关键词： 中医美容   面膜   中药提取物   用药特点  

摘要： 本文选择市场上销量最高的贴片式面膜进行研究,将佰草集、百雀羚、相宜本草、采之汲、自然之名五个品牌含有中药成分的3 1 9 款面膜进行归纳整理,分为保湿类面膜,美白类面膜,抗衰类面膜和舒缓类面膜。 目的:通过对四种功效面膜中所含中药成分的归纳整理,探讨其用药规律与特色。 方法:使用 Microsoft Office Excel 2021 软件中的数据挖掘插件和 SPSS 27.0,对规范好的四类面膜进行单味药的出现频次统计,并计算出频率,根据频数分析结果统计核心药物,并将核心药物的性味归经分布情况做成图表;运用 I B M S P S S Modeler 18.0 软件进行核心药物组合的关联规则分析,归纳总结其用药特色与规律。 结果: 1.四类面膜中都含有银耳。按出现频率较高不同类型中所含药物统计结果为:保湿类面膜:银耳、马齿苋、石斛、积雪草、芦荟、莲花;美白类面膜:银耳、芍药、茯苓、甘草、蔷薇花、苦参、雪莲花。抗衰类面膜:银耳、人参、积雪草、灵芝、黄芪。舒缓类面膜:积雪草、银耳、马齿苋、甘草、洋甘菊。 2.四类面膜中核心药物的药味多以甘、苦为主,药性以平、寒为主,保湿类面膜核心药物多归肝、肺、心经,美白类面膜核心药物多归胃、肺、肝、心、脾经。抗衰类面膜核心药物多归肝、肺、脾、胃、肾经,舒缓类面膜核心药物多归肝、肺经。 3.支持度最高的药对有保湿类面膜:麦冬与石斛;美白类面膜:苦参与芦荟;抗衰类面膜:黄芪与人参;舒缓类面膜:马齿苋与积雪草。 4.四类面膜油脂类成分出现频数>5 的有突厥蔷薇花油、扁核木油、霍霍巴籽油、向日葵籽油和酸橙果皮油。 5.四类面膜用药部位中根、根茎用药较多,其次是花、花粉部位,根皮、树皮用的最少。 结论: 1.四类面膜的核心药物中都包含银耳。四类面膜核心药物的药味多以甘、苦为主,药性以平、寒为主;多为补益药和清热药。 2.保湿类面膜归肝经最多,其次是肺经、心经;美白类面膜归胃经最多,其次是肺经、脾经;抗衰类面膜归肝经最多,其次是肺经、脾经;舒缓类面膜归肺经最多,其次是肝经。 3.四类面膜用药部位中根、根茎用药较多,根皮、树皮用药较少,多使用如突厥蔷薇花油等植物油类。 4.四类面膜核心药对: 保湿类:麦冬与石斛,两者复配提取物通过调控皮肤保湿相关基因,达到促进皮肤水合、修复皮肤屏障作用。美白类:苦参与芦荟,两者单独都具有美白作用,协同美白作用研究较少。抗衰类:黄芪与人参,两者组合在提高衰老大鼠的抗氧化能力上具有协同作用。舒缓类:马齿苋与积雪草,两者协同对于 TNF-α、IL-1α、IL-6均具有明显的抑制作用,明显缓解皮肤损伤。

关键词： 金纳米棒   铜沉积   核壳材料   免疫层析试纸条   黄曲霉毒素B1  

摘要： 黄曲霉毒素B1（Aflatoxin B1,AFB1）是黄曲霉（Aspergillus flavus）和寄生曲霉（Aspergillus parastiticus）产生的有毒次级代谢产物,主要存在于玉米、花生等农作物中,严重威胁到人类和动物的健康,在世界范围内引起了广泛的关注,因此建立可靠、快速、灵敏的AFB1检测方法已经成为当前亟需解决的问题。免疫层析分析技术是目前发展较为成熟的快速检测技术,因其方便、快速、成本低等优势被广泛应用于快速检测领域。但是该方法的最大缺点在于其检测灵敏度低,无法对微量分析物实现准确定量分析,因此如何提高免疫层析技术的灵敏度是当前研究的热点。本研究制备了光学信号良好的金纳米棒（Au nanorods,Au NRs）作为信号标签,结合铜沉积技术对信号进行放大;在Au NRs的基础上制备金核铜壳纳米复合材料用于提高检测的灵敏度,缩短检测时长,降低检测成本,从而拓宽试纸条的应用范围。具体研究内容如下: 1、基于金纳米棒的免疫层析试纸条检测玉米中的AFB1。在常规的免疫层析分析中,通常采用20～30 nm的球形金（Au nanoparticles,Au NPs）作为信号标签产生检测信号,由于其粒径小,发光强度不足导致灵敏度低。为了克服这一难题,本研究合成了光学信号优良、分散性好的Au NRs作为信号标签。通过静电吸附将抗黄曲霉毒素B1单克隆抗体（Anti-AFB1-m Ab）偶联在Au NRs上作为试纸条的金标探针,构建免疫层析试纸条检测玉米中的AFB1。在最优实验条件下,结合试纸条便携式定量分析仪建立标准曲线,该方法对玉米中AFB1的检出限为0.124 ng/m L,线性范围(IC10～IC90)为0.124 ng/m L～7.224 ng/m L,在玉米样品中的平均加标回收率为89.5%～111.7%,变异系数为3.97%～6.85%。对玉米质控样进行检测,检测结果与质控样认证值在95%置信区间内无显著性差异。 2、基于铜沉积信号放大技术的免疫层析试纸条检测玉米中的AFB1。信号放大技术在试纸条检测中的应用至关重要。本研究通过铜沉积增大Au NRs的粒径来增强试纸条的显色强度,使原本检测线上聚集的肉眼观察不到的Au NRs再次出现在视野中,从而减少探针的使用量,提高检测的灵敏度。通过优化铜沉积的温度、时间,硫酸铜和抗坏血酸的浓度获得最佳铜沉积的条件;在最佳实验条件下,该方法的线性范围为0.035 ng/m L～5.517 ng/m L,检出限为0.035 ng/m L,与未经信号放大的试纸条相比,灵敏度提高了4.9倍。在玉米中的平均加标回收率为89.06%～118.2%,变异系数为5.92%～9.10%,对玉米质控样进行检测,检测结果与质控样认证值在95%置信区间内无显著性差异,该检测模式在含有AFB1的玉米样品中具有较大的应用潜力。 3、基于金核铜壳纳米复合材料免疫层析试纸条检测玉米中的AFB1。利用铜沉积二次信号放大技术可以提高试纸条的检测灵敏度,但同时也增加了反应步骤和检测时长,降低了检测效率。为了提高检测效率,本研究探索制备了Au NRs核铜壳复合材料,与Au NRs相比,核壳材料粒径变大,光学信号更强,同时也可以为抗体提供更多的负载位点。本研究利用金核铜壳纳米材料作为信号标签,通过静电吸附偶联抗体制备检测探针,建立一种高灵敏度的AFB1试纸条检测方法。对抗体添加量、T线抗原浓度、探针使用量和免疫反应时间进行了优化,在最佳实验条件下,该方法的检出限低至0.026 ng/m L,同时简化了操作步骤,缩短了检测时间。该方法的线性范围为0.026ng/m L～0.913 ng/m L,在玉米样品中的平均加标回收率为103.34%～114.64%,变异系数为1.36%～5.75%,与其他常见的真菌毒素无明显交叉反应。进一步对玉米质控样进行检测,检测结果与质控样认证值在95%置信区间内无显著性差异,检测结果相关性好。

关键词： 黄曲霉毒素B1   玉米赤霉烯酮   粪肠球菌   贝莱斯芽孢杆菌   生物降解  

摘要： 黄曲霉毒素B1（Aflatoxin B1,AFB1）和玉米赤霉烯酮（Zearalenone,ZEN）是人们目前发现毒性最强,污染最为广泛,危害最为严重,造成经济损失最大的两种真菌毒素。AFB1和ZEN对人和动物具有广泛的消化系统毒性、生殖毒性、免疫毒性、细胞毒性和致癌性,给人和动物的健康带来极大危害。近年来,有关真菌毒素降解的研究报道越来越多,其中微生物降解法绿色高效,特异性强,脱毒率高,且不引入二次污染,受到了人们的广泛关注。本研究旨在从发霉饲料及花坛和草地、垃圾堆、花生地和玉米地等土壤中筛选出高效降解AFB1和ZEN的微生物菌株,优化了菌株对AFB1和ZEN的降解条件,并将其应用于花生粕及玉米粉中,最后探索其降解机理以及降解产物的致毒活性。主要内容如下: （1）AFB1降解菌的筛选、条件优化及应用研究:以香豆素为唯一碳源,初筛分离到43株存活菌株,通过菌株与AFB1共培养的方法复筛获得了菌株HB2-2,其对AFB1的脱毒率达40.25%。通过生理和生化以及16S r RNA基因测序等方法分析鉴定,确认菌株HB2-2为粪肠球菌（Enterococcus Faecium）。菌株HB2-2以10%（v/v）的接种量,在NB液体培养基中以32℃、200 r/min、96 h的发酵条件培养后,对AFB1标准品（113 ng/m L）的脱毒率为89.98%。添加20μL愈创木酚后脱毒率高达99.54%,而将其应用于降解花生粕中的AFB1（105μg/kg）,其脱毒率仅为53.97%。采用三因素三水平响应面试验对菌株HB2-2降解花生粕中的AFB1的条件进行优化,发现发酵时间为96 h、初始p H值为10.0、料液比为1:20时脱毒率最高,为88.15%,花生粕中AFB1残留量为12.46±1.17μg/kg,低于国标饲料中AFB1最高20μg/kg的限量。 （2）HB2-2菌株降解AFB1机理的初步研究:菌株HB2-2在NB液体培养基中发酵培养48 h后离心,其发酵上清液在96 h内对AFB1（113 ng/m L）的脱毒率为59.65%。而经100℃沸水加热、蛋白酶K及蛋白酶K+SDS处理后的发酵上清液对AFB1（300 ng/m L）的降解活性显著降低,推测该菌株发酵上清液中含有可降解AFB1的生物酶。进一步研究发现降解产物对Hep G2细胞及Raw264.7细胞的毒性显著低于AFB1。LC-MS分析AFB1降解产物分子量分别为330、286、248,我们推断产物P1、P2、P3分子式分别可能为:C17H14O7、C16H14O5、C14H16O4。 （3）ZEN降解菌的筛选、条件优化及应用研究:以ZEN为唯一碳源,通过菌株与ZEN共培养的方法,从前期初筛降解AFB1保存所获得的43株菌株和玉米地土壤进行复筛,获得了菌株YM1-1,其对ZEN的脱毒率达75.57%。通过生理和生化以及16S r RNA基因测序等方法分析鉴定,确认菌株YM1-1为贝莱斯芽孢杆菌（Bacillus velezensis）。菌株YM1-1以10%（v/v）的接种量,在LB液体培养基中以37℃、200 r/min、12 h的发酵条件培养后,对ZEN标准品（314 ng/m L）的脱毒率为100%。菌株HB2-2以10%（v/v）的接种量,在NB液体培养基中以32℃、200r/min、72 h的发酵条件培养后,对ZEN标准品（314 ng/m L）的脱毒率为64.0%。将菌株HB2-2及菌株YM1-1分别用于降解玉米粉中的ZEN（2641.18μg/kg）,发现均在料液比为1:10时脱毒率最高。其中菌株HB2-2脱毒率仅有29.58%,玉米粉中ZEN残留量为1460.17±17.45μg/kg,表明该菌株并不适用于实际应用中对ZEN毒素的脱除。菌株YM1-1脱毒率高达86.45%,毒素残留量仅为284.13±80.52μg/kg,低于国家标准规定的饲料中玉米赤霉烯酮含量500μg/kg。 （4）菌株YM1-1降解ZEN机理的初步研究:菌株YM1-1在LB液体培养基中发酵培养48 h后离心,其发酵上清液在12 h内对ZEN（370 ng/m L）的脱毒率为99.51%,而经100℃沸水加热、蛋白酶K及蛋白酶K+SDS处理后的发酵上清液降解活性显著降低,推测该菌株的发酵上清液中含有可降解ZEN的生物酶。进一步的研究表明降解产物对Hep G2细胞及Raw264.7细胞的毒性明显低于ZEN。LC-MS分析ZEN降解产物分子量为292,推测其产物分子式可能为:C17H24O4。 综上所述,本论文通过筛选研究分别获得了具有高效降解AFB1活性的粪肠球菌HB2-2和具有高效降解ZEN活性的贝莱斯芽孢杆菌YM1-1,并初步探究了菌株降解两种真菌毒素的机理。本论文具

关键词： 黄曲霉毒素B1   苯并芘   BEAS-2B细胞   CYP1A1   遗传毒性  

摘要： 黄曲霉毒素B1（AflatoxinB1，AFB1）是一种间接致癌物，需要经过代谢活化才能发挥其致癌作用。细胞色素P450酶（cytochromeP450s，CYPs）是代谢活化AFB1最主要的酶。AFB1被代谢活化生成活性产物后会引起DNA损伤、基因突变、细胞凋亡等一系列反应。以往对AFB1的研究主要集中在肝脏，而近年来研究显示大气颗粒物中的AFB1污染水平相对较高，提示肺脏也可能是AFB1产生毒作用的靶器官。课题组前期通过分子对接发现AFB1与CYP1A1蛋白质活性中心具有良好亲和力，并通过实验发现CYP1A1参与AFB1的代谢活化过程。本论文致力于研究CYP1A1代谢活化AFB1的能力，以及AFB1诱导过表达CYP1A1的人支气管上皮BEAS-2B细胞（2B-hCYP1A1）遗传损伤的作用机制，并探讨AFB1与苯并（a）芘（benzo(a)pyrene，BaP）暴露对2B-hCYP1A1细胞遗传毒性的联合效应。　　目的和意义：　　构建稳定过表达CYP1A1的中国仓鼠肺V79和人支气管上皮BEAS-2B细胞作为细胞模型，观察AFB1处理后所致细胞毒性效应、ROS水平、细胞周期改变、DNA损伤作用，系统研究CYP1A1在代谢活化AFB1以及其致细胞遗传损伤的作用，以及探讨AFB1与BaP联合暴露对细胞的遗传毒性效应。　　方法：　　运用AutodockVina软件对AFB1与CYP1A1的结合活性进行预测;AFB1与CYP1A1微粒体活化系统共孵育，LC-MS检测AFB1的代谢产物;采用慢病毒构建稳定表达CYP1A1的V79细胞和BEAS-2B细胞（V79-hCYP1A1、2B-hCYP1A1）及对照细胞（V79-Mz、2B-NC），Westernblot和实时荧光定量PCR（qRT-PCR）验证过表达效率;不同浓度AFB1染毒细胞后，采用CCK-8法检测细胞活力、微核实验检测细胞染色体损伤情况、DCFH-DA荧光探针检测细胞内ROS含量、彗星实验检测DNA损伤情况、ELISA检测细胞内AFB1-DNA加合物和8-OHdG水平、细胞免疫荧光法检测γ-H2AX荧光点表达、CENP-B免疫荧光法检测微核中携带着丝粒情况、Westernblot检测DNA损伤相关蛋白及细胞周期蛋白表达水平、转录组学测序检测AFB1染毒后mRNA的差异表达及对差异基因进行富集分析，qRT-PCR检测相关基因表达水平。　　结果：　　1.分子对接结果显示AFB1与人CYP1A1蛋白质活性中心具有良好的结合活性，结合自由能评分为-9.3kcal/mol，与亚铁血红素中的铁离子之间的距离为4.204?，符合催化反应所需的电子转移条件。AFB1与CYP1A1微粒体活化系统共孵育，LC-MS检测到AFB1的代谢产物AFM1。　　2.在6h/18h或12h/36h的暴露/恢复时程下，AFB1诱导V79-hCYP1A1和2B-hCYP1A1细胞细胞毒性及微核形成，且呈现浓度依赖性。CENP-B免疫荧光显示AFB1诱导2B-hCYP1A1细胞所形成的微核中，有60%携带有着丝粒，提示AFB1可能经CYP1A1代谢成为致非整倍体剂。与对照细胞相比，AFB1诱导2B-hCYP1A1细胞内ROS生成增加，且随着暴露时间的延长而增加。采用AFB1（1.25μM）作用于细胞24h后，与对照细胞相比，2B-hCYP1A1细胞内AFB1-DNA加合物水平升高。彗星实验显示不同浓度AFB1作用于细胞24h后，细胞拖尾率增加，且呈剂量依赖性，与对照细胞相比，2B-hCYP1A1细胞的DNA损伤效应更显著。采用AFB1（1.25μM）作用于细胞12h后，2B-hCYP1A1细胞γ-H2AX蛋白表达水平升高及荧光点增强，该作用可被CYP1A1特异性抑制剂佛手柑素抑制，以上结果提示CYP1A1介导AFB1致人支气管上皮细胞遗传毒性。　　3.转录组测序发现与未染毒组相比，AFB1染毒24h的2B-hCYP1A1细胞差异表达基因有3612个（1702个下调，1910个上调）（|log2（FoldChange）|＞1且padj＜0.05），GO富集分析表明差异表达基因主要富集在生物过程，其余分布在分子功能和细胞组分。KEGG富集分析结果显示差异表达基因主要涉及肿瘤的转录失调、MAPK信号通路、p53信号通路、细胞因子与细胞因子受体的相互作用等。　　***1可以诱导2B-hCYP1A1细胞周期阻滞在G1/S期。AFB1染毒抑制2B-hCYP1A1细胞CyclinB1、CyclinD1、CDK2和CDK4周期蛋白表达。　　5.选择AFB1（1.25μM）和BaP（20μM）进行联合染毒，在2B-hCYP1A1细胞中AFB1和BaP呈现出明显细胞毒性，两者共暴露处理毒性更强，但在对照细胞中三种处理都未呈

关键词： 传统中药制剂   民族药制剂   备案信息   四川省   医疗机构  

摘要： 目的回顾四川省医疗机构中药制剂(包括传统中药制剂和民族药制剂)的备案情况,分析存在的问题,提出发展策略。方法统计四川省药品监督管理局2019年1月1日至2022年5月16日发布的中药制剂备案信息,从备案中药制剂(剂型、功效主治)和备案机构(行政级别、地域分布)两方面分析四川省医疗机构应用传统工艺配制中药制剂的发展现状。结果备案中药制剂2720个,剂型以丸剂(48.20%)、散剂(19.93%)、胶囊剂(9.63%)为主。备案传统中药制剂1026个(37.72%),功效主治以活血(30.02%)、清热(18.81%)、补益(16.08%)为主;申报制剂备案医疗机构共76家,其中公立医疗机构49家,民办医院及诊所27家,多集中于成都市;公立医疗机构共备案中药制剂862个(84.02%),其中省级医院259个(25.24%)、市级医院421个(41.03%)、县级及以下医院182个(17.74%),且多数具备自行生产和配制的能力。备案民族药制剂1694个(62.28%),分布于甘孜州(1290个)、阿坝州(280个)、凉山州(124个),但申报制剂备案医疗机构仅15家。结论四川省中药制剂备案数量较多,备案医疗机构主要为省级、市级公立医疗机构,制剂备案情况区域性医疗特色较鲜明。

关键词： AFB1含量   三维荧光光谱   特征提取   回声状态网络   麻雀搜索算法  

摘要： 花生油在生产过程中极易受到黄曲霉毒素B1(Aflatoxin B1, AFB1)的污染。针对AFB1的传统检测方法操作繁琐、时效性差等问题,利用荧光光谱技术快速检测花生油中AFB1含量。首先通过三维荧光光谱确定最佳激发波长,使用K-means和自组织映射(Self organizing map, SOM)聚类算法对花生油中AFB1含量进行超标与否的定性鉴别,准确率均达95%以上;其次使用2种预处理算法和2种降维算法,选出竞争自适应重加权采样(Competitive adaptive reweighted sampling, CARS)为最佳的波长选择方法;随后将回声状态网络(Echo state network, ESN)用于AFB1的定量建模,同时与其他模型作比较,结果显示CARS-ESN模型获得了最佳AFB1含量预测效果;最后将麻雀搜索算法(Sparrow search algorithm, SSA)用于对ESN参数进行寻优,最终预测集决定系数达0.984,均方根误差达2.13μg/kg。结果表明了荧光光谱技术结合ESN预测花生油中AFB1含量的可行性,为在线检测食用油中真菌毒素含量系统的开发提供理论依据。