关键词： 黄曲霉毒素B1   黄河鲤鱼   免疫毒性   干预剂  

摘要： 黄曲霉毒素（AFB1）是当前发现的毒性和致癌性最强的化学物质之一，其中以AFB1的毒性最强。水产饲料中使用植物成分以及加工或贮存过程控制不当就会容易被黄曲霉毒素污染。本文系统研究了AFB1对黄河鲤鱼的急性毒性及慢性毒性：对黄河鲤鱼生长性能及生理生化指标的影响，对鲤鱼非特异性免疫酶活的影响，对鲤鱼 IL-1β、TNF-α以及Lysozyme-C等免疫相关基因表达的影响，对鲤鱼Bcl-2、Bax及 Caspase-3等细胞凋亡相关蛋白表达的影响，组织病理学分析以及毒素在黄河鲤鱼组织中的积累。同时通过体外细胞培养研究了香菇葡聚糖 CED对 AFB1诱导的黄河鲤鱼淋巴细胞免疫毒性的保护作用，制备纳米化肉桂醛并研究了其抑制黄曲霉菌生长及产毒活性。最后通过动物学实验等验证了CED、纳米化肉桂醛等作为水产饲料中AFB1干预剂使用的作用效果。\n 本研究主要内容包括：⑴通过腹腔注射测得AFB1对黄河鲤鱼半致死剂量为12.3mg/kg体重，95%置信区间12.2-25.5mg/kg体重。随着注射AFB1浓度的升高，黄河鲤鱼血液中细胞呼吸爆发活性、免疫球蛋白 IgM、碱性磷酸酶呈现先升高后下降的趋势；溶菌酶活性、血浆总蛋白、白蛋白含量降低；谷丙转氨酶活性、谷草转氨酶活性、补体3含量升高。经6.1mg/kgAFB1处理，鲤鱼肝脏SOD活性下降了11%，GSH含量下降了38%，MDA含量提高了28%，差异显著（P<0.05）。AFB1抑制了头肾、脾脏中IL-1β、TNF-α以及Lysozyme-C三个免疫相关基因的表达。表明AFB1一定程度上抑制了黄河鲤鱼机体免疫防御，诱导其肝脏发生氧化损伤。⑵通过90天不间断饲喂含AFB1的饲料，发现黄河鲤鱼表现出食欲下降、消瘦、活动减弱现象。1 mg/kg AFB1处理组鲤鱼增重率下降50%，饲料系数为对照组的2倍。鲤鱼的肥满度、肌肉必需氨基酸总量略有下降，差异不显著(P<0.05)。摄入1 mg/kg AFB1鲤鱼肝胰脏中AFB1含量高达6.1μg/kg，肌肉中AFB1含量却都低于0.5μg/kg。通过石蜡切片发现，鲤鱼肝脏、头肾、后肾、十二指肠等器官发生不同程度的病变。通过免疫组化分析发现，肝脏、肾脏细胞Bcl-2表达受到抑制，Bax表达升高，Bcl-2/Bax下降，Caspase-3表达升高。表明AFB1能够诱导黄河鲤鱼肝脏、肾脏细胞凋亡。⑶研究发现10、50μg/mL CED对黄曲霉菌产毒的抑制率分别达到70%、92%，而100、250、500μg/mL的CED对黄曲霉菌产毒的抑制率均达到100%。通过体外离体培养诱导方法，发现20μg/L AFB1能够显著抑制鲤鱼淋巴细胞活性，导致淋巴细胞内ROS水平、MDA水平显著升高（P<0.05）；能够抑制淋巴细胞内的SOD、CAT、GSH活性，降低膜电位水平，诱导淋巴细胞崩溃。100μg/mLCED处理，可以有效提高淋巴细胞活性，降低胞内ROS、MDA水平，增强SOD、CAT酶活。CED可以有效抑制AFB1诱导的淋巴细胞线粒体膜电位崩解状态，提高淋巴细胞活性，增强鲤鱼免疫细胞的抗氧化防御系统。⑷通过制备纳米化肉桂醛，提高了肉桂醛的溶解性、稳定性以及对黄曲霉菌的抑制效果。选择乙酸乙酯作为油相，无水乙醇为助表面活性剂，吐温-80作为表面活性剂，Km=2:1（吐温-乙醇质量比值），制备的纳米化肉桂醛，形成了均一、稳定、透明的水溶性体系。纳米化肉桂醛在终浓度为0.6 mM时，可以有效地抑制黄曲霉菌菌丝生长，与肉桂醛相比，抑菌活性提高了50-100%。Nano-CA能够导致黄曲霉菌孢子发生更强烈的钙离子外流。虽然1mM肉桂醛也能够有效抑制黄曲霉孢子生长，但低浓度的肉桂醛（沙氏培养基中0.2mM、花生酱中0.25mM）一定程度上能够促进AFB1的产生。因此在黄曲霉毒素污染控制上，纳米化肉桂醛比肉桂醛更有效果。⑸10mg/kg、50mg/kgCED作为饲料中AFB1干预剂，能提高鲤鱼的增重率、鲤鱼含肉率及降低饲料系数；一定程度上提高细胞呼吸爆发活性、溶菌酶活性、碱性磷酸酶（AKP）活性、IgM含量、C3含量，降低血清中ALT及AST活性。表明CED作为饲料添加剂可以有效降低AFB1对黄河鲤鱼的毒害作用，促进鲤鱼的生长，提高鲤鱼的非特异性免疫力。而Nano-CA能提高鲤鱼的增重率及降低饲料系数，但降低了鲤鱼的含肉率。Nano-CA作为饲料中AFB1干预剂使用，性能不如CED。

关键词： 饲料检测   黄曲霉毒素B1   免疫亲和柱   单克隆抗体   间接竞争酶联免疫吸附测定  

摘要： 黄曲霉毒素属于真菌毒素，是由曲霉属中的寄生曲霉和黄曲霉产生的一类结构相似的次级代谢产物，粮食和食品中的主要存在形式是黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2、M1及M2，其中黄曲霉毒素B1(AFB1)的毒性和致癌性最强，可以引起人类的慢性中毒，损害机体的多个脏器，生殖紊乱和免疫抑制等，特别是肝脏损害以及肝癌。很多国家都为本国的食品、饲料等制定了AFB1的限量标准。因此，简便高效的样品净化前处理方法和灵敏特异的检测技术对维护食品安全具有重要意义。\n 免疫亲和柱法作为一种样品富集和净化的前处理方法，因其高特异性、高灵敏度及净化效果好等优势，逐步用于真菌毒素净化和富集。与仪器分析法相比，酶联免疫吸附法(ELISA)具有特异性高、重复性较好、操作简单、成本较低等优点。将ELISA与免疫亲和柱纯化和富集方法相结合，可以提高检测灵敏度。本研究的目的是:(1)建立AFB1的免疫亲和层析柱;(2)优化该亲和层析柱的使用条件;(3)与ELISA方法相结合的检测饲料样品中AFB1的适用性。\n 研究结果表明:(1)用高纯度的AFB1单克隆抗体和溴化氰活化的Sepharose4B进行偶联、装柱，偶联率为98％，柱容量为646ng。(2)免疫亲和柱可以多次使用，但是免疫亲和柱的富集效果会有所下降:7次重复使用后可从85％下降到73％。故优化柱子的再生方法，分别用高pH与低pH的缓冲液交替洗涤，经过再生后的柱子对AFB1的富集率可高达93.7％。(4)食品或饲料样品需用pH中性、低浓度有机溶剂或盐溶液进行萃取，强有机溶剂或强酸或强碱会影响抗体活性，进而降低富集效率和亲和柱的使用次数。(5) AFB1单克隆抗体免疫亲和柱的富集条件:上样缓冲液流速为3ml/min，缓冲液中甲醇浓度为40％;洗脱液含30％甲醇-1M NaCl(pH=2.1)，150ng标准品对应8ml洗脱液体积。经加标回收率实验计算得到平均回收率为88.1％，变异系数0.62～2.37％。(6)免疫亲和柱在4℃放置70天的样品回收效率为80％。(7)用HPLC方法和免疫亲和-ELISA联用的方法分别对30份饲料样品进行检测，经统计学分析两种方法检测的结果无显著性差异(P＞0.05)。上述结果初步表明本试验研制的免疫亲和柱结合间接竞争ELISA方法可用于实际样品的批量检测。

关键词： 黄曲霉毒素B1   纳米免疫传感器   纳米金   快速检测   食品安全  

摘要： 以改性壳聚糖和纳米金复合物为电极修饰材料,包埋固定黄曲霉毒素B_1抗体制备信号放大型免疫传感器。以K_3[Fe（CN）_6]为探针,利用循环伏安法和差分脉冲伏安法研究其免疫反应对传感器响应电流的影响,结果表明,免疫响应电流与溶液中AFB_1的浓度在0.1-1.1 ng/m L范围内成线性关系,最低检测限为0.05 ng/m L（S/N=3）;免疫传感器的特异性、稳定性和重现性较好。利用该法对花生、花生油等实际样品中的黄曲霉毒素B_1进行检测,回收率在87.8-98.2%,检测精确度优于ELISA试剂盒,可用于食品中黄曲霉毒素B_1的快速检测。

关键词： 慢性浅表性胃炎   黄芪注射液   当归注射液   穴位注射  

摘要： 目的:观察穴位注射治疗慢性浅表性胃炎(CSG)的临床疗效。方法:92例分为两组,治疗组45例用黄芪注射液、当归注射液穴位注射,对照组47例用胃复春口服。结果:治疗组总有效率明显高于对照组(P<0.05)。结论:中药制剂穴位注射治疗CSG疗效确切。

关键词： 农产品   黄曲霉毒素B1   快速检测技术   食品安全  

摘要： 黄曲霉毒素B1(AFB1)是由黄曲霉菌和寄生曲霉菌产生的剧毒代谢产物，能够致癌。黄曲霉毒素污染是食品安全领域的热点问题之一。产生黄曲霉毒素的黄曲霉菌和寄生曲霉菌广泛存在于玉米、小麦及稻米等农作物中，各国对黄曲霉毒素的污染限量标准均有严格的规定。因欧盟的限量标准严于我国卫生部制定标准，我国出口农产品多次因黄曲霉毒素超标遭拒。因此，建立AFB1的快速检测技术对于保障食品安全，提升我国农产品的出口具有重要意义。\n 本研究的目的是:1）建立基于纳米金标记单克隆抗体的AFB1直接竞争ELISA检测技术;2）研制AFB1胶体金免疫层析试纸条。\n 1、利用碳二亚胺法，制备了AFB1偶联抗原AFB1-BSA和AFB1-OVA，经ELISA和免疫印迹鉴定，偶联抗原制备成功，可应用于AFB1相关免疫学检测方法的建立。\n 2、基于AFB1单克隆抗体(Anti AFB1)，分别建立了常规间接竞争ELISA(ic-ELISA)、辣根过氧化物酶（HRP）标记Anti AFB1直接竞争ELISA(dc-ELISA)和基于纳米金标记的Anti AFB1-HRP直接竞争ELISA(nano-dc-ELISA)三种检测模式。常规ic-ELISA的半数抑制率(IC50)为0.41ng/mL，检出限(IC10)为0.12ng/mL;dc-ELISA半数抑制率为0.119ng/mL，IC10为0.037ng/mL;基于纳米金和HRP双标记抗体的dc-ELISA IC50为0.099ng/mL，IC10为0.017ng/mL。\n 3、nano-dc-ELISA具有检时间短、灵敏度高、检测下限低的优点，在玉米和面粉中平均加标回收率在87％-104％之间，变异系数均小于10％。对于实际样品的定量检测结果与高效液相色谱有相关性较好(R2=0.749)，能够用于实际样本中AFB1的快速准确定量。\n 4、建立了AFB1胶体金免疫层析试纸条，检测灵敏度可达到0.1ng/mL，特异性、重复性良好。对加标样品中AFB1的检测限为5μg/kg，通过对谷物和饲料样本的快速检测证实，该方法与进口ELISA快速检测试剂盒一致性良好，且该方法操作简单，适合现场快速筛查。\n 上述方法的建立为食品或饲料中AFB1的速检测试剂盒的研制奠定了基础。

关键词： 中药   蓝耳病   防治  

摘要： 猪蓝耳病属于近年来常见的养猪行业面临的疾病之一，该病发病快，传播范围广，造成的危害大，严重制约养猪业的发展。本文结合多年来的工作经验，提出了应用中药制剂对该病进行治疗的方法，从实验效果来看较为明显，值得进一步研究和推广。

关键词： 闭合性掌指骨骨折   高氏骨伤系列   中药制剂   临床研究  

摘要： 目的:探讨高氏骨伤系列中药制剂对闭合性掌指骨骨折愈合的促进作用。方法:选取闭合性掌指骨骨折患者80例,按随机数字表法将患者分为对照组和研究组各40例,对照组患者采用常规治疗,实验组患者在对照组基础上予以高氏骨伤系列中药制剂治疗,比较两组患者骨折愈合情况、功能恢复情况及并发症发生情况。结果:两组患者均成功完成治疗,研究组患者总有效率为95.0%,明显高于对照的70.0%,差异具有统计学意义(P<0.05)。研究组患者治疗优良率为95.0%,显著高于对照组75.0%,两组患者治疗优良率比较差异具有统计学意义(P<0.05)。研究组患者并发症发生率明显低于对照组,且研究组患者满意度显著高于对照组,组间比较差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:对闭合性掌指骨骨折患者给予高氏骨伤系列中药制剂疗效显著,可促进患者骨折愈合,有利于关节功能恢复,值得临床推广应用。

关键词： 药物   制剂   新技术  

摘要： 随着我国加入WT0,中药制剂正逐步成为制药产业新的增长点,实现中药现代化已成为国家和中医药产业明确的奋斗目标以及发展方向,它是中药现代化的一个关键环节因素,而中药成分的复杂性决定了中药制剂的复杂性,丸、散、膏、丹、汤等传统中药制剂已经无法满足现代的制药的发展。这就必须要求我们有新的制药技术。本文分析了药物制剂新技术在中药制剂现代化中的应用。

关键词： 黄曲霉毒素B1   食用油   萃取仪   全自动   测定   固相   利用   动物健康  

摘要： 黄曲霉毒素对人和动物健康具有极大的危害，其中以黄曲霉毒素B1毒性最大，属特剧毒的毒物范围。引起人的中毒主要是损害肝脏．发生肝炎、肝硬化．肝坏死等，急性中毒严重者会出现水肿昏迷．以至抽搐而死。黄曲霉毒素是目前发现的最强的致癌物质，主要诱使动物发生肝癌，也能诱发胃癌、肾癌、直肠癌及乳腺、卵巢、小肠等部位的癌症。

关键词： 坝上长尾鸡   中药制剂   蛋品质   营养成分   微量元素  

摘要： 为了研究日粮中添加中药制剂对坝上长尾鸡蛋品质的影响,试验选取30日龄坝上长尾鸡400羽,随机分为2组,每组4个重复,每个重复50羽,对照组饲喂高峰期蛋鸡全价料,试验组饲喂添加中药制剂的预混料配制的全价料,在35周龄时检测鸡群的蛋品质,并对收集的数据进行比较分析。结果表明:试验组与对照组蛋品质各项指标均差异不显著(P>0.05),但与对照组相比,试验组蛋重、蛋壳强度均呈下降的趋势,蛋黄色泽评级优于对照组;总水分、粗蛋白、粗灰分、粗脂肪、钙、磷含量试验组与对照组之间均差异不显著(P>0.05),但试验组粗脂肪含量有降低的趋势;微量元素铜、铁、锰、硒、锌含量及重金属镉、汞和铅含量无显著变化(P>0.05),但铬含量试验组较对照组显著升高(P<0.05)。说明日粮中添加中药制剂对坝上长尾鸡的蛋品质和化学成分无明显影响,可在生产中推广应用。