关键词： 黄曲霉毒素B1   苯并芘   BEAS-2B细胞   CYP1A1   遗传毒性  

摘要： 黄曲霉毒素B1（AflatoxinB1，AFB1）是一种间接致癌物，需要经过代谢活化才能发挥其致癌作用。细胞色素P450酶（cytochromeP450s，CYPs）是代谢活化AFB1最主要的酶。AFB1被代谢活化生成活性产物后会引起DNA损伤、基因突变、细胞凋亡等一系列反应。以往对AFB1的研究主要集中在肝脏，而近年来研究显示大气颗粒物中的AFB1污染水平相对较高，提示肺脏也可能是AFB1产生毒作用的靶器官。课题组前期通过分子对接发现AFB1与CYP1A1蛋白质活性中心具有良好亲和力，并通过实验发现CYP1A1参与AFB1的代谢活化过程。本论文致力于研究CYP1A1代谢活化AFB1的能力，以及AFB1诱导过表达CYP1A1的人支气管上皮BEAS-2B细胞（2B-hCYP1A1）遗传损伤的作用机制，并探讨AFB1与苯并（a）芘（benzo(a)pyrene，BaP）暴露对2B-hCYP1A1细胞遗传毒性的联合效应。　　目的和意义：　　构建稳定过表达CYP1A1的中国仓鼠肺V79和人支气管上皮BEAS-2B细胞作为细胞模型，观察AFB1处理后所致细胞毒性效应、ROS水平、细胞周期改变、DNA损伤作用，系统研究CYP1A1在代谢活化AFB1以及其致细胞遗传损伤的作用，以及探讨AFB1与BaP联合暴露对细胞的遗传毒性效应。　　方法：　　运用AutodockVina软件对AFB1与CYP1A1的结合活性进行预测;AFB1与CYP1A1微粒体活化系统共孵育，LC-MS检测AFB1的代谢产物;采用慢病毒构建稳定表达CYP1A1的V79细胞和BEAS-2B细胞（V79-hCYP1A1、2B-hCYP1A1）及对照细胞（V79-Mz、2B-NC），Westernblot和实时荧光定量PCR（qRT-PCR）验证过表达效率;不同浓度AFB1染毒细胞后，采用CCK-8法检测细胞活力、微核实验检测细胞染色体损伤情况、DCFH-DA荧光探针检测细胞内ROS含量、彗星实验检测DNA损伤情况、ELISA检测细胞内AFB1-DNA加合物和8-OHdG水平、细胞免疫荧光法检测γ-H2AX荧光点表达、CENP-B免疫荧光法检测微核中携带着丝粒情况、Westernblot检测DNA损伤相关蛋白及细胞周期蛋白表达水平、转录组学测序检测AFB1染毒后mRNA的差异表达及对差异基因进行富集分析，qRT-PCR检测相关基因表达水平。　　结果：　　1.分子对接结果显示AFB1与人CYP1A1蛋白质活性中心具有良好的结合活性，结合自由能评分为-9.3kcal/mol，与亚铁血红素中的铁离子之间的距离为4.204?，符合催化反应所需的电子转移条件。AFB1与CYP1A1微粒体活化系统共孵育，LC-MS检测到AFB1的代谢产物AFM1。　　2.在6h/18h或12h/36h的暴露/恢复时程下，AFB1诱导V79-hCYP1A1和2B-hCYP1A1细胞细胞毒性及微核形成，且呈现浓度依赖性。CENP-B免疫荧光显示AFB1诱导2B-hCYP1A1细胞所形成的微核中，有60%携带有着丝粒，提示AFB1可能经CYP1A1代谢成为致非整倍体剂。与对照细胞相比，AFB1诱导2B-hCYP1A1细胞内ROS生成增加，且随着暴露时间的延长而增加。采用AFB1（1.25μM）作用于细胞24h后，与对照细胞相比，2B-hCYP1A1细胞内AFB1-DNA加合物水平升高。彗星实验显示不同浓度AFB1作用于细胞24h后，细胞拖尾率增加，且呈剂量依赖性，与对照细胞相比，2B-hCYP1A1细胞的DNA损伤效应更显著。采用AFB1（1.25μM）作用于细胞12h后，2B-hCYP1A1细胞γ-H2AX蛋白表达水平升高及荧光点增强，该作用可被CYP1A1特异性抑制剂佛手柑素抑制，以上结果提示CYP1A1介导AFB1致人支气管上皮细胞遗传毒性。　　3.转录组测序发现与未染毒组相比，AFB1染毒24h的2B-hCYP1A1细胞差异表达基因有3612个（1702个下调，1910个上调）（|log2（FoldChange）|＞1且padj＜0.05），GO富集分析表明差异表达基因主要富集在生物过程，其余分布在分子功能和细胞组分。KEGG富集分析结果显示差异表达基因主要涉及肿瘤的转录失调、MAPK信号通路、p53信号通路、细胞因子与细胞因子受体的相互作用等。　　***1可以诱导2B-hCYP1A1细胞周期阻滞在G1/S期。AFB1染毒抑制2B-hCYP1A1细胞CyclinB1、CyclinD1、CDK2和CDK4周期蛋白表达。　　5.选择AFB1（1.25μM）和BaP（20μM）进行联合染毒，在2B-hCYP1A1细胞中AFB1和BaP呈现出明显细胞毒性，两者共暴露处理毒性更强，但在对照细胞中三种处理都未呈

关键词： AFB1   多菌灵   斑马鱼   脑组织   联合毒性  

摘要： 黄曲霉毒素B1(AFB1)是一种由黄曲霉菌产生具有强致癌性的真菌毒素,常见于小麦、玉米、花生、大米、大豆等谷物中。尽管可以通过改善储存条件和食品加工方法来控制AFB1产生,但很难完全消除其存在。多菌灵是一种广谱杀菌剂,主要用于防治水稻、小麦、玉米、大豆等多种谷物作物上的真菌病害。因此,在谷物中经常可以观察到多菌灵与AFB1的共存现象。深入了解二者在生物体内的交互作用及其联合毒性效应,对于人类健康和生态环境的评估具有极其重要的意义。本研究基于斑马鱼模式生物,采用多组学联合分析技术,结合运动行为和组织病理观察,全面评估AFB1和多菌灵单剂及联合暴露对斑马鱼脑组织产生的毒性作用。同时,开展蛋白印迹、免疫荧光和分子对接分析阐明AFB1和多菌灵联合毒性作用机制。主要研究内容及结果如下: 首先,考察了多菌灵对黄曲霉菌及其毒素AFB1产生的影响,为后续开展AFB1和多菌灵联合毒性作用机制的研究奠定基础。多菌灵对黄曲霉的生长表现出抑制作用,呈现出剂量依赖性。多菌灵在抑制黄曲霉生长时,对黄曲霉代谢物AFB1的产生也具有影响。值得注意的是,多菌灵对黄曲霉菌代谢能力的影响呈现先升高后降低的变化趋势。 接着,探究环境相关浓度下AFB1和多菌灵单剂及联合后对斑马鱼脑组织神经系统的损伤效应。14天暴露后在斑马鱼脑组织检测到AFB1和多菌灵的蓄积。高浓度下联合暴露中多菌灵积累量显著高于单剂暴露,表明两种化合物会相互影响彼此在斑马鱼脑中的积累。旷场试验表明单剂和联合暴露导致斑马鱼运动距离和速度显著下降,而组织观察表明药物处理导致斑马鱼大脑皮质结构松散、细胞结构混乱等病理改变,其中联合暴露加剧了对斑马鱼运动的抑制和脑组织的损伤。 然后,采用多组学技术评估AFB1和多菌灵单剂及联合暴露后对斑马鱼脑组织的代谢毒性作用。AFB1暴露导致斑马鱼脑组织产生130个差异表达代谢物(DEMs)、271个差异表达脂质(DELs)和653个差异表达基因(DEGs),显著上调甘油脂代谢和鞘脂代谢途径。多菌灵导致斑马鱼脑组织产生130个DEMs、381个DELs和1202个DEGs,显著上调甘油脂代谢通路。AFB1和多菌灵联合暴露产生了183个DEMs、420个DELs和1877个DEGs,比AFB1和多菌灵单独暴露产生更强的毒性作用。联合暴露会导致甘油磷脂代谢显著下调,组氨酸代谢以及泛酸和辅酶A的生物合成通路显著上调。 最后,分别以AFB1和多菌灵为对照,探讨二者的联合毒性作用机制。相较于单剂,多菌灵与AFB1联合暴露表现出显著不同的毒性,随着暴露浓度的增加,与单剂暴露的差异也随之加深,呈现出明显的剂量依赖毒性。其中甘油磷脂代谢通路在AFB1和多菌灵联合毒性作用的产生中具有意义。结合PC12细胞验证,强化了AFB1和多菌灵联合暴露导致的甘油磷脂代谢通路的下调,证明了PI3K/AKT通路介导的联合暴露对凋亡诱导、氧化应激、周期阻滞、MAPK通路激活的联合毒性作用机制。同时,鉴于联合暴露致脂质代谢紊乱,识别了磷脂磷酸酶这一关键靶点。AFB1和多菌灵联合后通过调节LYS、TYR等特定氨基酸的表达,影响其与ptenb等磷脂磷酸酶的结合进而干扰其活性,从而对PI3K/AKT通路产生负调节作用,介导AFB1和多菌灵联合毒性产生。 本研究为阐明农药与真菌毒素交互作用产生联合毒性提供数据支持,有助于揭示这些物质在自然环境中对生命体的作用,从而有助于降低它们对人类健康、食品安全和生态环境的可能威胁。

关键词： XOD   雏鹅   痛风   发酵中药   益生菌  

摘要： 发酵中药因其绿色、无污染、无残留的特点,是目前畜牧业抗生素理想的替代品。雏鹅痛风是一种营养代谢性疾病,是尿酸生成过多或排泄障碍引起的尿酸盐沉积症。黄嘌呤氧化酶（Xanthine Oxidase,XOD）是痛风治疗的关键靶点,一些天然植物和益生菌对XOD具有抑制作用,因此,将二者结合起来开发具有功能性的新型发酵中药饲料添加剂具有重要的现实意义。 本研究首先测定了44种中药和14株益生菌对XOD的抑制作用,根据中药XOD抑制率结果自拟中药组方,并测定组方中药对XOD的半数抑制浓度(Half Maximal Inhibitory Concentration,IC50),从14株益生菌中最终筛选出来3株对XOD抑制效果较强的菌株。将自拟中药组方提取液和3株益生菌进行混合发酵,探究最佳的发酵条件。基于高效液相色谱技术（High Performance Liquid Chromatography,HPLC）测定发酵前后主要有效成分秦皮甲素、秦皮乙素、秦皮苷、虎杖苷、白藜芦醇的含量变化,并分析该变化的原由。制作雏鹅痛风模型,将发酵中药制剂用于此模型,观察其对雏鹅痛风的预防效果,分析血清中尿酸、XOD、肌酐、尿素氮、丙二醛（Malondialdehyde,MDA）、总抗氧化能力（Total Antioxidant Capacity,T-AOC）、超氧化物歧化酶（Superoxide Dismutase,SOD）、Ig A、Ig G等指标的变化,观察肝、肾、肠病理组织学变化并采用生物信息技术分析肠道菌群的丰度变化。主要结果如下: （1）从44种中药中筛选了7种中药进行组方,组方成分包括秦皮、虎杖、当归、桂枝、泽泻、威灵仙和木通,这7味中药的半数抑制浓度(Median Inhibition Concentration,IC50)分别是:秦皮12.5 mg/m L、虎杖5 mg/m L、当归7.5 mg/m L、桂枝20 mg/m L、泽泻15 mg/m L、威灵仙15 mg/m L和木通10 mg/m L。14株益生菌最终筛选出来3株对XOD抑制率较强的,分别是植物乳杆菌、粪肠球菌1、粪肠球菌2。优化发酵条件为温度37℃,接种量3%,初始p H7.0。 （2）测定了发酵前后5种生物活性成分的含量变化,发酵后含量下降的成分有秦皮甲素、秦皮苷、虎杖苷,秦皮甲素下降了9.2%,秦皮苷含量了5.73%,虎杖苷含量下降了15.54%。含量上升的成分有秦皮乙素和白藜芦醇,秦皮乙素上升了21.30%,白藜芦醇上升了63.05%。分析原因是在乳酸菌的作用下发生了生物转化,说明益生菌在中药的发酵过程中起到重要作用。 （3）设计了5个不同处理来制作痛风模型。第1组饲喂正常日粮;第2组饲喂含有24%粗蛋白和高钙的日粮;第3组饲喂含有28%粗蛋白和高钙的日粮;第4组饲喂正常日粮,试验第7天在饮水中添加浓度100 ppm的草甘膦;第5组饲喂正常日粮,从第3天开始腹腔注射浓度为1250 mg/100 m L的尿酸溶液,连续注射1周。死亡率最高的是第3组,死亡率为66.7%,临床和解剖观察具有痛风表现;试验第7d,各组尿酸水平没有明显差异,第14d,第3组和第4组的血清尿酸水平显著高于第1组,2组和5组（P<0.05）。结果显示第3组造模效果最好,根据雏鹅症状和病理变化,结合实际生产中雏鹅痛风的发病原因多以高蛋白饲粮引起,选择第3组用作后续试验。 （4）复方发酵中药制剂对雏鹅痛风的预防:设计了四个不同处理,阳性组饲喂高钙高蛋白饲料;菌液组在阳性组上添加5%植物乳杆菌、粪肠球菌1,粪肠球菌2的混合菌液;中药组在阳性组的基础上添加5%的中药组方;发酵组在阳性组的基础上添加5%的发酵中药组方。饲喂14 d发酵组鹅的死亡率相较于阳性组、菌液组、中药组显著降低,发酵组鹅死亡率相较于阳性组降低了56.7%,相较于菌液组降低了10%,相较于中药组降低了16.7%,证明在日粮中添加发酵中药组方可以降低雏鹅痛风的死亡率;发酵组鹅XOD活性为1.13U/L,显著低于阳性组、菌液组、中药组（P<0.05）,发酵组鹅血清尿酸、肌酐水平分别为93.36μmol/L、15.05 mmol/m L,显著低于阳性组、菌液组、中药组（P<0.05）;抗氧化指标方面,发酵组鹅血清中MDA水平为1.89nmol/m L,显著低于阳性组、菌液组、中药组（P<0.05）,发酵组鹅T-AOC和SOD水平分别为5.71 U/m L、3.93 ng/m L,较阳性组、菌液组、中药组显著提高（P<0.05）,说明高钙高蛋白日粮会降低雏鹅抗氧化能力,而在日粮中添加发酵中药可以减轻这一影响;在免疫球蛋白方面,发酵组鹅血清中Ig A水平为3.62μg/m L,显著高于阳性组（P<0.05）,但与菌液组和中药组差异不显著（P>0.0

关键词： 黄曲霉毒素B1   肉鸭   复合添加剂   肝损伤   解毒作用  

摘要： 黄曲霉毒素B1（Aflatoxin B1,AFB1）是一种常见于食品和饲料中的霉菌毒素,对动物生产性能和健康造成严重威胁。我国是鸭生产和消费大国,而鸭是对AFB1最敏感的动物之一。每年因饲料中AFB1污染而导致鸭中毒的事件时有发生,给畜牧业发展带来巨大损失,研究AFB1的解毒措施具有重要意义。为此,本试验研究了两种复合添加剂对缓解AFB1暴露所引起的毒性效应的效果,以期为消除AFB1对鸭的危害提供依据。主要研究如下: 以1日龄樱桃谷肉鸭为试验对象,将240只体重接近的肉鸭随机分为4组,每组6个重复,每个重复10只鸭。各组处理如下:（1）对照组（饲喂基础日粮）;（2）AFB1组（饲喂基础日粮+90μg/kg AFB1）;（3）试验Ⅰ组（饲喂基础日粮+90μg/kg AFB1+复合添加剂Ⅰ）;（4）试验Ⅱ组（饲喂基础日粮+90μg/kg AFB1+复合添加剂Ⅱ）。试验期为4周,分别于第2、4周试验结束屠宰取样,计算1-2周和3-4周的生长性能。采用第2周和第4周样品测定肝脾指数、血清生化指标、肝脏抗氧化、肝脏组织HE染色和油红O染色。对第4周样品进一步测定肝脏超微结构、肝脏重要基因表达以及盲肠菌群多样性等指标。主要结果如下: 1.在前两周中,与对照组相比,AFB1组料重比显著升高,鸭末重、平均日增重和平均日采食量显著降低（P<0.05）,在后两周中,与对照组相比,AFB1组鸭末重和平均日采食量显著降低（P<0.05）。AFB1组肝脏指数在整个试验期中显著升高（P<0.05）,脾脏指数在前两周显著升高（P<0.05）。整个饲养阶段中,AFB1组的死淘率均高于其他组。与AFB1组相比,两个试验组能不同程度增加平均日增重、平均日采食量和末重,降低肝脾指数、料重比和死淘率,缓解AFB1给肉鸭生长性能和肝脾指数带来的负面影响。 2.在整个试验期中,与对照组相比,AFB1组显著增加了血清中天门冬氨酸氨基转移酶（AST）、丙氨酸氨基转移酶（ALT）、总胆红素（TBIL）和总胆汁酸（TBA）的含量,显著降低了血清中总蛋白（TP）和白蛋白（ALB）的含量（P<0.05）。与AFB1组相比,两个试验组能不同程度降低血清中AST、ALT、TBA和TBIL含量,增加TP和ALB含量,一定程度缓解AFB1给肉鸭血清生化指标带来的负面影响。 3.在整个试验期中,与对照组相比,AFB1会导致肝脏主要抗氧化酶谷胱甘肽过氧化物酶（GPX）和超氧化物歧化酶（SOD）活性显著降低,肝脏抗氧化物质谷胱甘肽（GSH）含量显著降低,脂质过氧化物丙二醛（MDA）水平显著升高（P<0.05）。与AFB1组相比,两个试验组可不同程度增加抗氧化酶GPX和SOD活性,增加GSH含量,降低过氧化MDA水平,缓解AFB1所导致的肝脏氧化应激。 ***1导致肉鸭肝脏出现明显病变。病理学观察发现,AFB1会对肝脏细胞产生毒性作用,导致细胞变性、坏死和损伤。超微结构观察发现,AFB1会导致肝细胞核出现不规则萎缩,大量线粒体结构破坏并肿胀。油红O染色观察发现AFB1导致肝脏出现明显脂肪变性。与AFB1组相比,两个试验组动物肝脏损伤程度出现明显缓解。 ***1显著增加肉鸭肝脏IFN-γ和IL-6这两种炎症因子的表达,同时促进细胞凋亡基因Bax、Caspase-3和Caspase-9的表达,抑制抗细胞凋亡基因Bcl-2的表达（P<0.05）。AFB1会下调胆汁酸受体FXR和SHP的表达,下调胆汁酸外排基因BSEP和MRP2的表达以及增加胆汁酸合成基因CYP7A1和CYP8B1的表达（P<0.05）,导致胆汁酸代谢紊乱,出现胆汁淤积。两个试验组可调控肝脏炎症、凋亡以及胆汁酸代谢相关基因的表达,缓解AFB1导致的肝损伤。 6.各组肉鸭盲肠菌群组成上具有明显差异性（P<0.05）。AFB1组Chao1、Sobs和ACE指数均显著下降（P<0.05）,试验Ⅰ组有效缓解了这种趋势。菌群门水平分析表明丰度最高的4个门类包括厚壁菌门（Firmicutes）、拟杆菌门（Bacteroidota）、放线菌门（Actinobacteriota）和变形菌门（Proteobacteria）,其中Proteobacteria和弯曲杆菌门（Campilobacterota）具有显著的组间差异（P<0.05）。菌群属水平分析表明,AFB1暴露显著提高有害菌属埃希氏-志贺氏菌属（Escherichia-Shigella）相对丰度,降低有益菌属如粪杆菌属（Faecalibacterium）等相对丰度。LEf Se物种差异判别分析表明,对照组中粪杆菌属（g＿Faecalibacterium）和氨基酸球菌科（f＿＿Acidaminococcaceae）显著富集,AFB1组肠杆菌科（f＿Enterobacteriac

关键词： 微波   花生   黄曲霉毒素B1   压榨特性   品质评价  

摘要： 花生是我国第三大油料作物,是国产食用油的重要来源。传统热榨制油技术采用“外源传导热”高温炒制后压榨,存在油中脂质营养成分损失严重和饼粕蛋白过度变性等问题。微波是一种电磁波,高频电磁波可直接穿透到油料内部诱导水分子产生“内源摩擦热”,相较于传统热处理的由外向内进行热传导和对流加热,能量损失小,热效率高;微波同时还具有“非热效应”有助于消解和降解花生中对热稳定的真菌毒素。因此,本文主要开展微波预处理工艺对花生压榨制油的影响相关研究,具体研究内容和结果如下: （1）研究微波预处理温度、时间对受污染花生中黄曲霉毒素B1（AFB1）的消减效果,对比加以Na2CO3喷涂辅助后对不同初始AFB1含量花生中AFB1的降解效果差异。结果显示,随着微波处理过程中的温度升高和持续时间延长,花生中AFB1的降解效率会相应提高。当AFB1的浓度超过71μg/kg时,采用Na?CO?喷涂与微波处理相结合的方法,能够显著促进微波对AFB1的降解作用。然而,随着AFB1初始含量的增加,降解率会经历一个先上升后逐渐稳定的趋势,在初始含量为130μg/kg时达到最高值67%。花生经过Na?CO?辅助微波处理后进行压榨,得到的花生油的酸价和过氧化值等理化指标均优于GB/T 1534-2017压榨成品花生油一级标准,且营养品质高,氧化稳定性好。 （2）在探讨微波预处理对压榨特性的影响时,我们详细分析了花生水分含量、水分结合程度、花生质构参数、以及花生蛋白变性程度的变化趋势,并深入研究了这些变化如何影响压榨出油率。为了提供更为全面的对比,同时考虑真空烘箱处理的效果。最后利用皮尔逊（Pearson）相关性分析,建立了各个评估指标与出油率之间的数学关系,从而为优化花生加工工艺提供了科学依据。结果显示,当采用900 W的微波功率处理7min或在85℃的真空烘箱中烘制89min时,花生内部的水分能够有效地从5.25%降低到约2.27%。此时,花生在压榨过程中的出油率表现最佳,分别可达45.85%和45.76%。在此处理条件下,花生与榨油机之间的切应力达到适中水平,使花生能够充分受到挤压并发生形变,从而促进油脂的大量流出。 （3）研究微波预处理时间、微波功率、压榨温度和入榨水分对压榨花生油中植物甾醇、生育酚、总酚含量的影响。结果表明,花生油中的甾醇含量随着单位质量微波功率的增大和微波时间的延长而不断降低,在4.5W/g微波7min后,由167.6mg/100g显著降低至154 mg/100g。当压榨温度高于60℃时,提高压榨温度也会使其降低,但对花生入榨水分的调节不会对其造成影响;增大单位质量微波功率和延长微波时间都会促进压榨花生油中生育酚的溶出,在4.5W/g微波7min后,由20.13mg/100g显著增加至23.75mg/100g。此外生育酚的含量还会随着压榨温度和提高而先上升后下降,在65℃时达到最大值25.39mg/100g;增大单位质量微波功率、延长微波时间、提高压榨温度都会促进压榨花生油中酚类物质的溶出,而花生入榨水分对压榨花生油中总酚含量无显著性影响。 （4）研究微预处理对花生压榨饼残油率、氮溶解指数（NSI）的影响。结果表明,花生饼残油率随着微波功率的提高先降低后升高,在4.5W/g时由空白组的12.03%降到最低值7.54%。同时花生饼的残油率还会随着微波时间的延长和压榨温度的提高不断降低。此外其随着花生入榨水分的提高先降低后升高,在2.42%时达到最小值5.35%,此时花生压榨出油率最高。单位质量微波功率的增大、微波时间的延长、压榨温度的升高以及入榨水分的提高都会导致花生饼的NSI值降低,花生蛋白的溶解能力都有所下降。最后通过正交试验设计法优化出微波预处理压榨制油的最佳工艺参数为:单位质量微波功率1.5W/g,微波时间9min,压榨温度70℃,此时花生饼的残油率为7.3%,NSI为78.21%。以上研究可为花生的高效加工和利用提供坚实的理论支撑与详实的数据支持,从而指导实际生产操作

关键词： 黄曲霉毒素B1   脱氧雪腐镰刀菌烯醇   枯草芽孢杆菌   毒素降解   肉鸡试验  

摘要： 全球监测报告显示72%的饲料和饲料原料受到一种以上霉菌毒素的污染。来自亚洲的饲料样品中真菌毒素污染率(82%)高于来自欧洲和美洲的饲料样品(40%)。我国2022年饲料原料及配合饲料普遍受多种霉菌毒素污染,其中粕类、玉米及副产物、小麦和麸皮易被黄曲霉毒素B1(AFB1)和脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)污染。霉菌毒素已经被鉴定出了400多种,其中AFB1和DON对饲料和饲料原料危害最为严重。家畜采食霉变饲料,出现如饲料转化率低、生长速度缓慢、免疫力下降和繁殖障碍等症状。因此,研发安全高效降解饲料中霉菌毒素的产品迫在眉睫。本研究旨在分离筛选出能高效降解AFB1和DON的益生菌及中药组分,并研究其在不同条件下对AFB1和DON的降解率,又进行了肉鸡的体内试验,来探究益生菌及益生菌配合中药水提液在体内对AFB1和DON的降解效果。主要研究内容如下: (1)降解AFB1及DON菌株和中药组分的筛选本试验以香豆素和氧化苯乙烯为AFB1和DON的替代物,从淤泥、腐叶、动物粪便、牛羊瘤胃液及实验室保存的菌种中进行降解毒素益生菌的初步筛选,共获得十一株能在初筛平板上良好生长的菌株。以保肝解毒为筛选标准,通过查阅资料初步筛选出山楂、白术、茵陈、蒲公英四味中药作为备用药。采用ELISA试剂盒检测这十一株菌株对AFB1和DON的降解率,最终选择一株枯草芽孢杆菌ECL1.2为备用菌株,该菌株为实验室保存的益生菌,前期已对其生物学特性进行了研究。该菌株对AFB1和DON的降解率分别为82.77%、49.49%。另外ELISA试剂盒检测单味中药在体外对AFB1和DON的降解,结果显示这几味中药均无体外降解效果,因其有保肝解毒功效,后期将其与益生菌配合做动物体内降解试验。 (2)菌株ECL1.2降解毒素条件的优化利用试验一筛选出的菌株ECL1.2,以对AFB1和DON降解率为依据,探索其在不同温度(30℃、37℃、40℃)、时间(12 h、24 h、48h)、pH(pH4、pH7、pH9)、菌浓度(1×10～5 CFU/mL、1×10～6 CFU/mL、1×10～7CFU/mL)对AFB1和DON降解率的影响。在不同温度下,37℃时菌株ECL1.2对AFB1和DON降解率最高;在不同时间下,菌株ECL1.2作用24 h对AFB1和DON降解率最高;在不同pH下,菌株ECL1.2在pH7条件下对AFB1和DON降解率最高;在不同菌浓度下,当菌株ECL1.2浓度为1×10～6 CFU/mL对AFB1和DON降解率最高。菌株ECL1.2对AFB1和DON最佳降解条件为:温度37℃、作用24 h、初始pH 7.0、菌浓度1×10～6 CFU/mL。 (3)菌株ECL1.2和中药水提液对肉鸡饲料中AFB1和DON解毒效果的研究试验采用单因子试验设计,挑选了180只1日龄健康、体重接近、雄性AA肉鸡,分为前期(1～21天)和后期(21～42天)两个阶段进行饲养。按体重分为6个组,每组3个重复,每个重复10只鸡。试验分组:A组(基础日粮)、B组(试验日粮,即添加发霉玉米和玉米喷浆粉使AFB1和DON含量分别达到70和1000μg/kg)、C组(试验日粮+1×10～6CFU/g ECL1.2)、D组(试验日粮+2×10～6CFU/g ECL1.2)、E组(试验日粮+0.05%中药水提液(山楂:茵陈:白术:蒲公英=4:2:2:1))、F组(试验日粮+1×10～6CFU/g ECL1.2+0.05%中药水提液(山楂:茵陈:白术:蒲公英=4:2:2:1))。试验结束后通过测定肉鸡生长性能、营养物质代谢率、肉鸡血清、肝脏、胸肌及粪便中AFB1和DON含量、免疫器官指数和消化器官相对长度、血清生化指标、肝脏和肠道组织切片及肠道内容物微生物区系等相关指标,探究益生菌ECL1.2和中药水提液在体内对毒素的作用效果。结果显示与试验B组相比,试验C、D、E和F组均能有效缓解毒素对肉鸡生长的抑制作用,显著增加平均日增重(P<0.05),料重比和平均日采食量显著降低(P<0.05),试验F组(益生菌搭配中药水提液组)效果最佳,且试验C、D、E和F组显著降低肉鸡死亡率;试验C、D、E和F组显著提高了肉鸡对粗蛋白、粗脂肪和钙的代谢率(P<0.05);试验C、D、E和F组粪便中AFB1和DON含量显著降低(P<0.05),21d和42d血清中,各试验组间AFB1含量无显著差异(P>0.05),而试验C、D、E和F组DON含量显著降低(P<0.05),试验C、D、E和F组肝脏和胸肌中AFB1和DON含量显著降低(P<0.05);试验C、D、E和F组改善了AFB1和DON对肝脏器官指数的影响;试验C、D、E和F组显著降低了血清中谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)和碱性磷酸酶(ALP)活性(P<0.0