关键词： 补肾和脉中药制剂   动脉粥样硬化   炎症  

摘要： 目的：研究补肾和脉中药制剂(Bu-shen- he- mai- zhong-yao-zhi- ji,HMZYZJ)对ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化(atherosclerosis, AS)的治疗效果及可能机制。方法：将24只载脂蛋白E基因敲除(apolipoprotein-E knockout, ApoE-/-)小鼠随机分为高脂组、HMZYZJ组和阿托伐他汀组,每组8只。高脂组：高脂饲料(0.25%胆固醇和15%可可脂),HMZYZJ组：高脂饲料+HMZYZJ (1.37g/kg/d),阿托伐他汀组：高脂饲料+阿托伐他汀(5mg/kg/d)。8周后麻醉取材,切片做胸主动脉的HE和免疫组化染色,并检测斑块中肿瘤坏死因子-a(tumor necrosis factor-a, TNF-a)、白介素-1β (interleukin-1β, IL-1β)和白介素-8(interleukin-8, IL-8)的表达。结果：HMZYZJ组和阿托伐他汀组AS斑块的大小显著小于高脂组,HMZYZJ组和阿托伐他汀组炎症因子TNF-α. IL-1β和IL-8含量显著低于高脂组(P<0.05)。结论结果表明HMZYZJ及阿托伐他汀抑制了AS的进展,可能机制为抑制AS斑块内炎症反应。

关键词： 饲料原料   黄曲霉毒素B1   黄曲霉   营养成分   油脂   脂肪酸  

摘要： 诸多调查研究发现,在相同的温度条件下,饲料原料中水分含量都处于安全水分以下时,不同饲料原料中黄曲霉毒素（Aflatoxin,AF）的污染程度依然各不相同,例如,玉米和花生粕相比于小麦和豆粕更容易被AF污染。了解不同饲料原料中AF污染差异形成的原因,可以为饲料生产中AF污染的防治提供一定的科学依据。因此本研究根据不同饲料原料营养成分组成的差异,研究不同营养成分对黄曲霉生长和产毒的影响及其作用机制,从而阐明不同饲料原料中黄曲霉毒素B1（Aflatoxin B1,AFB1）污染差异性的原因。主要研究内容如下:1.油脂对黄曲霉生长和产生AFB1的影响及其可能的作用机制本试验选择饲料原料:小麦、玉米、大豆、花生、大豆粕、花生粕、玉米胚乳和玉米胚作为试验材料。在未脱脂和脱脂的饲料样品中分别接种黄曲霉孢子液,并且在脱脂饲料样品中添加10%的不同油脂（玉米油、大豆油、花生油和小麦胚芽油）后接种黄曲霉孢子液,于30℃培养15 d。研究不同饲料样品中AFB1的积累情况以及不同油脂在不同脱脂饲料样品中对黄曲霉产生AFB1的影响。其次,在人工合成培养基中添加0.5%-8.0%的玉米油、大豆油、花生油和小麦胚芽油,进一步研究不同油脂对黄曲霉生长和合成AFB1的影响,并测定AFB1合成中关键基因及蛋白的表达量。1)不同原料中AFB1的积累情况及不同油脂在脱脂原料样品中对黄曲霉合成AFB1的影响。粗脂肪含量高的原料如大豆、玉米胚和花生中AFB1的含量较高,且脱脂样品中AFB1的含量要明显低于未脱脂的样品,但是在脱脂样品中添加10%的玉米油能恢复脱脂样品对AFB1合成的促进作用。在不同脱脂样品中分别添加10%的玉米油、花生油、大豆油、小麦胚芽油发现,花生油对黄曲霉产AFB1的促进作用最强,小麦胚芽油的作用相对较弱。但是在不同脱脂样品中添加同一种油脂,原料中AFB1的含量各不相同。以上结果说明,油脂含量可能是造成不同原料AFB1污染差异的主要原因之一,且油脂种类对黄曲霉产毒也有一定的影响;此外,除了油脂,原料基质中其它成分也对黄曲霉产毒有较大影响。2)四种油脂在培养基中对黄曲霉生长及产毒的影响。结果显示,AFB1的产量随着油脂添加量的增加而增加,当油脂的添加量≥1.0%时,花生油的促进作用最明显（P<0.05）,其次,玉米油>大豆油>小麦胚芽油。油脂均能促进黄曲霉菌落生长,黄曲霉菌落直径随着油脂添加量的增加也明显增加（P<0.05）,其中花生油的促进作用最强。4种油脂对黄曲霉产孢有一定的抑制作用,其中小麦胚芽油和大豆油的抑制作用最强。花生油对黄曲霉孢子萌发的促进作用最明显（P<0.05）,但大豆油的影响相对较小（P≥0.05）。说明油脂对黄曲霉产毒和黄曲霉菌落生长的作用一致,但对黄曲霉产毒与产孢的结果不一致。3)四种油脂对AF合成过程中关键基因及蛋白表达的影响。本试验检测了与AF合成相关的14个关键基因。结果表明,4种油脂均能明显促进基因afl R和afl S表达,其中花生油的作用最显著,其次是小麦胚芽油>玉米油>大豆油。同时,4种油脂均显著上调AF合成通路前段基因afl C和afl D（P<0.05）的表达。AF合成后段的基因afl O、afl Q和调节基因afl U在玉米油组和花生油组中明显上调（P<0.05）,而在其它两组中无显著差异。本试验应用i TRAQ技术研究发现,花生油、玉米油、大豆油和小麦胚芽油与对照组相比,差异蛋白分别有298个、236个、231个和168个;其中上调蛋白分别有179个、88个、123个和86个;下调蛋白分别有119个、148个、108个和82个。花生油对AF合成相关蛋白表达的影响最大,共有7个差异蛋白,其中蛋白Afl G、Afl K、Afl L、Afl O、Afl P和Afl V显著上调（P<0.05）,蛋白Afl B显著下调（P<0.05）。大豆油的影响相对较小,有3个上调蛋白Afl G、Afl O和Afl P。蛋白Afl G、Afl O和Afl P在4种油脂中均显著上调。说明,油脂可能是通过上调AF合成相关的关键基因与蛋白的表达从而促进黄曲霉合成AFB1。2.不饱和脂肪酸对黄曲霉生长及合成AFB1的影响在培养基中分别添加0.005%-6.0%的单一不饱和脂肪酸:油酸、亚油酸、亚麻酸和花生四烯酸;以及按照油酸、亚油酸和亚麻酸在4种天然油脂中的比例配制成的4种混合脂肪酸（添加量:0.5%、2.0%和8.0%）,然后接种黄曲霉孢子液,于30℃培养7 d。研究单一不饱和脂肪酸和脂肪酸配比对黄曲霉生长及合成AFB1的影响。1)不饱和脂肪酸在培养基中对黄曲霉生长和产AFB1的影响。AFB1的产量随着油酸、亚油酸和花生四烯酸添加量的增加而增加,但是亚麻酸明显抑制了黄曲霉合成AFB1。4种脂肪酸均可促进黄曲霉菌落生长,其中亚麻酸的促进作

关键词： 黄曲霉毒素B1   筛选   降解性质   降解效率  

摘要： 黄曲霉毒素(Aflatoxin,AFT)是黄曲霉和寄生曲霉的次级代谢产物,具有很强的致癌、致突变和致畸性。它广泛存在于食品、饲料、农副产品中,不仅对人类和动物的健康造成极大的危害,同时会带来巨大的经济损失,是食品安全中一个广为关注的问题。现在虽然有很多去除黄曲霉毒素B1(AFB1)的方法,但是现有的物理法和化学法虽然能在一定程度上去除AFT,但是存在降低产品营养价值、感官品质低、易产生副产物、有二次污染、去毒不彻底或需要昂贵的设备等缺陷限制了它们的实际运用。因此,寻找一种安全有效的解毒方法是当前迫切需要解决的问题。在防控真菌毒素中,生物降解,尤其微生物的作用一直受到重视,人们希望借此开发一种安全实用、对食品营养价值无明显影响的去毒方法。本文以AFB1降解菌的分离鉴定为目的,以AFT的结构类似物香豆素为唯一碳源和能源筛选能高效降解AFB1的微生物,并对其发酵液上清的降解特性,以及活性物质的粗分离等方面进行了研究,主要结果如下:(1)以香豆素为唯一碳源的方法,从不同样本中初筛得到86株可以利用香豆素的菌株,通过HPLC方法测定,发现有12株菌的降解AFB1的能力在25%-95%。(2)采用its序列分析,这12株菌分别为镰孢属、青霉属、枝顶孢霉属、碱性翅孢壳属、环带状枝顶孢属、链格孢属、灰白翅孢壳属。(3)Fusarium ***3361发酵液上清的降解能力高于细胞和胞内提取物,1 min降解率为70.20%,20 min降解率达到78.81%。在10-90度的降解活性都保持在73.53%以上,最适pH7.0,最佳碳源为玉米粉,最佳氮源为牛肉膏,发酵液上清对热处理非常耐受,煮沸10 min,降解能力没有降低,仍为80.57%,蛋白酶K处理后发酵液上清的降解能力降低了 50%,MTT实验进一步证实了发酵液了上清可以降解AFB1,与之前实验结果相吻合。同时将WCQ3361的发酵液上清处理受AFB1污染的饲料,其降解效率均在60%以上另外通过硫酸铵和离子交换层析,初步分离得到具有降解AFB1能力的活性物质。在饱和度为60%的硫酸铵可以沉淀下来的蛋白的降解活性可达86.62%。通过阴离子交换层析分离得到的蛋白降解能力达57.47%。(4)Acremonium ***6A的发酵液上清的降解效果高于活细胞和胞内提取物。加蛋白酶处理发酵液上清后降解作用降低,但是热处理后降解效果无变化。发酵液上清在5 min对AFB1的降解率为74.43%,48 h降解率达到79.36%。在0-80℃的降解能力保持在71.60%以上,最适pH8.0,受金属离子的影响比较明显,Fe3+和Zn2+能够促进AFB1的降解,Ni2+能够明显抑制AFB1的降解。最佳碳源为乳糖,最佳氮源为硝酸铵。(5)Penicillium sp.5952上清的降解效果最强。加胰酶处理后,降解能力降至6.21%,加热处理后降至12.99%。发酵液上清对AFB1的降解效果相对缓慢,24 h降解率达到95.92%。从30℃-50℃,对AFB1的降解率均在92.81%以上,pH值为7.0时降解率最高,为94.99%,Cu2+和Zn2+明显抑制AFB1的降解。菌株发酵了 18 h对AFB1就表现出降解活性,发酵48 h时降解率为94.91%。利用葡糖糖、麦芽糖、乳糖、山梨醇、玉米粉和蔗糖这6种发酵后降解率均在89.19%以上,利用肉蛋白胨、胰蛋白胨、大豆蛋白胨、酵母提取物和硝酸铵5种氮源发酵后降解能力均在91.25%以上。

关键词： Chinese patent medicines   Microbial limit test   Validation of method   中药制剂   微生物限度检查   方法验证   Chinese patent medicines   Microbial limit test   Validation of method   Language of Keywords: English   Chinese  

摘要： Objective: To study the antimicrobial effect of 5kinds of Chinese patent medicines and to establish microbial limit test method for them. Methods: Common method and culture medium dilution method were used to do the recovery test in order to establish and validate the method. Result: Yinhuang oral liquid showed an antimicrobial effect on Staphylococcus aureus to some extent but the effect can be eliminated by culture medium dilution *** 4kinds did not show an antimicrobial effect. Conclusion: The common method can be used for the microbial limit test of Taian oral liquid, sodium bicarbonate solution,chloral hydrate clyster and tannin *** method can be used for the microbial limit test of Yinhuang oral liquid. [ABSTRACT FROM AUTHOR]

关键词： 中药   提取物组合物   专利信息分析   专利保护   可专利性  

摘要： 目的：通过对中药提取物组合物的专利文献信息进行挖掘和分析,探索此类专利的发展历史、重点防治的疾病领域和权利人分布,明确中药提取物组合物及其专利的内在特点,为促进我国中药提取物组合物的科研创新、推动中药提取物组合物的专利发展和保护提供思路与参考。方法：本研究以国家知识产权局专利数据库、中国专利信息中心、中国知识产权网以及相关知识产权机构作为数据信息来源,检索的时间范围为1995年1月1日至2014年12月31日期间申请的中药提取物组合物的相关发明专利为研究对象,运用Excel、Access、 SPSS等软件,通过简单和高阶统计相结合,理论与实例相结合的方法进行分析。具体如下：1.简单分析与聚类分析相结合,探索中药提取物组合物专利的发展进程、病系研发方向及权利人分布;2.运用频数分析、聚类分析和因子分析相结合的方法,探索重点防治病系的中药提取物组合物的药物及科类的组合规律;3.根据重点防治病系的药用植物科类的频数分析结果,以有效专利中所涉及的高频科类及其所含中药为研究对象,对其药理作用及活性成分进行对比,结合以药性为研究参数的模糊聚类分析结果,探索同科中药的相似性;4.根据权利人分布的研究结果,以高频权利人的中药提取物组合物有效专利为研究对象,对其有效专利的剂型、活性成分结构以及用途等进行简单统计,结合理论分析,为现代中药企业专利网的构建提供借鉴;5.基于对中药提取物组合物的组合规律和特点的分析结果,以理论联系案例的方法探讨此类发明的可专利性判断。结果：1.中药提取物组合物相关创新成果的专利保护发展于近二十年,发展速度于2004年开始具有明显提升;2015年以前国内中药提取物组合物有效发明专利中,职务发明占78.11%;高频专利权人主要包括现代中药企业、高校以及以技术开发、技术转让等为核心经营范围的技术企业;防治内科疾病中的心系病与肝系病的中药提取物组合物有效专利所占比例较大。2.防治心系病的中药提取物组合物涉及高频中药为丹参、人参和三七等,高频科为五加科、豆科、唇形科以及伞形科;常用中药组合单元为人参+麦冬,丹参+降香,人参+五味子等;常用科类组合单元为五加科+百合科,唇形科+豆科,五加科+五味子科等。3.防治肝系病的中药提取物组合物涉及高频中药为丹参、黄芪、川芎等,高频科类为伞形科、唇形科、菊科等;常用中药组合单元为栀子+黄芩、柴胡+甘草、白芍+当归;常用科类组合单元为茜草科+唇形科、伞形科+豆科、毛茛科+伞形科。4.各科均有一些在有效成分及药理作用方面具有相似性的中药,依据模糊聚类分析结果,对各类中药进行对比发现,各科属于同类的中药在药理作用和活性成分上更为接近。5.天士力制药集团股份有限公司含有丹参的中药提取物组合物的专利网基本构建完全,该专利网主要围绕丹参提取物十三七提取物十冰片这一组合物展开,在核心权利获得保护的基础上,通过对组合物单元进行替换、细化组合物配比范围等核心技术的延伸,形成具有更大保护力度和更加稳固的防御体系。结论：1.中药提取物组合物发明专利在近二十年中历经四个增长阶段,整体处于上升趋势,其增长与国家法律法规及重大战略的推动、中药提取物的产业化趋势、近年来丰硕的中药提取物组合物的科研成果等因素密切相关;有效专利的职务发明比例在整个中药复方领域具有明显优势,高频权利人以现代中药企业居多;中药提取物组合物有效专利所述用途,以心系病与肝系病的防治居多。2.根据防治心系病和肝系病的中药提取物组合物的组合规律研究结果,高频中药大多属于高频科类,且常用的中药组合单元与常用科类组合单元基本一致;高频科类及常用科类组合单元对新的中药提取物组合物研发具有一定的提示作用;中药提取物组合物的组合规律研究,在激励自主研发,促进专利申请等方面具有一定应用价值。3.本研究中所涉及的同科中药,药性相似者在化学成分与药理作用方面具有更明显的共性;相关领域科研人员应辨证运用同科中药的相似性,适当绕开热点研发药物,对低频中药的化学成分及药理作用进行深入研究,进而展开新组合物的研究,为促进单位创新成果的产出,构建和完善专利网等方面提供可能。4.现代中药企业应以核心技术的专利权利获取为基础,围绕一类具有相似功效的产品,展开中药提取物组合物的外围研发与专利网构建,同时注重研发方向的多样化,根据不同技术路线有针对性的申请专利,以丰富专利网的构建路线,提高专利网的系统性,促进专利网的可持续发展;重视专利申报质量与申请时机,以提高专利网构建的成功率。5.对中药提取物组合物的可专利性判断应将专利法与中医药理论相结合,主动引用中药领域权威单位的实验室检定数据或专家的意见;我国专利审查标准中应尽快增设专门针对中药领域发明的章节。建议：1.政府层面：以完善适用于中药提取物组合物发明的专利保护政策为主要任务。在现行专利审查标准中,尽快增设专门针对中药领域发明的章

关键词： 黄曲霉毒素B1   纳米抗体   免疫检测   融合表达   丙氨酸扫描   定向改造  

摘要： 黄曲霉毒素B1（Aflatoxin B1,AFB1）是—种主要由黄曲霉和寄生曲霉产生的次级代谢产物,广泛存在于花生、玉米、小麦等农作物中,通过食品和饲料途径使人畜中毒。AFB1具有强致癌、致畸、致毒性等作用,同时还可降低细胞免疫力。鉴于AFB1的巨大危害,国内外研究人员已经建立了多种检测方法。其中,基于抗原-抗体特异性反应的免疫学分析方法,具有简便快速、特异性好、适合高通量检测等特点,从而被广泛应用。高质量抗体的制备是建立特异性强、灵敏度高的免疫分析方法的关键。纳米抗体（Nanobody,Nb）是目前已知的最小抗原结合片段,具有易表达、水溶性好、稳定性高等性质,已广泛应用于食品安全分析、医学诊断等领域。同时,为提高酶联免疫吸附法（Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）的灵敏度,最直接的办法可通过基因改造,制备高亲和力的抗体来实现。本研究制备了抗AFB1纳米抗体,并对其进行定向改造,主要研究内容如下:1.抗AFB1纳米抗体的淘选、表达及活性分析以人工抗原AFB1-OVA为靶分子,进行四轮固相亲和淘选（1轮酸洗脱+3轮竞争洗脱）,从噬菌体展示的纳米抗体免疫文库中淘选得到16种独特的抗AFB1纳米抗体序列,其中克隆p HEN1-G8的阻断效果最佳,其半数抑制浓度（Inhibitory Concentration,IC50）值为0.98 ng/m L。将p HEN1-G8的基因克隆至载体p ET25b（+）构建重组载体p ET25b（+）-G8,转入*** Rosetta（DE3）表达菌株,经IPTG诱导表达并镍柱纯化,获得分子量约为20 KDa的纳米抗体Nb-G8。间接竞争ELISA测得其IC50为4.61 ng/m L,线性范围1.14 ng/m L18.59 ng/m L。2.p ET25b（+）-G8-AP融合蛋白的原核表达、纯化及活性分析将编码碱性磷酸酶（Alkaline Phosphatase,AP）的基因克隆至表达载体p ET25b（+）-G8中,构建融合表达载体p ET25b（+）-G8-AP,并在*** BL21（Rosetta,DE3）中进行原核表达。经ELISA分析,纯化后的融合蛋白G8-AP同时具有良好的抗原结合能力和碱性磷酸酶活性。G8-AP的碱性磷酸酶比活力为364.51±8.34 U/mg。融合蛋白G8-AP的IC50为5.25 ng/m L,线性范围1.02～26.98ng/mL。与其它常见真菌毒素未见明显交叉反应,批内变异系数低于10%。3.纳米抗体Nb-G8的分子模拟及丙氨酸扫描同源建模构建Nb-G8的3-D结构模型,采用分子对接技术构建Nb-G8与AFB1的结合模型,预测了多个抗原抗体关键氨基酸结合热点。采用丙氨酸扫描技术初步对预测的6个关键氨基酸加以验证。6个关键氨基酸突变为丙氨酸后,T32A的生物活性与G8（Wild type,WT）相比,未见明显差异;而突变子I33A、F49A、W54A和V112A的灵敏度下降,突变子Y106A完全丧失抗原结合能力。4.纳米抗体Nb-G8定点饱和突变库的构建及淘选构建了三个定点饱和突变文库,完成Nb-G8的10个预测位点的饱和突变。分别对三个突变文库进行四轮固相亲和淘选,间接竞争phage-ELISA进行鉴定。突变子M1-4-12没有抗原结合活性;突变子M3-3-8、M3-3-12和M3-4-18不能被AFB1阻断;突变子M3-4-10和M3-4-13的灵敏度较野生型提高了15%。

关键词： 微课   技工院校   中药制剂技术  

摘要： 本文以"硬胶囊剂填充"为例,探索微课在《中药制剂技术》教学中的应用。利用微课教学,可以提高学生的学习积极性,培养学生自主学习的能力,促进课堂教学与企业生产实际结合,并能促进现代信息技术与《中药制剂技术》课程教学的深度融合。

关键词： 黄曲霉毒素B1的测定   注意事项   免疫亲和层析法高效液相色谱法  

摘要： 食品中黄曲霉毒素的测定方法是使用GB/T18979-2003《食品中黄曲霉毒素的测定免疫亲和层析净化高效液相色谱法和荧光光度法》中免疫亲和层析法高效液相色谱法进行的测定,但是在实际测定中发现许多细节问题在测定中容易忽视,而会影响测定的结果,本文针对笔者长期的实验发现的问题分别对样品的处理、标准溶液及衍生液的处理、免疫亲和柱等方面做了归纳分析.

关键词： 免疫分析   黄曲霉毒素B1   呕吐毒素   玉米赤霉烯酮  

摘要： 检测谷物中常见的真菌毒素。使用酶联免疫分析法检测黄曲霉毒素B1,呕吐毒素,玉米赤霉烯酮。黄曲霉毒素B1,呕吐毒素,玉米赤霉烯酮ELISA检测试剂盒的标准曲线的IC50分别为0.14,20.4,0.58 ng/mL。上述三种真菌毒素的添加浓度分别为5,500,25 ng/g,平均添加回收率分别为89.2%,94.8%,83.6%。该方法操作简便,准确性好,满足国家限量标准的要求。

关键词： 医疗机构中药制剂   监管   现状   分析   建议  

摘要： 目的：为了充分发挥四川省医疗机构中药制剂在临床中的治疗作用,促进和保障医疗机构中药制剂的发展。为人们治疗疾病、保证身体健康提供更加安全有效的医疗机构中药制剂。方法：通过横断面回顾性研究方法对医疗机构中药制剂存在的问题进行分析；通过查找整理对医疗机构中药制剂相关法规进行梳理；通过问卷调查的方式对医疗机构中药制剂现状进行分析；通过监管部门调研对监管现状及相关医疗机构中药制剂品种临床前研究现状进行分析；通过SWOT分析了解医疗机构中药制剂的优势、劣势、机遇与威胁。结果：(1)回顾性分析：采用查阅文献方法,共纳入70篇与医疗机构制剂／中药制剂相关研究,主要涉及医疗机构制剂质量控制、制剂室软硬件配备、经济效益及制剂管理制度法规方面的问题。(2)医疗机构中药制剂相关政策法规梳理：目前关于医疗机构中药制剂的政策法规有《中华人民共和国药品管理法》2015年修订版、《医疗机构制剂配制质量管理规范》、《关于扶持和促进中医药事业发展的实施意见》等,这些法规对于医疗机构中药制剂的发展有一定的支持作用,但相关执行效力还未达到,政策法规的制定还有待完善和提高。(3)医疗机构中药制剂现状分析：比较三级医院与二级医院,两者之间人员学历、中药制剂品种数、中药制剂不良反应上报情况、对中药制剂相关指南及注册免报资料的了解程度差异有统计学意义；中医院与西医院之间中药制剂品种数差异有统计学意义。83.33%的参与调研机构制剂设备无更新；91.67%参与调研机构只有部分制剂品种在配制使用；只有25%参与调研机构的中药制剂品种全部进入医保；95.83%参与调研机构的制剂收入占全院药品销售的比例在10%以下。(4)监管部门调研：各级监管部门对医疗机构中药制剂的监管侧重于资质审核方面,如制剂许可、注册管理、人员要求等；工艺主要以简单的水煎煮提取与蒸发浓缩为主；在体动物安全性研究显示医疗机构中药制剂具有较高安全性。(5)通过SWOT分析找出了医疗机构中药制剂目前发展的优势在于其最具中医药特色、是重要的新药来源等；制约因素主要有质量标准不完善、技术创新能力不足、制剂品种萎缩。结论：针对医疗机构中药制剂发展面临的上述问题,医疗机构应积极研发疗效突出、安全性高的特色中药制剂；监管机构对医疗机构中药制剂的管理应宽严有度；适当调整简化医疗机构中药制剂的审批程序；放宽医疗机构中药制剂的使用限制；改善医疗机构中药制剂委托配制的监管；相关部门适当增加中药制剂医保报销范畴；提高对人员素质要求和加强现场检查力度。