关键词： CHINESE medicine   AUTOPHAGIC vacuoles   ANIMAL experimentation   CAPSULES (Pharmacy)   CORONARY heart disease   ELECTRON microscopy   HEMODYNAMICS   HERBAL medicine   LACTATE dehydrogenase   RATS   RESEARCH -- Finance   SWINE   WESTERN immunoblotting   DATA analysis -- Software   DESCRIPTIVE statistics   CORONARY angiography   ONE-way analysis of variance   THERAPEUTIC use  

摘要： Shuangshen Ningxin capsule (SSNX), a modern Chinese formula, has been used to treat cardiovascular diseases in Eastern Asia. Our study focuses on the autophagy regulation of SSNX against coronary artery injuries. Myocardial infarction model was established in Chinese miniswines (CMS) by coronary artery balloon injury. SSNX was administered to the CMS for 8 weeks with 4 mg/kg or 16 mg/kg. Myocardial cells were incubated with 20% SSNX medicated serum for 2 hours. Assays were performed to detect the effects of SSNX on (i) coronary artery diameter by angiography, (ii) hemodynamics by noninvasive hemodynamic monitoring system, (iii) plaque burden and plaque volume by intravenous ultrasound (iv) coronary artery histology by H&E staining, (v) autophagosome by transmission electron microscopy, (vi) lactate dehydrogenase (LDH) leakage, and (vii) Beclin-1 and LC3-I/II expressions by Western blot. The results showed that CMS treated with SSNX exhibited the correction for the disturbed cardiac hemodynamics, increase of coronary artery diameter, reduction of high plaque burden and plaque volume, and decrease of LDH. The inhibitory effect of SSNX on CMS autophagy was demonstrated by the reduction of autophagosome and the downregulation of beclin-1 and LC3-I/II. SSNX may protect coronary artery and increase the stability of plaque through the suppression of myocardial cellular autophagy, which suggests the potentially therapeutic effect of SSNX on ischemic cardiovascular disease.

关键词： 黄曲霉毒素B1   黄曲霉毒素B1降解酶   工艺优化   酶制剂制备  

摘要： 黄曲霉毒素广泛存在于食品、饲料、农副产品中,其不仅对人类和动物的健康造成极大的危害,同时会带来巨大的经济损失。现有去除黄曲霉毒素的物理法和化学法存在处理时间长、产品品质低、易产生副产物、有二次污染等缺陷,而酶法降解黄曲霉毒素具有高效性、特异性、无环境污染等优点而备受关注。本研究以香豆素为唯一碳源筛选能高效降解黄曲霉毒素B1(AFB1)的微生物,并对其发酵工艺和酶制剂制备技术进行了优化。试验结果证实了50 L发酵罐小试发酵工艺和酶制剂制备技术的可行性和有效性,为工业化生产黄曲霉毒素降解酶及其应用提供了一定的理论依据。具体研究内容如下:1.以香豆素为唯一碳源从不同样本中初筛得到27株能在香豆素平板上生长的菌株。经过复筛确定菌株HSD8产黄曲霉毒素降解酶的效果最好,酶活达443U/m L。通过对该菌株进行形态观察、生理生化特性以及16S r RNA基因序列测定与分析,最终鉴定为Sinomonas sp.,国内外尚未见该菌属的微生物具有产酶降解AFB1的报道。2.测定HSD8菌株的生长曲线并确定其对数生长期为4-16 h。采用单因素试验对HSD8菌株产AFB1降解酶的的发酵条件进行优化,确定了最优发酵条件为:装液量50 m L/250 m L、发酵周期48 h、初始p H 5.0、接种量8%、发酵温度37°C、摇床转速160 r/min,在此发酵条件下,酶活可达548 U/m L,比优化前提高了23.7%。3.采用单因素法优化HSD8菌株发酵培养基的碳氮源和金属离子,最终确定了碳源为糖蜜,氮源为柠檬酸氢二铵,金属离子为Mg2+、Mn2+和Ca2+。通过PB试验设计和中心复合试验设计对HSD8菌株的发酵培养基进行优化,最终确定其发酵培养基组成为:糖蜜3 g/L,柠檬酸氢二铵10 g/L,KH2PO4 2 g/L,K2HPO4?3H2O0.4 g/L,Na Cl 4.5 g/L,Mn SO4?H2O 0.6 g/L,Ca Cl2 0.6 g/L,Mg SO4 2.16 g/L,香豆素0.17 g/L。通过模型验证,预测酶活为741 U/m L,实际酶活为736 U/m L与预测酶活吻合良好,其酶活比优化前提高了25.54%。4.以摇瓶发酵条件为基础,在50 L发酵罐上进行发酵试验。经过单因素试验确定了通风量为20 L/min、搅拌转速200 rpm、接种量5%和发酵周期36 h,在此最优条件下进行连续三批发酵,其酶活的平均值为794 U/m L。同时与摇瓶发酵相比,接种量减少了3%、发酵周期缩短了12 h、酶活提高了7.9%。将发酵液进行后处理制备酶制剂,选用10%的麦芽糊精作为填充剂和0.2%的阿拉伯胶作为包埋剂,采用离心喷雾干燥的方式制备样品其酶活为723 U/m L,酶活损失为8.9%。

关键词： 量子点   荧光共振能量转移   黄曲霉毒素B1   均相免疫   定量检测  

摘要： 荧光共振能量转移(Fluorescence eesonance energy transfer,FRET)技术为实现感应纳米尺度的距离变化提供了快速、灵敏并且简单的检测手段。传统FRET体系,常利用荧光蛋白和有机染料作为荧光探针,但由于荧光基团吸收光谱范围窄,发射光谱常伴随拖尾现象,容易造成供体的发射光谱和受体的吸收光谱相互干扰,重叠程度受到影响,导致FRET效率降低。同时传统荧光物质的抗光漂白及化学稳定性较差,在应用过程中易发生光降解和化学降解,也使得FRET的应用受到限制。量子点作为一种新型的荧光材料,具有激发光谱范围宽、发射光谱窄且可调谐、抗光漂白及光稳定性好等独特的光学特性。基于量子点FRET原理构建的检测新方法在免疫分析、生物分子的相互作用及生物传感器等领域的应用近年来取得了很大进展。然而,在以上的FRET体系中,量子点常被用来作为能量转移的供体,而利用两种不同发射波长的量子点作为供、受体的研究报道并不多见。量子点具有高于传统有机染料一个数量级的光子吸收截面,因此理论上,量子点可作为一种优良的能量受体应用于FRET体系。黄曲霉毒素B1(AFB1)是黄曲霉菌和寄生曲霉菌的次级代谢产物,是一种具有剧毒、致突变、致畸、致癌的化合物。食用受AFB1污染的食品对人体健康具有极大的危害,建立简便、快速、灵敏的AFB1特异性分析方法对于防控AFB1污染具有重要意义,而基于荧光共振能量转移的荧光免疫分析方法作为一种新型的检测方法备受关注。本研究利用两种不同尺寸直径的量子点,分别与AFB1及抗体进行偶联,利用抗原-抗体之间的特异性亲和反应,使供体和受体量子点满足发生FRET的距离,并进一步考察了供受体偶联物不同标记比率对FRET效率的影响,在此基础上建立了AFB1均相竞争免疫新方法,并应用于大米提取液中AFB1的定量检测。具体研究过程如下:首先,采用绿色量子点(QSA530)偶联AFB1作为能量供体,红色量子点(QSH620)偶联抗AFB1抗体作为受体。采用DCC/NHS制备不同AFB1投料比的绿色量子点偶联物;采用EDC/NHSS法制备不同抗AFB1抗体投料比的红色量子点偶联物。琼脂糖凝胶电泳及红外图谱等方法进行偶联效果的表征,结果表明偶联后的量子点荧光强度略有降低(6%–8%),但最大发射波长未发生偏移。探讨了供受体偶联物抗原抗体标记比率对FRET效率的影响,结果表明在多个“单价”受体结合单个“多价”供体的反应模式下,两种量子点间能够产生合理且持续增强的共振能量转移。进一步通过正交试验优化获得最佳QSA530:AFB1标记比率为1:10,mAb:QSH620标记比率为1:1,最佳供体/受体反应配比定为5.0。其次,考察了反应溶液中pH值、离子强度、甲醇含量以及反应时间对FRET效率的影响,实验结果表明反应体系的pH值、离子强度及有机溶剂含量对FRET效率影响较大,该变化不仅来源于环境条件对免疫学效率的影响,同时来源于对量子点之间的能量传递影响。通过条件优化,本研究确定pH 7.4,含10 mM NaCl和10%甲醇(v/v)的PB缓冲液作为FRET反应工作液,检测时间为加样后20 min。以大米提取液为基质的FRET定量标准曲线方程为Y=-4.065 Ln(x)+12.142(R2=0.9904),AFB1定量范围为0.06–5.0 ng/m L,大米提取液中AFB1最低检测灵敏度为0.04 ng/mL。特异性实验结果表明,该反应与其他结构类似物及真菌毒素交叉反应率较低;加标回收实验结果表明,大米样品平均加标回收率介于81.28%–97.36%之间,批内变异系数在3.9%–5.9%之间,批间变异系数7.2%–8.4%之间,以上数据表明本实验方法具有良好的特异性及准确性。将该方法进一步与商业化ELISA剂盒进行对比分析,结果显示二者具有良好的相关性,表明本实验方法可用于AFB1快速筛查检测。

关键词： 色谱技术   中药制剂   质量控制  

摘要： 质量是影响中药制剂走出国门、走向世界市场的关键，也是判国外中药制剂进入中国市场的关键标准。色谱技术作为中药制剂质量控制技术之一，它在中药成分测定、真伪鉴别以及有害成分析实验上的作用重大。

关键词： 中药制剂   大山楂丸   实验教学改革  

摘要： 文章通过实验教学改革尝试,以中药制剂"大山楂丸"为实例,将中药制剂与中药制剂分析两门课程实验教学结合起来,让学生全面理解中药制剂及其质量控制知识,提高学生的兴趣和认识,达到良好的教学效果。

关键词： 黄曲霉毒素B1   肉鸭   致病性  

摘要： 本试验旨在研究饲料中黄曲霉毒素B1（AFB1）对肉鸭的致病性。饲喂高剂量AFB1饲料的试验组鸭的体重、平均日增重和平均日采食量比饲喂低剂量AFB1饲料的对照组鸭显著降低,而料重比和死亡率显著增加。饲喂高剂量AFB1饲料的试验组鸭肝脏病变明显,肝细胞发生空泡变性,部分肝细胞严重肿胀,可见明显的胆管增生情况;肾小管扩张、充血;胰腺局灶性坏死,炎性细胞浸润。

关键词： 中药提取物   去屑   祛痘   防腐   个人护理品  

摘要： 目的:筛选抑菌效果较好的中药提取物,并将其应用到有相应抑菌需要的配方中,发挥去屑、祛痘、防腐作用,为相关护理品的开发奠定基础。方法:(1)对23种中药进行提取、浓缩、干燥,分别得到中药水提物和醇提物。(2)通过抑菌圈试验、MIC试验筛选出对糠秕孢子菌、痤疮丙酸杆菌、五大常见致病菌(金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、大肠杆菌、白色念珠菌、黑曲霉)有抑制作用的中药提取物。(3)将筛选出来的抑菌效果较好的中药提取物应用到有相应抑菌需要的配方中,进一步验证其抑菌效果,并进行相应的稳定性考察和安全性测试。结果:(1)通过抑菌功效评价结果来选定应用在去屑洗发水中的提取物是丁香醇提物、黄连水提物、大黄醇提物;应用于祛痘凝胶中的提取物是黄柏醇提物、甘草醇提物、黄连水提物;用于替代传统防腐剂的是由黄连水提物、黄连醇提物、黄芩醇提物、重楼醇提物复配的复合提取液。(2)通过去屑功效评价,发现黄连提取物与传统去屑剂ZPT复配后去屑效果减弱甚至消失,单用效果与阳性对照接近;0.4%丁香醇提物与ZPT的复配效果理想,稳定性、安全性均符合要求。(3)在祛痘产品的应用中,综合功效性、安全性、稳定性三方面考虑,确定三种提取物及其添加量:黄柏醇提物为5%,甘草醇提物为5%,黄连水提物为3%。(4)在防腐挑战试验中发现最佳防腐体系是0.2%黄连水提物和10%复合防腐提取液3复配。结论:中药提取物对糠秕孢子菌、痤疮丙酸杆菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、铜绿假单胞菌、白色念珠菌有抑制作用,部分中药提取物抑菌作用明显,应用于个人护理品中可以发挥去屑、祛痘、替代防腐剂的作用。

关键词： 大鼠   肝癌模型   药物   原发性肝癌患者   综合性治疗   Hepatic Carcinoma   中药治疗   抗肿瘤机制   复发或转移   多脏器转移   中药制剂   治疗手段   指标考察   早期诊断   脏器指数   严重危害   死亡人数   生命健康   生存质量   临床治疗  

摘要： 前言 原发性肝癌(Primary Hepatic Carcinoma,PHC)是临床常见的恶性肿瘤之一,其严重危害人类生命健康.此病早期不易被发现,中后期病情发展迅速,恶性程度高,易发生多脏器转移,治疗难度大,患者自然生存期缩短等特点.虽然目前通过加强对高危人群的监测,争取早期诊断并给予手术、放化疗和肝脏移植等综合模式治疗,使原发性肝癌患者的5年生存率已有显著的提高,但是我国每年仍有约11万人死于肝癌,占全世界肝癌死亡人数的45％.目前,中药治疗原发性肝癌已成为常用的治疗手段,尤其中药能够有效防治肝癌患者术后复发或转移,提高患者免疫力,改善中晚期肝癌患者的生存质量、延长患者生命,突显多方面的优势,可达到综合性治疗原发性肝癌的目的. 本课题研究制备大鼠原发性肝癌模型,并且给予灌服化癥散积微丸,通过比较各组脏器指数,病理学指标考察,以及AFP变化,初步探讨该药物抗肿瘤机制,为临床治疗原发性肝癌提供理论依据,也为研究抗癌中药制剂奠定基础.

关键词： 慢性阻塞性肺疾病   痰热清注射液   临床疗效   IL-17   IL-8  

摘要： 目的 探讨痰热清注射液配合常规疗法治疗慢性阻塞性肺疾病(COPP)急性发作期的疗效及其作用机制.方法 52例COPD急性期患者随机分为常规疗法组和联用痰热清治疗组,治疗组在常规疗法的基础上联用痰热清注射液治疗.观察两组临床疗效并检测患者血清IL-17和IL-8的含量变化.结果 治疗组总有效率为92.85％.常规疗法组为79.16％,两组间比较,差异有显著性,P＜0.05.治疗组患者血清IL-17和IL-8的含量明显低于常规疗法组.结论 在常规疗法的基础上联合应用痰热清注射液治疗COPD急性发作能明显提高临床疗效.这可能与痰热清注射液能明显降低患者IL-17和IL-8的分泌,减轻其调控中性粒细胞在呼吸道的募集和激活,进而减轻COPD的炎症过程有关.

关键词： 鞣质   中药   病原菌   抑菌作用  

摘要： 目的研究五倍子、石榴皮、虎杖、大黄、黄芩、生地榆、柯子等7种中药材提取物对从养殖病鳗中分离得到的12株常见病原菌的抑菌作用。方法采用索氏提取法和超声提取法,以水和乙醇为提取溶剂分别萃取7种中药的有效组分,采用平板稀释法对12种菌株开展药物敏感实验,测定各种中药提取物对12种致病菌的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)。结果 7种中药提取物对12种菌都有不同程度的抑制作用。对于五倍子、石榴皮、大黄、虎杖4种药,索氏提取效果比超声提取效果好;对于生地榆和柯子,超声提取效果比索氏提取效果好。超声醇提五倍子抑菌效果最好。结论 7种中药提取物单用对病原菌均有不同程度的抑制作用,不同乙醇体积分数,提取中药与溶剂的比例对抑菌效果影响显著。