关键词： 中药制剂   质量   稳定性检测   有效期  

摘要： 目的对自制中药制剂质量的稳定性进行监测,验证中药制剂的有效期。方法选取医院临床较为常见的并且具有代表性的6种自制中药制剂,对其进行监测,中药制剂有片剂、洗剂、口服液、软膏,分别为外用和内服两种,为了可以确保药剂的质量,要对药剂进行稳定性检查,在12;4个月的有效期内进行监测药剂的质量。结果 6种自制中药制剂性状外观留样24个月后没有明显的变化,只有金黄软膏的光泽有些许暗淡,金黄洗剂有少许的沉淀情况,轻微摇晃,沉淀散去,没有粘瓶的现象。6种自制的中药制剂中含有的药用成分都已经被检测到,正骨片一号中监测到了香附酮,正骨片二号中监测了续断,骨疏宁片中监测到了熊果酸,补肾健骨口服液监测到了当归,在黄金软膏和黄金洗剂中监测出了大黄酚。依据对应的崩解时限检查方法进行检查三种片剂,三种片剂在12;4个月的有效期内各自的崩解时限都完全符合相对应标准的指定值。结论医院临床的6种常用自制中药制剂,在12个月-24个月的有效期内都具有稳定的质量,对于有效期的设定都非常合理的。

关键词： 稻谷   贮藏   霉菌   黄曲霉毒素B1   近红外光谱   便携式分析仪  

摘要： 贮藏稻谷常受到微生物侵染,尤其典型霉菌和毒素的侵染会引起稻谷品质下降,严重危害稻谷贮藏安全。常规的生化检测方法如平板培养法、薄层层析法、高效液相色谱法以及酶联免疫法在检测周期、操作技术难度或检测成本等方面存在一定的局限和不足。近红外光谱技术具备非破坏性、分析速度快、成本低、稳定性好、污染小等优点,适合于现场检测,是一种潜在的解决手段。本课题利用近红外光谱技术实现了稻谷典型贮藏霉菌和毒素的快速、无损检测。研究近红外光谱分析仪扫描条件、光谱曲线预处理算法、稻谷典型霉菌和毒素近红外特征光谱挖掘、异常样品剔除算法、光谱数据预处理方式。在此基础上构建并优化稻谷典型贮藏霉菌和毒素近红外检测数学模型,建立稻谷典型贮藏霉菌定性和定量识别方法,并基于最优检测数学模型设计便携式贮藏稻谷霉菌和毒素指标分析仪,同时为稻谷贮藏霉菌和毒素实时准确检测提供一种新的方法依据。本文主要研究内容和结论如下:(1)探讨了近红外稳定性检测影响因素。采用近红外光谱分析仪采集贮藏稻谷光谱数据,通过对近红外透射光谱响应的研究,发现稻谷样品在扫描温度为25℃时12个波长点处的相对标准偏差最小,最小为3.026%。确定样品扫描6次时相对标准偏差最小,为9.436%;运用傅立叶变换近红外光谱分析仪采集贮藏稻谷光谱数据,考察了在不同扫描温度、不同分辨率以及不同扫描次数下的近红外透射光谱吸光度的变化,稻谷样品在扫描温度为25℃时,存在5个光谱信息丰富的区域,其波峰处的相对标准偏差最小,最小可为3.180%。通过对每个波数下的吸光度平均值和标准偏差的对比,以及综合考虑光谱的分辨能力和光谱采集时间等因素,确定最佳分辨率为8 cm-1。依据每个波数下的吸光度平均值和标准偏差以及综合考虑光谱信噪比和光谱采集时间等因素,确定最佳扫描次数为64次。结果表明:适宜的近红外光谱扫描条件可以提高透射光谱检测性能,确定的扫描条件可满足后续光谱采集试验要求。(2)探索了基于光谱曲线预处理算法的稻谷霉菌和毒素官能团特征吸收光谱数据挖掘。采用一阶导数、二阶导数、多元散射校正、标准正态变量变换和标准正态变量变换+去趋势五种算法对稻谷霉菌和毒素原始光谱进行了预处理,并结合有机物官能团在近红外区域基频、倍频吸收谱带确定了稻谷霉菌和毒素特征吸收光谱谱带;根据光谱曲线预处理后光谱重叠峰分辨效果,分析比较了不同预处理算法对稻谷霉菌和毒素光谱的影响,一阶导数算法对光谱重叠峰分辨效果最好;根据稻谷样本基团在各吸收峰位和强度上的差异,确定了稻谷霉菌菌落、黄曲霉毒素B1、黑曲霉菌、白曲霉菌、青霉菌、灰绿曲霉菌、黄曲霉菌和上述五种混合霉菌特征近红外光谱谱带。结果表明:确定的最优预处理算法可满足本试验挖掘特征光谱数据的特定要求。稻谷典型霉菌和毒素在近红外谱区的吸收主要是含氢基团的各级倍频与合频的吸收,将为建立、优化近红外检测数学模型提供理论依据。(3)构建了基于近红外光谱的稻谷霉菌和毒素检测数学模型。通过模拟稻谷贮藏试验,建立了贮藏环境温度和含水率对稻谷表面霉菌菌落总数影响规律的数学模型,该模型可以描述和预测稻谷表面霉菌菌落总数在贮藏仓内的变化规律,指导稻谷安全贮藏;采用竞争型酶联免疫法对贮藏稻谷黄曲霉毒素B1含量进行了测定,研究发现稻谷样品黄曲霉毒素B1参考值数据服从正态分布;分析比较了不同异常样品剔除算法即样品浓度残差判别法、样品马氏距离判别法、样品杠杆值和学生化残差判别法算法对模型预测性能的影响,发现所选择的4种算法实现了对霉菌菌落和黄曲霉毒素B1光谱数据异常样本的判别和剔除;采用常规光谱预处理方式和小波分析方式处理稻谷黄曲霉毒素B1光谱数据,确定小波分析为最优预处理方式。分解小波基函数为Daubechies5小波,分解尺度水平为3。优化小波消噪后建模校正集决定系数和预测集决定系数分别为0.872和0.863,校正标准偏差和预测标准偏差分别为2.376和2.352,优化小波消噪模型预测精度高于常规光谱预处理建立的模型预测精度;利用支持向量机算法建立了稻谷黄曲霉毒素B1支持向量机回归模型,确定了基于RBF核函数模型最优参数为c=106,?=0.0015,该模型预测精度明显高于小波消噪后PLSR建模预测精度;选择数量少、有代表性的波长点,应用多元线性回归算法,建立稻谷霉菌菌落和黄曲霉毒素B1近红外预测数学模型。发现多元线性回归算法明显优于BP神经网络算法,多元线性回归可解决全光谱建模计算量大、过拟合等不足;在纯种接种条件下,当霉菌浓度高于3101?个/ml,可将五种贮藏霉菌区分开来;而对于混合接种情况,当霉菌浓度高于5101?个/ml时,才可将五种贮藏霉菌区分开来;稻谷霉菌浓度在5101?cfu/g以下处于正常的储藏状态,纯种水平接种方式下,可利用聚类分析算法实现开始霉变前的稻谷霉菌种类有效鉴别,聚类分析是一种理想的定性识别算法

关键词： 中药制剂   三虎痛风颗粒Ⅱ号   质量控制   定性定量分析   药效学   液相色谱法  

摘要： 目的:三虎痛风颗粒Ⅱ号主要由虎杖、葛根、防己、广金钱草、土牛膝等十余味药材组成。采用现代中药质量控制分析及药效学研究方法对进行定性定量分析及药效实验，为完善三虎痛风颗粒剂质量控制及药效基础实验提供科学依据。　　方法:采用薄层及紫外一可见分光光度法、高效液相色谱法对三虎痛风颗粒Ⅱ号进行定性定量分析实验。采用耳廓打孔法、腹腔注射醋酸溶液、腋窝皮下植入灭菌棉球法、扭体法及对小鼠碳粒廓清功能研究原方提取物抗炎、镇痛作用及免疫作用。　　结果:三虎痛风颗粒Ⅱ号中虎杖、葛根、防己、广金钱草、土牛膝供试品色谱中在与对照药材相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性对照无干扰。UV方法测定总苷浓度在1.92～9.6μg/ml范围内与吸光度呈现良好的线性关系，得到平均回收率为98.29％，RSD为1.24％。三批样品中总苷的含量分别为0.6565mg/g、0.6599 rag/g、0.6579 mg/g。 HPLC法测定大黄素含量，对照品在9.64～77.12μg/ml范围内，峰面积和浓度线性关系良好平均回收率为98.49％，RSD值为1.97％;HPLC法测定虎杖苷含量，对照品浓度在0.048～0.384μg范围内与色谱峰面积呈良好线性关系，得到平均回收率为97.5％，RSD为1.97％。药效学实验表明，原方提取物未见明显毒性反应，按人临床常用剂量130.5g，在人临床常用量的范围内使用是安全的，没有急性毒性。有一定的抗炎、镇痛、提高免疫功能的作用，对尿酸钠盐注射所引起的特异性关节炎有明显抑制作用。　　结论:采用薄层色谱法能有效对三虎痛风颗粒Ⅱ号进行鉴别。初步建立了紫外分光光度法、高效液相法测定虎杖总苷、大黄素及虎杖苷含量方法。药效实验表明原方提取物有抗炎、镇痛、提高免疫功能的作用，未见明显毒性反应，临床常用量的范围内使用是安全的。

关键词： 黄曲霉毒素B1   试纸条   快速检测   中药材   UPLC-MS/MS  

摘要： 目的：基于胶体金免疫层析技术制备一种快速检测莲子、当归、姜粉、陈皮、西洋参、白芍中黄曲霉毒素Bi (AFB1)的试纸条,以期建立简单、快速、经济、高效的黄曲霉毒素B1的检测方法。方法：①采用酶联免疫吸附法(ELLIS A)对制备抗AFB1单克隆抗体效价评估；②采用柠檬酸三钠还原法制备纳米金颗粒,制备的胶体金溶液经目测法、透射电镜扫描法、紫外分光光度计法观察金颗粒分散均匀程度及测定平均粒径大小；③采用间接竞争胶体金免疫层析技术(Indirect competitive colloidal gold immune chromatography technology, ICGT),优化纳米金标记抗体最佳偶联浓度、金标抗体最佳偶联pH和包被在硝酸纤维素膜(NC)上AFB1-BSA(检测线)和二抗羊抗鼠IgG(控制线)浓度；④采用滴加标品溶液法,确定免疫层析试纸条的最低检测限,考察试纸条的性能(特异性、稳定性及重现性)：⑤采用试纸条检测法对市售莲子、当归、姜粉、陈皮、西洋参、白芍样品中AFB1初筛,并采用UFLC-MS/MS法分别对市售6种中药样品中AFB1的含量进行测定。结果：①试纸条制备的研究结果显示：当制备AFB1单克隆抗体浓度为3.8mg/mL,酶联免疫吸附法(ELLISA)抗体效价评估为1：1.0×104时,ICso为0.01ng/mL的时候,抗体效价良好；胶体金溶液在528nm处有最大吸收波长,金颗粒的平均粒径约为40nm；胶体金标记抗体最佳标记浓度为6μg/mL,在pH 8.2下,抗体与胶体金偶联结果最佳,NC膜上最佳吸附抗原浓度(AFB1-BSA,检测线)为0.3mg/mL,二抗羊抗鼠(IgG,控制线)最佳吸附浓度为0.5mg/mL;制备的试纸条最低检测限为2.5ng/mL,检测时间10min,对试纸条特异性的考察结果显示,其性能良好。②试纸条对6种中药中AFB1初筛结果显示：6份莲子、9份当归、23份姜粉、1份白芍、9份陈皮药材样品中,检测出AFB1。且含量超过 2.5ng/mL,10份西洋参样品中未检测出阳性样品。③LC-MS/MS定量分析结果显示：6份莲子样品呈阳性,AFB1的含量分布范围在：4.37-7.82μg/kg；9份当归样品呈阳性,AFB1的含量分布范围在：3.85-10.82μg/kg；23份姜粉样品呈阳性,AFB1的含量分布范围在：2.53-6.82μg/kg；1份白芍样品呈阳性,AFB1的含量分布范围在：2.75μg/kg；9份陈皮样品呈阳性,AFB1的含量分布范围在：2.90-10.2lμg/kg；西洋参样品中未检测出阳性样品或低于定量限。试纸条的检测结果与***/MS结果相比较,提示制备的试纸条灵敏度、稳定性良好,能够满足部分中药中黄曲霉毒素B,初步筛查的目的。结论：本研究所制备的快速检测中药中AFB 1的试纸条具有经济合理、操作简便、结果直观、灵敏度高的优点。与常规的AFB1分析方法相比,试纸条检测省略了繁琐的操作步骤和昂贵的仪器设备。能满足中药材的实时、实地快速检测目的。同时,为建立中药材中AFB1的快速筛查方法提供了参考和依据。但是,由于中药化学成分复杂,基质干扰严重,制备的免疫层析试纸条仅适用于组分与AFB1结构差异性较大中药快速检测。因此,优化示踪物标记免疫蛋白,提高试纸条检测特异性、灵敏度也是今后值得研究的重点。

关键词： 中药制剂   化学药物成分   测定  

摘要： 目的采用高效液相色谱法对抗风湿类中药制剂进行测定,检验其中非法掺入的化学成分。方法以Agilent高效液相色谱仪为本次测定仪器,将测出物色谱保留时间和对照物实施比较,以判断抗风湿类中药制剂中的化学药物成分。结果本次研究检出醋酸泼尼松、地塞米松、双氯芬酸钠以及布洛芬四类物质。结论高效液相色谱法可准确测定中药制剂中的非法化学药物成分,且其检测的灵敏度较高。

关键词： 寄生曲霉菌   油脂   饲料原料   成分   黄曲霉毒素B1  

摘要： 黄曲霉毒素(Afltoxin,AFT)是一类主要由寄生曲霉菌和黄曲霉菌产生的具有致癌、致畸和致突变的次级代谢产物,在黄曲霉毒素所有类型中,以黄曲霉毒素B1(AFB1)毒性最强,已经被世界卫生组织划定为I类致癌物。自然条件下,不同饲料原料中黄曲霉毒素的污染水平存在较大差异,探明不同原料黄曲霉毒素污染水平差异性的原因及可能的作用机制,对原料的选择、贮藏,预防及有效控制原料中黄曲霉毒素的污染,从而保证饲料产品质量安全具有重要理论依据和指导意义。因此,本项目在研究籽粒完整性对寄生曲霉菌产生AFB1影响的基础上,分析影响不同原料AFB1污染水平差异的可能成分,研究这些成分对寄生曲霉菌产生AFB1的影响,阐明不同饲料原料黄曲霉毒素污染水平差异性的原因及可能的作用机制。主要研究内容及结果如下:1.籽粒完整性对寄生曲霉菌产生黄曲霉毒素B1的影响研究试验选取饲料工业生产中的常规饲料原料(玉米、小麦、花生和大豆)及其副产品(玉米粕、小麦粕、花生粕和大豆粕)作为试验材料,接种寄生曲霉菌孢子液,在同等条件下培养15d,分别在0d,5d,10d和15d收集样品,通过高效液相色谱仪测定样品中AFB1的含量。结果表明:1)未灭菌、灭菌处理的粉碎玉米、花生、大豆和小麦及其副产品均随着培养时间的延长,刺激寄生曲霉菌产生AFB1的量增加。同时期未灭菌、灭菌粉碎样品,AFB1产生量均显著高于其对应饼粕类样品(P<0.05)。同时期灭菌粉碎的不同原料及其副产品AFB1含量均高于对应的未灭菌同类样品。2)玉米、小麦、花生和大豆籽粒样品随着培养时间的延长,除表面灭菌处理和高压灭菌处理的籽粒玉米在培养5d时AFB1含量最高外,其它籽粒样品(花生、大豆和小麦)产生AFB1的最高含量均出现在培养15d。寄生曲霉菌在玉米、小麦、花生和大豆籽粒上开始生长的部位不同。同等条件下,观察到寄生曲霉菌最先在籽粒玉米和小麦胚部开始生长,但在籽粒花生和玉米中的生长速度比在大豆和小麦中生长快速。说明籽粒结构及其完整性不同对寄生曲霉菌产生AFB1的影响也不同,这可能是影响寄生曲霉菌在玉米、小麦、花生和大豆中AFB1产生的重要因素。2.油脂种类及其水平对寄生曲霉菌在不同原料中产生黄曲霉毒素B1的影响研究试验以脱脂原料(脱脂玉米粉、脱脂大豆粉、脱脂小麦粉、脱脂花生粉、脱脂玉米胚粉和脱脂小麦胚粉)为试验材料,添加不同油脂(玉米油、花生油、大豆油和小麦油)的不同水平(2%,5%,10%和15%),接种寄生曲霉菌的孢子液,在同等条件下培养15d,分别在0d,5d,10d和15d收集样品,通过高效液相色谱仪测定样品中AFB1的含量。结果表明:1)不同油脂及其添加水平对寄生曲霉菌在对应脱脂原料中产生AFB1的影响。结果显示,所用的6种脱脂样品在培养前10d均随着培养时间和对应油脂添加水平的增加,AFB1含量线性增加,除脱脂玉米粉、脱脂大豆粉、脱脂小麦粉、脱脂小麦胚粉的15%油脂添加水平和脱脂小麦粉的2%、10%油脂添加水平AFB1积累程度在培养10d时最高,其余样品AFB1含量均在培养15d时最高。说明脂肪含量是影响寄生曲霉菌产生AFB1的重要因素,但不同油脂的同一个添加水平在对应的原料中产生AFB1的量和积累速度不同。2)不同油脂及其添加水平对寄生曲霉菌在不同脱脂原料中产生AFB1的影响。试验结果表明,不同油脂的同一添加水平对寄生曲霉菌在同一脱脂原料中产生AFB1的差异相对较小,而同一油脂同一添加水平对寄生曲霉菌在不同脱脂原料中产生AFB1的差异较大。在培养10d时,当四种油脂(大豆油、花生油、玉米油和小麦油)的15%油脂水平添加到脱脂大豆粉中,AFB1含量最大值是最小值的1.4倍。而当大豆油的15%油脂水平添加到不同脱脂样品(脱脂大豆粉、脱脂花生粉、脱脂玉米胚粉、脱脂小麦胚粉、脱脂玉米粉和脱脂小麦粉)中,AFB1含量最大值是最小值的31.3倍。其他油脂的不同油脂水平均出现类似趋势。而且在培养15d时,所有油脂种类及其油脂水平刺激寄生曲霉菌产生AFB1的量与培养10d时产生AFB1的量均出现类似趋势。说明脂肪含量是影响寄生曲霉菌产生AFB1的重要因素,但是脂肪种类对AFB1产生的影响较小。3.不同营养成分对寄生曲霉菌在合成培养基中产生黄曲霉毒素B1的影响及其可能的作用机制研究通过准确分析试验样品的不同营养成分(氨基酸、矿物质、碳和氮含量),选择可能影响黄曲霉毒素产生的成分和水平,以合成培养基为培养基质,接种寄生曲霉菌的孢子液,在同等条件下培养3d后收集样品。通过高效液相色谱仪测定培养液中的AFB1含量,Real-time PCR技术测定黄曲霉毒素生物合成过程中关键基因的表达量。结果表明:1)不同试验样品中各氨基酸(蛋氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、甘氨酸、丙氨酸、苯丙氨酸、亮氨酸和赖氨酸)含量差异在几倍至几十倍。样

关键词： 医院   中药制剂   临床试验   质量管理   模式  

摘要： 中药制剂是临床治疗中重要的药物种类之一,其以中药为基础,通过现代先进的医疗技术,配制成相应的药剂,使更多的患者能够找到合适的药物,促进机体康复。随着中药制剂的广泛应用,其质量问题也逐渐被人们关注。中药制剂质量的高低,直接关系到患者的临床疗效,关乎患者的身体健康及生命安全,因此必须给予高度重视。为了更好地控制医院中药制剂的质量,需加强其临床试验质量管理,推行中药制剂临床试验质量管理模式。本文将深入分析医院中药制剂临床试验质量管理模式,为临床试验质控工作提供重要参考。

关键词： 伏马毒素B1   黄曲霉毒素B1   赭曲霉毒素A   水凝胶胶体晶体微球   多重检测   化学发光  

摘要： 本文是基于水凝胶光子晶体微球和化学发光法建立的一套用于农产品中真菌毒素的多重检测方法。本文研究的主要内容包括水凝胶微球的自组装、水凝胶微球的表征、水凝胶微球表面的化学修饰、单重检测农产品中伏马毒素B1的条件优化及其标准曲线的建立和回收率的测定、多重检测农产品中伏马毒素B1、黄曲霉毒素Bl、赭曲霉毒素A的条件优化及其标准曲线的建立和回收率的测定、用液相色谱串联质谱法检测农产品中真菌毒素的回收率。用水凝胶液填充Si02三维光子晶体微球内部空隙,使微球内部成为实心即得到水凝胶光子晶体微球。再利用扫描电子显微镜、光纤光谱仪对水凝胶微球进行表征。然后在水凝胶微球表面进行化学修饰,增强其与生物分子的结合能力。水凝胶光子晶体微球不仅具有表面积大的优势,还因其内部是实心可以避免非特异性吸附,从而使得检测的背景信号低,灵敏度更高,信号误差更小。在伏马毒素B1的单重检测中优化条件为：抗原包被缓冲液为pH=9.6的碳酸盐缓冲液,抗原包被浓度为1000ng/mL,一抗稀释比率为1:30000,HRP-IgG稀释比率为1：6000。用本法做线性回归分析得线性范围为0.0001-1ng/mL,标准曲线为y=-4037.89x+927.36,R2=0.997。之后对伏马毒素B1单克隆抗体的特异性进行了探究,结果显示特异性强,与伏马毒素B1类似物无明显交叉反应。将不同浓度的伏马毒素Bl添加到三种不同谷物中,分别测定其回收率,其回收率分别为：大米92.30±4.70%-107.59±±8.07%、玉米78.91±11.20±-99.70±0.42%、小麦78.60±0.71%-128.45±6.34%。在多重检测中,FBI、AFB1、OTA三种毒素的线性范围为：0.001-10ng/mL、0.0001-1ng/mL和0.0001-1ng/mL。线性方程分别为：y=-2606.027x+3170.360(R2=0.995)、 y=-2462.584x+1098.877(R2=0.996)、y=-2839.9661x+2163.278(R2=0.997).对大米、玉米和小麦三种农产品中分别添加FB1、AFB1、OTA标准品进行回收率测定,各真菌毒素回收率分别为,在大米中：FB174.96±5.82%-87.89±8.34%、AFB1 86.54± 7.42%-95.84±8.31%、OTA 79.29±4.99%-101.03±7.26%;在玉米中：FB1 78.95±1.97%-101.41±9.23%、AFB1 87.27±5.11%-97.07±8.60%、OTA 82.79±4.53%-95.92±8.83%;在小麦中：FB1 88.56±7.64%-104.87±5.77%、AFB1 86.53±5.35%-102.80±5.37%、OTA 84.59±6.34%-92.84±5.79%。本法与液质联用法对比可知,液质联用法测得回收率与本法检测结果基本一致,20份谷物样品中毒素的检测结果的相关性方程及相关性系数分别为：FB1 y=1.105x+0.084(R2=0.945);AFB1 y=1.127x-0.037(R2=0.905);OTAy=1.074x-0.089 (R2=0.968);进一步验证了本法用来进行农产品中真菌毒素检测的可行性。

关键词： 金葛解毒散   黄曲霉毒素B1   奶牛饲料  

摘要： 奶牛饲料黄曲霉毒素污染问题严重,不仅引起奶牛繁殖率、生产性能和原料奶质量降低,而且引发更严重的食品安全问题,严重危害着我国奶业的可持续发展和消费者的生命健康。为了研究金葛解毒散对奶牛饲料黄曲霉毒素污染的预防效果,该试验选取中国荷斯坦奶牛24头,平均分为6组,分别为健康对照组、阳性对照组以及金葛解毒散低、中、高剂量组和霉菌脱组。在不同时间段进行血液肾功能、抗氧化功能和免疫学功能生化指标的检测;试验末期检测乳汁黄曲霉毒素M1的残留量。试验结果显示:金葛解毒散可以显著降低肾功能指标,可以显著升高抗氧化指标活性,可以显著提高免疫功能指标,乳汁中黄曲霉毒素M1的残留量显著减少,且高剂量组变化最明显。综上所述,金葛解毒散能够增强动物机体抗氧化功能、提高免疫力和肾功能,具有降低饲料黄曲霉毒素污染毒性的作用,且饲料添加量最适宜为75 g/（头·d）。该试验为金葛解毒散预防奶牛黄曲霉毒素B1中毒的推广提供研究依据,为减少经济损失,提高原料奶的质量,加快奶牛业的发展奠定研究基础。

关键词： 黄曲霉毒素   模拟表位   免疫原性   食品安全   预防策略   动物中毒  

摘要： 黄曲霉毒素（Aflatoxin，简称AFT）主要是由黄曲霉、寄生曲霉和特曲霉这几类真菌产生的真菌次级代谢产物，具有强毒性和强致癌性，所以被国际肿瘤研究机构定义为IA类有毒物质。目前经鉴定分离出来的毒素类别达到20余种，它们在结构上类似，其中以黄曲霉毒素B1（Aflatoxin B1，简称AFB1）的毒性最强。为了消除AFB1含量的超标对食品安全影响，各个国家均对AFB1制定了相应产品的最高限量标准。　　自噬菌体展示技术产生以来，模拟表位的概念应运而生，两项技术密不可分，模拟表位可谓是最具发展潜力的一个方向，运用噬菌体展示技术模拟抗原表位结构和化学特征得到的小分子肽，可运用于生命科学的许多领域，有关模拟表位的免疫原性的问题也日益受成为业界关注的焦点。　　本研究采用噬菌体展示技术，利用7肽库淘选AFB1模拟表位并成功获得了AFB1模拟表位菌株。以抗AFB1单克隆抗体为靶分子，从噬菌体随机7肽库中进行4轮亲和淘选。从第4轮噬菌斑平板上随机挑选18个噬菌斑，经phage-ELISA和竞争ELISA鉴定，获得了14个能与靶标结合的阳性噬菌体，其中13个表位能被黄曲霉毒素B1抑制，分别为Phage1(P1)、P2、P4、P5、P8、P10、P11、P12、P13、P14、P15、P17和P18。分别进行DNA序列测定并翻译成相应的氨基酸序列。经过分析比对发现，获得的模拟表位中七个为相同序列。分别绘制6个不同序列的模拟表位的抑制曲线，结果显示 P10（YRRHEKD）抑制效果最好，得到的IC50值为20.41ng/mL，检测线性范围为1.5~50 ng/mL。　　鉴定模拟表位的免疫原性并获得能诱导机体产生抗体的模拟表位。用1012 pfu/只的P10号噬菌体作为免疫原免疫Balb/c小鼠，二免后14天采集小鼠多抗血清，分别采用P10号噬菌体和AFB1-OVA为包被原。其中AFB1-OVA包被原时，小鼠多抗血清效价最高能够达到1:800，产生了能够与 AFB1人工抗原发生反应的抗体。　　本研究成功获得了一个黄曲霉毒素B1的模拟表位，该表位具有一定的免疫原性，能够诱导机体产生针对黄曲霉毒素B1人工完全抗原的抗体。本研究对预防动物AFB1中毒具有重要意义，这一免疫预防策略对于防控其他真菌毒素也具有重要借鉴意义。