关键词： 上转发光技术   免疫层析   食品安全   黄曲霉毒素M1   黄曲霉毒素B1  

摘要： 目的：以上转发光(Up-Converting Phospher, UCP)材料作为标记物,与经典免疫层析方法结合,建立可对奶制品中黄曲霉毒素M1及粮食中黄曲霉毒素B1直接进行现场检测的上转发光免疫层析(up-converting phosphor technology-based lateral-flow, UPT-LF)'决速定量检测方法。方法：1.上转发光免疫层析试纸制备：分别以黄曲霉毒素M1(AFM1)单克隆抗体,黄曲霉毒素Ml (AFM1)与小牛血清白蛋白(BSA)偶联物：AFM1-BSA;黄曲霉毒素Bl (AFB1)单克隆抗体,黄曲霉毒素B1(AFB1)与小牛血清白蛋白(BSA)偶联物：AFB1-BSA作为特异性生物探针,以UCP颗粒作为标记物,采用竞争免疫反应作为检测模型,分别建立免疫层析试纸：黄曲霉毒素Ml上转发光免疫层析检测试纸(UPT-LF-AFM1)及黄曲霉毒素B1上转发光免疫层析检测试纸(UPT-LF-AFB1).2.上转发光免疫层析检测试纸性能评价：1) UPT-LF-AFM1:配置系列浓度AFM1毒素标准品,评价UPT-LF-AFM1包括检测敏感性、线性、精密性在内的检测性能。对实际牛奶及奶粉样品同时进行UPT-LF-AFM1及LC-MS检测,评价UPT-LF-AFM1对实际样品的定性及定量检测能力。2)UPT-LF-AFB1:配置系列浓度AFB1毒素标准品,评价UPT-LF-AFB1包括检测敏感性、线性、精密性在内的检测性能,同时以其余相关生物毒素标准品评价UPT-LF-AFB1检测特异性。将AFB1毒素标准品添加到实际粮食样品中作为检测样品,评价UPT-LF-AFB1对实际样品的检测能力及其耐受性。结果：1.上转发光免疫层析试纸制备：1) UPT-LF-AFM1:将抗AFM1单克隆抗体、羊IgG分别与UCP颗粒共价偶联,用结合物稀释液将两种结合物等比混合,以终浓度1.5mg·mL-1浸泡玻璃纤维作为结合垫。AFM1-BSA与兔抗羊IgG分别配制为0.5 mg·mL-1、0.3 mg·mL-1,以2μL·cm-1喷点于分析膜上作为检测带(T)与质控带(C)。2)UPT-LF-AFB1:将抗AFB1单克隆抗体、兔抗羊IgG分别与UCP颗粒共价偶联,用结合物稀释液将两种结合物等比混合,以终浓度1mg·mL-1浸泡玻璃纤维作为结合垫。AFB1-BSA与羊IgG均配制为0.5mg·mL-1,以2μL·cm-1喷点于分析膜上作为检测带(T)与质控带(C)。2.上转发光免疫层析检测试纸性能评价：1) UPT-LF-AFM1:对奶粉中AFM1检测敏感性可达*** (μg·Kg-1)、在0.1～0.7ppb (μg·Kg-1)间具有较好线性(r=-0.99359,P=0.00641)；牛奶中AFM1检测敏感性可达0.3ppb (μg·L-1),在0.3-0.7ppb((μg·L-1)间具有较好线性(r=-0.99938,P<0.05),每个浓度重复测量的变异系数小于15%。在定性检测评价中,对奶粉检测灵敏度Se=100%,特异度Sp=85%,ROC曲线下面积为0.978±0.036；牛奶检测中灵敏度Se=81%,特异度Sp=88%,ROC曲线下面积为0.891±0.099：与LC-MS结果进行x2检验,无显著差异(P>0.05)。在定量检测评价中,UPT-LF-AFM1对于奶粉及牛奶中AFM1检测均具有较好回收率,与LC-MS比较无明显差异(奶粉：t=0.66,P>0.05；牛奶：t=1.01,P>0.05)。2) UPT-LF-AFB1:对AFB1检测敏感性可达0.03ng·mL-1,在0.03-1000ng·mL-1间具有较好线性(r=-0.98459,P<0.0001),每个浓度重复检测变异系数小于10%。特异性较优,除与结构相似的AFM1存在一定程度的交叉反应外,与赭曲霉毒素、蓖麻毒素、肉毒毒素等七种毒素均无交叉反应。UPT-LF-AFB1对包括花生、大红豆、玉米等在内的15种粮食样本耐受性均较优,均可满足国标中限量标准检测要求。结论：本研究建立了可分别对奶制品中黄曲霉毒素M1及粮食中黄曲霉毒素B1进行快速定量检测的上转发光免疫层析试纸条,操作简便快捷,无需复杂前处理,具有良好的检测敏感性及特异性,对各实际样品耐受性较好,可满足食品安全中对现场快速检测的需求。

关键词： 膏方   无副作用   综合作用   中药制剂   治疗预防   阴阳气血   医院   膏滋   中医师   滋补   营养   体质   经验   进补   疾病   补虚   辨别   保健  

摘要： 问题一:膏方是药吗?吃膏方有没有副作用?答:膏方是一种具有高级营养滋补和治疗预防综合作用的中药制剂,效果好,无副作用.进补的膏方必须由经验丰富的中医师根据个人的体质情况辨别其阴阳气血的盛衰,结合其原有的疾病,遵循补虚益损的原则制定.问题二:医院所开的膏方和市面上买到的,诸如'固元膏'一类的保健膏方是一回事吗?答:市面上买的膏方属于成方膏滋药,而医院开的膏方是属于临方膏滋药.

关键词： 大川芎方   释药行为   中药制剂   体内评价  

摘要： 目的:本课题制备了大川芎方多组分中药制剂，使其与原方制剂释药同步，并对该多组分制剂的评价技术进行了研究。　　方法:　　1.以大川芎方镇痛药效物质基础为研究对象，以挤出滚圆技术制备了不同释药行为的释药单元（调释微丸），采用基于数学集合的释放动力学评价方法优化释药单元的配伍，并以人工神经网络模型进行验证，最终制备了大川芎方多组分中药制剂;2.对大川芎方多组分中药制剂进行有效成分含量测定及体外释药评价，采用不同的基于化学计量学的释药评价方法进行评价，探讨一种组合式释药评价方法对多组分中药制剂评价的适用性;3.对大川芎方多组分中药制剂进行了以代谢组学及内源性物质含量测定的体内药效评价。　　结果:　　1.本课题以原方制剂为参比，制备了大川芎方多组分中药制剂，其组成及配比为:川芎释药单元（川芎调释微丸A）与天麻释药单元（天麻调释微丸E）在4∶9时，释药行为与原方制剂保持基本一致;2.建立了基于数学集合的释放动力学评价方法，使用相对误差ε及异步系数k进行评价时，结果表明制备的大川芎方多组分中药制剂体外释药情况与原方制剂无统计学差异，说明其与原方制剂释药一致;建立了基于自身对照原理的释药评价方法中，在载荷图中，发现洋川芎内酯I、阿魏酸、洋川芎内酯H、天麻苷元可以作为区分其质量的指标性成分;基于组间比较原来的释药评价方法中，在PCA、HCA、LDA三种模式识别方法中均发现20131010批次的大川芎方多组分制剂在三个批次中与原方制剂的释药情况最为接近;最终通过组合式的释药评价方法，确定大川芎方多组分中药制剂与原方制剂释药同步;3.对大川芎方多组分中药制剂进行了体内评价。研究了大川芎方多组分中药制剂以及原方制剂在造模后对内源性物质的变化情况及对大鼠的血清、尿液、脑组织中的整体代谢趋势的影响。结果显示，硝酸甘油造模后，5-HT、5-HIAA、DA、CGRP、NO、NOs在血中均显著上升，5-HT、NOs在大鼠脑干及下丘脑中表达均显著下降，且呈现特异性分布;而给予大川芎方多组分制剂、原方制剂、阳性药后，与模型组相比血中的5-HT、5-HIAA、DA、CGRP、NO、NOs均出现下降趋势，脑中的5-HT、NOs的表达也出现回调趋势。上述结果中，原方制剂组与阳性药组均最接近于正常对照组，其中大川芎方多组分中药制剂低剂量组(其剂量为原方制剂的1/6)与阳性组无统计学差异，大川芎方多组分中药制剂中剂量组（其剂量为原方制剂的1/3）与原方制剂组无统计学差异，说明大川芎方多组分中药制剂与原方制剂药效一致。代谢组学评价结果显示，造模后大鼠的血清、尿液、脑组织的代谢趋势与正常对照组明显不同，给予大川芎方多组分中药制剂以及原方制剂后出现向正常组回调的趋势。结合组学评价与内源性物质含量测定结果说明，制备的大川芎方多组分中药制剂和释药行为和药效与原方一致，且大川芎方多组分中药制剂的给药剂量为原方制剂的1/3。　　结论:制备的大川芎方多组分中药制剂释药情况与药效与原方制剂一致，且给药剂量为原方制剂的1/3，说明制备的大川芎方多组分中药制剂可以降低原方制剂的给药剂量。

关键词： 莲子   黄曲霉毒素B1   赭曲霉毒素A   量子点   生物传感元件  

摘要： 莲子为睡莲科水生草本植物莲Nelumbo nucifera Gaertn.的干燥成熟种子，是我国常用的大宗中药材，由于其极高的药用和滋补价值，在食用和医疗保健中发挥了十分重要的作用，也是我国中药材出口创汇的重要品种之一。该品多产于我国湖北、湖南、福建等南方温湿地区，富含油脂和淀粉，储藏不当，则易发生霉变。前期研究，发现莲子在采收、储藏和流通过程中易受真菌毒素污染，严重影响了莲子药材的质量、安全性和出口创汇。针对莲子真菌毒素污染研究，尤其以黄曲霉毒素和赭曲霉毒素研究最多，其中黄曲霉毒素，阳性率达70％，其中30％的样品中AFB1含量超出了限量标准(5μg/kg)，25％的样品AFs总量超出了限量标准(10μg/kg)，国外亦有莲子中黄曲霉毒素污染的报道，为莲子的“药用”和“食用”带来严重的安全隐患。鉴于莲子药材中黄曲霉素和赭曲霉毒素的污染情况，很有必要建立灵敏准确的快速筛查分析方法，随行监控采收、储藏和流通过程中药材真菌毒素的污染状况，保障药材质量。基于此本论文主要研究内容和结论如下:　　(1) CdSe/CdS核壳量子点的合成。研究采用液体石蜡作为反应溶剂，Cd(DDTC)2为前驱体，以连续壳层前驱体注入方式合成CdSe/CdS核壳型量子点，并采用透射电镜对其形貌特征进行表征。实验优化了油胺和壳层前驱体在整个反应体系中的用量，结果表明，在50％（体积比）油胺和10次前驱体加入量的条件下，成功制备了点状CdSe/CdS核壳量子点。　　(2)基于适配子标记量子点检测OTA。本章首先将油溶性CdSe/CdS量子点转化为可用于生物标记的水溶性量子点。其次，通过硫代碱基修饰的ssDNA作为量子点配体，其功能区含有我们需要标记的适配子，“锚”区作为连接量子点的标记区。通过改变“锚”区硫代碱基的数目，达到控制标记在量子点表面ssDNA数目。最后，我们用优化的ssDNA-CdSe/CdS作为生物传感器，建立OTA的检测方法，结果显示，OTA在1-30 ng/mL范围内线性关系良好(R2＞0.9513)，其线性拟合方程为y=4.75x+323.18，满足限量标准5 ng/mL的检测要求。　　(3)建立间接竞争酶联免疫吸附法快速筛检莲子中黄曲霉毒素B1的污染水平。本法采用间接竞争酶联免疫法测定了经甲醇-水(80∶20)溶液提取后莲子药材中的黄曲霉毒素B1。通过对包被抗原和一抗工作浓度进行优化，建立了最佳ic-ELISA法，结果显示，AFB1在0.171～7.25 ng/mL之间线性关系良好，R2＞0.978，IC50为1.29 ng/mL，回收率在74.73％～126.9％之间，该法检测限为0.128 ng/mL。应用该法检测20批莲子药材，结果显示:1～15号样品（30℃、30％湿度条件下贮藏一年）中AFB1污染水平为1.19～115.3μg/kg，40％样品中AFB1含量超过限量标准，16～20号样品（新购买）中AFB1污染率为40％。对上述结果采用液质联用确证，样品中AFB1与标品具有相同的保留时间、离子碎片、离子碎片丰度比，排除了假阳性的检测结果。表明本研究建立的ic-ELISA分析方法操作简便、灵敏、结果准确，可用于莲子中AFB1的高通量现场快速检测。

关键词： 现代中药制剂药材   饮片炮制   探究分析  

摘要： 中药是我国特有的一种医学诊疗模式,在历史发展过程中发挥着重要作用,中药大多数来源于自然界,属于一种天然物质,毒副作用较小,在治疗慢性病、疑难杂症等方面具有重要意义,本文主要探讨的就是现代中药制剂药材和饮片炮制,在具体论述的过程中首先从现代中药制剂药材入手去分析,其次论述了重要制剂饮片的相关规定,最后论述了中药饮片炮制方法及其作用,并对全文进行总结。

关键词： 中药提取物   周围神经损伤   治疗   应用  

摘要： 周围神经损伤后患者出现肢体肿胀、神经性疼痛、感觉功能消退等,严重影响着患者的身体健康和生活质量。目前中医药治疗在周围神经损伤治疗中取得显著进展,可通过活血通络、化瘀祛痰等方法施治。随着医学技术的不断发展,中药提取物在周围神经损伤治疗中应用越来越广泛。本文主要分析川穹、马钱子、天麻、银杏叶、三七、黄芪、当归、枸杞、人参、牛膝、鹿茸在周围神经损伤治疗中的应用,旨在改善周围神经损伤患者的预后。

关键词： 黄曲霉   黄曲霉毒素B1   曲古抑菌素A   去乙酰化酶  

摘要： 黄曲霉能引起动物和人类患曲霉病和肝癌,其产生的黄曲霉毒素被联合国粮农组织和世界卫生组织认定为I类致癌物质。黄曲霉毒素合成的调控机制尚未研究透彻。本研究发现曲古抑菌素A能够抑制毒素产生,因而对其调控机制进行了初步的研究。通过不同浓度的曲古抑菌素A处理黄曲霉,发现抑制效率与浓度呈正比;同时,曲古抑菌素A也导致生长延迟,产孢增加。为了深入研究抑制剂的作用,本研究选取了对毒素抑制率接近50%的5μM 曲古抑菌素A做进一步研究。在该浓度下,处理黄曲霉不同时间,用TLC定性检测和HPLC精确定量,发现TSA对黄曲霉的作用时间早,作用效果持续且稳定。同时,通过荧光定量PCR检测与产毒相关的基因转录情况,发现结构基因aflC,aqlk,aflO,afQ转录水平都发生下调,而AflR作为毒素合成的转录因子,其转录水平却没有发生显著变化。成功克隆了去乙酰化酶基因hdaA,并在黄曲霉中成功敲除了该基因。敲除菌对生长并无太大影响,但是产毒减少,孢子产量增多,说明HdaA能够特异调节毒素合成和孢子产生。用曲古抑菌素A处理后,敲除菌的毒素产量和野生型相比,发生了明显的上调,但和DMSO对照组相比仍然减少。通过抑制率分析,敲除菌对曲古抑菌素A的响应变弱。本研究为寻找抗黄曲霉毒素药物提供了理论支持,在防控黄曲霉毒素污染,保护环境和提高粮食生产方面,具有重大的理论意义。

关键词： 益视口服液   纯化工艺   中药制剂   质量控制  

摘要： 目的:研究壳聚糖絮凝法、水提醇沉法以及膜分离微滤法3种不同分离纯化工艺对益视口服液的纯化效果，通过比较其君药有效成分的转移率以及纯化前后物理化学参数的变化，筛选出益视口服液的最佳纯化工艺，并且建立该制剂更加完善的质量标准。　　方法:1.按照《中国药典》2010年版（一部）各饮片项下的有关规定，对益视口服液中各药味进行鉴别、检查和含量测定;2.以益视口服液中君药有效成分转移率和干膏得率为评价指标，对水提醇沉工艺、壳聚糖工艺以及膜分离工艺的最佳工艺条件进行优选。壳聚糖以絮凝时的温度、药液酸碱度、药液浓度以及壳聚糖用量为考察因素，采用L9(34)正交表安排试验，以2，3，5，4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷转移率及干膏得率为考察指标，采用方差分析优选出最佳纯化工艺条件;水提醇沉以药液浓度、乙醇加入量、搅拌速度为考察因素，采用单因素试验对其最佳条件进行优选;以进液压力、药液浓度、药液pH值、作为考察因素，采用Design-Expert8.5中的Box-Behnken中心组合试验设计原理及响应面分析法对益视口服液纯化工艺进行优选，用最佳条件再做膜孔径单因素考察，选出最佳孔径。3.通过对不同纯化方法药液前后物理化学参数的测定并分析其物理化学参数之间的相关性，结合实际情况优选出最佳纯化工艺。4.通过对复方中更多药味的薄层色谱鉴别，以及增加含量测定指标，建立制剂的质量标准。　　结果:1.试验所用各饮片均符合《中国药典》2010年版（一部）各饮片项下的质量要求。2.最佳壳聚糖絮凝条件:不调节pH、药液浓度为1.0 g/mL，加入体积比为30％的壳聚糖溶液，于40℃的恒温水浴静置时，二苯乙烯苷转移率可达到83.39％，干膏率降低到20.45％;最佳水提醇沉工艺条件:药液浓度为0.5 g/mL，乙醇加入量为药液3倍，搅拌速度中等强度时，纯化效果最好，但是考虑到经济效益，以及考虑到乙醇加入量2倍和3倍之间差异不大的情况，故而乙醇加入量本实验选用2倍量;最佳膜分离条件:进液压力为1.11 bar，药液浓度为0.0325 g/mL，药液pH为3.87，膜孔径选取0.8μm;3.通过比较纯化前后物理化学参数，发现各因素均有一定规律性，进行向后回归性分析后发现粘度和浊度与各化学参数之间有显著相关性;4.建立了更加完善的益视口服液质量标准。　　结论:以二苯乙烯苷转移率、干膏得率以及纯化前后物理化学参数结合大生产过程中的各种现实因素，最终筛选出益视口服液的最佳纯化精制工艺为水提醇沉工艺。验证试验表明该方法合理可行。并提高完善了该制剂的质量标准。

关键词： 咳嗽变异性哮喘   中药制剂   临床效果  

摘要： 目的探讨在小儿咳嗽变异性哮喘治疗中应用苏黄止咳胶囊与玉屏风颗粒联合疗法的临床效果。方法从我院2012年2月~2014年5月收治的咳嗽变异性哮喘患儿中选取82例为研究对象，采用随机数字表法，将其分为观察组41例，对照组41例，对照组给予西医常规治疗，观察组采用玉屏风颗粒联合苏黄止咳胶囊治疗，观察两组患儿治疗效果，外周血指标变化及不良反应。结果观察组患儿经治疗总有效率为95.12%，同对照组80.49%比较，明显较高(<0.05)；两组患儿治疗前WBC及IgE水平无明显差异(跃0.05)，治疗后观察组同对照组比较，均明显较低(<0.05)；观察组患儿不良反应发生率为9.76%，同对照组24.39%比较，显著较低(<0.05)。结论对于咳嗽变异性哮喘患儿，采用玉屏风颗粒联合苏黄止咳胶囊治疗，疗效确切，可明显改善症状，且安全性高，值得推广。

关键词： 铜绿假单胞菌   联合用药   微量棋盘稀释法  

摘要： 目的研究头孢他啶和双黄连注射液、热毒宁注射液、喜炎平注射液联合应用抗临床分离的铜绿假单胞菌的效果。方法收集并分离临床来源的68株铜绿假单胞菌，采用微量棋盘稀释法，计算头孢他啶分别和3种中药制剂的FIC指数。结果采用头孢他啶和热毒宁注射液联用，以相加(11.76%)和无关(58.82%)作用为主，以协同(10.29%)和拮抗(8.82%%)为次。采用头孢他啶和双黄连注射液联用，以无关(36.76%)和相加(20.59%)作用为主，以协同(11.76%)和拮抗(16.18%)为次。头孢他啶与喜炎平注射液联用抗铜绿假单胞菌无效。结论在临床治疗过程中，可以佐以中药制剂以增强抗菌药物治疗的有效性。