后通过在scFv基因的C端加一段能与亲水性聚苯乙烯特异性结合的标签PStag，并将其可溶性表达于***21(DE3)中，以此为基础建立了双抗体夹心ELISA检测AFB1的方法。具体研究结果如下：　　1AFB1、F(ab’)2片段和Ab2相互作用的光谱学分析　　采用金黄色葡萄球菌（Staphylococcusaureus）蛋白A（SPA）亲和层析柱法纯化兔抗AFB1多克隆抗体（Ab1），然后将纯化的抗体在pH2.7溶液中酸化处理，经pH4.3的NaAc缓冲液透析后，37℃下以胃蛋白酶酶切4h，最后酶切体系经SPA亲和层析柱、SephadexG150填充柱以及Eppendorf超滤管纯化，获得F(ab’)2片段。以纯化的F(ab’)2片段免疫了3只BALB/c小鼠（编号分别为1-3），制备多克隆抗抗体Ab2。应用间接非竞争ELISA分析各小鼠Ab2产生进程，结果显示，各小鼠均对免疫原F(ab’)2产生明显的免疫反应。以间接竞争ELISA证明了Ab2、AFB1与F(ab’)2片段反应的竞争关系，结果表明AFB1与F(ab’)2片段的结合能力强于Ab2。Ab2的灵敏度为131.8μg/mL，竞争抑制曲线的线性方程为Y=-18.89x+90.06，R2=0.9894，线性范围是1～1000μg/mL。这些结果表明，Ab2与AFB1可能存在镜像关系，可进一步研究其作为AFB1的替代品。　　在此基础上，采用圆二色光谱分析法和荧光光谱分析法研究了Ab2、AFB1与F(ab’)2片段三者相互作用的机理。圆二色光谱分析表明，在AFB1对F(ab’)2片段的作用过程中，随着AFB1的增加，F(a

关键词： 水产养殖业   植物病害   兽药   病原生物   水产品   生物药物   感受性   水生动植物   防控   中药制剂  

摘要： 水产用兽药质量参差不齐。在当前的水产用兽药市场上,许多制品均以"非药品"的形式在销售。部分水产用兽药在生产中并没有达到"安全有效、质量可控"的要求,假、冒、伪、劣水产用兽药充斥市场。部分企业为了增加水产用兽药的疗效,甚至在中药制剂中违规添加西药,这已经是比较普遍的现象。由于水产用兽药的质量参差不齐,要做到定量给药自然失去了物质基础。病原生物对药物的感受性不清楚。长期以来,我们没有进行关于水产养殖动植物病原生物药物感受性变化的普查工作,缺乏各种致病生物对水产用药物的敏感程度变化状况等基本参数,各种水产用兽药说明书中规定的用药量

关键词： 中药制剂   西药   合用   配伍应用  

摘要： 中西医结合中怎样联用中西药增强疗效、避免不良反应,达到合理用药目的是临床药师研究的重要内容[1]。本文就中西药联用时药物的药效和毒性变化进行讨论。

关键词： 玉米   紫外线   黄曲霉毒素B1   呕吐毒素  

摘要： 本实验旨在探索利用高压紫外线在极短时间内处理霉变玉米，对玉米霉菌毒素达到所期望的杀灭率，以实现能在实际生产中应用的效果。试验从饲料厂仓库选取正常玉米60kg，分成四份A、B、C、D，其中B、C、D进行霉变处理，在B霉变程度为20%、C霉变程度为40%、D霉变程度为60%时，分别在A、B、C、D中采样抽取500g标记为A1、B1、C1、D1，然后B、C、D用紫外线灯进行不同时间的照射处理，照射2s的标记为B2、C2、D2，照射7.5s的标记为B3、C3、D3，照射15s的标记为B4、C4、D4，照射30s的标记为B5、C5、D5。分别对A1、B1、C1和D1进行常规营养的测定，包括能量、粗蛋白和粗脂肪的测定，然后进行对比观察前后营养变化量。对B1、B2、B3、B4、B5、C1、C2、C3、C4、C5、D1、D2、D3、D4、D5进行黄曲霉毒素B1和呕吐毒素的测量，观察紫外线的对霉菌毒素的杀灭效果。结果发现霉变情况不同粗蛋白、脂肪和能量均表现为差异性显著，且随霉变程度升高蛋白含量表现为先降低后增加，脂肪一直降低。在30s内随着照射时间的增加，黄曲霉毒素先增加后减少；在30s内随着照射时间的增加，呕吐毒素先减少后增加，最后再减少，其中2s的时候杀毒效果最好。