关键词： 中药提取物   吸湿机理   防潮策略   中药原料   中药制剂  

摘要： 吸湿性是中药原料的一个重要的物理属性，中药原料的强吸湿性给中药固体制剂的生产和储藏带来了极大的困扰。随着中药制剂生产的工业化水平提高，以及质量源于设计和过程控制的制剂生产研发理念在中药领域的不断应用，中药原料的吸湿性越来越受到药学工作者的重视。本课题主要在对中药原料的吸湿性和防潮技术进行分析的基础上，对中药原料的吸湿过程和吸湿机理进行了系统研究，并建立了适用于中药原料吸湿特点的防潮策略体系，以期最终为解决中药制剂在研究、生产、储藏中的吸湿问题提供技术方法和理论支撑。　　吸湿性研究方法学的确定对中药原料的吸湿性试验方法学进行研究，分别探讨了中药原料的处理方式、中药原料在试验容器中的堆放方式以及吸湿性试验条件（环境温度和相对湿度）对中药原料吸湿行为的影响。结果表明，中药原料的堆积厚度、暴露面积对其吸湿行为的影响较大，而脱湿时间的影响较小;环境温度和相对湿度均影响中药原料的吸湿行为。因此，在中药原料的吸湿试验中，应根据研究需要考察具体的影响因素。　　吸湿行为研究分析了中药原料的吸湿行为特征，阐述了中药原料的吸湿机制。基于化学动力学和化学热力学的理论基础，分析了中药原料的吸湿行为特征，并通过数学模拟的方法对中药原料的吸湿动力学行为和吸湿热力学行为进行了表征，结果表明，中药原料的吸湿动力学过程符合Langmuir模型或准一级动力学模型，吸湿热力学过程可以应用GAB模型或Ferro-Fontan模型表征。在此基础上对模型进行了修正，建立了中药原料吸湿行为模型，并对模型进行了验证，通过模型自身对照验证和加速试验验证，考察了模型的适用性。结果表明，中药原料吸湿行为模型的适用性良好，能够用于模拟中药原料的吸湿行为，并通过加速试验预测中药原料的吸湿行为。　　水分在中药原料中的扩散与分布阐明了在中药原料吸湿过程中，水分的扩散行为以及水分在中药原料中分布形式。应用理论假设和数学模拟的方法分析了水分在中药原料中的扩散和分布。结果表明，水分在中药原料中的扩散同时存在多种扩散机制。在生产环境下，主要的扩散动力和限速步骤为膜扩散。同时，水分在中药原料一部分被吸附于中药原料的表面，另一部分被中药原料吸收，甚至可能和部分化学成分发生简单的化学反应，随环境湿度的增加，吸湿量增加，被中药原料吸收的水分的量的比例逐渐增大。　　吸湿机理研究分析了中药原料吸湿过程中的能量转化行为，阐明了中药原料的吸湿机制。基于焓熵补偿理论，分析了在中药原料吸湿过程中焓、熵、自由能随中药原料含水量的变化过程，并分析三者之间的相关关系。研究结果表明，在中药原料的吸湿过程中存在焓熵补偿效应，中药原料的吸湿机制为自发的、放热的、熵增的熵驱动过程。　　防潮策略研究在探讨了中药原料物理属性对其吸湿性的影响以及吸湿性对中药原料成形性的影响的基础上，结合中药原料的吸湿行为模拟和吸湿机制分析结果，建立了中药原料防潮策略体系。该体系涵盖了中药制剂生产的关键过程包括生产时限预测、保存方法预测、辅料选择、防潮技术选择和优化等方面的内容。并应用中药原料吸湿理论和模型对防潮技术降低吸湿性的能力以及模型预测中药原料吸湿性的能力进行了分析、判断和验证。结果表明，该防潮策略体系适用性良好，可以应用预测模型对中药原料的吸湿性进行预测，并指导防潮技术的选择和优化。

关键词： 镉中毒   中药制剂   疗效评价  

摘要： 目的探讨血塞通注射液(主要成份为三七总皂苷)在镉中毒患者的疼痛治疗及肾功能改善方面的效果。方法选择职业性慢性镉中毒患者20例为实验组,注射血塞通注射液,一天一次,另选择职业性慢性镉中毒患者20例为对照组,不使用血塞通注射液。2个月后,通过疼痛缓解度(PRD)评估量表和临床生化检验,比较两组患者疼痛缓解度(PRD)和尿镉、尿β2微球蛋白(β2-MG)、尿视黄醇结合蛋白值。结果治疗2个月后,实验组PRD为2.98,高于对照组,差异有统计学意义(t=12.9,P>0.05);实验组尿镉值5.49 umol/mol肌酐、尿β2微球蛋白(β2-MG)值6.73 umol/mol肌酐、尿视黄醇结合蛋白值3.14 umol/mol肌酐,低于对照组,但差异无统计学意义。结论血塞通注射液(主要成份为三七总皂苷)对镉中毒引起的胸背和四肢疼痛有明显镇痛作用,且对排镉、改善肾功能作用有限。

关键词： 中药制剂   质量控制   影响因素  

摘要： 目的分析研究中药制剂的质量控制因素。方法选取2014年1月2016年12月作为中药制剂质量管理控制时间,即研究阶段,选择2012年1月2013年12月作为中药制剂质量管控措施实施前时间,即对照组阶段,每1个月定期抽检1次,结合不定期抽检结果,研究阶段及对照阶段各抽检50次及40次,对比两次抽检不合格率,分析不合格原因。结果研究阶段抽检不合格率2.00%（1/50）明显低于对照阶段的25.00%（10/40）,P<0.05。结论掌握中药制剂不合格因素,不断优化现代制药技术及设备,完善相关管理制度,有助于提升中药制备工艺,保证中药制剂质量及临床效果

关键词： 黄曲霉毒素B1   CYP450 2A13   BEAS-2B细胞   恶性转化   RNA芯片   circRNA-miRNA-mRNA   克隆形成  

摘要： 目的:筛选与AFB1诱导的P50B-2A13细胞恶性转化相关的circRNAs、miRNAs、mRNAs,探索circRNA-miRNA-mRNA在AFB1诱导B-2A13细胞恶性转化中的靶向调控作用。方法:首先用miRNA芯片、mRNA芯片和cricRNA芯片检测经AFB1诱导的P50B-2A13恶性转化细胞以及同期对照细胞（P50B-Vector细胞）中miRNAs、mRNAs和circRNAs表达谱,比较分析这两种细胞之间差异表达的miRNAs、mRNAs和circRNAs。以miRNA为中心,采用TargetScan软件分析了差异表达的miRNAs靶基因,将这些靶基因与差异表达mRNA相匹配,保留共有的且表达水平相反的miRNA-mRNA调控关系,根据miRNA与circRNA靶向关系,通过筛选出的miRNAs在circRNA-miRNA库中找到对应的差异表达的circRNA,初步构建circRNA-miRNA-mRNA调控关系。结合pathway分析和疾病富集分析筛选出与肺癌可能相关的mRNAs,通过RT-qPCR对关键mRNAs,miRNA及circRNA进行验证。采用western blot验证mRNA在蛋白水平的表达。最后用瞬时转染siRNA干扰方法抑制ID3和FGF5基因的表达,用平板克隆和划痕愈合实验检测它们对P50 B-2A13细胞的增殖与迁移的影响。结果:（1）在P50B-2A13细胞和P50 B-Vector细胞之间,miRNA芯片分析得到差异表达的miRNAs有60个,其中表达上调的有37个,表达下调的有23个,mRNA芯片分析得到差异表达的mRNAs有1014个,其中表达上调的有771个,表达下调的有243个,circRNA芯片分析得到差异表达的circRNAs有4313个,其中表达上调的有1496个,表达下调的有2812个。（2）对差异表达的miRNAs、mRNAs和circRNAs靶向关联分析得到GJA1、ID3和FGF5为候选功能靶基因,miR-23c 等 6 个 miRNAs 为调控中心以及 hsacirc0002842 等 85 个 circRNA 为海绵作用的调控关系。（3）RT-qPCR验证表明,miRNAs和mRNAs的表达和芯片结果高度一致,circRNA的表达与芯片结果一致性达到80%。（4）在P50-B-2A13细胞中,敲减ID3可以明显抑制细胞的克隆形成能力,但抑制FGF5对细胞克隆形成能力影响不大;抑制ID3和FGF5对划痕愈合都能起到一定的抑制作用,在划痕24h之后,空白组（P50 B-2A13）、对照组（P50 B-2A13+Negative control）、敲降ID3（P50B-2A13+ID3-siRNA）和敲降 FGF5（P50B-2A13+FGF5-siRNA）划痕愈合度分别为 53.9%、51.1%、38.8%和 30.6%。结论:（1）以差异表达的miRNA为中心的靶向关联分析,结合肿瘤相关的差异表达的mRNA,初步发现以GJA1、ID3和FGF5为功能基础,miR-23c等多个miRNAs为调控中心、hsacirc0002842等多个circRNA为海绵作用的调控关系可能与AFB1诱导的B-2A13细胞恶性转化相关。（2）ID3对恶性转化的P50 B-2A13细胞的克隆形成能力和划痕愈合能力有一定的影响;FGF5虽然对细胞克隆形成能力的影响不显著,但可影响细胞的划痕愈合能力。

关键词： 人CYP1A2   AFB1   CPR   原核表达   酶动力学   定点突变  

摘要： 黄曲霉毒素是一类真菌产生的次级代谢产物,广泛分布在花生、玉米、大豆等粮食作物中。黄曲霉毒素B1（Aflatoxin B1,简称AFB1）,是黄曲霉毒素中毒性最强的。在肝脏中AFB1被细胞色素450代谢活化后,会转变为强致癌的物质,从而引发癌症。细胞色素P450（cytochrome P450,简称CYP）是一类重要的超家族蛋白,在人和动物体内广泛参与多种内外源化合物的代谢。人CYP1A2是肝脏中代谢AFB1的关键酶之一,目前CYP1A2结合AFB1的分子机制并不清楚。本研究首先根据大肠杆菌偏爱密码子对人CYP1A2进行全基因序列优化,在基因5’端添加17α信号肽序列,利用pCWori+表达载体为在大肠杆菌DH5α进行表达经Ni2+亲和纯化可得到纯度超过95%的蛋白。CYP1A2重组蛋白表达量可达6 mg/L培养基,其Fe2+·CO差光谱具有典型的450 nm吸收峰。为构建CYP酶活反应体系,本研究从人293T细胞中克隆了人CYP450还原酶的基因,5’端引入pel B信号肽,利用p ET22b载体在BL21（DE3）p LysS中表达纯化具有活性的蛋白,重组蛋白表达量达到20 mg/L培养基。本研究根据已报道的人CYP1A2的晶体结构（PDB:2HI4）,利用Auto Dock4.2进行AFB1和人CYP1A2的分子模拟对接,预测出T124、F125、F226、F260可能参与AFB1在活性口袋的结合。后续实验中我们对目标位点进行定点突变,表达纯化各突变体,利用Fe2+·CO差光谱鉴定蛋白特征吸收峰并确定有效浓度。我们首先利用丁基羟基茴香醚（BHA）诱导小鼠肝脏高表达谷胱甘肽-S-转移酶（GST）,从鼠肝胞浆中亲和纯化获得GST,再用猪肝微粒体孵育AFB1,加入小鼠GST结合谷胱甘肽（GSH）到环氧化的AFB1（Aflatoxin B1-8,9-epoxide,简称AFBO）来获得AFB1-GSH标准品,来间接检测AFBO,并利用高效液相色谱（HPLC）收集AFB1-GSH产物。进行CYP1A2及突变体与AFB1的酶活孵育,HPLC定量测定AFB1-GSH及AFM1产物的形成速率。根据标准曲线,得到人CYP1A2代谢AFB1产生AFBO的Vmax为0.19±0.01 nmol/min/nmol CYP,Km为27.87±4.99μM,羟化产生AFM1的Vmax为0.60±0.04 nmol/min/nmol CYP,Km为21.80±3.97μM。而突变体F226A对AFB1无代谢活性;突变体F226W、F226Y相对于野生型,代谢活性仍降低90%以上,但是相对于F226A突变体而言,活性均有一定的恢复。突变体T124A对AFB1的代谢活性与野生型相差不大,但是对底物的亲和力有所增加。突变体F125A不能正常表达;可获得F260A突变体,但蛋白不具有450 nm特征吸收峰。为进一步确定预测的氨基酸位点对AFB1结合的专一性,我们检测了重组人CYP1A2对模式底物7-乙氧基试卤灵的代谢活性。测得生成试卤灵的Vmax为4.24±0.29nmol/min/nmol CYP,Km为247±52 nM。突变体F226A对7-乙氧基试卤灵同样无代谢活性。同时发现,F226W、F226Y相比野生型,代谢活性降低84%以上,但是相对于F226A突变体,活性均有一定的恢复。突变体T124A对7-乙氧基试卤灵的活性相比野生型,活性无明显变化。分子结构软件PyMOL分析显示F226和F260的苯环侧链可能与AFB1分子存在σ-π共轭相互作用,以此维持AFB1分子在CYP1A2活性口袋的结合。同时由于AFB1与7-乙氧基试卤灵均为芳香杂环结构,F226等氨基酸残基在7-乙氧基试卤灵的结合上可能发挥与AFB1结合中相似的作用。综上所述,利用分子对接和定点突变等方法,我们确定Phe226为人CYP1A2结合AFB1的关键氨基酸残基,其主要通过σ-π共轭相互作用稳定AFB1在CYP1A2活性口袋的结合。

关键词： 专利   中医院   中药制剂   专利保护   广东省  

摘要： 目的:1.本研究着眼于现阶段我国中医院中药制剂发展中存在的突出问题,通过对现阶段我国中医院中药制剂的发展现状进行评述,找出我国中医院中药制剂的发展中存在的突出问题。基于存在的突出问题,从专利视角出发,论述将中医院的发展与现代知识产权运行规则相融合,充分利用院内中药制剂,挖掘专利信息资源,避免中药知识产权流失,建立中医院中药制剂的专利管理制度以及专利评价指标体系现实意义及必要性。2.以广东省内中医院为例,在对广东省中医院中药制剂的发展现状进行调查的基础上,对广东省中医院中药专利申请现状进行统计分析,基于专利视角,结合现阶段政府对院内制剂实行的推广应用政策,探讨广东省中医院中药制剂的发展前景,为政府及相关部门以及医疗机构提出中药制剂发展的建议。3.为促进中医药、民族中医药的挖掘、继承和发展,避免院内中药制剂遭淘汰过程中中药知识产权的无形流失,应用数据挖掘的相关技术,对中医院中药制剂进行专利信息挖掘,构建中医院中药制剂的专利管理及专利保护框架体系,提高中医院科技研发能力助推中药制剂国际化和持续健康发展。方法:1.文献研究法:检索中国生物医学文献数据库、维普全文数据库、CNKI数据库、万方中华医学会期刊数据库及相关官方网站,收集与中医院中药制剂发展有关的文献。检索Ovid LWW、Springer Link等外文期刊全文数据库,收集国外中医院中药制剂发站的相关文献。文献的范围包括学术期刊、政策文件、各级政府的正式文件、及常规信息资料。在此基础上,对文献进行整理,比较分析,了解中医院中药制剂的发展现状。2.访谈法:对有代表性的问题调查访问,把握研究问题的现状及存在的问题,使研究中所要表达的立场、观点更具有真实性和有效性,通过访谈掌握广东省中医院中药制剂的发展现状的第一手资料。对于如何挖掘中医院中药制剂专利信息资源,通过访问资深的专利代理人来掌握最新的中药专利申请动态。3.专利检索方法:以国家知识产权局专利检索平台为基础,收集相关主题专利数据,并对检索结果进行合并、筛选处理,然后对所需要分析的专利数据进行整理。通过sopat专利检索平台获取专利文献全文,对专利申请内容进行全面分析,找出其中存在的问题,为中医院中药制剂专利信息资源挖掘策略的制定提供参考依据。4.统计分析法:使用国家知识产权局检索平台自带统计软件以及spss17.0用于专利数据的检索与基础统计分析,借助excel进行辅助测算。对广东省16家三甲中医院中药专利的发展趋势、专利分布及专利维持时间等方面进行二元Logistic回归及线性回归分析。结果:对16家广东省中医院的中药专利数据进行处理,得出如下结果:1.十年间省内中医医院中药专利总体保持上升态势,但省内各市区域之间相差较大。2.专利维持数量整体不高。3.授权专利维持时间不长与专利申请书中是否提供实验数据、是否开创新剂型存在明显关联。4.未获授权专利的主要原因为未缴年费、公布后视为撤回和公布后驳回、无效。结论:广东省中医院中药制剂的发展与专利制度相结合有其重要现实意义,需要从以下几个方面作出改善:1.提升中医院中药制剂的临床服务能力。2.在院内中药制剂越来越萎缩的形势下,医院自身不应局限在经济效益,而应关注院内中药制剂在遭淘汰的过程中,传统中药资源潜在流失的危险。3.充分利用专利信息资源,将专利制度与中医院中药制剂的发展相结合,通过对院内中药制剂申请专利向中药新药开发,形成经济效益。4.对中医院中药制剂进行专利信息资源挖掘,在现有院内制剂的基础上研发新的经验方,在保持传统中药特色的原则下不断创新,使中药制剂与国际化的医疗市场接轨。

关键词： 药物不良反应   中药制剂   给药途径  

摘要： 目的分析中药制剂导致不良反应发生的原因,为中药制剂的合理使用提供参考。方法对我院78例中药制剂导致的不良反应进行回顾性分析。结果 78例ADR中年龄在50岁以上的患者ADR发生率较高;注射剂为引起ADR比例最高的中药剂型,占比46.15%;其中以活血化瘀类药物占多数,静脉给药引起ADR占比最高,为62.82%;皮肤及其附件为主要的累及器官,临床表现以皮肤和消化系统损害较为常见。结论中药制剂不良反应的发生与患者个体因素,以及药物剂型、给药途径等因素有关,临床上应加强对于临床安全用药的监控,确保患者能够安全用药。

关键词： 益生菌   发酵中药   生化指标   抗氧化   肠道菌群  

摘要： 为研究三株益生菌发酵中药制剂对鲤鱼血清生化指标、肝脏抗氧化指标及肠道菌群结构的影响,选用初始体重为(11.0±1.0)g的鲤鱼360尾,分为4个组,每组30尾,设3个重复。Ⅰ组为对照组,饲喂基础日粮;Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组分别为产朊假丝酵母组、枯草芽孢杆菌组、鼠李糖乳杆菌发酵中药组。养殖56 d后,测定血清生化指标、肝脏抗氧化指标,并采用DGGE法测定肠道菌群结构。结果表明:Ⅱ组、Ⅲ组、Ⅳ组的LSZ、C3、CAT、SOD,Ⅲ组、Ⅳ组的T-AOC均显著高于Ⅰ组(P<0.05),MDA显著低于Ⅰ组(P<0.05)。DGGE分离图谱及聚类分析相似性范围为0.29～0.77,Ⅳ组与Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅲ组的相似性较低;且Ⅲ组、Ⅳ组鲤鱼肠道菌群丰富度显著高于Ⅰ组、Ⅱ组(P<0.05)。研究表明,摄食益生菌中药发酵饲料对鲤鱼生化指标、抗氧化指标及肠道菌群结构均有明显影响。

关键词： 中药制剂   桑黄粗粮菌粉   化学成分   质量评价  

摘要： 目的:以粗粮为培养基，利用桑黄进行发酵培养，通过优化筛选适宜的培养条件，得到桑黄菌丝。经后期干燥、粉碎、调味等处理步骤得到桑黄粗粮菌粉。基于发酵前后活性成分的变化，以荞麦为培养基建立桑黄粗粮菌粉的的质量标准。　　方法:将桑黄试管种进行液体发酵培养，将得到的桑黄液体菌种分别接种于小米、荞麦、玉米做的培养基中。利用正交设计考察含水量、粮食装样量、液体接种量对菌丝的生长的影响，筛选出最佳的发酵方案。通过硫酸苯酚法测定粗粮发酵前后多糖含量的变化;通过福林酚比色法测定粗粮发酵前后肽含量变化;利用G-2000测定发酵前后肽分子量的变化;采用Kromasil C18色谱柱(250mm×4.6mm，5μm)流动相甲醇-水15∶85，流速***-1，检测波长260nm，柱温30℃，测定粗粮发酵前后核苷含量的变化。根据上述的有效成分的结果，制定桑黄粗粮发酵的质量标准。按照粉剂的制备工艺开发成桑黄粗粮菌粉。　　结果:将液体培养的桑黄菌种接种于小米、荞麦、玉米做的培养基中，通过正交设计得知桑黄菌最佳生长条件为:含水量45％-50％、装样量250g、接种量30％。在上述条件下桑黄菌丝的生长速度最快，菌丝的量最多。通过硫酸苯酚法测定经桑黄发酵前后多糖含量的变化可知，小米:发酵前4.180mg/g，发酵后64.917mg/g;荞麦:发酵前5.033mg/g，发酵后90.083mg/g;玉米:发酵前4.883mg/g，发酵后69.750mg/g。通过福林酚肽比色法测定经桑黄发酵前后肽含量的变化可知，小米:发酵前2.817mg/g，发酵后35.733mg/g;荞麦:发酵前4.317mg/g，发酵后42.133mg/g;玉米:发酵前2.150mg/g，发酵后32.367mg/g。通过HPLC法测定经桑黄发酵前后核苷的含量变化可知（以脲苷为代表），小米:发酵前0.0996mg/g，发酵后0.463mg/g;荞麦:发酵前0.0953mg/g，发酵后0.491mg/g;玉米:发酵前0.0679mg/g，发酵后0.293mg/g;利用G-2000色谱柱测定发酵前后肽分子量的变化可知，发酵后分子量有减小的趋势。　　结论:荞麦作为培养基时桑黄菌丝生长速度最快，菌丝质量最好，可作为桑黄菌粉制备的最佳培养基。粮食经桑黄发酵后多糖的含量、核苷的含量、肽含量等活性成分都有所增加，肽分子量有减小的趋势。经以上数据分析，以荞麦作为培养基，经桑黄发酵，制备粗粮菌粉，工艺稳定，质量控制方法严谨科学，重现性良好。

关键词： 中药制剂   质量控制   方法  

摘要： 目的探讨对中药制剂质量造成影响的影响因素,并且研究有效方法加以控制,从而对于中药制剂的优质化做出充分保障。方法对我院中药制剂制作情况加以分析,针对制剂质量造成影响的具体因素加以分析,利用文献检索的方法,有效明确具体的干预方法,针对中药制剂质量做出有效保证。结果对中药制剂质量造成影响的相关因素加以分析,主要集中于用药处方方面、临床中药制剂工艺方面、药物存储库房相关情况以及中药仓储条件几方面。结论将审方力度有效加大,将制剂有关环节管理力度有效加强,最终可以保证中药制剂质量得以显著提升,从而对于中药制剂的优质化做出有效保证。