关键词： 黄曲霉毒B1   硒   抗氧化   MDCK细胞   细胞凋亡   β-胡萝卜素  

摘要： 黄曲霉毒素在发展中国家是最重要的健康杀手,它是由黄曲霉和寄生曲霉的产毒菌株所生成,并对生长期的家禽(尤其是雏鸭和火鸡)、幼猪、怀孕母猪、犊牛和犬产生影响。相对而言,成年牛、绵羊和山羊对急性的黄曲霉毒素中毒抵抗力较强,但如果长期从食物中摄入也可能引起中毒。硒是日常饮食中广泛存在的一种含量很低但是必不可少的矿质元素,由于其具有的许多独特而新颖的营养学、生物化学及分子生物学特性,使之成为营养学研究中一个被持续关注的热点。含有硒的抗氧化硒蛋白GPX1主要作用是抗氧化应激,这也使得硒成为具有抗氧化特性的一种重要微量营养素。β-胡萝卜素是效力最强的的维生素A原(即类胡萝卜素),具有发挥抗氧化特性的能力。它可以在脂质阶段通过减少自由基来发挥其抗氧化功能。它是一种有效的抗氧化剂,可以通过猝灭纯态氧、过氧自由基,抑制脂质过氧化来发挥其在脂质系统中的抗氧化作用。研究的目的：本文专注于两项研究。第一项研究是探讨AFB1在MDCK细胞上诱导细胞毒性和氧化应激的潜力,硒(蛋氨酸和亚硒酸钠)对AFB1诱导的氧化应激的保护潜力,而且也比较了有机硒(硒蛋氨酸)和无机硒(亚硒酸钠)的抗氧化潜力。第二项研究探讨AFB1在MDCK细胞上诱导致细胞病变、氧化应激和细胞凋亡的潜力以及p-胡萝卜素对AFB1诱导的氧化应激和细胞凋亡的保护潜力。方法：MDCK细胞培养于DMEM,培养基中补充有10%的血清和1%的抗生素(10,000IU/ml青霉素和10,000μg/ml的链霉素,Gibco),细胞在37℃、加湿环境中培养。细胞长满后用胰蛋白酶消化分离,并根据需要进行重悬。在第一项研究中,细胞培养在94(用于MTT),24(用于LDH, GSH)和6(用于MDA, GPX1的活性及mRNA)孔板。培养24小时后更换为含有不同剂量和不同形式硒(硒蛋氨酸或亚硒酸钠)的新培养基,继续培养24小时,然后再换上含0.25μg/ml AFB1 (1mg/ml的浓度溶解于DMSO中)的新培养基,并继续培养48小时。在只用硒的实验中,细胞培养24小时后,更换成含有硒的培养基并继续培养24小时。试验分为以下几组：A(阴性对照,细胞不加任何刺激剂),B(毒素对照,力口0.25μg/ml毒素),C(0.2μM硒+0.25μg/ml毒素),D(0.8μM硒+0.25μg/ml毒素),E(1μM硒+0.25μg/ml毒素),F(2μM硒+0.25μg/ml毒素),G(4μM硒+0.25μg/mll毒素)和H(8μM硒+0.25μg/ml毒素)。在只含硒的试验中,硒浓度都是相同的但是不加毒素。在第二项研究中,细胞培养在94(用于MTT),24(用于GSH)和6(用于MDA, caspase-3活性和Bcl-2的mRNA)板。用于细胞病理学检查的细胞培养在玻璃盖玻片上(预先涂有聚-L-赖氨酸)。试验分为以下几组：A(对照,细胞不加任何刺激剂),B(毒素对照,0.25μg/ml毒素),C (0.05μM β-胡萝卜素+0.25μg/ml毒素),D(0.1μM β-胡萝卜素+0.25μg/ml的毒素),E(0.2gμM β-胡萝卜素+0.25μg/ml毒素),F (0.胡萝卜素+0.25μg/ml毒素)和G (0.8μM β-胡萝卜素+0.25μg/ml毒素)在只含有β-胡萝卜素的试验中,β-胡萝卜素的浓度都是相同的但不加毒素。培养结束后,试验样本根据各个检测的要求进行制备。比如做GSH,MDA和GPX1活性的检测时要通过超声裂解法制备细胞裂解物,MTT检测可以用细胞分光光度法直接进行检测,细胞外LDH的检测需要收集培养基。对于GPX1和Bcl-2 mRNA的检测,cDNA要根据试剂盒的说明书来制备。结果：结果表明AFB1对MDCK细胞的毒性作用具有剂量和时间依赖性。AFB1的半数最大中毒浓度(IC50)为0.25μg/ml。因此,接下来的试验中AFB1的浓度均使用0.25μg/ml。第一项研究的结果表明,0.25μg/ml的AFB1会导致显著的氧化应激,具体表现在与对照组相比,丙二醛(MDA)水平显著增加,细胞内GSH水平显著降低,以及GPX1活性和mRNA水平显著降低。硒蛋氨酸能够对AFB1诱导的氧化损伤起到保护作用,且这种作用具有剂量依赖性。当硒蛋氨酸的浓度在1μM到4μM之间时,保护作用较好。在这一范围内,MDA含量显著下降,而细胞内GSH水平,GPX1活性和mRNA水平都显著提高。此外,细胞存活率显著改善。但是,当使用亚硒酸钠时,只有较低浓度的亚硒酸钠可以保护细胞免受AFB1诱导的细胞损伤,而较高浓度的亚硒酸钠可作为促氧化剂,添加了较高浓度亚硒酸钠的试验组造成的细胞损伤比只加毒素组更严重。第二项研究的结果表明,0.25μg/ml的AFB1会导致显著的氧化应激,表现在丙二醛(MDA)水平显著增加,细

关键词： 黄曲霉毒素B1   玉米   臭氧   品质   毒性  

摘要： 黄曲霉毒素（Aflatoxins, AFs）主要是由黄曲霉和寄生曲霉产生的一类毒性极强的次级代谢产物的总称。在已发现的AFs中，常见黄曲霉毒素B1、B2、G1和G2（AFB1, AFB2,AFG1和AFG2）。其中AFB1分布最广，毒性最强，为1级致癌物。玉米是我国重要的食品和饲料原料，当收获、加工和储藏等措施不当时，AFB1污染玉米的问题较突出。尽管目前已建立了一些物理、化学和生物降解和脱除AFB1方法，但高效、安全、经济的绿色降解和脱除方法仍很少。因此，对AFB1降解和脱除的研究一直是热点。臭氧降解AFB1研究报道可追溯到上世纪60年代，但迄今研究仍局限于不同原料中AFB1的降解率，对臭氧处理后原料品质和毒性的改变研究较少，这极大限制了臭氧降解AFB1技术的应用。本研究利用超高效液相色谱串联四级杆飞行时间质谱（UPLC Q-TOF MS），对AFB1在不同臭氧体系下的降解产物结构进行分析，推测了降解产物生成途径和毒性，并以玉米为实样，研究臭氧降解AFs的动力学，评估臭氧处理AFB1污染玉米后的理化特性和毒性，以期为臭氧降解AFB1的应用提供理论和实践依据。研究主要结果概述如下： 臭氧降解AFB1的产物结构研究。通过臭氧和臭氧水纯体系与AFB1反应，首次发现10个AFB1降解产物，根据其离子碎片信息和精确分子量，推测出各降解产物的分子式和结构式。臭氧降解AFB1产物结构分析表明，在臭氧和臭氧水纯体系中与AFB1的主要作用机制是AFB1的臭氧加成反应历程，据此推测了AFB1降解产物的生成途径。由降解产物的结构-效应关系，推测AFB1降解产物毒性显著降低。 臭氧降解AFs的动力学研究。以AFs污染的玉米粉和玉米籽粒为实样的研究发现，玉米粉和玉米籽粒中AFs的臭氧降解率随着臭氧浓度和处理时间的增加而显著提高；当水分含量为17.40%的玉米粉经75mg/L的臭氧处理60min后，AFB1的含量由53.60μg/kg降低到11.38μg/kg，降解率为78.76%；而水分含量为13.47%和20.37%的玉米籽粒经90mg/L的臭氧处理40min后，AFB1含量分别由83.0μg/kg和77.6μg/kg降低到4.90μg/kg和21.42μg/kg，降解率分别为94.1%和72.4%。AFs臭氧降解的动力学模拟表明，不同原料中AFs臭氧降解规律符合一级动力学模型。玉米粉中AFs降解速率按以下次序递减：k75mg/L>k45mg/L>k30mg/L>k15mg/L，kAFB1>kAFs>kAFG1>kAFB2；玉米籽粒中AFB1降解速率按以下次序递减：k90mg/L>k65mg/L>k40mg/L，k13.47%玉米水分>k20.37%玉米水分。臭氧降解AFs的动力学参数中的动力学方程、反应速率常数、相关系数和半衰期，为最优地控制臭氧反应条件、臭氧降解对玉米品质改变及安全性评价奠定了理论和实践基础，也为臭氧降解AFB1污染的玉米应用的可行性提供了技术保障。 臭氧处理对原料理化特性影响的研究。AFB1污染的玉米臭氧处理后理化特性变化结果表明，经75mg/L的臭氧处理60min后，玉米粉的水分含量从17.40%降至11.45%，经90mg/L的臭氧处理40min后，玉米籽粒的水分含量从13.47%降至9.90%，均远低于玉米长期储藏的安全水分（15.0%）。玉米经臭氧处理后，水分含量降低，有利于长期储藏。臭氧处理后的玉米粉脂肪酸值显著升高，远超国家规定的重度不宜存标准（>78mg KOH/100g干基）；而玉米籽粒脂肪酸值上升缓慢，符合国家宜存标准（<50mgKOH/100g干基）；玉米粉和玉米籽粒经臭氧处理后，色泽、黏度和糊化等性能均发生改变，玉米粉变化更明显，这对保持玉米原有品质是不利的。综合考虑臭氧对玉米的品质影响、操作的方便性、经济性、安全性、环保性和高效性等因素，臭氧对玉米籽粒中AFB1的降解是较佳选择。 臭氧降解AFB1的安全性评价。体外毒性研究表明，与未经AFB1处理的HepG2人肝癌细胞相比，AFB1可以显著抑制细胞生长，细胞形态发生显著改变，凋亡细胞显著增多，细胞中p53蛋白表达显著减少，AFB1具有很强的细胞毒性（p<0.05）；AFB1臭氧降解产物对HepG2人肝癌细胞毒性实验结果表明，细胞形态与未经AFB1处理的细胞相比未发生显著改变，凋亡细胞显著减少，细胞中p53蛋白表达也无显著改变（p>0.05），臭氧处理显著降低AFB1的细胞毒性。昆明鼠体内毒性研究表明，与基础饲料组相比，AFB1污染玉米组昆明鼠平均增重和饲料消耗量显著降低，肝脏、肾脏与体重比显著增加，血清中谷丙转氨酶、谷草转氨酶和碱性磷酸酶活性显著升高，总蛋白、白蛋白和球蛋白含量显著降低（p<0.05），肝脏和肾脏产生明显组织学病变

关键词： AFB1   AFM1   季节性   瘤胃发酵   霉菌毒素吸附剂   奶牛   抗氧化能力   转化率   生产性能  

摘要： 针对当前奶牛养殖过程中奶牛采食黄曲霉毒素B1(Aflatoxin ***1)污染饲料带来的牛奶和奶制品黄曲霉毒素M1(Aflatoxin Ml, AFM1)的污染问题,本文研究了日粮中AFB1到牛奶的转化率、牛奶中AFM1的清除规律,以及AFBl对奶牛生产性能和健康的影响。同时,评价了吸附剂Solis Mos (SM)的添加效果。具体研究内容与获得的结果如下。 1、长三角地区奶牛场日粮中AFB1和原料奶AFM1的季节性变化(试验一) 本试验调研了长三角地区18家奶牛场全混合日粮(Total Mixed Ration, TMR)中AFB1和原料奶AFM1在4个季节的发生率和污染程度。每个季节收集15份TMR样本,4个季节共采集60份TMR样本;而每个季节从奶缸中采集18份混合牛奶样,4个季节共采集72份原料奶样。TMR中AFB1测定应用HPLC-FLD方法(检出限为0.3μg/kg),牛奶AFM1测定应用LC-MS/MS方法(检出限为0.01μg/L)。应用SAS9.2(SAS Institute Inc., Cary, NC)单因素方差分析程序检验4个季节的TMR AFB1和牛奶AFM1的浓度差异。AFB1在28份TMR样本(46.7%)中被检出,AFB1浓度范围0.332-4.040ug/kg。冬季TMR中AFB1浓度显著高于春季和秋季(P<0.05),但与夏季没有显著差别。总共72份奶样中有43份牛奶样检测出AFM1(59.7%),其浓度范围为0.01-0.42μg/L。冬季原料奶中AFM1浓度(0.123μg/L)显著高于其他季节,春季(0.029μg/L)、夏季(0.032μg/L)与秋季(0.032μg/L)牛奶样AFM1浓度差异不显著(P>0.05)。本试验结果显示,TMR中AFB1以及牛奶中AFM1的污染呈现季节性差异,冬季和夏季饲料易致AFB1污染,而冬季牛奶污染AFM1风险最高,因此对牧场饲料和牛奶的AFs管理中需要考虑季节性因素。 2.日粮AFB1向牛奶的转化以及日粮中添加SM的效果(试验二) 本研究的目的是研究日粮AFB1到乳AFM1的转化率和乳中AFM1的清除规律,并评价SM对摄入不同剂量AFB1的奶牛乳中AFM1、奶牛血液生化指标和瘤胃发酵参数的影响。选择24头泌乳后期经产荷斯坦奶牛(泌乳天数271±29d;奶产量21.6±3.1kg/d),随机分为3组,每组8头。3组奶牛被安排进行3个小试,每个小试含2个处理,每个处理4头牛,采用交叉试验设计。小试1、2、3中奶牛分别采食含AFB1含量为0、20、40μg/***的日粮,每个小试中,奶牛接受对照组或添加0.25%的SM处理组。每个小试分为两个连续的时期,每期含有4d预试期(d1-4)、7d AFB1饲喂期(d5-11)和5d清除期(d12-16)。完成第一期试验后,将对照组和处理组对换,进入第二期试验。在每期试验第1、2和10-14d,采集TMR和牛奶样本;d1、11和14的晨饲前,通过尾静脉采集10mL血液至肝素管;d1和11晨饲后2h,通过口腔瘤胃导管采集50mL瘤胃液。结果发现,采食基础日粮奶牛乳中AFM1的本底水平是0.003gg/L;采食含20μg/kg AFB1日粮的奶牛乳中AFM1均值为0.105μg/L,日粮AFB1到牛奶的转化率为0.56%;采食含40μg/kg AFB1日粮的奶牛乳中AFM1均值为0.209μg/L,日粮AFB1到牛奶的转化率为0.59%。当奶牛停止采食AFB1污染日粮3d后,乳中AFM1即可清除。添加SM到含20μg/kg AFB1的日粮中能够显著减少奶中AFM1浓度(0.105vs.0.088μg/L, P<0.05),降低AFB1向牛奶中的转化率(0.56vs.0.46%,P<0.05);但在含40μg/kg AFB1日粮中添加SM并不能降低牛奶中AFM1浓度。在基础日粮中添加SM能够增加总挥发性脂肪酸(VFA)浓度(99.6vs.94.2mM, P<0.05)、微生物蛋白(MCP)含量(3.3vs.2.9mg/mL, P<0.05)以及羧甲基纤维素酶(CMCase)活性(0.34vs.0.26U, P<0.05);在含20μg/kgAFB1日粮中添加SM能增加总VFA浓度(99.8vs.93.4mM, P<0.05), MCP含量(3.2vs.2.7mg/mL, P<0.05)以及CMCase活性(0.28vs.0.22U, P=0.07);但是,在含40μg/kg AFB1日粮中添加SM并未改变瘤胃发酵参数。无论是在基础日粮,还是在AFB1污染日粮中添加0.25%的SM,均不影响奶牛泌乳性能、肝功能和体液免疫,但可降低机体氧化应激。 本试验结果表明,日粮中AFB1转化为乳AFM1的比率为0.46

关键词： 糖尿病   胰岛素抵抗   葡萄糖摄取   胰岛素受体底物-1(IRS-1)   葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)  

摘要： 目的 构建小鼠L6胰岛素抵抗肌细胞,研究不同中药提取物对L6细胞胰岛素抵抗性的影响。 方法 1.高糖胰岛素抵抗细胞模型(IR-L6)构建 高糖DMEM培养基对正常大鼠L6肌细胞进行诱导分化,考马斯亮蓝染色法检测细胞分化情况。诱导分化后的细胞用棕榈酸处理以构建胰岛素抵抗模型。葡萄糖氧化酶法测定不同时间上清剩余葡萄糖浓度,以验证胰岛素抵抗模型是否构建成功。 2.不同中药对胰岛素抵抗L6细胞葡萄糖摄取率的影响 大鼠L6肌细胞分为9组：正常L6细胞组(NC)、胰岛素抵抗组(IR)和7组不同中药处理实验组(IR-Drug Treated)。L6胰岛素抵抗细胞分别用不同中草药进行干预后作为实验组,胰岛素抵抗组细胞用生理盐水进行空白处理,随后[3H]-2-脱氧-D-葡萄糖([3H]-2DG)摄取测定各组细胞葡萄糖摄取量,评估各中草药对胰岛素抵抗细胞葡萄糖代谢影响。 3.不同中药提取物降糖机理研究 RT-PCR法检测各组细胞IRS1mRNA水平和GLUT4mRNA水平,western blotting法检测各组细胞IRS1酪氨酸磷酸化蛋白表达和GLUT4蛋白表达水平。 结果 1.高糖胰岛素抵抗细胞模型构建 葡萄糖氧化酶实验结果显示：棕榈酸处理48h后,IR-L6组细胞培养液上清葡萄糖浓度达(20.75±0.19) mmol/L,比L6空白对照组(17.69±0.25mmol/L)明显要高(P<0.05)。 2.不同中草药对胰岛素抵抗L6细胞葡萄糖摄取率的影响 细胞培养6h,R组细胞葡萄糖摄取率比NC组细胞显著下降6.4%(P<0.05),且随着时间的延长,这种显著性逐渐增强(P<0.05)。IR组与各实验组对比结果显示：细胞培养6h时,实验组细胞中只有小檗碱组细胞葡萄糖摄取率比R组显著上升(P<0.05),其他组细胞葡萄糖摄取率与IR组之间并无明显差异(P>0.05)。细胞培养12h,中药提取物处理组中小檗碱、葛根素、黄芪多糖、麦冬多糖和大黄素组细胞葡萄糖摄取率较IR组均显著上升(P<0.05),且这种显著性随着培养时间的延长逐步增强；而人参皂苷组细胞和银杏叶提取物组细胞葡萄糖摄取率虽略有上升,但差异并不显著(P>0.05)。 3.中药降糖机理研究 与IR组相比,各中药组IRS-1mRNA和GLUT mRNA水平均显著增高(P<0.05), IRS-1酪氨酸磷酸化蛋白水平和GLUT蛋白水平也同步显著增加。 结论 小檗碱、葛根素、黄芪多糖、麦冬多糖和大黄素均可通过增强IRS-1酪氨酸磷酸化来增强胰岛素抵抗L6细胞葡萄糖摄取能力。

关键词： 中药制剂   重点实验室   中药质量控制   教育部   教育行政组织  

摘要： 现代中药制剂教育部重点实验室(简称"重点实验室")于2003年底经国家教育部批准依托江西中医药大学组建,是全国高校中唯一从事中药新制剂、新剂型、新技术研究开发的教育部重点实验室。其研究目标是在中医药理论指导下,经现代药理和临床实验验证,运用现代技术、方法和手段,研制安全、有效、稳定、可控、方便的新一代中药制剂。重点实验室建立了中药制剂制造装备、中药新型给药暨物性表征评价、中药质量控制评价、菌物药研究中心等技术平台,获批"中蒙药丸剂国家工程研究中心"、"创新药物与高效节能制药设备协同创新中心"、"中药新型给药系统技术平台"、"中药集成创新技术平台"、国家中医药管理局"中药制剂"和"中药质量控制"三级实验室、江西省"中药制剂"高水平实验室、南昌市重点实验室等。购置了300台件、总价值达5100余万元的

关键词： 药物不良反应   抗感染药物   中药制剂  

摘要： 目的研究分析药物不良反应情况和影响因素。方法对我院500例药物不良反应资料进行分析讨论。结果临床中抗感染药物以及中药制剂造成的不良反应居多,主要症状有皮肤和附件损伤。结论临床中造成药物出现不良反应的主要因素是抗感染药物或中药制剂的不合理使用,所以,临床用药中应制订相应的解决办法,以避免药物不良反应的发生,提升用药安全性。

关键词： 玉米赤霉烯酮   黄曲霉毒素B1   酶联免疫   抗原制备   抗血清   单克隆抗体  

摘要： 本课题来源为吉林省世行贷款农产品质量安全项目《吉林省优势农产品——玉米汁加工质量安全控制关键技术研究》（2011-Z67）。 玉米赤霉烯酮（Zearalenone，ZON）和黄曲霉毒素B1（Aflatoxin B1，AFB1）是真菌产生的有毒次级代谢产物，主要存在于粮食、饲料、食品中，尤其常见于保存在潮湿环境下的玉米、玉米饲料及玉米制品中。ZON具有较强的类雌激素作用。AFB1具有强烈的致癌作用。酶联免疫法（Enzyme-Linked ImmunoSorbentAssay，ELISA）较传统分析方法，具有成本低、耗时时间短、快速、灵敏、便于基层检测部门检测的特点，成为目前毒素检测发展的方向。而制备高灵敏性、强特异性的抗体则是建立毒素ELISA检测试剂盒的关键。 本文采用乙二胺-EDC法制备阳离子化偶联蛋白，分别采用DCC-NHS活性酯法、曼尼希法、AFB2a法制备相应ZON和AFB1的完全抗原，并采用紫外、薄层层析、电泳、TNBS等技术对中间产物和完全抗原进行了性质分析和鉴定。利用制备的ZONO-BSA和AFB2a-cBSA免疫小鼠，制备小鼠的多抗血清，采用间接ELISA和间接竞争ELISA方法对血清进行评价分析。同时，免疫ZONO-BSA的小鼠脾细胞与SP2/0细胞进行细胞融合，制备ZON单克隆抗体。采用间接ELISA和间接竞争ELISA方法对抗体的效价、灵敏度、检测限进行了评定。最后，参考国标，使用高效液相色谱法检测AFB1，验证方法的回收率等参数，并比对前面建立的ic-ELISA方法。具体研究内容如下： (1)阳离子化蛋白的制备，该研究采用乙二胺-EDC法制备阳离子化牛血清蛋白（cBSA）和阳离子化鸡卵清蛋白（cOVA）。 (2) ZON抗原的制备，采用DCC-NHS活性酯二步法构建ZON完全抗原。根据紫外检测结果，可初步判断，ZON完全抗原制备成功。TNBS法测得偶联结合比nZONO:nBSA=12.7:1、nZONO:nOVA=6.6:1。 (3) AFB1完全抗原的制备，选用两种方法制备AFB1的完全抗原，分别为AFB2a法、曼尼希法。AFB2a法制备得到AFB2a-cBSA和AFB2a-cOVA。曼尼希法制备得到AFB1-cBSA和AFB1-cOVA。根据紫外检测结果，可初步判断，AFB2a法制备AFB1完全抗原成功。TNBS法测得偶联结合比nAFB1:ncBSA=14.32:1、nAFB1:ncOVA=7.45:1。 (4)抗ZON抗血清的制备和评价，选择ZONO-BSA作为免疫抗原免疫小鼠，间接ELISA测定小鼠血清的效价。ELISA结果显示，小鼠的效价均呈现较高的水平，最高可达1:64000。间接竞争ELISA测得抗血清的IC50为74.69ng/mL，检测限为23.24ng/mL。 (5)抗AFB1抗血清的制备和评价，选择AFB2a-cBSA作为免疫抗原免疫小鼠，间接ELISA结果显示，小鼠的效价均呈现较高的水平，最高可达1:256000。间接竞争ELISA测得抗血清的IC50为90.00ng/mL，检测限为29.16ng/mL。 (6) ZON单克隆抗体的制备和评价，选择ZONO-BSA作为免疫抗原免疫小鼠。免疫程序结束后，取脾，进行细胞融合，筛选出阳性杂交瘤细胞FG2。制备并纯化腹水。间接ELISA结果显示，单抗的效价为1:1024000。间接竞争ELISA测得单抗的IC50为9.21ng/mL，检测限为2.78ng/mL。 (7) HPLC检测AFB1，建立HPLC检测AFB1的方法，并得到标准曲线，本方法标准曲线的回归方程为S=63187.94859*C+85195.63562，相关系数R2为0.99237，线性关系良好。加标回收试验表明，使用该法检测黄曲霉毒素B1，平均回收率为89.32%，相对标准偏差RSD为3.83%。选用HPLC法和建立的AFB1多抗血清的间接竞争ELISA方法进行比对，相关系数为0.83，需具有较高的相符性。

关键词： 降糖药   糖尿病   高血压病   纯中药制剂  

摘要： 李老先生患糖尿病20余年,近来出现精神不振、嗜睡现象,为求系统治疗,住进了河南省中医院干部病房。入院时,专家发现他神志恍惚,反应迟钝。查体时突然呼之不应,意识丧失。急查血糖1.6毫摩尔/升,考虑患者低血糖昏迷,立即给予抢救,50%葡萄糖注射液静脉注射,并给予10%葡萄糖注射液静脉点滴,约10分钟后患者意识恢复。追问病史得知,李老先生长期应用胰岛素治疗糖尿病,家属近日听信朋友推荐,给他加服了两种"纯中药制剂"降糖药。这些不曾

关键词： 疗效观察   山西中医学院   临床观察   加减治疗   大鼠   中医学   中国医药学   溃疡性结肠   中药制剂   学报   连续出版物   目次  

关键词： 黄曲霉毒素B1   杂色曲霉素   细胞凋亡   联合毒性  

摘要： 粮食经常会发现有真菌毒素的存在，并且不同类型毒素会共同存在，而其共存后对人体的联合毒性并没有系统的认识，国家对于毒素共存后单种毒素的最大允许摄入量也没有明确的法律法规。本文选取较有代表性的真菌毒素—黄曲霉毒素B1（AflatoxinB1,AFB1）和杂色曲霉素（Sterigmatocystin，ST）进行联合毒性的研究，鉴于两种毒素都具有肝毒性，本试验选取HepG2细胞作为研究对象。经过AFB1和ST的单独和联合作用后，观察HepG2细胞的细胞内部各部位的损伤情况，细胞凋亡的程度以及凋亡相关的蛋白表达的变化。探讨AFB1和ST的单独和联合作用诱导HepG2细胞凋亡的作用机制以及二者的联合作用类型。 将不同浓度的AFB1、ST以及其混合物加入处于对数期的HepG2细胞中进行处理，并且设置溶剂对照组（0.1%DMSO）。药物处理24h、48h后，观察细胞中细胞增殖率、ATP含量、DNA含量、线粒体膜通透性及活性氧含量5个指标的变化情况，并且分析两种毒素的联合作用。结果发现单独及联合作用时细胞的存活率、细胞的DNA含量、ATP含量的降低程度呈剂量相关性，而细胞内ROS的含量、线粒体膜通透性呈剂量依赖性增高。对各个指标的结果进行显著性分析表明，当AFB1和ST联合作用于HepG2细胞时表现为加和作用。 选取AFB1、ST单独及联合染毒时对细胞增殖抑制率达到10%、30%和50%时的浓度为本章的实验浓度，并设置溶剂对照组（0.1%DMSO），药物处理48h后，观察细胞的形态变化，检测细胞线粒体膜电位的变化，细胞周期的变化以及细胞凋亡率。实验发现Hoechst33258染色后细胞出现浓染，表明有细胞凋亡的现象产生。AFB1、ST及其混合物都诱导HepG2细胞发生了细胞周期阻滞。单独作用时不同浓度的药物会诱导不同的周期阻滞，主要集中在G0/G1期和S期，联合作用时则同时诱导HepG2细胞发生G0/G1期阻滞和S期阻滞。同时，线粒体膜电位的下降及细胞凋亡率的增加均呈剂量相关性。两种毒素联合染毒后，细胞凋亡各个表征并没有比单独作用时明显增多或者减少，进一步证明两种毒素的联合作用为加和作用。 采用细胞免疫组织化学染色检测AFB1、ST单独及联合作用时对HepG2细胞中Bax、Bcl-2、Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9及p53表达的影响。结果表明Bcl-2蛋白的阳性表达量呈剂量依赖性降低，Bax、Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9及p53的阳性表达量随着毒素浓度的增加而增加。 上述实验表明AFB1、ST单独及联合作用会对HepG2细胞的主要部位如DNA和线粒体造成损伤，并且引起细胞凋亡。综上所述，AFB1和ST联合作用于HepG2细胞时为加和作用。