关键词： 黄曲霉毒素B1   表面等离子体共振   免疫传感器   可再生使用  

摘要： 针对花生中高毒污染物黄曲霉毒素B_1(AFB_1),开发一种可再生循环使用的抑制型表面等离子体共振(SPR)免疫传感器。方法 :用活化酯偶联制备AFB_1包被抗原(AFB_1-OVA),并通过EDC/NHS将其预先包被到表面等离子体共振芯片表面。依据免疫抑制原理,即目标物(AFB_1)与AFB_1-OVA共同竞争固定浓度的特异性抗体,以及不同浓度AFB_1所得到的SPR响应,计算抑制率并绘制曲线,可实现对食品中AFB_1的准确、灵敏分析。结果:检测过程抗体浓度为80 nmol/L;该抑制型SPR免疫传感器的检出限(IC15)为0.0049μg/L,灵敏度(IC50)达到0.025μg/L;对花生样品中AFB_1的检出限(IC15)和灵敏度(IC50)分别达到0.13μg/kg和0.74μg/kg。整个检测过程不超过5 min,同一芯片可重复使用60次以上。结论:所构建的SPR传感器操作简便,灵敏度高,检测耗时短,成本低,可以满足食品样品中高毒性AFB_1的快速、准确、低成本的分析要求。

关键词： 小油坊   花生油   黄曲霉毒素B1  

摘要： 黄曲霉毒素去除方法可分为物理去除法、化学去除法和生物去除法3类。本文就此3种方法展开论述。

关键词： 乳酸菌   纳豆芽孢杆菌   黄曲霉毒素B1   伏马毒素B1   吸附作用  

摘要： 为了研究乳酸菌和纳豆芽孢杆菌对霉菌毒素的吸附作用,采用L_9(3~4)正交试验设计,研究不同菌浓度、环境温度及吸附时间对吸附作用的影响。结果表明,乳酸菌和纳豆芽孢杆菌对黄曲霉毒素B_1和伏马毒素B_1的吸附作用主要受菌浓度的影响(P<0.05),温度和时间对吸附强度无显著影响。浓度为1×10~9CFU/m L时,乳酸菌对黄曲霉毒素B_1的吸附强度(18.02%)显著高于纳豆芽孢杆菌(13.88%)(P<0.05),对伏马毒素B_1的吸附强度(13.45%)显著低于纳豆芽孢杆菌(17.62%)(P<0.05)。建议提高菌群数量及种类以去除饲料中霉菌毒素的危害。

关键词： 再生障碍性贫血   兰州方   骨髓增殖   中药制剂  

摘要： 目的通过观察中药制剂兰州方对免疫介导的再生障碍性贫血模型小鼠骨髓组织形态学及股骨有核细胞数的影响,以此证实其的确切疗效并探讨机理。方法将BALB/C小鼠90只随机分为6组:兰州方大、中、小剂量组,贞芪扶正颗粒对照组,模型组和正常对照组,每组15只。除正常对照组外,其余75只小鼠均经3.0 GY直线加速器γ射线全身照射,照射4小时内输入取自DBA/2小鼠的胸腺、淋巴结细胞悬液。照射一周后,通过检测血象、骨髓象,证明造模成功。各组用药40天后将小鼠脱颈处死,取双侧股骨进行有核细胞计数和病理学切片观察,并对所测结果进行统计学处理。结果模型组,兰州方大、中、小剂量组,贞芪扶正颗粒对照组小鼠BMC计数较正常对照组小鼠明显减少(P<0.05或P<0.01);兰州方大、中、小剂量组,贞芪扶正颗粒对照组BMC计数较模型组显著升高(P<0.05或P<0.01)。模型组,兰州方大、中、小剂量组,贞芪扶正颗粒对照组造血组织容量百分率较正常对照组明显减少(P<0.05或P<0.01);模型组,兰州方大、中、小剂量组,贞芪扶正颗粒对照组脂肪组织容量百分率较正常对照组明显增多(P<0.05或P<0.01);兰州方大、中、小剂量组,贞芪扶正颗粒对照组造血组织容量百分率较模型组显著升高(P<0.05),而脂肪组织容量百分率较模型组亦显著升高(P<0.05或P<0.01);兰州方中剂量组造血组织容量百分率高于兰州方大、小剂量组和贞芪扶正颗粒对照组(P<0.05);兰州方中剂量组脂肪组织容量百分率低于兰州方大、小剂量组和贞芪扶正颗粒对照组(P<0.05)。结论中药制剂兰州方具有改善骨髓微环境、促进骨髓造血细胞的增殖分化、提高造血祖/干细胞数量、抑制非造血组织细胞增生分化的作用,并通过以上环节使骨髓造血功能恢复。

关键词： 中药制剂   研发   中医药发展  

摘要： 医院制剂是医院药学的重要组成部分,在满足临床医疗和科研需要、加强药学与临床学科的联系与互动、弥补市场不足、培养药学人才、提高医院社会经济效益等方面均具有积极而重要的作用。本文对我省医院制剂的现状进行总结,指出目前全省中药制剂在制剂水平、质量标准、临床研究方面还存在诸多不足,提出应从加强各项研究、加强医药协调、开发中药新药、延伸医疗制剂的附加值、扩大临床服务、创办专科医院这6个方面着手,在目前我国政府加大中医药事业的投入力度、中医药工作迎来重大战略的机遇期,转变观念,调整思路,整合资源,加大特色制剂研发投入,积极开展医药结合的科学研究,实现中药制剂研发与应用的突破性发展,更好地为社会服务、为人民服务。

关键词： 中药提取物   生产性能   种公鸡   乌鸡   试验动物   受精蛋孵化率   基础饲粮   饲养试验  

摘要： 为研究复方中药提取物对凌云乌鸡种公鸡生产性能的影响,试验选取270只合格的成年凌云乌鸡种公鸡为试验动物,进行为期5个月的饲养试验。试验鸡群随机分为3组,每组3个重复组。对照组饲喂基础饲粮,试验A组和试验B组分别在基础饲粮上添加相应的中药提取物300mg/kg。结果表明,试验A组和试验B组较对照组而言,中药提取物能显著提高公鸡所配母鸡的受精率和受精蛋孵化率。结论:中药提取物能显著提高凌云乌鸡种公鸡的生产性能。

关键词： 益生菌   中药制剂   肉仔鸡   免疫作用  

摘要： 本文将植物乳杆菌、酵母菌、枯草芽孢杆菌复合的益生菌制剂与消食健脾和抗病毒类中药饲料添加剂联合应用,研究其对AA肉仔鸡(爱拔益加肉鸡)生长性能和免疫器官的影响。本试验选取1日龄AA肉仔鸡180只,随机分为4组,每组3个重复,每个重复15只鸡,Ⅰ组为对照组(CK),饲喂基础日粮,Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组分别饲喂基础日粮添加0.05%的中药制剂、0.05%的益生菌制剂、0.05%益生菌制剂和0.05%中药制剂。饲喂周期35d。结果显示:日粮中添加益生菌及中药配伍制剂组各阶段的AA肉仔鸡日增重都有所提高,也明显提高了饲料利用率。1~21 d的Ⅳ组日增重较CK组提高了9.08%(P<0.05),料肉比较CK组降低了6.62%(P<0.05)。21~35 d的Ⅳ组日增重较CK组提高了9.69%(P<0.05),料肉比较CK组降低了8.96%(P<0.05)。1~35 d的Ⅳ组日增重较CK组提高了12.97%(P<0.05),料肉比较CK组降低了9.17%(P<0.05)。另外,连续饲喂益生菌及中药配伍制剂35 d,还可以提高AA肉仔鸡胸腺、脾脏和法式囊指数。与CK组相比,Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组胸腺指数分别提高4.11%(P>0.05)、3.89%(P>0.05)、8.80%(P<0.05);与CK相比,Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组脾脏指数分别提高13.81%、14.90%(P>0.05)、30.21%(P<0.05);与CK组相比,Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组法氏囊指数分别提高13.06%、13.83%、28.20%(P<0.05)。结果表明,益生菌与中药制剂联合应用能显著提高1~35 d的AA肉仔鸡生长性能和免疫器官的发育,并且两者具有协同增效作用,在肉禽的养殖过程中,可起到替代部分抗生素的效果。

关键词： 肉鸡   黄曲霉毒素B1   姜黄素   肝损伤   GST   Nrf2  

摘要： 黄曲霉毒素B1(Aflatoxin B1,简称AFB1)是黄曲霉毒素(AF)中的一种,AFB1因其肝毒性强、危害大、分布广而被列入一级致癌物。AFB1为前致癌物,进入体内经Ⅰ相药物代谢酶催化代谢为黄曲霉毒素B1-8,9-环氧化物(AFBO),肝脏为其主要靶器官,可造成肝损伤,甚至诱发肝癌。肝脏结合解毒是消除代谢物毒性的主要方式,其中谷胱甘肽-S-转移酶(GST)是肝脏的主要解毒酶,而黄曲霉毒素B1-8,9-环氧化物-谷胱甘肽加合物(AFBO-GSH)是评价GST能否解毒AFB1的主要指标之一。姜黄素(curcumin)是姜黄的活性成分,具有抗炎、抗氧化及提高机体免疫力等功效,可激活Nrf2-ARE通路对抗氧化应激,但其作用机制尚不明确,尤其是姜黄素能否通过促进肝脏的解毒机制干预AFB1的肝毒性未见报道。本实验选择国内饲养量大的Arbor Acres(AA)肉鸡作为实验动物,从mRNA、蛋白质表达水平、酶活性三个层次来探讨AFB1对肉鸡肝脏Nrf2和主要II相解毒酶表达的影响及添加姜黄素对AFB1造成上述影响的改变。并采用高效液相色谱法检测加合物AFBO-GSH含量的变化以此来评价GST的解毒能力。本研究将阐明AFB1致肉鸡亚急性肝损伤和姜黄素如何影响核因子NF-E2相关因子(Nrf2)及其下游靶基因GSTA家族与GSTM家族部分亚型(GSTA、GSTA3、GSTA4和GSTM2)、环氧化物水解酶1型(EPHX1)的表达,从而缓解AFB1诱导的肉鸡亚急性肝损伤作用。研究结果如下:1、AFB1和/或姜黄素对肉鸡肝脏Nrf2及II相酶(GST、EPHX1)的影响本实验采用病理组织学切片法(HE染色)、RT-PCR和Western-Blot法,研究了饲料中连续添加AFB1(5 mg·kg)及不同剂量姜黄素(150 mg·kg、300 mg·kg和450 mg·kg)28d对AA肉鸡肝脏Nrf2及相关II相解毒酶(GSTs、EPHX1)的影响。结果显示,连续染毒28d,AFB1组肉鸡Nrf2基因及蛋白表达极显著低于空白对照组(P<0.01);II相酶GSTA、GSTA3、GSTA4、GSTM2和EPHX1基因表达极显著低于空白对照组(P<0.01);GSTA3蛋白表达极显著低于空白对照组(P<0.01);病理组织切片结果显示,AFB1组肉鸡肝细胞变性坏死现象严重,表明AFB1对肉鸡肝脏造成损伤,而姜黄素干预组肉鸡肝组织AFB1损伤症状被显著缓解,且缓解程度与姜黄素剂量呈正相关,表明姜黄素对AFB1诱导的肝损伤有保护作用。姜黄素对照组与空白对照组相比各项指标未见显著差异(P>0.05),说明添加的姜黄素浓度对肉鸡无不良影响。与AFB1染毒组相比,中、高剂量姜黄素能够极显著提高Nrf2及II相酶GSTs、EPHX1基因的表达(P<0.01);高剂量姜黄素能够极显著提高Nrf2、GSTA3及GSTM2蛋白的表达(P<0.01),说明姜黄素是通过提高Nrf2及其下游II项酶通路的表达来抵抗AFB1诱发的氧化应激及其肝损伤。停止染毒及姜黄素干预后第7d(即实验第35d),各组肝脏指标变化趋势与28d相似,AFB1组AA肉鸡肝脏仍呈现明显的肝损伤状态,高剂量姜黄素对AFB1诱导的AA肉鸡亚急性肝损伤仍存在持续的保护作用。说明AFB1对肉鸡肝脏Nrf2及II相酶(GST、EPHX1)的影响在停毒7d内具有后遗毒性,而且姜黄素的干预作用在停药7d内有持续性。2、AFB1及姜黄素对肉鸡肝脏GST活性及其催化AFBO解毒能力的影响连续染毒28d,与空白对照组相比,肉鸡肝组织内GST酶活性极显著降低(P<0.01),姜黄素干预组与AFB1组相比,GST酶活性有所提高但未见显著差异。将肉鸡肝微粒体分别与丁基羟基茴香醚(BHA)诱导小鼠肝胞液、对照组肉鸡肝胞液、添加姜黄素肉鸡肝胞液及不添加肝胞液放入缓冲液中进行反应,采用高效液相色谱法对上清液中加合物进行分析检测。结果显示仅在添加姜黄素的一组上清液中检测到AFBO-GSH加合物。停毒停药7d后,各组GST酶活性趋势及AFBO-GSH加合物检测结果与28d相似。说明姜黄素提高了肉鸡肝组织GST酶活性,促进谷胱甘肽(GSH)与AFBO的结合,从而起到解毒作用,并且其干预作用在停药7d内有持续性。以上结果表明,连续28d饲喂含有5 mg·kg AFB1的饲料能够造成AA肉鸡亚急性肝损伤,且损伤不可逆;肉鸡体内共检测到以下参与解毒的II相酶亚型:GSTA、GSTA3、GSTA4、GSTM2和EPHX1;姜黄素通过上调Nrf2及上述II相酶的表达,促进AFBO与GSH结合解毒改善AFB1诱导的肝损伤,以高剂量干预效果最佳,这是姜黄素缓解AFB1致AA肉鸡肝损伤的作用机制之一。建议姜黄素混饲的干预剂量为450 mg·kg。

关键词： 黄曲霉毒素   AFB1   免疫层析   胶体金   胶体碳   量子点   荧光微球  

摘要： 黄曲霉毒素(AF)是一类很强的致癌物质,这里面毒性最强的就属黄曲霉毒素B1。当粮食保存不当发霉时,会有大量黄曲霉毒素B1生成,即使高温也很难将其破坏,对人们安全造成了极大的威胁。本文分别选取胶体金、胶体碳、荧光微球及量子点作为标记材料,研究了免疫层析定量检测方法,达到快速检测食品中黄曲霉毒素B1。本文通过几个方法对目前的黄曲霉毒素B1免疫层析方法进行改良:(1)筛选标记条件过程中通过引入读数仪数据,较其他文献中肉眼判断更加精准的确定最佳标记条件。(2)通过实际反应判断标记和结合效果相结合,而非其他文献上只关注抗体与标记物间的标记效率,优选出标记效率高而且结合效果好的条件。(3)首次引入胶体碳在黄曲霉毒素B1项目中,获得比较简易可控性好的生产条件,胶体碳对样本之间的偏差抗干扰性能比胶体金要好。(4)通过优选荧光微球和量子点材料提高黄曲霉毒素B1的检测灵敏度,降低抗原抗体的使用量,缩减生产成本。(5)通过综合条件的优化提高检测灵敏度,减少样本干扰的影响。几种层析方法的灵敏度如下:黄曲霉毒素B1胶体金检测卡的肉眼判断灵敏度为0.2 ng/mL;黄曲霉毒素B1胶体金检测卡的仪器判读灵敏度为0.05 ng/mL。黄曲霉毒素B1胶体碳检测卡的肉眼判断灵敏度为0.1 ng/mL;黄曲霉毒素B1胶体碳检测卡的仪器判读灵敏度为0.05 ng/mL。当以荧光微球作为标记物时,通过紫外灯肉眼判断试纸条的灵敏度为黄曲霉毒素B1 0.05 ng/mL;用荧光免疫层析分析仪判读试纸条的灵敏度为黄曲霉毒素B1 0.01 ng/mL;检测卡的灵敏度为黄曲霉毒素B1 0.01 ng/mL。当以量子点作为标记物时,通过紫外灯肉眼判断试纸条的检测限为黄曲霉毒素B1 0.05 ng/mL;用量子点免疫层析分析仪判读试纸条的灵敏度为黄曲霉毒素B1 0.01 ng/mL;检测卡的灵敏度为黄曲霉毒素B1 0.01 ng/mL。综上所述,通过标记方案的改变,不同材料的选择,改进了黄曲霉毒素B1免疫层析产品的稳定性能和灵敏度。但是由于食品样本的多样性,还有很多复杂的样本未研究,因此关于标示物及抗干扰性能的提高有待继续深入研究。

关键词： 黄曲霉毒素B1   EGCG   合成抑制   氧化应激   RNA-Seq  

摘要： 黄曲霉毒素B1（AFB1）是由黄曲霉等真菌产生的一种强致癌性真菌毒素,ROS介导的氧化应激是其合成的先决条件,抗氧化剂能有效抑制毒素合成。前期研究发现茶多酚能显著降低黄曲霉胞内氧化压力,抑制AFB1的生物合成,但作用机理尚不明确。因此,本文首先考察了五种茶多酚单体:儿茶素（C）、表儿茶素（EC）、表没食子儿茶素（EGC）、表儿茶素没食子酸酯（ECG）、表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）对AFB1合成的抑制效果,明确了起主要抑制作用的单体,并探究了单体空间结构与抑制产毒能力之间的关系;然后通过RNA-Seq技术研究了该单体对黄曲霉基因转录水平的影响,从中挖掘出AFB1合成途径、氧化应激信号传导途径中响应该单体作用的关键基因;最后从基因转录、蛋白表达及修饰、AFB1合成代谢途径等方面分析茶多酚单体对AFB1合成的抑制作用,阐明茶多酚抑制AFB1合成的分子机制,主要结果如下:1.五种茶多酚主要单体对黄曲霉生长无明显抑制作用,未对菌丝体结构造成破坏,但可有效抑制AFB1的合成,抑制率最高可达92.00%（2 mg/mL EGCG）,抑制作用由大到小为:EGCG>EC>ECG>EGC>C,表明EGCG是抑制AFB1合成的主要单体。为进一步研究单体空间结构与抑制AFB1合成的关系,采用Gaussian 09软件中DFT计算方法在B3LYP/6-31G（d,p）基组下计算了五种茶多酚单体的键长键角、酚羟基氢带电荷数、前线轨道能量等参数。发现茶多酚单体化合物C9位羟基成酯后抑制AFB1合成能力增强;化合物酚羟基数越多,酚羟基氢带正电荷数越大,则茶多酚单体的抗氧化活性越高,且单体抑制AFB1合成的能力越强,说明茶多酚单体清除自由基的能力影响其抑制AFB1合成的效果;分子的LUMO轨道能级越小,抑制AFB1合成能力越强,说明茶多酚单体抑制AFB1时以清除电子为主。2.对黄曲霉转录组数据进行分析,发现EGCG使黄曲霉927个基因发生了显著性差异表达（p<0.05）,其中496个基因下调,431个基因上调,上调基因主要参与抗氧化酶及脂质的合成,下调基因主要涉及细胞受氧化压力等刺激所激活的信号传导途径。经EGCG处理后,AFB1合成所需前期基因（aflA、aflC、aflE）、中期基因aflJ及毒素合成的特异性调控因子基因aflR均发生了下调;且氧化应激介导的丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号途径中MAP激酶激酶Mkk2、MAP激酶SakA及其下游转录因子AtfA的基因转录水平也发生了下调。推测EGCG通过MAPK途径抑制AFB1合成基因簇中aflA、aflC、aflE、aflJ、aflR的表达,减少AFB1的合成。3.基于黄曲霉转录组的数据分析,进一步研究了EGCG对黄曲霉胞内ROS水平、细胞质与细胞核中激酶SakA蛋白表达及磷酸化水平、转录因子基因atfA及AFB1合成基因簇中afl A、aflC、aflE、aflJ、aflR的转录水平、AFB1及其前体物质NOR合成的影响。结果显示:EGCG能显著降低黄曲霉胞内ROS水平,缓解菌体胞内氧化压力;抑制ROS对SakA的激活,使细胞质与细胞核中该激酶磷酸化水平分别下降了38.92%和78.64%;下调atfA、aflA、aflC、aflE、afl J、aflR的转录水平,使AFB1前体物质NOR的合成量减少70.91%,进而阻断了AFB1的合成（抑制率为87.50%）。上述结果表明EGCG通过降低胞内ROS含量,抑制了ROS介导的SakA/AtfA信号通路对毒素合成基因簇上基因（aflA、aflC、aflE、aflJ、aflR）的转录激活,限制毒素合成前体物质的供应,阻断了AFB1的合成。本课题的研究进一步丰富了人们对黄曲霉毒素B1合成的复杂调控网络的认识,为筛选和开发适用于控制食品中黄曲霉毒素B1污染的天然抑制剂奠定了理论基础。