关键词:
孕烷X受体
坏死性凋亡
黄曲霉毒素B1
肝细胞毒性
摘要:
目的初步探讨孕烷X受体(PXR)对黄曲霉毒素B1(AFB1)诱导肝细胞DNA损伤和坏死性凋亡的影响。方法采用已构建的PXR高表达L02-PXR和空白载体对照L02-p B细胞;实时荧光定量PCR(q RT-PCR)检测细胞NR1I2和CYP3A4 m RNA水平改变;蛋白免疫印迹(Western blotting)检测细胞内PXR和坏死性凋亡下游效应自噬分子LC3-Ⅰ和LC3-Ⅱ蛋白相对表达含量;双核微核试验(CBMN)检测细胞遗传损伤情况;采用噻唑蓝(MTT)法测定AFB1对细胞活性抑制影响;利用坏死性凋亡抑制剂Nec-1构建坏死性凋亡抑制的细胞模型,验证AFB1诱导的坏死性凋亡的效应。结果与L02-p B细胞相比,L02-PXR细胞NR1I2 m RNA和PXR蛋白显著上调(均P〈0.001)。AFB1显著地诱导L02-p B和L02-PXR细胞中CYP3A4 m RNA上调(均P〈0.05),在L02-PXR细胞中的效应更为明显。与对照组相比,AFB1在5-30μmol/L呈剂量反应关系诱导L02-p B和L02-PXR细胞的微核率增高(均P〈0.05),L02-PXR细胞更为明显;同时,AFB1明显地诱导两株细胞的核芽率和核桥率,但随AFB1剂量增高都有下降趋势。细胞活性随AFB1浓度(1.875-120μmol/L)增加呈剂量反应关系抑制(均P〈0.05);且相对于L02-p B细胞,L02-PXR细胞对AFB1处理48 h诱导的细胞活性抑制作用更为敏感(P〈0.05)。Nec-1可显著性抑制AFB1诱导的L02-PXR细胞活性抑制率(P〈0.05),然而却不能降低AFB1诱导L02-p B细胞活性抑制率。此外,AFB1显著性诱导L02-p B和L02-PXR坏死性凋亡下游LC3-Ⅱ的上调(均P〈0.05);且与L02-p B细胞相比,Nec-1对AFB1诱导的L02-PXR细胞活性抑制和LC3-Ⅱ上调的抑制效果更为明显(P〈0.05)。结论 PXR参与AFB1诱导人肝细胞DNA损伤介导的坏死性凋亡,与PXR促进AFB1诱导CYP3A4基因上调有关。