关键词： 肺结核   复治   化疗   中药   免疫调节剂   成本-效果分析  

摘要： 目的 观察中药制剂、免疫调节剂联合化疗与单纯化疗,三种方案治疗复治涂阳肺结核的临床疗效及不良反应。并进行药物经济性评价,寻找最佳治疗方案。方法选取2010年1月—2012年12月浙江省中西医结合医院住院及门诊复治肺结核痰菌阳性患者307例,按照治疗方案将患者分为3组,对照组99例、中药组105例、免疫组103例。3组治疗方案均为强化期3个月,巩固期5个月。对照组：3HL2ZV/5HL2V(H:异烟肼,L2：利福喷丁,Z：吡嗪酰胺;V：左氧氟沙星);中药组：3HL2ZV/5HL2V+康复新液10 mL/次,3次/d,口服;免疫组：3HL2ZV/5HL2V+母牛分枝杆菌菌苗22.5 μg／次,1次／2周,肌肉注射。观察3组治疗2周、3个月、8个月后的效果,包括症状改善情况、痰菌阴转情况、病灶吸收情况、空洞闭合情况、不良反应情况。并采用成本-效果分析法进行药物经济学评价。结果中药组和免疫组的8个月痰菌阴转率分别为93.3%、92.2%,3个月病灶吸收率为82.9%、78.6%,两项指标与对照组80.8%、50.5%比较,具有统计学意义(P<0.05)。中药组8个月空洞关闭率较对照组有明显差异(P<0.05)。中药组、免疫组、对照组症状消失率分别为65.4%(287/439)、62.3%(259/416)、24.8%(84/339),其中中药组、免疫组较对照组均增高(P<0.05);中药组与免疫组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。不良反应发生率对照组为45.5%(45/99),中药组为33.3%(35/105),免疫组为38.8%(40/103),差异无统计学意义(P>0.05)。治疗成本中药组、免疫组和对照组分别为10 485.5、8734.4、7832.3元。增量成本-效果中药组和免疫组分别为212.3、79.1元。结论复治肺结核患者采用中药或免疫调节剂联合西药化疗,能够提高机体免疫力,加速痰结核菌阴转和病灶吸收,提高空洞闭合率,降低不良反应,且中药组效果更明显。从成本-效果分析,免疫组较中药组更能有效地控制成本,为最佳治疗方案,具有广泛的应用价值。

关键词： 鸡大肠杆菌病   银翘口服液   中药抑菌   药效   方法学考察   优化工艺  

摘要： 中兽医学具有数千年的悠久历史,其理论源于生产和医疗实践,在不断完善的发展过程中,逐步形成了独特的比较系统完整的医学理论体系,具有不可超越的优势。许多经典方在临床动物疾病的防治应用中收到良好的效果。银翘口服液是在法定处方银翘散的基础上研制而成,将传统经典方银翘散由散剂剂型,应用现代制药技术研制成为口服液剂型,研究发现改型后的液体剂型与传统散剂比较,具有使用方便、吸收快、疗效高等优点。药理学研究表明,银翘散具有的抗菌抗病毒、抗炎抗过敏、解热镇痛作用活性,并能调节机体免疫功能。在生产工艺研究中,为确保制备工艺的科学性,采用L9(34)正交试验设计表,以挥发油的提取量和水提液中绿原酸含量作为指标,分别对挥发油提取和水提工艺进行优化,最终得到了银翘口服液的最佳制备工艺,为进一步质量控制研究奠定基础。质量控制研究中,对制剂中药材进行了薄层色谱鉴别研究,试验表明金银花、连翘、牛蒡子、薄荷、荆芥、甘草有效成分在TLC色谱中斑点清晰,重现性良好,阴性无干扰,可快速确定银翘口服液中以上六味中药的存在。对金银花中重要的活性成分绿原酸进行了HPLC测定方法的研究,建立了理论塔板数高、分离度好的优化色谱条件,经过精密度考察、稳定性考察、重复性考察等方法学验证,验证了该方法的准确度和重现性,最终确定以绿原酸作为标志物对产品质控。实验室抑菌实验:以5株鸡源大肠杆菌临床分离株和禽*** O78标准株(C84008)为供试菌,牛津杯法测定银翘口服液体外抑菌活性;以试管二倍稀释法测定其最小抑菌浓度(MIC)。结果显示银翘口服液对鸡大肠杆菌具有较好的抑制作用,对大肠杆菌标准株的MIC为32 mg/mL,对5株大肠杆菌临床分离株的MIC分别为52、52、83、83、104 mg/mL。银翘口服液和银翘散对人工感染鸡大肠杆菌病的治疗试验,以编号11-29的鸡源大肠杆菌临床分离株为攻毒菌株,攻毒剂量为3.0×108CFU/只,银翘口服液为治疗组,银翘散为对照药物组。结果显示银翘口服液高剂量组、中剂量组的死亡率与攻毒对照组比较,差异极显著(p<0.01),银翘口服液低剂量组、银翘散对照组的死亡率与攻毒对照组比较,差异显著(p<0.05)。治疗有效率、死亡率以及体增重,银翘口服液高、中剂量组治疗效果均优于银翘散对照组,差异显著(p<0.05),银翘口服液低剂量组与银翘散对照组比较,无显著差异。

关键词： 中药制剂   HPLC   多指标含量分析方法   丹参素   原儿茶醛   丹酚酸B   芍药苷   阿魏酸   中药制剂   HPLC   多指标含量分析方法   丹参素   原儿茶醛   丹酚酸B   丹参酮ⅡA   芍药苷   阿魏酸   中药制剂   HPLC   多指标含量分析方法   丹参素   原儿茶醛   丹酚酸B   芍药苷   阿魏酸   葛根素   中药制剂   HPLC   多指标含量分析方法   丹参素   原儿茶醛   丹酚酸B   芍药苷   阿魏酸   盐酸小檗碱   中药制剂   HPLC   多指标含量分析方法   丹参素   原儿茶醛   丹酚酸B   葛根素   盐酸小檗碱   中药制剂   HPLC   多指标含量分析方法   葛根素   虎杖苷   阿魏酸   大黄素   中药制剂   HPLC   多指标含量分析方法   丹参素   原儿茶醛   丹酚酸B   大黄素  

摘要： 本文通过对精制冠心颗粒、精制冠心片、利脑心胶囊、心宁片、妇炎康片、消渴平片、养阴降糖片及肾衰宁胶囊等8种中药多指标成分的提取和含量测定方法的研究,应用多波长高效液相分析法对丹参素、丹酚酸B、原儿茶醛、芍药苷、阿魏酸、大黄素、虎杖苷、盐酸小檗碱及葛根素进行定量分析,建立更加经济、可靠、准确、专属性强的质量控制方法。本论文共分为八部分,主要研究内容包括:第一部分HPLC法测定精制冠心颗粒中5种成分的方法研究目的:通过色谱条件的优化,建立一种同时测定精制冠心颗粒中丹参素、丹酚酸B、原儿茶醛、芍药苷和阿魏酸含量的多指标分析方法。方法:采用Agilent Zorbax Eclipse XDB-C18(150mm×4.6mm,5μm)色谱分离柱,流动相为乙腈(A)-甲醇(B)-0.5%H3PO4溶液(C),采用梯度洗脱(0min:A4%,B1%,C95%;7min:A4%,B2%,C94%;10min:A15%,B5%,C80%;30min:A22%,B11%,C67%;40min:A30%,B15%,C55%),流速:1.0m L·min-1,柱温:30℃,进样量:10μL,波长选用:280nm、230nm、320nm。结果:丹参素、原儿茶醛、丹酚酸B、芍药苷和阿魏酸分别在33.07～530.00μg·m L-1、2.81～44.93μg·m L-1、187.20～2995.20μg·m L-1、23.70～379.39μg·m L-1和0.20～3.12μg·m L-1范围内线性关系良好,加样回收率为98.90%、98.95%、98.91%、98.59%和97.76%。三个不同厂家的丹参素、原儿茶醛、丹酚酸B、芍药苷和阿魏酸的平均含量为1.6330 mg·g-1、1.6640 mg·g-1、1.6523 mg·g-1,0.2131 mg·g-1、0.2135 mg·g-1、0.2143 mg·g-1,11.7580 mg·g-1、11.7529 mg·g-1、11.7425 mg·g-1,2.9067 mg·g-1、2.9018 mg·g-1、2.8995 mg·g-1,6.0453×10-3 mg·g-1、5.9989×10-3 mg·g-1、5.8555×10-3 mg·g-1。结论:本方法分离效果好、操作简单、方便,能达到较好的控制产品质量的目的。比较了不同生产厂家精制冠心颗粒的5种成分含量,但差别不大。第二部分HPLC法测定精制冠心片中6种成分的方法研究目的:通过色谱条件的优化,建立一种同时测定精制冠心片中丹参素、原儿茶醛、丹酚酸B、丹参酮ⅡA、芍药苷和阿魏酸含量的多指标分析方法。方法:采用Agilent Zorbax Eclipse XDB-C18(150mm×4.6mm,5μm)色谱分离柱,流动相为乙腈(A)-甲醇(B)-0.5%H3PO4溶液(C),采用梯度洗脱(0min:A4%,B1%,C95%;7min:A4%,B2%,C94%;10min:A15%,B5%,C80%;30min:A22%,B11%,C67%;40min:A30%,B15%,C55%;41min:A80%,C20%;55min:A80%,C20%),流速:1.0m L·min-1,柱温:30℃,进样量:10μL,波长选用:280nm、230nm、270nm、320nm。结果:丹参素、原儿茶醛、丹酚酸B、丹参酮ⅡA、芍药苷和阿魏酸分别在16.54～530.00μg·m L-1、1.44～44.93μg·m L-1、93.60～2995.20μg·m L-1、6.56～210.00μg·m L-1、11.86～379.39μg·m L-1、0.40～12.48μg·m L-1范围内线性关系良好,加样回收率为98.69%、98.49%、98.06%、98.90%、99.33%、98.24%,比较了3个不同厂家中6种成分的含量,丹参中的丹参素、原儿茶醛、丹酚酸B和丹参酮ⅡA含量相差较大。结论:此方法分离效果好、操作简单、方便,能达到较好的控制产品质量的目的。不同生产厂家精制冠心片的6种成分含量有很大差异。第三部分HPLC法测定利脑心胶囊中6种成分的方法研究目的:通过色谱条件的优化,建立了一种同时测定利脑心胶囊中丹参素、丹酚酸B、原儿茶醛、芍药苷、阿魏酸和葛根素含量的多指标分析方法。方法:采用Agilent Zorbax Eclipse XDB-C18(150mm×4.6mm,5μm)色谱分离柱,流动相为乙腈(A)-甲醇(B)-0.5%H3PO4溶液(C),采用梯度洗脱(0min:A4%,B1%,C95%;7min:A4%,B2%,C94%;10min:A10%,B5%,C85%;35min:A20%,B10%,C70%;45min:A35%,B10%,C55

关键词： 五味子提取物   大黄提取物   黄连提取物   青蒿素提取物   长春花提取物   有机溶剂残留量   气相色谱法  

摘要： 摘 要目的:近年来,随着中药提取物在医药、食品、化妆品及保健品等方面的广泛应用,各国对中药提取物的质量标准的要求日趋严格。中药提取物中残留有机溶剂系指在中药提取物生产过程中使用或产生的而未能完全除去的有机挥发性化合物。残留有机溶剂是一种潜在性的药物毒性危险,不仅对中药提取物的稳定性有影响,更重要的是危害使用者身体健康。残留有机溶剂的毒性或致癌作用日益引起医药界的重视,人用药物注册技术要求国际协调会议(ICH)指导原则指出:“在药物生产过程中尽量避免一、二类有机溶剂的使用,维护中药绿色、环保、健康的形象”。实际中需对其残留溶剂含量进行测定,并做出合理的判断,以保证中药提取物的质量。在残留溶剂分析沿革中,检测方法多种多样。目前气相色谱法普遍被各国药典所采用。本文就是采用顶空毛细管柱气相色谱法对大黄提取物、黄连提取物、五味子提取物、青蒿素提取物以及长春花提取物中甲醇、乙醇、乙酸乙酯、二氯甲烷、三氯甲烷等有机溶剂残留量进行检测分析。目前常见利用顶空气相色谱法测定药物中有机溶剂残留量的相关报道,但对中药提取物中有机溶剂残留量的测定的研究还在发展阶段。中药提取物大都是成分复杂,有已知成分又有未知成分,水溶性较差。在实验中,以这五种提取物的成分特性和被测残留溶剂的特性以及它们之间的相互影响为前提,通过多次试验,获得了适合本次试验的最佳溶剂、顶空条件和色谱条件。本研究旨在为中药提取物的质量标准提供数据支持。方法:1收集大黄提取物、黄连提取物、五味子提取物、青蒿素提取物和长春花提取物大黄提取物、五味子提取物、青蒿素提取物来源于长沙中仁生物科技有限公司;黄连提取液为石家庄第四制药厂;黄连提取物浸膏为自制;长春花提取物来源于陕西帕尼尔生物科技有限公司2采用GC7900气相色谱仪和DK-3001B型半自动顶空进样器测定五种中药提取物中有机溶剂的残留量。3采用气相色谱法。色谱柱为ZB-1毛细管柱,检测器为氢火焰离子化检测器,柱温为程序升温,载气为氮气,进样口温度为200℃,检测器温度为230℃。分离测定大黄、五味子和黄连提取物中乙醇和乙酸乙酯残留量。4采用气相色谱法。色谱柱为DB-624毛细管柱,检测器为氢火焰离子化检测器,柱温为程序升温,载气为氮气,进样口温度为200℃,检测器温度为220℃。分别分离测定青蒿素提取物中乙酸乙酯和氯仿的残留量和长春花提取物中甲醇、乙醇、二氯甲烷、三氯甲烷的残留量。5采用D7900色谱工作站对色图谱进行分析;采用excel统计软件分析数据。结果:1在该色谱条件下,测得五味子提取物、大黄提取物和黄连提取物中乙醇和乙酸乙酯的线性范围分别为0.0255～1.02mg/m L(r2=0.9985)和0.0258～1.03mg/m L(r2=0.9998);五味子提取物中乙醇和乙酸乙酯的平均回收率为98.9%和110%;黄连提取物中乙醇和乙酸乙酯的平均回收率为102%和111%、大黄提取物中乙醇和乙酸乙酯的平均回收率为101%和99.1%(RSD均<5.0%);3种样品中2种有机溶剂残留量均符合ICH要求。2在该色谱条件下,测得青蒿素提取物中乙酸乙酯和氯仿两溶剂分别在0.429～21.5mg/m L(r2=0.9956)和5.19～260μg/m L(r2=0.9997)范围内线性良好,平均回收率分别为99.0%和99.0%,RSD分别为1.97%和3.21%,青蒿素提取物中上述有机溶剂残留量均符合ICH和GMP要求。3所建立的长春花提取物中残留溶剂测定方法中各溶剂峰分离良好,甲醇、乙醇、二氯甲烷和三氯甲烷四种溶剂线性范围分别为0.299～5.98mg/m L(r2=0.9998)、0.490～9.80mg/m L(r2=0.9993)、0.0681～1.36mg/m L(r2=0.9991)、9.04～181μg/m L(r2=0.9992),RSD均<5%,平均回收率分别为101%、104%、100%、111%。结论:1用DMF溶解五味子、大黄和黄连提取物,能使残留溶剂更好挥发,而且不干扰测定结果,几乎对色谱系统无污染,是理想顶空溶剂。所建立的方法简单、灵敏度高、结果准确,可用于三种提取物中有机溶剂残留量的测定。2应用顶空气相色谱、氢火焰离子化检测器和DB-624毛细管色谱柱检测青蒿素提取物和长春花提取物中的溶剂残留量。通过方法学验证,线性关系良好,分离度高,回收率高。所建立的方法准确可行。青蒿素提取物样品中氯仿未检出,乙酸乙酯含量低于ICH规定值。长春花提取物样品中甲醇和二氯甲烷含量未超出ICH规定值,乙醇和三氯甲烷含量已超出ICH规定值。

关键词： 黄曲霉毒素B1   鸡原代肝细胞   山豆根多糖   干扰   硒   细胞色素 P450  

摘要： 黄曲霉毒素（Aflatoxin,AF）可由多种曲霉菌属的真菌产生,主要为黄曲霉菌和寄生曲霉菌。黄曲霉毒素B,（AflatoxinB,,AFB1）,是人类,鸟类,猪,鱼类和啮齿类等许多动物的强力致癌毒物。AFB1的靶器官是肝脏,它能诱导肝脏细胞的DNA、蛋白质及脂质损伤,并导致癌症发生。AFB1本身无毒,但可经过细胞色素P450（cytochrome P 450,CYP450）代谢生成有毒的中间产物（exo-AFB1-8,9-epoxide,exo-AFBO）,从而产生毒性,AFB,引起的氧化应激是其毒性作用的重要途径之一。目前已报道多种化合物可抵抗AFB,的氧化应激反应如维生素A、C和E以及丁香酚等。硒和山豆根多糖（Bush Sophora Root polysaccharides,BSRPS）分别作为动物体必需营养和中国传统中药成分,二者的抗氧化能力亦较为突出。目前,本实验室通过体外培养技术优化分离得到了鸡原代肝细胞,并于体外环境下验证了硒的抗氧化作用可缓减AFB1的肝毒性,而关于硒在体内环境下对AFB,的肝毒性是否有抵抗作用还不得而知,因此本研究就不同硒源在体内环境下对AFB,的致鸡肝毒性是否有缓减作用及其机制进行了探究;而山豆根多糖对黄曲霉毒素B,氧化应激损伤的影响研究尚未见报道。因此,本课题以此为切入点,拟探讨山豆根多糖和硒对黄曲霉毒素B,的肝毒性作用的缓减机制,主要内容如下:试验一.黄曲霉毒素B1对鸡原代肝细胞的损伤鸡原代肝细胞是由本实验室所优化的胶原酶灌流消化法而分离得到的,经过台盼蓝染色测得每个肝脏经消化分离获得的细胞的存活率为94%±0.6%（n=3）;每消化一个肝脏组织可获得的活细胞总数为（10.7±0.4）×108个（n=3）。用DMEM培养液将细胞稀释到5×105个/mL的浓度,以200 μL/孔和3 mL/孔的细胞量分别接种于96孔板和6孔板,并在37℃、5%CO2培养箱中培养,通过MTT法检测肝细胞活性的OD值和细胞培养液中LDH、ALT和AST等酶的活力,用于测定AFB1损伤细胞的最低致毒浓度。结果发现:肝细胞的活力OD值随着毒素浓度的增加而降低,细胞培养液中LDH、ALT和AST等酶活力随着毒素浓度的增加而升高;而当AFB1的浓度为0.05μg/mL时,这几个指标虽较空白组高但差异不显著。这表明AFB,对鸡原代肝细胞有损伤作用,且最低致毒浓度为0.05 μg/mL。试验二.山豆根多糖缓减黄曲霉毒素B1对鸡原代肝细胞的毒性作用山豆根多糖是根据已有文献方法提取的,测定其含量后用PBS稀释到5 mg/mL的浓度备用。以200 μL/孔和3 mL/孔的细胞量,将5×10°个/mL的鸡原代肝细胞分别接种于96孔板和6孔板,并在37℃、5%C02培养箱中培养,分别用于测定山豆根多糖的安全浓度及其对AFB1作用下的鸡原代肝细胞的影响。通过检测肝细胞的MTT和细胞培养液中LDH、ALT和AST等酶的活力,结果发现:1600 μg/mL的山豆根多糖能引起细胞损伤,而100、200、400和800 μg/mL的山豆根多糖浓度是安全的,且山豆根多糖对AFB,作用下的鸡原代肝细胞的有效保护浓度为200、400 和 800μg/mL。试验三.山豆根多糖缓减黄曲霉毒素B1肝脏毒性的作用机制山豆根多糖的有效保护浓度确定后,以3 mL/孔的细胞量将5×105个/mL的鸡原代肝细胞接种于6孔板,并在37℃、5%CO2培养箱中培养,测定肝细胞的抗氧化能力、CYP450 1A5、3A37和SOD2的mRNA水平。结果显示:与空白组相比,AFB1能显著降低鸡原代肝细胞内SOD2与GSH-Px的活性和SOD2的mRNA水平,而显著升高MDA的量和CYP450 1A5的mRNA水平,这说明AFB1能降低鸡原代肝细胞的抗氧化能力;而与AFB,组相比,加入山豆根多糖能显著逆转AFB1对鸡原代肝细胞的抗氧化能力的影响,且对SOD2的逆转效果更显著。为了探究山豆根多糖缓减AFB1对肝细胞的氧化损伤的机制及其与肝细胞内SOD2之间的关系。通过干扰肝细胞中的SOD2基因,检测肝细胞中CYP450 1A5 mRNA水平,并比对干扰前后肝细胞的活性和释放于细胞外的LDH、ALT和AST的酶活力。结果显示:SOD2被干扰后,在BSRPS + AFB1作用下的肝细胞CYP45O1A5mRNA水平升高,细胞活性降低,而细胞外液LDH、ALT和AST酶活力增加。这说明SOD2被干扰后,AFB1对肝细胞的氧化损伤加重,而山豆根多糖可能主要是通过提高SOD2的活性从而降低CYP450 1A5的水平来缓解AFB1对肝细胞的氧化损伤。试验四.不同硒源缓减黄曲霉毒素B1肝脏毒性的作用机制为了探讨不同硒源对黄曲霉毒素B,（AFB,）致鸡肝毒性的影响。选用1日龄健康ROSS 3

关键词： 单克隆抗体   制备工艺   黄曲霉毒素B1   金黄色葡萄球菌C型肠毒素  

摘要： 生物毒素(biological toxins)是生物体分泌的有毒代谢化学物，包括动物、植物、海洋生物和微生物等产生的对其它生物物种有毒害作用的各种化学物质。微生物污染食品，在适宜的条件下产生毒素，这些毒素伴随着食物被人们食用后引起的一系列急慢性中毒称为微生物毒素性食物中毒。微生物食物中毒常见多发，以真菌和细菌毒素污染最普遍。　　黄曲霉毒素(Aflatoxins，AFs)是自然界中已发现的毒性最强的真菌毒素，主要是由黄曲霉(Aspergillus flavus)、特曲霉(Aspergillus nomius)、寄生曲霉(Aspergillus parasiticus)等产生的次生代谢产物。黄曲霉毒素及其衍生物有20多种，其中常见的黄曲霉毒素分别是B1、B2、G1、G2、M1、M2，毒性大小排列顺序为B1＞B2＞G1＞M1＞G2＞ M2[7-8]。黄曲霉毒素B1的毒性最大，致癌力最强。黄曲霉毒素的检测方法包括薄层色谱法、高效液相色谱法、酶联免疫吸附法、胶体金检测技术等，其中酶联免疫吸附测定法具有特异、灵敏、简单、经济、耗时短等优点。　　金黄色葡萄球菌肠毒素(Staphylococcal enterotoxins，SEs)是由金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）分泌的外毒素，常引发食物中毒。目前已经发现的SEs大约有20种，其中SEA和SEB研究较多，对于有三个亚型的SEC研究较少。金葡菌肠毒素的检测方法主要有动物试验鉴定法、免疫学方法和针对毒素编码基因的分子生物学方法。其中，肠毒素检测多采用免疫学检测方法。　　本研究旨在(1)制备高亲和力和特异性的AFB1单克隆抗体，建立AFB1间接竞争ELISA检测方法，并试用于实际样品检测;(2)制备高亲和力和特异性的SEC单克隆抗体和多克隆抗体，并建立SEC的ELISA检测方法。　　1.利用碳二亚胺法制备黄曲霉毒素B1完全抗原AFB1-BSA，经紫外分析和ELISA鉴定偶联成功，蛋白浓度为2.5mg/mL，测定其偶联比为8.4∶1～9.3∶1，获得了具有较好偶联比的完全抗原。　　2.通过免疫动物、细胞融合、克隆化筛选等技术获得了4株AFB1单克隆抗体，分别为1D6、2D9、3B9、1H4，测定效价均可达1∶204800。腹水纯化效果良好，测定腹水得率最高的3B9的抗体亚类为IgG1，亲和力常数为2.2×109L/mol。　　3.利用3B9细胞株分泌的单抗建立了AFB1间接竞争ELISA检测方法，检测线性范围为1.04～25ng/mL，检测限为1.04ng/mL，半数抑制率(IC50)为6.03ng/mL，批内和批间变异系数均小于10％，平均加标回收率在线性范围内可达85％～120％，变异系数均小于10％。通过饲料样品检测证实，该方法与进口ELISA试剂盒检测一致性良好，可用于实际样品中黄曲霉毒素B1的快速筛检，并为黄曲霉毒素B1快速检测试剂盒的研制奠定了基础。　　4.利用原核表达技术获得了重组蛋白SEC，免疫Balb/c小鼠和新西兰大白兔后获得了SEC单克隆抗体和多克隆抗体。6株SEC单克隆抗体分别为2B10、2C10、4G9、2E7、3B11、2C12，腹水效价可达1∶204800。多克隆抗体的效价可达1∶102400。测定6株单抗的相对亲和力大小为2C12＞2C10＞3B11＞2E7＞4G9＞2B10，其中2C12的亲和力常数为3.19×109L/mol，2B10的亲和力常数为5.74×108L/mol。测定亲和力最佳的2C12的抗体亚类为IgG2a。　　5.分别利用SEC单克隆抗体和多克隆抗体建立SEC间接ELISA检测方法，其中利用SEC单抗获得的检测线性范围为62.5-1000ng/mL，检测下限为52ng/mL，利用SEC多抗获得的检测线性范围为250-8000ng/mL，检测下限为158ng/mL。该结果为进一步研究SEC的免疫检测方法提供了基础。

关键词： 藿香正气液   藿香正气水   中药制剂   消化不良   水土   解表化湿   家庭药箱   胃肠道   理气和   高峰期   症状   呕吐   旅游   价格   功效   功能   腹泻  

摘要： 对于很多人的家庭药箱来说,藿香正气制剂是长期“住客”之一.价格便宜、功能多样是它受到许多人青睐的原因,因此也流传了很多关于该中药制剂的诸多神奇功效.那么事实到底是怎样的呢? 水土不服 说法:夏天是旅游的高峰期,外出时如果水土不服,出现消化不良、呕吐、腹泻等胃肠道不适,带上一盒“藿香正气液”有备无患.藿香正气水(液)具有解表化湿、理气和中的作用,出现上述症状时服用能够缓解.

关键词： 黄曲霉毒素B1   液相色谱-串联质谱法   凡纳滨对虾  

摘要： 采用液相色谱-串联质谱法,测定了凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)中黄曲霉毒素B1。采用选择离子扫描方式(SRM),ESI正离子模式检测,黄曲霉毒素B1的分子离子峰为(m/z)313.00,定量离子为(m/z)285.1,定性离子为(m/z)269.1、241.1。样品经过乙酸乙酯提取,正己烷净化,以乙腈0.5mmol/L乙酸铵水溶液(含0.1%甲酸)为流动相进行梯度洗脱。结果表明,黄曲霉毒素B1在0-5ng/m L范围内线性关系良好(R>0.999),检出限为0.1μg/kg,在0.5μg/kg、1.0μg/kg、2.0μg/kg三个水平上进行加标回收试验,平均回收率为95.8%—103.2%,精密度RSD≤3%。采用该方法满足凡纳滨对虾中黄曲霉毒素B1的低含量检测。

关键词： 黄曲霉毒素B1   量子点荧光微球   免疫层析试纸条   定量检测  

摘要： 黄曲霉毒素B1（AFB1）是已知毒性最强的真菌毒素,被世界卫生组织癌症机构列为Ⅰ类致癌物,许多国家制定了相应的法律法规限制农产品中AFB1的含量以减少对人和动物的危害。本研究首次将量子点荧光微球作为标记探针应用于竞争免疫层析试纸条实现了对小分子物质的检测,建立了基于FIT/FIC比值定量的AFB1量子点荧光微球免疫层析试纸条定量模型。本研究中所用商品化量子点荧光微球是通过掺杂Cd Se/Zn S量子点所得,直径为247 nm±13 nm,同等摩尔数下量子点荧光微球的荧光强度是量子点的2863倍。以量子点荧光微球为标记探针偶联黄曲霉毒素B1单克隆抗体腹水制备了免疫层析试纸条,试纸条的最佳工艺条件为:样本垫处理液为p H 8.0的硼酸钠缓冲液（含1.0%BSA、0.25%Tween-20和0.1%Na N3）,每毫克量子点荧光微球的腹水蛋白质标记量为150μg,荧光微球腹水标记物所用体积为5μL（36μg/m L）,T线抗原喷涂浓度为0.4 mg/m L,C线驴抗鼠二抗喷涂浓度为1.0 mg/m L。在此条件下探究了检测样品中p H、甲醇浓度以及试纸条判读时间对试纸条免疫反应动力学的影响。实验结果表明基于FIT/FIC比值进行定量,在一定范围内有效消除了反应时间、溶液p H及甲醇浓度对试纸条反应动力学的影响。本方法所建立的AFB1量子点荧光微球免疫层析试纸条检测模型的线性回归方程为y=-0.28ln（x）+1.25（R2=0.9942）,50%抑制浓度（IC50）为13.87±1.54 pg/m L（n=3）,其灵敏度比量子点免疫层析试纸条方法学提高了39倍（IC50=0.54±0.06 ng/m L）,试纸条定量检测范围为5～60 pg/m L,表明该荧光试纸条具有较好的检测性能。该试纸条与AFG1、AFG2、AFM1、AFB2的交叉反应率（Cr）分别为51.6%、0.2%、1.73%和5.58%,与桔霉素、展青霉素、赭曲霉毒素A、呕吐毒素、玉米赤霉烯酮五种毒素交叉反应率均小于0.01%;试纸条检测实际玉米样品中黄曲霉毒素B1的最低检测限为0.42 pg/m L;试纸条批内检测回收率在97.89%105.70%之间,批间回收率为96.32%110.30%,且批内批间检测变异系数（CV）均在10%以内。以上结果表明AFB1量子点荧光微球免疫层析试纸条具有良好的精密度和准确度。同时采用试纸条与ELISA商品试剂盒两种方法随机检测40个玉米阴性加标样本,结果表明二者具有良好的相关性（R2=0.9391）。采用高效液相色谱串联质谱（LC-MS/MS）方法和试纸条对9份来源不同的谷物及饲料产品进行分析,数据表明两种方法相关性很好。以上结果表明,基于量子点荧光微球标记探针建立的AFB1定量检测方法灵敏度高,可用于实际玉米样品中黄曲霉毒素B1的快速检测,该研究为食品安全检测提供了新的研究思路。

关键词： 抗炎   内毒素血症   中药制剂   异嗪皮啶   青蒿素  

摘要： 本研究主要针对细菌、病毒、内毒素等因素引起的炎症病理过程,按“清热解毒,活血化瘀”治则选药遣方研究抗炎中药。症候明显期的炎症病理过程的基本证候表现按中医进行辨证,大多属于温病的“营血分证”证型,治疗按“清热凉血、清热解毒,活血化瘀”的治疗原则进行设计并选药组方进行研究。本次研究是在已有研究成果的基础上运用均匀实验设计,以抗炎药理学指标为考察目标,进行处方药物的拆方分析,并在此基础上进一步完善处方筛选与设计,完成适用剂型的制备,并就制剂的安全性、有效性进行了初步评价,对有关质控标准进行了初步研究,初步完成了制剂质控标准指标成分的含量测定研究,为进一步开发抗炎新制剂奠定了一定的科学基础。本处方经筛选后确定由青蒿,栀子,金银花,丹参、草珊瑚等五味中药组成,分别提取其有效部位,并经组合制备成按生药计为1g·mL-1的混合药液,与糊精：淀粉(1：2)混合后,用95%乙醇作粘合剂湿法制粒而成并且命名为“黄金丹草颗粒”。试验对颗粒剂按制剂通则的要求进行了有关粉体学性质研究、临界相对湿度的测定,确定制剂符合颗粒剂剂型要求。试验进一步采用TLC法对制剂中有关有效部位及其成分进行了鉴别。其中,分别以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(9：4：1)；乙酸乙酯-丙酮-甲酸-水(5：5：1：1)为展开剂时能充分鉴定制剂中的异嗪皮啶及栀子苷。而以HPLC进行的含测定量分析,则初步建立了制剂中两种重要的有效成分-青蒿素及异嗪皮啶的含量测定方法,并就制剂中两组分的含量进行了测定和确认。这些研究为该制剂的开发及其质量标准的建立奠定了初步的基础。试验以制剂为研究对象,分别研究了制剂对以二甲苯致小鼠耳壳肿胀度模型、醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性增高模型、以及小鼠人工内毒素血症病理模型的药理作用进行了系统的观察,以期研究该制剂的抗炎作用。结果发现该中药制剂能显著或极显著地降低二甲苯所致的耳壳肿胀程度；抑制毛细血管通透性的增加。在研究该复方颗粒剂对小鼠人工内毒素血症病理模型的影响时。试验采用小鼠腹腔注射大肠杆菌内毒素,成功建立了小鼠内毒素血症病理模型。并在此基础上研究了制剂对内毒素致炎症病理过程的影响。结果表明：LPS阳性对照组动物72h死亡率为78.57%,阳性对照药物组-地塞米松磷酸钠注射液组小鼠的死亡率为28.57%,与阳性对照组比较具显著差异(P<0.05)；制剂中剂量的死亡率为30.85%,较阳性药物组略高(P>0.05),但显著较阳性对照组小鼠死亡率低(P<0.05)。期间动态测定染毒后不同时间血清中TNF-α、IL-6水平及肝组织中eNOS含量。结果发现：治疗中剂量组能显著降低TNF-α、IL-6水平,与阳性药物地塞米松磷酸钠组比较,降低TNF-α和IL-6的程度相当。染毒后LPS组eNOS含量在24h明显升高,至72h才恢复正常,制剂组和DEX组在12h eNOS含量达到高峰,24h后迅速下降,中药制剂中剂量组的治疗效果和DEX组的差异不明显(P>0.05)。实验结果表明：该中药颗粒剂可有效治疗内毒素血症的炎症病理过程,其重要的作用机制是通过抑制炎症初期TNF-α、IL-1、IL-4及eNOS等致炎因子的表达并进而控制炎症病理的发展产生治疗作用,这为进一步明确并研究其作用机理也奠定了基础,为进一步确证制剂的疗效提供了可能。为研究该制剂安全性,试验还进行了有关制剂对小鼠经胃肠道给药的最大耐受量测定。结果表明：服药后小鼠体重、进食量等与空白对照组比较未表现出现显著性差异(P<0.05)。小鼠对该中药颗粒剂经胃肠道给药的最大耐受量为0.403g/20g,该剂量是人口服推荐剂量的144倍。表明该制剂具有较高的安全性。综上可知：以本次研究中药组方及其制剂为基础,开发新型的抗炎中药制剂具有良好的基础,并可望获得良好的结果。