关键词： CXCR4   黄曲霉毒素B1   肝细胞癌  

摘要： 目的：肝细胞癌(Hepatocellular carcinoma, HCC)是我国一种重大高发恶性肿瘤,其发病机制及寻找预后与治疗的靶点仍是该研究领域的重要热点问题。近年来国内外的研究发现趋化因子受体4(Chemokine Receptor 4, CXCR4)在23种不同类型肿瘤中均有不同程度的表达上调,但其在黄曲霉毒素Bi (Aflatoxin B1, AFBi)所诱导的HCC中是否也有类似作用,AFB1暴露与CXCR4表达是否存在关系,它们在影响HCC预后的作用中是否具有相互调控作用,国内外至今为止未见相关报道。本研究目的在于通过体外细胞学实验与HCC的临床样本分析以研究CXCR4表达和AFB1相关性HCC的关系,分析CXCR4表达在AFB1相关性HCC肿瘤化进程中的可能调节作用。方法：1、收集来自AFB1高暴露地区HCC患者(共399例)的手术切除标本,包括肿瘤组织与肿瘤旁组织；收集所有研究对象相关临床病理资料,主要包括年龄、性别、种族、肝炎病毒感染情况、肿瘤大小及TNM分期等信息,并对所有研究对象进行生存随访。2、通过酶联免疫吸附法检测研究对象其HCC肿瘤组织中FB1-DNA加合物浓度来确定AFB1暴露水平。3、采用Real-time定量PCR技术来检测新鲜HCC组织中的CXCR4 mRNA表达水平。4、采用免疫组织化学技术检测HCC石蜡组织样本中的CXCR4蛋白表达水平。5、采用蛋白免疫印迹技术检测体外培养细胞中的CXCR4蛋白表达水平。6、通过体外培养细胞的AFB1毒性实验检测AFB1暴露对CXCR4表达的影响。7、使用风险比例回归模型与逻辑回归模型等方法分析CXCR4表达与AFB1相关性HCC肿瘤化及预后的关系。结果：1、本研究共收集到399例同时具有HCC肿瘤组织与肿瘤旁组织的研究对象,也收集到了22例新鲜的符合要求的HCC组织样本。2、免疫组织化学结果显示：与HCC肿瘤旁组织相比,HCC肿瘤组织中CXCR4蛋白表达水平上调,相对表达量分别为5.86±3.56和7.56±3.99(P<0.01)；新鲜组织样本中CXCR4 mRNA的相对表达量分别为5.97±1.79和1.00±0.33(P<0.05)。3、体外培养细胞学实验发现：与非HCC肿瘤的肝细胞相比,HCC肿瘤细胞中CXCR4 mRNA和蛋白均上调(P<0.05)4、在HCC肿瘤组织中,高AFB1暴露水平与更高的CXCR4表达相关,对应贡献值为2.38～5.52之间(P<0.05)；细胞学毒素实验进一步证实AFB1暴露能上调CXCR4表达。5、CXC4表达可调节HCC无肿瘤复发生存(P=4.26×10-13),多因素风险比例回归模型分析显示：以低CXCR4表达为参照,中表达和高表达对应肿瘤复发风险分别为1.81(1.23～2.68)和3.93(3.83～5.46),趋势检验对应P值分别为3.17×10-5和3.18×10q6。而且这种对HCC预后的调节作用不受HCC肿瘤大小、分级、分期等临床病理特征的影响。6、AFB1暴露水平和CXC4表达在对HCC无肿瘤复生存影响中具有协同作用,相比于低风险的参照组,高AFB1暴露和高CXCR4的表达增加肿瘤复发风险更为明显,对应风险值为8.37(5.25～13.35),对应P值为4.76×10-19。结论：1、CXCR4在HCC肿瘤组织中高表达,并调节HCC预后,提示CXCR4表达上调促进HCC的肿瘤化进程,是HCC的一个潜在治疗靶点。2、AFB1暴露上调CXCR4表达,并与后者对HCC预后的调节中具有协同作用,提示AFB1也许通过CXCR4分子通路而促进HCC的发生发展,这为AFB1相关性HCC的发生发展提供了的研究视野。

关键词： 花生油   黄曲霉毒素B1   限值   检测   分析  

摘要： 目的:花生是最易受黄曲霉毒素B1（AFB1）污染的农作物之一,直接影响以花生为原料的花生油品质,食用受黄曲霉毒素污染的花生油会引起人慢性中毒且还可致癌、致畸、致突变等,严重危害着人们的生命健康。本文采用ELISA酶联免疫吸附法对市售和自榨花生油进行检测,结果发现自榨花生油黄曲霉毒素B1超标较多[1]。

关键词： 教育部   教育行政组织   重点实验室   中药制剂  

摘要： 现代中药制剂教育部重点实验室(以下简称"重点实验室")是2003年底经国家教育部批准依托江西中医药大学组建,2005年9月正式开始建设:于2006年8月第一个提前一年通过教育部验收,是全国高校唯一从

关键词： 花生油   黄曲霉毒素B1   碱炼   安全性评价   响应面法  

摘要： 花生油是我国居民消费的主要植物油之一,它很容易被黄曲霉毒素B1(Aflatoxins B1,AFB1)污染。AFB1是一种毒性极强的致癌物,主要由黄曲霉或寄生曲霉产生的次生代谢产物,在泥土、霉变的粮食作物及其制品中普遍存在,特别是发霉的花生,从而导致花生油中残留量较大,给人类健康带来严重威胁。因此,研究如何去除花生油中黄曲霉毒素已成为当前油脂企业面临的重大食品安全问题。本文研究了花生油碱炼脱毒工艺,探讨了该工艺中各因素对脱毒效果的影响,碱炼脱毒对花生油品质的影响,以及对脱毒后的花生油进行安全性评价。主要结果如下:1.在模式系统下,碱液能快速分解AFB1。100μg/kg的AFB1纯溶液在300 min后被1.0%的碱液完全分解并产生许多中间产物。2.影响碱炼脱毒效果的因素是碱液浓度>超碱用量>碱炼终温>碱炼初温。利用响应面法确定其最佳脱毒工艺为:碱液浓度23.42%,超碱用量0.3%,碱炼初温43.51℃,碱炼终温77.07℃,搅拌方式为初温180 r/min(25 min)至终温120 r/min(20 min),此条件下AFB1从34.78μg/kg降低到0.37μg/kg,降解率达到98.94%,所建立的预测模型能准确的预测花生油的碱炼脱毒效果,碱炼后的花生油黄曲霉毒素浓度远低于国家标准20μg/kg(GB 1534-2003)。3.碱炼脱毒对花生油品质影响很小。碱炼脱毒能改善花生油色泽,使花生油的亮度(L值)显著增加(P<0.05),其油品更加澄清透明;花生油酸价显著改善(P<0.01),由初始的1.81±0.01 mg/g降低至0.076±0.00 mg/g,降低了95.8%;过氧化值明显升高(P<0.05),从初始的1.20±0.02 mmol/kg增加到2.29±0.04 mmol/kg;过氧化值和酸价均符合GB 1534-2003中对压榨成品一级花生油的要求(过氧化值≤6.0 mmol/kg,酸价≤1.0 mg/g)。碱炼后花生油中的不饱和脂肪酸无显著变化(P>0.05)。4.在90天贮藏过程中,花生油的酸价和过氧化值明显升高(P<0.05),酸价由0.076±0.00 mg/g上升到0.275±0.00 mg/g;过氧化值由2.288±0.01 mmol/kg上升到2.693±0.02 mmol/kg,但酸价和过氧化值都远低于GB1534-2003的限量要求。5.碱炼脱毒能显著提高污染AFB1的花生油的安全性。碱炼脱毒后,染毒花生油显著减少鼠伤寒沙门氏菌TA98、TA102、TA97和TA100菌株的回复突变数(P<0.05),在最佳碱炼脱毒条件下,未检测到染毒花生油的致突变性;与阳性对照相比,HepG2细胞活性显著提高,其活性达到95.45%,与阴性对照组相比无显著差异(P>0.05)。

关键词： 中药制剂   气相二氧化硅   广藿香油   葛根素   大豆苷元   金银花提取物   固体分散体  

摘要： 目的:评价气相二氧化硅AEROPERL(R)300 Pharma(AP)应用于提高难溶性药物的溶出速率和生物利用度、液态药物粉末化、改善中药提取物的吸湿性等方面的特性。　　方法:借助AP的多孔性及亲水性，以其为载体材料，分别制备葛根素-AP固体分散体和大豆苷元-AP固体分散体，对其外观形态、物相特征进行评价，并对固体分散体中药物的体外溶出和大鼠体内药动学行为进行考察;用AP吸收固化广藿香油，考察固化粉体的外观形态、流动性、压缩成型性及广藿香油中百秋李醇的热稳定性;选择金银花为模型药物，以吸湿前后粉体外观、吸湿率、吸湿初速度、平衡吸湿量、吸湿平均速度、休止角为指标，探讨AP对金银花提取物吸湿性的影响，并与常用防潮辅料进行比较。　　结果:采用共沉淀法制备不同比例(1∶1，1∶2，1∶3，1∶5，1∶10 w/w)的葛根素-AP固体分散体。电镜结果表明，随着AP用量的增加，葛根素在AP中分散程度提高。经DSC和XRPD分析，葛根素在固体分散体中大部分以无定型状态存在。溶出实验表明，制成固体分散体后，葛根素体外溶出速率显著加快，且随着AP用量的增加，溶出速率呈递增趋势。大鼠药动学数据显示，固体分散体相对生物利用度是葛根素原料药的168.3％。常温留样六个月后，葛根素的含量、溶出及晶型均未发生明显改变，表明在贮存过程中稳定性良好。通过均匀实验设计优化出大豆苷元-AP固体分散体的制备工艺，DSC和XRPD结果表明，药物大部分以无定型的状态存在，与原料药相比，体外溶出速率加快，体内的相对生物利用度为137.1％。与常规二氧化硅和PVP K30相比，AP制备工艺简单，溶出快且粉体流动性好;在液体药物粉末化的考察中，AP载药量大，可吸附自身重量1.5倍的液体药物，固化后的粉体流动性佳、填充性好，优于沉淀法二氧化硅和环糊精的固化粉体，并在一定程度上可提高广藿香油中指标性成分百秋李醇的热稳定性;吸湿实验结果表明，AP能显著降低金银花提取物的引湿性，随着AP用量的增加，吸湿速率呈递减趋势。与浸膏粉相比，在相同用量下，流浸膏与AP混合后减压干燥所得粉体的吸湿速率小。与常用防潮性辅料MCC、乳糖、磷酸氢钙相比，AP的吸湿率较大，但由于其卓越的吸附能力，吸湿后的粉体依然保持良好的流动性。　　结论:AP的高孔隙容积，大比表面积，卓越的流动性和一定的亲水性，使其在提高难溶性药物的溶出速率和生物利用度、液态药物粉末化及改善中药提取物的吸湿性等方面有显著作用，将在中药制剂中有广泛的应用前景。

关键词： 口腔科药物   中药制剂   质量标准  

摘要： 口腔治疗用制剂药品是指专供口腔疾患的预防、治疗、手术修复使用的局部作用制剂，在全国各地的口腔医院均有广泛使用。军队医疗机构常用的口腔治疗用制剂药品大多收载于《中国人民解放军医疗机构制剂规范》(2002年版)第六章中，前标准制定较早，制剂质量标准检验项目内容较少，不够完善，实验操作繁琐，不符合《中国药典》2010年版对制剂质量标准的要求。本课题旨在对常用的22种口腔治疗用制剂药品的质量标准进行全面修订和升级，遵循《中国药典》2010年版及制剂药品相关法规对制剂“安全、有效、稳定、可控”的原则，对制剂质量标准检验项目进行科学、全面的规定，采用经典、简单、适用于基层单位的方法对制剂质量标准进行提高。　　论文综述部分对《中国人民解放军医疗机构制剂规范》(2002年版)做了解读、总结了口腔治疗用制剂药品的特点、在制剂质量标准提高过程中所用到的方法主要是含量测定方法的研究进展。实验部分，以部分制剂为代表，从研究方法入手，主要在鉴别、检查及含量测定方面对制剂的质量标准进行了提高。鉴别:部分制剂前标准鉴别项不完善或鉴别方法特异性不强，例如复方硫酸庆大霉素膜，前标准未对其中的有效成分盐酸达克罗宁和维生素A进行鉴别，采用化学鉴别法增加对这两种成分的鉴别;复方克林霉素膜前标准中的化学鉴别法无相应的结果，改为色谱法进行鉴别。检查:制剂检查项均参照《中国药典》2010年版中的规定进行，其中创新点在于复方碘甘油类似于《中国药典》2010年版二部中的碘酊，参照碘酊，采用HPLC-ELSD法对溶剂甘油量进行了检查。含量测定:部分制剂前标准中未规定有效成分的含量或含量测定方法测定结果不准确，如碘仿纱条未对碘仿含量进行规定，采用紫外-可见分光光度法对其进行测定;干髓糊剂中多聚甲醛的含量测定方法结果存在较大偏差，改为柱前衍生HPLC法进行测定;根据制剂特点，还增加了HPLC-ELSD法、氟离子电极法、滴定法及管碟法测定制剂中有效成分的含量。　　课题研究结果表明，参照《中国药典》2010年版二部附录制剂通则新建立的制剂标准检查项目比前标准更加符合制剂的特点，在此基础上进行的质量标准提高结果更加准确。鉴别项:对前标准中的鉴别项目进行了改进和完善，采用了化学鉴别法和色谱鉴别法，鉴别结果比原方法更准确，且重现性好。检查项，增加了检查项的制剂，所增加项目均符合制剂的特点，检查结果均符合规定，甘油量的测定方法可行;含量测定项:采用的新的含量测定方法解决了前标准中含量测定存在的问题，专属性强，适用性广，含量测定结果准确。　　通过课题的研究，22种制剂的质量标准上升到了一个新的台阶，满足《中国药典》2010年版对制剂“安全、有效、稳定、可控”的要求，可以申请纳入新版《中国人民解放军医疗机构制剂规范》中。

关键词： 血清指标   黄芪   补气药   熊胆粉   黑熊   合剂   饲喂   饲养   TBIL   SOD   差异显著   GSH   AST   中药制剂   LDH  

摘要： 熊胆是东北的一种特产,市场上有许多戒酒、保肝产品都采自黑熊胆。大多数服用熊胆的人都误认为熊胆是一种保健品,事实上熊胆是我国的中药保护品种。熊胆自古被应用于平肝解毒,熊胆在体内分解过程中释放的牛磺酸可以迅速消除饮酒引起的倦意和疲劳,减轻酒精对肝脏的损害,保护肝细胞,降低血压,保护人的心脑血管[1]。据《本草纲目》记载:熊胆平肝、利胆、明目。现代药理研究表明,熊胆具有很好的解酒功效。有关熊胆粉的药理作用研究表明,熊胆

关键词： aflatoxin B1   Cereal Grains   Gamma Irradiation   radiation  

摘要： Aflatoxin B1 is the most potent hepatocarcinogen known in animals and it is classified by the International Agency of Research on Cancer (IARC) as Group I carcinogen meaning that it is a proven cancer-inducing agent. It also occurs in the environment contaminating a lot of different food and feed commodities. The aim of this study was to assess the possible effect of gamma irradiation on the reduction of aflatoxin B1 in some cereal grains and the impact on nutritive values including, ash, &moisture. It was found that maize samples contain the highest level of aflatoxin B1 than wheat and rice. Gamma irradiation is a suitable technique which reduces the levels of aflatoxin B1 in cereal samples without affecting the nutritive values, at 4 KGy the reduction percents of aflatoxin B1 were 15.54%, 22.25%, and 27.46% for maize, wheat, and rice respectively whereas at 6 KGy the reduction percents of aflatoxin B1 were 32.39%, 43.84%, and 56.38% respectively and the 8 KGy radiation dose remove about 60.26% of the toxin in maize, 64.68% in rice and 69.29% in wheat samples. Higher radiation doses than 8 KGy are required to remove the toxin until it reaches the legal limit (5ppb) according to FAO. [ABSTRACT FROM AUTHOR]

关键词： 肿瘤干细胞   T-淋巴细胞瘤(Hut102)   CHIR99021   PD173074   裸鼠移植   CD34   CD44   长春新碱   阿霉素   耐药  

摘要： 背景：恶性淋巴瘤细胞是最易发生于身体的淋巴系统、扁桃体、脾和骨髓,是一种淋巴组织系统的免疫肿瘤细胞。淋巴细胞瘤属于中医学的“恶核”范畴,以全身消瘦衰弱为特征,常由脏腑虚损所致。随着对恶性淋巴肿瘤起源与发病机制的认识,有学者提出了肿瘤形成起源于肿瘤干细胞的假说。对于肿瘤耐药性的认识,也有学者指出大多数传统治疗手段不能有效杀死肿瘤中极少数量的干细胞。治疗后未杀死的肿瘤干细胞,最终成为肿瘤复发及转移的根源,这是目前无法彻底根治肿瘤的主要原因。中药提取物长春新碱是治疗急性淋巴瘤白血病的一线化疗药物,但其临床效果差,不能彻底治愈患者。我们首次将CHIR99021和PD173074川于T淋巴瘤肿瘤干细胞的筛选和培养,筛选富集和鉴定Hut-102肿瘤细胞球,并观察诱导后具有肿瘤于细胞特征的Hut-102细胞球,是否对中药提取物长春新碱有较强耐受性并初步探讨其对长春新碱耐受的机制。目的：采用非贴壁细胞球无血清培养法,来体外构建并鉴定了T-淋巴瘤干细胞,观察诱导的T-淋巴细胞瘤细胞球对中药抗肿瘤药长春新碱的耐受性并初步探讨其耐受性的机制。方法：筛选富集肿瘤干细胞：通过悬浮细胞培养法来回收大量Hut-102细胞中的细胞球,并通过分化抑制剂的CHIR99021和PD173074抑制剂进行癌症干细胞的提取。鉴定肿瘤干细胞：通过逆转录PCR法来检测Sox2、OCT4、Nanog、Klf4、Bmil、 C-Myc干细胞特征基因表达；通过Western blOt进一步验证细胞内OCT4蛋白表达；通过流式细胞术分析细胞表面抗原CD34、CD44勺表达；采用溴化乙锭法检测细胞内周期分布情况；通过CFDA-SE荧光染料观察淋巴细胞增殖的情况；将已富集到的Hut-102细胞球通过尾静脉移植到裸鼠异体内,确定其具有体内移植能力。观察耐受性并初步探讨机制。用CCK8观察诱导T-淋巴细胞瘤细胞球对抗肿瘤药阿霉素以及中药长春新碱耐受性；用PCR检测诱导T-淋巴细胞瘤细胞球耐药相关基因的表达。结果：采用细胞球悬浮培养法,选取具有抑制自我更新能力作用的CHIR99021和PD173074两种抑制剂,成功取得已回收出Hut-102细胞球。Hut-102细胞球干细胞特征基因,包括Sox2、OCT4、Nanog、Klf4、Bmil、C Myc表达均显著性高于Hut-102细胞,并且高表达OCT4蛋白；Hut-102细胞球表面抗原CD34阳性表现为74.20%,表面抗原CD44阳性表现为90.82%,证明了两种分化抑制剂应用细胞球悬浮培养法,能够有效获得具有CD34+、CD44+表面抗原特征的Hut-102细胞球；收集到的Hut-102细胞球中处于G1/G0期的为64%,S期的为30.56%,表明细胞球处于暂时不增长或处于静止状态；富集后的Hut-102细胞球增殖情况显著优于Hut-102细胞。采用无菌条件下尾静脉注射,分别将Hut-102细胞球和Hut-102细胞移植到NON/SCID裸鼠体内,结果表明：裸鼠血清中检测到67.74%±5.32%细胞表达Hut-102细胞球特异性标记物(CD3),而移植对照Hut-102细胞的裸鼠体内并未检测CD3细胞,显示Hut-102细胞球在NON/SCID裸鼠体内具有移植能力。Hut-102细胞球对中药长春新碱具有很强的耐药性,比对阿霉素耐药性要强8倍。其耐药性的机制,可能在于高表达耐药基因ABCG2、ABCC10、ABCB4。结论：本课题首次在Hut-102淋巴瘤细胞中加入两种抑制剂CHIR99021和PD173074,富集出具有肿瘤干细胞特征的Hut-102细胞球,该细胞球在裸鼠体内具有移植能力。富集到的Hut-102细胞球对中药长春新碱有较强的耐受性,其耐受性机制可能与高表达耐药基因有关。

关键词： 黄曲霉毒素B1   黄曲霉毒素B-DNA   加合物(AFB1-DNA加合物)   AFB1暴露水平   原发性肝细胞癌  

摘要： 目的探讨广西人群血清中游离黄曲霉毒素B1(AFB1)的含量、肝组织中黄曲霉毒素B-DNA加合物的表达与AFB1暴露水平与肝癌发生的关系。方法在广西以肝癌高发家族(71例)和相对应的非癌对照家族(107例)成员为研究对象,采集外周血5.0 m L。采用HPLC法测定其血清中游离的AFB1浓度。收集404例行肝切除术患者手术后的石蜡肝组织病理标本,通过免疫组织化学技术检测上述404例肝组织中AFB1-DNA加合物表达水平;同时通过聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术检测上述HCC患者肝组织中p53基因第249密码子第3位碱基G→T的突变("突变热点"),即AGG→AGT。结果肝癌高发家族成员血清中游离的AFB1,检出率为100%,平均含量为1.069μg/L-1;非癌对照家族成员血清中游离的AFB1检出率为78.50%,平均含量为0.8581μg/L-1;2组的检出率及平均含量比较差异有统计学意义(P