关键词： 金猪宝   生长性能   免疫功能  

摘要： 断奶应激是目前养猪业面临的普遍问题,给养猪业的健康持续发展带来了一定的障碍。仔猪断奶后的应激反应主要表现为断奶后采食量减少、免疫力下降、抗病能力差及腹泻等。养殖户面对这类问题主要采取手段是通过在饲料中添加抗生素进行预防和治疗,这种方法不仅效果不佳,还会对仔猪造成不同程度的免疫抑制,降低疫苗效果,还会出现生长性能下降等情况,如何更好的对仔猪断奶应激进行管理,是养殖户亟需解决的问题,而本研究针对养殖户存在的这一问题,研发了该产品金猪宝,为了能够方便养殖户的使用,该产品通过混合及制粒工艺制成片剂,可口服或饮水使用。为了广泛推广该产品,本研究对金猪宝的临床剂量筛选及临床应用方面进行了大量试验,试验主要分为两个部分。第一部分:金猪宝预防仔猪腹泻及改善生长性能剂量的筛选,通过对不同猪场不同日龄断奶仔猪进行腹泻保护率观察及生长性能改善进行评价得出:(1)通过对21日龄、28日龄断奶仔猪腹泻保护率进行观察,结果表明金猪宝剂量为每天10g(2片/d),对不同日龄断奶的仔猪腹泻保护率为100%。(2)通过对21日龄、28日龄断奶仔猪生长性能方面的观察,结果表明金猪宝剂量为每天10g(2片/d),能够提高不同日龄断奶仔猪的日增重,降低料肉比,提高了仔猪断奶后的生长性能。以上试验表明金猪宝的最佳使用剂量为每天10g(2片/d)时,腹泻保护率为达到100%,同时生长性能较好。第二部分:中药制剂—金猪宝对不同日龄断奶仔猪生长性能及免疫功能的影响(1)观察金猪宝在生产实际中,对于21日龄和28日龄断奶的仔猪生长性能的影响,每天添加10g(2片/d),本试验共计分为三组,空白组,试验组,阳性对照组,通过21日龄断奶仔猪试验观察:仔猪平均日增重试验组与对照组相比,差异极显著(p<0.01),日增重提高了16.39%,对照组与阳性对照组相比差异不显著(P>0.05);试验组料肉比为1.42,与对照组相比降低了9.55%,差异显著(p<0.05);对照组与阳性对照组差异不显著(P>0.05);通过28日龄断奶仔猪试验观察:平均日增重试验组与对照组相比,差异极显著(p<0.01),日增重提高了9.8%,对照组与阳性对照组相比差异不显著(P>0.05);料肉比方面,试验组料肉比为1.53:1,与对照组相比降低了5.55%,差异显著(p<0.05);另外断奶仔猪经常发生腹泻,金猪宝组对腹泻的保护率达100%,说明金猪宝具有预防腹泻的作用,空白组和阳性对照组腹泻的发生率与试验组相比,腹泻率明显升高,因此金猪宝具有提高日增重,降低料肉比,并且预防腹泻的作用,与其它产品相比较具有更好的效果。(2)观察金猪宝对于21日龄和28日龄断奶的仔猪免疫指标的影响,对每组仔猪进行采血,通过血清检测免疫指标,对免疫球蛋白、总蛋白、白蛋白、补体C3、补体C4进行检测,应用酶联免疫试验,用试剂盒进行检测,结果表明,试验组中的Ig G(g/L)、Ig A(g/L)、Ig M(g/L)、C4(g/L)与对照组相比,差异都表现显著(p<0.05),其中C3(g/L)及总蛋白与对照组相比,差异极显著(P<0.01),阳性对照组其中的Ig G(g/L)与对照组相比差异显著(P<0.05),阳性对照组Ig A(g/L)、Ig M(g/L)、C3(g/L)、C4(g/L)与对照组相比,差异均不显著(p>0.05),通过对免疫指标的检测结果比较,表明金猪宝能够提高断奶后仔猪血清中免疫指标的水平,说明金猪宝能够改善断奶后仔猪的免疫功能,提高抗病力,减少疾病的发生,因此中药制剂—金猪宝在临床应用中具有重要的作用。

关键词： 鸡   MDV   复方中药制剂   Pi3k-Akt信号通路   肿瘤相关因子  

摘要： 马立克氏病(Marek’s Disease,MD)是易感禽类中高度传染的病毒性肿瘤疾病,是家禽养殖业潜在的威胁,常引起大规模的发病,造成重大的经济损失。虽然有疫苗的防疫,但其的作用具有局限性,MD的防控仍然面临着更多的挑战。在鸡感染马立克病毒(Marek’s disease virus,MDV)后,选择前期研究结果中被富集到Pi3k-Akt信号通路中,且与肿瘤发生相关的差异表达基因,结合MDV感染病程的特点,拟应用复方中药制剂和MD模型鸡,研究MDV感染对鸡Pi3k-Akt信号通路中8个肿瘤相关因子Itga2b、Itgb1、Fak、Pik3ca、Pdpk1、Akt1、Mdm2、p53及tert表达的影响,以及复方中药制剂对其干预的作用效果,旨在为防治MDV感染关键靶基因的筛选、中药复方制剂作为饲料添加剂预防MD奠定基础,对家禽养殖业的健康发展具有一定的实践意义。应用qPCR及Western Blot对肿瘤相关因子表达水平,以及改进的TRAP银染法对端粒酶活性进行试验,结果表明:1.对MDV感染鸡脾脏Pi3k-Akt信号通路中8个肿瘤相关因子及端粒酶活性的分析结果显示:(1)与对照组相比,鸡感染MDV后,其脾脏组织Pi3k-Akt信号通路中肿瘤相关因子Itgb1、Mdm2、p53在转录水平和蛋白水平均升高,且差异极显著(P<0.01);(2)因子Itga2b、Fak转录水平升高,差异显著(P<0.05),其蛋白水平呈升高趋势,但差异不显著(P≥0.05);(3)因子Pik3ca、Akt1转录水平升高,差异极显著(P<0.01),其蛋白水平升高,差异显著(P<0.05);(4)因子Pdpk1在转录水平和蛋白水平差异均呈升高趋势,但差异不显著(P≥0.05);(5)因子Akt1(Ser473)蛋白水平升高,差异显著(P<0.05);(6)基因tert转录水平降低,差异显著(P<0.05)。(7)与对照组比较,在MDV感染鸡后,其脾脏组织端粒酶活性升高,差异极显著(P<0.01)。2.复方中药制剂作用于MD模型鸡后,其脾脏组织Pi3k-Akt信号通路中8个肿瘤相关因子及端粒酶活性的分析结果显示:(1)因子Itga2b在转录水平升高,差异极显著(P<0.01),蛋白水平无显著性差异(P≥0.05);(2)因子Itgb1、Fak、Pdpk1转录水平降低,差异极显著(P<0.05),其蛋白水平呈降低趋势,差异不显著(P≥0.05);(3)因子Pik3ca、Akt1转录水平降低,差异极显著(P<0.01),其蛋白水平降低,差异显著(P<0.05);(4)因子Mdm2、p53转录水平和蛋白水平均降低,差异极显著(P<0.01);(5)因子Akt1(Ser473)蛋白水平降低,差异显著(P<0.05);(6)基因tert转录水平升高,差异不显著(P≥0.05);(7)与对照组比较,端粒酶活性无显著性差异(P≥0.05)。综上所述,在鸡感染MDV后,脾脏组织Pi3k-Akt信号通路肿瘤中相关因子、端粒酶活性均发生一定程度的上调;添加复方中药制剂饲喂MDV感染的鸡后,对鸡脾脏中Pi3k-Akt信号通路中肿瘤相关因子有一定的下调作用。本研究结果将为以该通路相关基因作为靶点筛选中药复方制剂,有效防止MD提供参考依据。

关键词： 医疗机构   中药制剂   质量标准   制订   质量控制  

摘要： 本文概述医疗机构中药制剂质量标准的制订,以提高医疗机构研究开发自制中药产品的技术水平,促进中药制剂产业的发展;为制剂生产、检验、使用提供科学、先进、可控的质量依据,以为生产有效、安全、稳定的中药制剂提供保障。

关键词： 黄曲霉毒素B1   牦牛   挥发性脂肪酸   蒙脱石   酵母细胞壁提取物  

摘要： 为探讨黄曲霉毒素B1（AFB1）对牦牛瘤胃发酵性能和血清生化指标的影响,及3种吸附处理对AFB1的吸附效应,采用两因素4水平全因子试验设计,在牦牛日粮中添加不同水平的AFB1:A组20μg/kg,B组40μg/kg,C组60μg/kg,设对照组;同时添加不同水平的吸附剂:Ⅰ组蒙脱石（MMT）50g,Ⅱ组酵母细胞壁提取物（YCW）50g,Ⅲ组MMT 25g+YCM 25g,设对照组。测定血清AST、ALT、ALB等7个指标,瘤胃液pH、NH3-H、VFA等14个发酵指标,和瘤胃液AFB1、血液AFM1浓度。结果显示:（1）AFB1降低牦牛瘤胃pH,和氨氮（NH3-H）、挥发性脂肪酸（VFA）、乙酸、丙酸和戊酸浓度,以及微晶纤维素酶、纤维二糖酶和木聚糖酶活性,使乙丙比升高（P<0.01或P<0.05）。（2）3种吸附剂处理均不同程度降低乙丙比和提高VFA、乙酸、丙酸、丁酸、微生物蛋白浓度及羧甲基纤维素酶活的作用,但仅见YCW的作用（P<0.01或P<0.05）。（3）AFB1使牦牛血清AST、ALT、LDH、GGT浓度升高,降低ALB浓度（P<0.01或P<0.05）。（4）3种吸附剂处理均表现出使血清ALB浓度不同程度升高,AST、ALT、GGT、瘤胃AFB1、血液AFM1等浓度降低,但仅见MMT和YCW的作用（P<0.01或P<0.05）。结论:AFB1降低牦牛瘤胃pH、NH3-H、VFA、乙酸、丙酸、戊酸浓度、微晶纤维素、纤维二糖、木聚糖酶活,并提高乙丙比;3种吸附剂处理均可抑制AFB1对牦牛瘤胃微生物的毒性,其中以YCW效果较优;AFB1降低牦牛血清ALB浓度,导致AST、ALT等浓度升高;3种吸附剂处理均可降低AFB1对牦牛血清生化指标及血液AFM1浓度的影响,以MMT效果较优。

关键词： 纳米银   核酸适配体   黄曲霉毒素B1   检出限  

摘要： 介于目前纳米材料被人们广泛的了解并使用,在经过对于纳米金材料的各项探究之后,人们对于纳米银的好奇程度与日俱增,并开始利用它进行新一轮的探究。本论文选择纳米银粒子作为基质,结合核酸适配体对黄曲霉B1进行可视化检测。相较于传统的纳米金粒子来说纳米银在制备环节所需材料更加常见,成本相对较低,从稳定性、灵敏度、准确度上来分析与使用纳米金时的结果相差无样,本着实验方便快捷的原则,故使用纳米银作为本次试验的材料。为了试改善纳米银的稳定性,本论文在后期试用二氧化硅来增强纳米银的稳定性,形成Si02-AgNPs。本论文选择氧化还原法制备纳米银粒子并通过透射电子显微镜(TEM)和紫外可见吸光谱(UV-Vis)对每次制备得到的纳米银粒子进行结构形态的观察。通过确定最佳的氯化钠溶液浓度和最佳的核酸适配体浓度使得所设计的体系达到最稳定的状态,再对AFB1进行可视化检测,根据吸收峰值绘制标准曲线,并利用回收率实验检验其真实性,最终得出检测限。为增强体系的稳定性,本论文是采用二氧化硅与之形成复合颗粒进行检测实验,并选择使用纳米银粒子包裹二氧化硅的粒子形式。该复合粒子的结合主要是通过化学耦合或物理方法。检测体系成分与使用纳米银粒子体系保持一致,利用回收率实验对该体系进行可真实性检验,最终得出体系的检测限。根据实验结果可分析出,调整试剂比例后的氧化还原法制备得到的纳米银粒子无论从形态大小以及分布情况都得到了可观的改善。本论文设计的两种体系中纳米银及复合粒子所占的体积为250 μL,0.4μM适配体溶液所占体积为60μL,0.15M的NaCl溶液所占体积为60μL,黄曲霉B1所占的体积为60μL,共计430μL。经过计算,纳米银检测体系所得到的检测限为LOD=11.761ng/L。使用SiO2—AgNPs进行上述实验,最后所得到的检测限LOD= 10.984 ng/L。针对之前所建立的快速检测体系相比,本次设计的两种体系将可视化的最低浓度从之前的4μg/L降低至了300ng/L,有了比较明显的改进。

关键词： 中医   中药   中药制剂   配制工艺   新技术  

摘要： 近年来,中医药受到了人们及广大患者的普遍关注。中药饮片的使用存在着相应的不足之处,如疗效缓和及用药时间较长、药物提取复杂、口感差、患者用药依从性低、携带不方便等。应用方法与疗效也就成了中药制剂工作者大力研究的方向,中药制剂的新技术、新工艺、新剂型已悄然突起。调整中药剂型,确保疗效,降低毒副作用,增加用药的依从性,方便携带等是配制工艺新技术发展的主要目标。本文主要对中药制剂配制工艺中的新技术进行介绍,希望能够和相关专业人士共同探讨。

关键词： AFB1   枯草芽孢杆菌YC2   降解条件   作用机理  

摘要： 黄曲霉毒素B1（AFB1）是目前已发现的黄曲霉毒素中毒性最强的一种,其具有强肝毒性、高致突变性和高致畸性。广泛存在于农产品及饲料食品中,对人类健康存在严重威胁,同时对粮食和畜牧业造成严重的经济损失。AFB1具有非常稳定的理化性质,一般食品加工过程难以对其造成破坏。相对于物理法和化学法而言,生物降解AFB1反应条件较温和,不易造成营养的流失,也不会有产生新的毒素。细菌降解AFB1是一种有效、安全和环保的解毒方法。目前,生物降解AFB1的应用较少,尚未发现生物酶降解AFB1的相关应用。因而,分离高效降解AFB1的细菌具有重要的实际应用价值。本研究在筛选及鉴定高效降解AFB1的细菌菌株的基础上,优化降解AFB1的条件,并初步探讨其降解AFB1的作用机理,得到以下结果:（1）采用间接竞争ELISA方法测定培养液中AFB1含量,所得标准曲线相关系数>0.9990,加标回收率>98%,精密度<5%。在2.5μg/kg75μg/kg范围内线性较好。说明本实验所建立的方法简单便捷、准确可靠。适用于培养液中AFB1的检测。（2）使用香豆素代替AFB1做为唯一碳源,对AFB1降解菌株进行初筛实验,通过添加AFB1标准溶液,进行复筛实验。实验共计得到9株具备去除AFB1能力的菌株,其中去除能力最高的为鱼肠中分离出的YC2菌株。对YC2菌株细胞进行洗脱萃取,并测定细胞中AFB1的剩余量,确定了该菌株去除AFB1的过程为降解反应。（3）结合形态学观察、生理生化鉴定和16S rRNA基因序列测定分析对降解AFB1活性最高的菌株YC2进行鉴定。菌落呈现乳白色的圆形菌落,边缘整齐且薄,菌体中央微隆起,呈丘状,革兰氏阳性杆菌。并经过16S r RNA测序及系统进化树分析,初步确定该菌株为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）。（4）YC2菌株降解黄曲霉毒素B1条件的研究。比较了pH、温度、培养时间和金属离子对YC2菌株降解活性的影响,结果表明:YC2菌株从鱼肠中分离出的YC2菌株对黄曲霉毒素B1的降解反应最佳条件为:pH 7,温度为35℃左右,培养时间为72h,不添加金属离子。（5）通过测定发酵上清液、胞内液等对AFB1的将降解能力,发现上清液降解AFB1的能力最高,为82.6%。由此判断该菌株分泌了一种胞外物对黄曲霉毒素B1进行降解。而上清液经热处理及蛋白酶K处理后,其AFB1降解率显著降低。因此,推测主要是YC2分泌的一种胞外蛋白酶起到了降解AFB1的作用。

关键词： 黄曲霉   黄曲霉毒素B1   转录因子   AflSnt2   致病性  

摘要： 黄曲霉(Aspergillus flavus)是一种常见的腐生致病性真菌,繁殖能力极强,所产生的黄曲霉毒素B1(AFB1)具有极强的毒性,已被列为一级致癌物,对人类和社会危害极为严重,因此研究黄曲霉毒素的合成调控机制意义重大。近年来,已经有很多关于转录调控因子的研究报道,这些转录因子在酵母和曲霉属等多种真菌中都发挥着非常重要的作用。在曲霉中,转录调控因子Snt2对其毒素的生物合成及致病性过程的影响目前尚不明确。因此,本论文对黄曲霉转录调控因子AflSnt2的生物学功能进行初步探究。本研究通过生物信息学方法筛选到黄曲霉转录调控因子AflSnt2,利用同源重组方法构建aflsnt2基因敲除(Δaflsnt2)和回补菌株(Δaflsnt2-C),探究了aflsnt2基因在黄曲霉的生长发育、次级代谢及致病性过程中发挥的功能。结果表明,与野生型(WT)和回补株相比,aflsnt2基因敲除株在PDA培养基上产孢数量显著减少,且分生孢子梗的长度明显变短。此外,aflsnt2基因的缺失使黄曲霉丧失了产生菌核的能力并且阻断了 AFB1的生物合成。以上结果表明,AflSnt2在黄曲霉分生孢子产生、菌核形成以及毒素生物合成过程中起到了正调控作用。本研究还探究了aflsnt2基因敲除株对多种外界胁迫环境的响应,结果表明敲除株对过氧化氢和盐离子更加敏感,在7 mmol/L浓度的过氧化氢环境下,敲除株无法生长;但浓度为1.2 mol/L的山梨醇会促进敲除株的生长。此外,Δaflsnt2菌株的生长也受到了十二烷基磺酸钠的显著抑制。黄曲霉侵染花生和玉米种子的试验结果表明,与野生型和回补株相比,Δaflsnt2菌株侵染种子后的产孢量明显减少,且未产生黄曲霉毒素AFB1,这都与本研究先前的观察结果一致。随后进一步探究了 AflSnt2对黄曲霉体内淀粉酶和脂肪酶活性的影响,结果表明敲除菌株中淀粉酶和脂肪酶的活性显著降低,这说明黄曲霉中AflSnt2可能是通过调节体内水解酶活性来影响对花生、玉米的致病性。这些结果都表明AflSnt2在黄曲霉生长发育、毒素的生物合成以及黄曲霉对农作物致病性等过程中都起到了关键作用。综上所述,本研究初步研究了黄曲霉中转录调控因子AflSnt2的功能,结果表明AflSnt2参与了黄曲霉的菌丝生长、分生孢子产生、菌核形成、黄曲霉毒素B1的生物合成、环境胁迫响应以及黄曲霉致病性等多种生命活动过程的调控。

关键词： 蛭金通络胶囊   心绞痛   胸痹   经络痹阻证  

摘要： 目的评价自制传统中药制剂蛭金通络胶囊治疗冠心病心绞痛(胸痹经络痹阻证)的临床疗效。方法所有纳入冠心病心绞痛病例随机分为两组,治疗组592例、对照组397例,治疗组口服蛭金通络胶囊治疗,对照组口服利脑心胶囊治疗,疗程8周。观察两组治疗后心绞痛发作次数和症状变化、心电图和左心室功能改善情况。结果治疗组临床疗效均优于对照组,且显效率和总有效率有显著性差异(P<0.05)。结论蛭金通络胶囊对冠心病心绞痛疗效显著。

关键词： 中药制剂   不良反应   原因探讨  

摘要： 目的分析中药制剂用药后出现的不良反应,并分析其发生的原因。方法回顾性分析2016年5月至2017年8月我院门诊及住院部上报的服用中药制剂后出现不良反应的107例患者的临床资料,根据不良反应情况分析其发生的原因。结果中药制剂引发不良反应累及的器官或系统主要有皮肤、呼吸系统、消化系统、神经系统、心血管系统、全身性损害等。其原因主要与药物使用不当、药物滥用以及患者自身身体因素等有关。结论中药制剂引发不良反应的原因较多,在临床使用中药制剂时,应加强对中药制剂使用的科学性和合理性,深度了解中药制剂的用法和用量以及不良反应,以提高中药制剂的安全性和有效性。