关键词：
霉菌毒素
酶联免疫法
高效液相色谱法
测试效果
摘要：
本课题针对黄曲霉毒素B,(AFB,)、玉米赤霉烯酮(ZEN)和呕吐毒素(DON)3种毒素,各选择目前国内外市场上应用较广的4个厂商生产的酶联免疫(ELISA)试剂盒,严格按照每种试剂盒产品的使用说明书进行测试,对标准样品测试结果的灵敏度、准确度和精确度、重现性,以及其对真实样品的测定结果与相应毒素的国家标准分析法(高效液相色谱法)测定结果的符合度等方面评价各个试剂盒产品的实用性。试验一四种AFB1试剂盒测定结果的比较分别用4种ELISA试剂盒测定标准样品和真实样品中的AFB,,并以标准样品的半数抑制浓度(IC50)、平均相对误差和平均相对标准偏差及标准曲线的斜率和截距变异系数分析试剂盒的灵敏度、准确度和精确度及重现性,以真实样品的回收率和与HPLC测定结果符合度分析其实用性。结果表明,对于标准样品,试剂盒A1、A2、A3 和 A4 的 IC50 分别为 2.18 μg/kg、9.42 μg/kg、8.05 μg/kg 和 6.58 μg/kg;添加 10 μg/kg、25 μg/kg、50 μg/kg、100 μg/kg和200 μg/kg 5个梯度的AFB1标准品进行试验,测定值与真实值之间的平均相对误差分别为28.74%、63.76%、20.01%和21.61%,平均相对标准偏差分别为8.82%、38.46%、13.59%和7.63%;各试剂盒标准曲线的斜率变异系数分别为14.17%、13.01%、7.91%和7.74%,截距的变异系数分别为23.74%、54.55%、12.43%和12.31%。对于真实样品,在配合料中添加10μg/kg、50μg/kg和100μg/kg3个梯度的AFB1标准品进行试验,4种试剂盒的平均回收率分别为99.86%、39.13%、91.10%和85.39%,真实样品的测定中,各试剂盒与HPLC测值的占比(P)分别为9.28、26.89、5.08和1.83,与HPLC法结果的标准差之比(S)分别为72.22、160.42、15.77、3.43。总之,试剂盒A1的灵敏度和回收率较好,试剂盒A3和A4的准确度、精确度和重现性均优于其他的2个试剂盒,A1、A3和试剂盒A4的回收率较高,试剂盒A4的测定值与真实值的符合度较好。试验二四种ZEN试剂盒测定结果的比较分别用4种ELISA试剂盒测定标准样品和真实样品中的ZEN,并以标准样品的半数抑制浓度(IC50)、平均相对误差和平均相对标准偏差及标准曲线的斜率和截距变异系数分析试剂盒的灵敏度、准确度和精确度及重现性,以真实样品的回收率和与HPLC测定结果符合度分析其实用性。结果表明,对于标准样品,试剂盒Z1、Z2、Z3 和 Z4 的 IC50 分别为 270.24 μg/kg、缺失、168.51 μg/kg 和 39.27 μg/kg;添加 50 μg/kg、250μg/kg、500μg/kg、1000 μg/kg和2000 μg/kg 5个梯度的ZEN标准品进行试验,测定值与真实值之间的平均相对误差分别为26.43%、146.19%、8.53%和19.35%,平均相对标准偏差分别为2.68%、8.05%、3.58%和7.42%;各试剂盒标准曲线的斜率变异系数分别为34.42%、9.13%、20.27%和12.33%,截距的变异系数分别为41.40%、167.10%、22.18%和10.78%。对于真实样品,在配合料中添加250μg/kg、500 μg/kg和1000 μg/kg 3个梯度的ZEN标准品进行试验,4种试剂盒的平均回收率分别为95.83%、295.57%、218.74%和132.77%,真实样品的测定中,各试剂盒与HPLC测值的占比(P)分别为3.66、5.76、12.90和4.90,与HPLC法结果的标准差之比(S)分别为12.76、21.32、18.90、7.61。总之,试剂盒Z4的灵敏度和重现性较好,试剂盒Z3的准确度和精确度较好,试剂盒Z1的回收率较好,但是四个试剂盒在真实样品的符合度上,表现性能都稍差。试验三四种DON试剂盒测定结果的比较分别用4种ELISA试剂盒测定标准样品和真实样品中的DON,并以标准样品的半数抑制浓度(IC50)、平均相对误差和平均相对标准偏差及标准曲线的斜率和截距变异系数分析试剂盒的灵敏度、准确度和精确度及重现性,以真实样品的回收率和与HPLC测定结果符合度分析其实用性。结果表明,对于标准样品,试剂盒D1、D2、D3 和 D4 的 IC50 分别为 354.31 μg/kg、89.79 μig/kg、589.83 μg/kg 和 403.44 μg/kg;添加 200 μg/kg、500 μg/kg、1000 μg/kg、2000 μg/kg 和 4000 μg/kg 5 个梯度的 DON 标准品进行试验,测定
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