关键词： 中药制剂   质量问题   影响因素   控制措施  

摘要： 目的:对中药制剂质量影响因素及控制措施进行研究.方法:以我院2016年1月至2017年1月使用的2100份中药制剂处方为例,对其质量问题及原因进行统计分析,并针对质量问题发生原因进行控制对策研究.结果:2100份中药制剂处方中,有97份存在质量问题,其中,因制剂处方引起的质量问题约为40.2％,制剂工艺为29.9％,制剂原材料为10.3％,制剂剂量为10.3％,人员因素为9.3％.结论:根据中药制剂质量影响因素,通过加强对制剂处方以及制作工艺、原材料质量等方面管理和控制,提高中药制剂制作及管理人员能力素养,以减少中药制剂质量问题发生,确保其质量可靠和临床使用安全.

关键词： 黄曲霉毒素B1   脱霉剂   肉鸡   生长性能   生化指标  

摘要： 为了探究不同浓度黄曲霉毒素B1对矮脚黄A肉公鸡生长性能的影响以及不同类型的脱霉剂对AFB1的效果评估。本试验选用自然霉变高黄曲霉毒素B1玉米开展不同比例替代正常低毒素玉米开展日粮设计,同时在高黄曲霉毒素B1基础上添加不同类型的脱霉剂研究肉鸡在生长性能、肝脏、肝功能、血清生化功能等指标的影响。试验一选用矮脚黄A公鸡为研究对象,试验设5个处理,每个处理7个重复,每个重复75只鸡,其中第一组为低毒素对照组,黄曲霉B1检测浓度1.32μg/kg,第2-4组日粮黄曲霉B1检测浓度分别为19.33μg/kg、51.77μg/kg、99.36μg/kg;第5组日粮分为两个阶段:21d前0.53μg/kg;21d后53.60μg/kg。试验二选用矮脚黄A公鸡为研究对象,试验设6个处理,每个处理6个重复,每个重复75只鸡,第一组为低毒素对照,黄曲霉毒素B1浓度为1.24μg/kg,第二组为高毒素对照,黄曲霉毒素B1浓度为45.44μg/kg,3-6组日粮黄曲霉毒素B1浓度分别为41.16μg/kg、36.79μg/kg、41.75μg/kg、37.30μg/kg,在第3-6组分别添加了不同类型的脱霉剂:1号脱霉剂吸附剂（硅铝酸盐）、2号脱霉剂（硅铝酸盐）、3号脱霉剂（生物降解型）、4号脱霉剂（混合型）。分别记录两个试验21d、42d、61d三个阶段日均增重（ADG）、日均采食量（ADFI）、耗料增重比（F/G）。并于试验第21d和61d每组处理随机选取12只鸡,静脉采血析出血清,屠宰取肝脏组织,进行感官评价和切片分析。同时测定血清、肝脏相关生化指标。试验结果表明:（1）不同浓度的AFB1对肉鸡各阶段生长性能均没有显著影响（P>0.05）。全程使用高AFB1日粮与仅在中后期使用高AFB1的比较结果差异也不显著（P>0.05）。（2）试验一中21d时SOD活力、MDA、POD活力、H2O2和ALP均无显著差异（P>0.05）。但从数值上来看添加毒素各组SOD活力整体低于对照组。61d时MDA、H2O2和ALP均无显著差异（P>0.05）。SOD活力、GSH-PX差异显著（P<0.05）,添加50μg/kgAFB1组和添加100μg/kgAFB1组SOD活力、GSH-PX活力低于其他各组。（3）试验一中21d时ALB差异极显著（P<0.01）,与对照组相比,添加毒素组ALB降低幅度明显,添加毒素组与对照组AST和GLOB无显著差异（P>0.05）,61d阶段添加毒素组与对照组AST、GLOB和ALB均无显著差异（P>0.05）。（4）在高AFB1饲料（40μg/kg）中添加不同的脱霉剂对成活率在数值上有所改善。（5）试验二中21d SOD活力、GSH-PX、MDA、H2O2和ALP均无显著差异（P>0.05）。61d时SOD活力、GSH-PX、MDA、H2O2和ALP均无显著差异（P>0.05）。（6）试验二中21d时对照组与其他组ALB指标差异显著（P<0.05）,AST和GLOB差异不显著（P>0.05）,61d时各组间的AST、ALB、GLOB指标均无显著差异（P>0.05）。（7）添加毒素各组肝脏解剖照片以及肝脏切片并未发现与正常对照组间存在显著差异。

关键词： 表没食子儿茶素没食子酸酯   黄曲霉毒素B1   大鼠   抗氧化   炎症因子   细胞凋亡  

摘要： 目的:表没食子儿茶素没食子酸酯（Epigallocatechin Gallate,EGCG）是由绿茶中含量最高、活性最强的多酚类化合物,具有抗氧化、抗炎症、抗癌等多种生物学功能。黄曲霉毒素B1（Aflatoxin B1,AFB1）是由普遍存在于自然界中的黄曲霉和寄生曲霉所产的一种毒素,其毒性是氰化物的10倍、砒霜的68倍,同时还有致突变性、致畸性以及致癌性。AFB1与人类肝癌的发生发展明显相关,研究表明其机制可能与AFB1通过引发肝细胞过量产生活性氧,导致肝脏氧化应激,造成肝脏炎症,从而损伤肝脏,诱发癌变有关。EGCG在预防AFB1引起的肝损伤作用方面,目前国内外尚未见相关报道,具有较好的研究前景。本研究拟在探讨EGCG对AFB1致大鼠急性肝损伤的干预作用,为EGCG应用于治疗AFB1相关肝损伤疾病提供依据。方法:选用SPF级雄性Sprague-Dawley（SD）大鼠,体重180-220g,根据国内外文献及前期预实验,确定黄曲霉毒素B1（AFB1）致大鼠急性肝损伤的干预剂量后,大鼠适应性饲养5天,随机分为空白组、AFB1组、低E干预组、高E干预组以及EGCG组,每组10只。低E干预组灌胃25mg/kg EGCG,高E干预组及EGCG组灌胃100mg/kg EGCG,空白及AFB1组则灌胃等量双蒸水,一天一次,连续5天。AFB1组、低E和高E干预组于第6天单剂量腹腔注射AFB12 mg/kg,空白及EGCG组则予以等量双蒸水腹腔注射,染毒后各组大鼠继续以EGCG或双蒸水继续灌胃。所有大鼠于AFB1给药48h后称量大鼠终体重,腹腔注射1%苯巴比妥麻醉后打开腹腔腹主静脉取血,取血后迅速移除肝脏并用预冷生理盐水冲洗后吸干称重,剪肝大叶一块约0.5×0.5×1cm大小的组织完全浸泡在福尔马林溶液中,使其充分固定后进行组织病理学研究,其余肝组织则用冻存管分装后液氮急冻,于-80℃超低温冰箱保存备用。测定脏器指数:肝指数、脾指数、肾指数;用日立自动生化分析仪检测血清肝功能指标:谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）和碱性磷酸酶（ALP）、总胆红素（TBIL）、直接胆红素（DBIL）含量;肝组织病理学检验（HE染色）:通过光学显微镜观察肝组织结构及其病理变化;按试剂盒说明书测定肝组织抗氧化指标:过氧化氢酶（CAT）、总谷胱甘肽（GSH）、总超氧化物歧化酶（SOD）水平,按试剂盒说明书测定大鼠血清丙二醛（MDA）;酶联免疫吸附法测定肝组织抗氧化基因8-羟基脱氧鸟苷（8-OHdG）及大鼠血清炎症因子IL-6;实时荧光定量PCR法检测大鼠组织炎症因子IL-6基因及凋亡基因Bcl-2、Bax。结果:***1致大鼠急性肝损伤模型的构建:黄曲霉毒素B1（AFB1）致大鼠急性肝损伤的剂量为2mg/kg（腹腔染毒）。***对AFB1致急性肝损伤大鼠体重及脏器指数影响:AFB1组大鼠体重显著降低（P<0.05）,且肝、脾、肾指数显著升高（P<0.05）;与AFB1组比较,EGCG干预组体重明显升高,肝、脾、肾指数明显降低（P<0.05）;EGCG组与空白组相比,体重、脾、肾指数没有显著性改变。3.大鼠肝组织病理学变化（HE染色）:EGCG可以减轻AFB1所致大鼠的急性肝损伤,同时表明100mg/kg EGCG对大鼠肝脏无影响。***对AFB1致急性肝损伤大鼠血清肝功能的影响:AFB1染毒后,大鼠肝功能指标ALT、AST、TBIL、DBIL、ALP相较于空白组均有明显升高（P<0.05）,而EGCG各剂量干预后可显著降低AFB1对大鼠肝脏的损伤作用,其肝功能指标明显好转（与AFB1组相比,P<0.05）。EGCG组与空白组比较,肝功能各指标没有显著性变化。***对AFB1所致急性肝损伤大鼠抗氧化能力的影响:AFB1染毒可致大鼠抗氧化能力明显下降,与空白组相比其肝组织CAT、GSH、SOD水平降低（P<0.05）,血清MDA、肝组织中8-OHdG水平升高（P<0.05）;EGCG干预后其抗氧化能力有所恢复,与AFB1组相比大鼠肝组织CAT、GSH、SOD水平增高（P<0.05）,血清MDA、肝组织8-OHd G水平降低（P<0.05）。EGCG组与空白组比较,抗氧化能力各指标没有统计学差异。***对AFB1所致急性肝损伤大鼠抗炎能力的影响:与空白组比较,AFB1染毒后血清IL-6及肝组织IL-6基因表达水平均升高（P<0.05）,各干预剂量组则较AFB1组显著降低（P<0.05）。EGCG组与空白组比较,炎性指标IL-6水平没有显著性变化。***对AFB1所致急性肝损伤大鼠抗细胞凋亡能力的影响:与空白组比较,AFB1染毒大鼠肝组织Bcl-2基因表达下降、Bax基因表达上升（P<0.05）、Bcl-2/Bax比值明显下降（P<

关键词： 碳基荧光材料   荧光   汞离子   有机磷农药   黄曲霉毒素B1  

摘要： 随着人们生活水平的提高及环保意识的增强,环境污染带来的食品安全问题日趋成为人们关注的焦点。工业重金属、农药残留以及霉菌毒素等污染物会经食品长期摄入积累而成为人类健康的潜在杀手,不仅能引起急性或慢性中毒还具有明显的致畸性、致癌性和致突变性,所以,如何快速高效的检测食品中的污染物已成为广大科研工作者研究的重大问题之一。荧光分析法灵敏度高,选择性强,设备操作简单,价格低,在分析检测中有着不可替代的作用。近年来,碳基荧光纳米材料因其优良的发光特性、光稳定性、生物兼容性以及易修饰性受到人们的广泛关注,相比于传统的荧光材料比如稀土荧光材料、有机染料和半导体量子点,碳基荧光纳米材料中不含有重金属离子且合成简单绿色,成本低,被广泛作为荧光探针应用于化学/生物分子标记检测和生物成像等领域。本论文基于碳基荧光纳米材料（碳量子点或氮化碳）利用荧光分析法对重金属汞离子、有机磷农药和黄曲霉毒素B1（AFB1）进行了检测,主要分为以下三个部分:1.本实验基于碳点-金纳米簇（CDs-AuNCs）复合物构建荧光比率法传感器,通过Hg2+-Au+作用检测重金属汞离子,并实现了其可视化检测。利用简单的水热法以苯硼酸为碳源合成带有硼酸基团的碳点,将合成金纳米簇的稳定剂牛血清白蛋白修饰在碳点的表面,以其作为金纳米簇的模板剂制备CDs-AuNCs双发射荧光材料。我们通过表面修饰的方式开发碳点的新功能,一方面是通过修饰使碳点对溶液的金属离子等的响应可以忽略不计,作为双发射荧光探针的参考物质,另一方面,修饰后的碳点直接作为金属纳米簇的合成模板,简化双发射荧光材料的制备方法,减少制备过程中使用的化学试剂。更为重要的是当双波长发射的两个发射峰距离较远并且荧光量子产率较高时,在便携式光源的照射下,随检测物质浓度的不同溶液呈现不同的颜色,可实现现场可视化检测。制得的材料用TEM、HRTEM、FT-IR、XRD、XPS、紫外光谱和荧光光谱等手段进行了表征,实验结果表明碳点和金纳米簇成功复合到一起,荧光量子产率高达27.3%,两发射峰的距离为215 nm,在优化条件下,该方法对汞离子检测的线性范围为2-15 nM,检测限为0.73 nM,且可实现汞离子的可视化检测,具有良好的选择性和特异性。另外,该方法还可以检测实际样品自来水中的汞离子。2.本实验基于石墨相氮化碳/纳米金（g-C3N4/AuNPs）体系间的荧光内滤效应（IFE）和有机磷农药对乙酰胆碱酯酶的抑制作用构建荧光比色双信号传感器,对有机磷农药进行检测。在此双信号传感器中,氮化碳作为荧光探针,其荧光能被纳米金猝灭,而纳米金既作为荧光吸收剂又作为比色探针;乙酰胆碱酯酶（AChE）能使氯化乙酰胆碱（ATChCl）水解生成硫代乙酰胆碱,这种水解产物会使纳米金因静电作用产生聚集而使氮化碳的荧光恢复,在此过程中,纳米金的状态由分散到聚集,颜色由酒红色变蓝色,若体系中存在有机磷农药时,AChE的活性被抑制,导致氮化碳荧光猝灭,基于氮化碳荧光和纳米金颜色的变化来实现有机磷农药荧光比色双信号的检测。制得的材料用TEM、Zeta电势、紫外光谱和荧光光谱等手段进行了表征,实验结果表明氮化碳与纳米金之间的猝灭机理为IFE而不是荧光共振能量转移。在优化条件下,该方法对有机磷农药检测的线性范围为2.0×10-11–6.0×10-9 M,检测限为6.9×10-12 M。另外,该方法还可以检测实际样品果汁中的有机磷农药。3.本实验基于多孔氮化碳纳米片荧光探针结合磁分离技术构建荧光免疫传感器,对黄曲霉毒素B1（AFB1）进行检测。多孔氮化碳纳米片多用于光催化领域,首次作为荧光探针检测霉菌毒素。将AFB1抗体修饰到多孔氮化碳纳米片表面作为荧光探针,将AFB1抗原（AFB1-BSA）修饰到氧化铁磁性纳米颗粒表面作为免疫探针,当检测体系中存在目标分析物AFB1时,AFB1会与抗原竞争抗体,形成磁性基复合材料（氮化碳-抗体-抗原-氧化铁）和氮化碳-抗体-AFB1,经外磁场分离测磁性基复合材料的荧光,AFB1的浓度与荧光强度成反比。制得的材料用SEM、紫外光谱和荧光光谱等手段进行了表征,实验结果表明抗原抗体已成功修饰在氧化铁和多孔氮化碳纳米片表面。在优化条件下,该方法对AFB1的线性范围为0.01–0.5 ng/mL,检测限为0.002 ng/mL。另外,该方法还可以检测实际样品玉米中的AFB1。

关键词： AFB1   硒   雏鸡   脾脏   死亡受体通路   内质网通路   分子机制  

摘要： 黄曲霉毒素B(Aflatoxin B,AFB)广泛存在于发霉的原料和饲料中,是由黄曲霉和寄生曲霉等产生的毒性最强的一种次级真菌毒素产物,具有很强的免疫毒性和致癌性。硒作为一些抗氧化酶和硒-P蛋白的重要组成部分存在于动物和人体中,是人和动物生长所必需的微量元素,具有抗癌、抗氧化、提高机体免疫力和拮抗某些毒素的功能。有研究表明,免疫细胞的过度凋亡是引起免疫抑制的重要原因,且有关硒拮抗AFB对机体的危害报道也逐渐引起人们的关注。目前,关于AFB导致雏鸡免疫器官细胞凋亡的研究已有一些报道,但AFB导致免疫器官细胞凋亡的信号通路的研究还比较匮乏。本试验将288只1日龄健康科宝雏鸡随机分为四组,分别饲喂对照日粮(AFB=0mg/kg,Se=0.3mg/Kg)、+Se组日粮(Se=0.7mg/Kg)、AFB日粮(AFB=0.6 mg/kg)和AFB+Se组日粮(AFB=0.6 mg/kg,Se=0.7mg/Kg)21天。用组织病理学、流式细胞术、TUNEL染色及RT-qPCR等方法检测雏鸡脾脏指数、细胞凋亡及死亡受体通路和内质网通路中相关基因的表达量,探究AFB对雏鸡脾脏细胞凋亡信号通路的影响及硒对其拮抗作用的分子机制。其结果如下:7日龄时,与对照组和+Se组相比,AFB组和AFB+Se组雏鸡脾脏绝对重量和脾脏指数无显著性差异(p>0.05)。14日龄时,AFB组脾脏绝对重量显著或极显著低于对照组、+Se组和AFB+Se组(p<0.05或0.01);21日龄时,AFB组脾脏绝对重量显著或极显著低于对照组和+Se组(p<0.05或0.01)。14和21日龄时,AFB组脾脏指数显著低于对照组(p<0.05)。组织病理学检测结果表明,7日龄时,各组无明显病理学变化。14日龄和21日龄时,AFB组鸡脾脏红髓区出现淤血,椭球内出现大量不规则空白区域,脾小结内淋巴细胞数量减少。+Se组脾脏组织形态学结构与对照组相似,组织结构正常。AFB+Se组雏鸡脾脏组织结构趋于正常。流式细胞术检测结果显示,7、14和21日龄时,AFB组脾脏细胞凋亡率均极显著地高于对照组和+Se组(p<0.01);AFB+Se组脾脏细胞凋亡率显著低于AFB组(p<0.05);+Se组雏鸡脾脏细胞凋亡率与对照组相比无显著性差异(p>0.05)。TUNEL染色结果显示各组间TUNEL阳性细胞数量变化规律与流式细胞术检测结果一致。实时荧光定量PCR结果显示,与对照组和+Se组相比,7、14和21日龄时,AFB组雏鸡脾脏细胞Caspase-3、Caspase-8、Caspase-10、TNF-α、TNF-R1、FasL、Fas、GRP78和GRP94的mRNA表达量显著升高(p<0.05或0.01);与AFB组相比,AFB+Se组雏鸡脾脏Caspase-3、Caspase-8、Caspase-10、TNF-α、TNF-R1、FasL、Fas、GRP78和GRP94的mRNA表达量显著降低(p<0.05或0.01)。+Se组与对照组相比无显著性差异。综上所述,日粮中0.6mg/kg AFB可导致雏鸡脾脏指数减低,淋巴细胞减少,细胞凋亡增多,死亡受体通路相关分子Caspase-3、Caspase-8、Caspase-10、TNF-α、TNF-R1、FasL和Fas以及内质网通路相关分子GRP78和GRP94的mRNA表达量上调;在日粮中额外添加0.4 mg/kg硒(以亚硒酸钠为硒源)可减缓上述变化。说明AFB可能通过激活死亡受体和内质网通路中的凋亡分子导致脾脏细胞过度凋亡,而硒可能通过拮抗AFB对上述两条通路的影响而发挥保护功能。

关键词： 中药制剂   纳米混悬技术   应用  

摘要： 应用中药制剂中纳米混悬技术有效改善了部分难溶性中药中的有效部位溶解度、有效成分、生物利用度,这一技术的应用推动着我国传统医药向现代化方向发展。本文具体通过分析中药纳米混悬技术在制备中的具体应用方法,总结中药纳米混悬技术中的固化技术。

关键词： 珠芽魔芋葡甘低聚糖   制备   性质   黄曲霉毒素B1   吸附  

摘要： 珠芽魔芋（Amorphophallus Bulbifer）作为魔芋新品种,因具有繁殖系数大、产量高、抗性强等特点,体现出明显的种植及栽培优势。目前对珠芽魔芋的研究主要集中在其生物学特性、引种和驯化、组织培养和繁育栽培等方面,对其含有的魔芋葡甘聚糖（Konjac glucomannan,KGM）的性质和深度开发利用的研究较少,关于珠芽魔芋葡甘低聚糖（Bulbifer oligo-glucomannan,BOGM）性质的研究报道却没有。霉菌毒素对作物饲料的污染是全球性问题,对毒素的脱毒方法主要有物理、化学、生物法,其中使用最多、最成熟的是物理吸附法。本文以珠芽魔芋粉为材料,采用半干酶解法制备BOGM,研究并优化了半干酶法制备BOGM的工艺条件。分析了所得BOGM的低聚糖组成,并对BOGM的理化性质进行研究,为其进一步的应用提供理论依据。通过对黄曲霉毒素B1（aflatoxin B1,AFB1）的体外吸附实验以及动物实验,研究BOGM是否可作为吸附AFB1的吸附剂,对比KGM、酵母细胞壁提取物（Yeast Cell Wall Extract）,得出对AFB1吸附能力的大小,提供一种无毒无害的AFB1吸附剂。本论文研究的结果如下:***制备工艺研究以珠芽魔芋粉为原料,通过单因素实验以及响应面优化实验,得出BOGM制备的优化工艺条件:酶添加量1614 U/g,酶解时间为3.19 h,固液比为1:1.73,酶解温度55℃,缓冲液pH为6.0,此时珠芽魔芋粉水解率为50%,BOGM得率为39.96%。利用Design Expert 8.05软件、采用Box-Behnken设计原理,得出珠芽魔芋粉水解率的回归方程（Y=53.57+3.58A+1.28B+2.62C-0.69AC-1.39A2-0.97C2）。通过响应分析图得出各因素对珠芽魔芋粉水解率的影响程度大小依次为β-甘露聚糖酶添加量>固液比>酶解时间,根据方差分析以及响应分析图,得出β-甘露聚糖酶添加量与固液比对珠芽魔芋粉水解率影响的交互作用明显,酶添加量与酶解时间、固液比与酶解时间的交互作用不明显。珠芽魔芋粉水解率随β-甘露聚糖酶添加量的增加、酶解时间的增加、固液比的减小而升高。***的理化性质及结构研究BOGM溶于水、不溶于体积浓度在60%以上的乙醇溶液,且在20%、40%体积浓度的乙醇溶液中的溶解度（25℃）分别为41.33%、22.63%。BOGM的白度比珠芽魔芋粉、酵母细胞壁提取物高,样品呈弱酸性,比重为0.80 g/mL,具有很强的吸湿性。不同浓度的BOGM的水溶液,其粘度都随温度的上升而下降。不同的pH条件下,BOGM的美拉德反应程度均随时间的延长而加深,与pH=4.5时相比,在pH=6.5时,BOGM的美拉德反应的着色度更深,且不同pH条件的着色度均比白糖的着色度深。在抑制淀粉的老化实验中,BOGM对淀粉老化的抑制程度随其添加量的增多而增大。制备的BOGM时间飞行质谱分析表明,从相对分子为381.1到1515.5包含2～9糖,其中4、5、6糖的含量较高（4糖含量最多）,2、3、7、8、9糖含量较少（9糖含量最少）。经红外光谱分析,与珠芽魔芋粉相比,BOGM的基本结构没有改变,通过分析低聚糖的相应特征峰,推测其为吡喃型低聚糖。3.对AFB1的吸附能力1)体外吸附:对AFB1的体外吸附实验表明,在不同的pH（pH=3.0、pH=6.5）条件下,BOGM、KGM、酵母细胞壁提取物（三种吸附剂的添加量均为0.2%）对AFB1的吸附能力不同,pH在6.5时,不同的吸附剂对AFB1的吸附能力更大。在相同的pH条件下,不同吸附剂对AFB1的吸附能力的大小依次为BOGM>酵母细胞壁提取物>KGM。其中在pH=6.5时,BOGM对AFB1的吸附能力最强,达到81.50%。2)动物实验:以BOGM、KGM以及酵母细胞壁提取物作为毒素吸附剂,将小鼠随机分为7组,分别为空白组（只喂养基础饲料,K组）,阳性对照组（基础饲料中添加AFB1,AFB1组）,实验组:BOGM的低、中、高剂量组（基础饲料中添加AFB1并分别添加0.1%、0.2%、0.3%的BOGM,分别记为B1组,B2组,B3组）,KGM组（基础饲料中添加AFB1以及0.2%的KGM,KGM组）,酵母细胞壁提取物组（基础饲料中添加AFB1以及0.2%的酵母细胞壁提取物组,J组）。喂养结束后,AFB1组雌雄鼠的肝脏、肾脏、脾脏以及胸腺均有不同程度的肿胀,在实验组的饲料中添加吸附剂后,减轻了小鼠器官的肿胀情况,缓解了毒素对器官的损伤。在对小鼠血清的检测中,AFB1组的小鼠血清中的总蛋白、白蛋白含量较空白组均显著性降低（P<0.05）,乳酸脱氢酶（LDH）、谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）活性较空白组均显著升高,超氧化物

关键词： 蛇   细菌   耐药   中药   基因  

摘要： 细菌耐药性随着养殖业的发展而发展,养蛇行业也不例外。近年来,我们临床接诊蛇病例分离获得的耐药细菌表现日益增多,增加了临床防治的难度,蛇源性细菌的耐药情况鲜见资料报道。本课题以探究蛇源性细菌耐药情况,以及中药提取物对蛇源性细菌耐药基因影响为目的,开展了以下研究。从2016-2017年临床接诊的败血症蛇病例中,挑选分离获得的23株细菌,采用检测表型特征的常规方法结合现代分子生物学PCR方法,对23株细菌分别进行了鉴定。鉴定结果显示,23株细菌分别归属于7种细菌,其中肺炎克雷伯菌5株,肠道沙门氏菌2株,鲍曼不动杆菌3株,枸橼酸杆菌1株,摩氏摩根菌1株,普罗威登斯菌3株,粪肠球菌8株。采用纸片法进行体外抑菌试验,试验结果表明,5株肺炎克雷伯菌、8株粪肠球菌对庆大霉素和链霉素耐药,2株肠道沙门氏菌对红霉素和泰乐菌素耐药,3株鲍曼不动杆菌、3株普罗威登斯菌、枸橼酸杆菌以及摩氏摩根菌对青霉素和头孢拉啶耐药。根据细菌的耐药情况,分别设计氨基糖苷乙酰转移酶基因aac(3)-Ⅱ、质粒介导的喹诺酮类耐药基因A型qnrA、二氢叶酸合成酶基因1型SUL1、甲基化酶基因B型erm(B)、广谱β-内酰胺酶基因三个亚型:CTX-M-type、CTX-M-1 以及 blaOXA-23-like、新德里金属-β-内酰胺酶-4基因NDM4等8种耐药基因的引物,运用PCR方法检测相应的耐药基因。研究发现,5株肺炎克雷伯菌中有3株检测出aac(3)-Ⅱ耐氨基糖苷类药物的目的基因,8株粪肠球菌中有2株检测出erm(B)耐大环内酯类药物的目的基因,2株肠道沙门氏菌中有1株检测出SUL1耐磺胺类药物的目的基因,其余细菌均未能检测到耐药基因。将5种中药提取物,硫酸黄连素、双花连翘提取物、黄芩苷、天蚕素、苦参提取物分别与检测到耐药基因的细菌共培养4h和24h,检测发现,3株肺炎克雷伯菌aac(3)-Ⅱ耐氨基糖苷类药物目的基因均未能检出,2株粪肠球菌erm(B)耐大环内酯类药物的目的基因均未能检出,而1株肠道沙门氏菌与中药提取物共培养结果无变化,其SUL1耐磺胺类药物的目的基因仍然可以检测出来。综合上述研究结果可以得出以下结论:(1)23株蛇源性细菌分属于7种不同的细菌。(2)7种23株细菌的耐药情况不同。有3株肺炎克雷伯菌检测出aac(3)-Ⅱ目的基因,2株粪肠球菌检测出erm(B)目的基因,1株肠道沙门氏菌检测出SUL1目的基因,其余细菌未能检测到耐药基因。(3)硫酸黄连素、双花连翘提取物、黄芩苷、天蚕素、苦参提取物对肺炎克雷伯菌aac(3)-Ⅱ耐药基因以及粪肠球菌erm(B)耐药基因在24h内有抑制作用。

关键词： 中药制剂   临床治疗   不良反应  

摘要： 目的:研究中药制剂在临床应用中出现不良反应的主要原因,同时对其应对措施进行探讨.方法:对我院在2013年到2016年之间出现的160例中药制剂不良反应现象进行具体原因的分析,主要针对患者的年龄、性别、用药种类以及出现的不良反应现象等方面进行对比分析,进一步研究中药制剂在临床应用中出现不良反应的原因.结果:研究数据显示,在160例患者中,老年人和儿童出现不良反应的几率要大于中年人和青年人,出现不良反应的用药方式以静脉滴注居多.不良反应主要集中在皮肤和消化系统中.结论:中药制剂在临床应用中会受到很多因素的影响,如果用药方式或者用药不当很容易因其不良反应,为此,需要加强对中药制剂的用药管理工作,保证合理用药,从根本上减少不良反应的几率,进而提升中药制剂在临床治疗中的应用效果.

关键词： 光子晶体   分子印迹技术   共组装   适配体   黄曲霉毒素B1  

摘要： 真菌毒素是真菌在食品中产生的次级代谢产物,食用受真菌毒素污染的食品严重危害人体健康,可导致免疫抑制和蛋白质合成受阻等,甚至可以致癌、致畸和致突变。近年来,主要依赖于大型仪器来检测真菌毒素,这些技术有高度灵敏、特异性强的优势。但是,这些检测方法由于仪器昂贵、需专业人员操作,且前处理步骤繁琐,因而给技术普及带来很大的困难,特别是现场检测。光子晶体在检测中具有响应信号自表达,无需额外试剂显色,操作简单等优势,是较理想的传感检测材料,尤其是在现场快速检测方面有巨大的潜力。本研究以光子晶体为传感平台,以真菌毒素(黄曲霉毒素B1(AFB1))作为检测目标物,与分子印迹和生物识别技术相结合,探索真菌毒素检测新方法,构建了黄曲霉毒素B1的简便、快速且灵敏的筛查技术。具体工作如下:(一)真菌毒素印迹的光子晶体传感技术研究。合成单分散、粒径均一的SiO微球,并对合成条件进行优化,选取280 nm SiO微球作为光子晶体前驱体,用垂直沉降自组装法制备蛋白石光子晶体。通过设计―三明治‖结构小腔室,利用分子印迹技术,制备了AFB1印迹的反蛋白石光子晶体(MIPP IOPC),用洗脱液将AFB1模板洗脱,获得带有印迹孔穴的聚合物。实验中探索了多种配比预聚合液制备的印迹光子晶体,用于检测目标物AFB1,结果均没有明显的响应信号。分析是由于AFB1在溶液中溶解度小,导致模板分子在聚合液中浓度太低,不能形成足够的印迹孔穴,从而未能产生明显的检测信号。之后采用较易溶解的5,7-二甲氧基香豆素(5,7-DMC)代替物(代替AFB1)制备印迹聚合物,以甲基丙烯酸(MAA)为单体,二甲基丙烯酸乙二醇酯(EGDMA)为交联剂,制备了不同比例的印迹聚合物,有微弱的响应信号。因此,下步实验中研究新型光子晶体的制备,并对用于真菌毒素的检测可行性进行分析。(二)共组装法制备SiO结构反蛋白石光子晶体传感技术研究。悬浮聚合法合成粒径约为280 nm聚甲基丙烯酸甲酯(PMMA)微球,在PMMA微球悬浮液中加入适量正硅酸乙酯(TEOS)溶液,以胶体/模板共组装方法制备了Si O反蛋白石光子晶体材料。实验过程中对PMMA微球质量分数、PMMA微球悬浮液与TEOS溶液的比例及蒸发干燥温度进行了优化,在质量分数为0.3%的PMMA微球悬浮液10 m L中添加80μL TEOS溶液,放于60℃干燥箱中蒸发干燥48 h,制备出无裂缝的SiO反蛋白石光子晶体。用3-氨丙基三乙氧基硅烷(APTES)在反蛋白石光子晶体上修饰氨基基团,再用戊二醛修饰醛基,将修饰了氨基的适配体与其互补DNA序列杂交,杂交后的适配体通过氨基与醛基反应连接到反蛋白石光子晶体上,最终获得连接适配体的反蛋白石光子晶体传感材料。用紫外可见分光光度计和圆二色光谱仪验证了适配体可以有效识别目标物AFB1。采用荧光检测方法验证了适配体的互补DNA可以被AFB1置换下来,能够用于检测。用光纤光谱仪研究了适配体光子晶体传感材料对AFB1的响应行为,发现此传感材料可用于快速检测AFB1,最低检测限低至1 pg/m L。此方法可以在反蛋白石光子晶体制备过程中避免裂缝的产生,防止非均匀渗透和过度覆盖,大大减少了随机缺陷,简化了制备步骤,结构稳定。此外,该功能化的光子晶体传感器还可以连接抗体、受体等识别元件来拓展此类传感器的应用范围,此方法制备的传感器具有高度灵敏、操作简便及应用范围广泛等优点,具有较好的应用前景。