关键词： 中药制剂   脑梗死   偏瘫   康复训练   ADL能力  

摘要： 目的:脑梗死的发病率致残率均较高,探讨中药制剂联合早期合理地对卒中患者进行康复治疗及由康复治疗师指导协助病人进行有效的肢体运动功能训练,对肢体运动功能恢复的重要性.方法:我们自2014年8月―2017年8月收治的卒中后偏瘫患者60例,随机分为观察组和对照组,各30例,观察组通过运用综合康复训练,取得满意的效果,治疗前及治疗40d后采用指数评定量表进行评定.结果:两组患者治疗后MBI各项目评分均显著升高,(t>14.86,P<0.001),观察组评分显著高于对照组(t>18.65,P<0.001).结论:对脑卒中患者早、中期进行康复训练可提高患者的ADL能力,有利于促进患者病情的康复,值得大力推广和应用.

关键词： 黄曲霉毒素B1   小窝蛋白-1   肝细胞损伤   氧化应激   自噬  

摘要： 研究背景与目的黄曲霉毒素(aflatoxins,AFTs)是食物和食品中最常见的真菌代谢产物,属于二氢呋喃香豆素的衍生物,被国际癌症研究机构归为I类致癌物。在黄曲霉毒素的几个亚型中,黄曲霉毒素B1(aflatoxin B1,AFB1)毒性最大,在人体和动物体内也最为常见,肝脏是其主要的靶器官。AFB1进入体内后要发挥活性,首先必须通过细胞色素P450(Cytochrome P450)酶系统的转化,生成高度活性的中间产物AFB1-8,9-环氧化合物(AFB1-8,9-epoxide,AFBO),AFBO则能够与DNA、RNA、蛋白质等大分子结合,进而阻断基因的转录与翻译,影响基因表达。在这一过程中,AFBO代谢会大量消耗谷胱甘肽(glutathione,GSH),造成细胞内活性氧累积,产生脂质过氧化反应,引发DNA和蛋白损伤,诱导基因突变或细胞凋亡。可见在AFB1代谢过程中所引发的氧化应激是其致肝细胞损伤的直接原因。目前临床上治疗AFB1中毒也主要是采用体外补充抗氧化剂的方法。然而,目前关于AFB1引起氧化应激的机制及其中发挥作用的关键分子尚不清楚。因此,探寻AFB1致肝细胞氧化应激作用中的关键分子有望为AFB1临床治疗提供新靶点。小窝蛋白-1(Caveolin-1,Cav-1)是Caveolin家族成员之一,位于细胞膜和内体膜,主要通过自身磷酸化作用参与胆固醇转运、大分子内吞等过程。Cav-1能够调节细胞内多条信号转导通路,如受体酪氨酸激酶、Src家族酪氨酸激酶(Src,Fyn等)、内皮型一氧化氮合酶及一些下游信号分子H-Ras、MEK、ERK、PI3K/AKT等。Cav-1既是一种抑癌蛋白,又是一种癌蛋白,这种双重作用依据细胞类型、癌症发展阶段的不同而不同,也是近年来研究的热点问题。Cav-1也被发现与各种应激有关,包括氧化应激、紫外照射、放射治疗,以及与应激相关信号有关。最新证据表明,Cav-1是一种氧化应激相关蛋白,氧化应激可以影响Cav-1的膜转运。在氧化应激条件下,Cav-1磷酸化与细胞凋亡和细胞附着密切相关,而Cav-1的双重作用在氧化应激中也有体现,如有研究发现磷酸化Cav-1蛋白表达增加具有抗凋亡作用,可促进氧化应激后细胞存活。也有研究发现Cav-1表达减少或缺失能够显著抑制肺组织中性粒细胞趋化、黏附和上皮细胞/内皮细胞凋亡,减轻弥漫性肺泡损伤、肺血管内皮屏障损伤及肺水肿程度。我们前期研究发现AFB1作用过程中能够引起肝细胞中Cav-1的表达升高以及Cav-1分子定位的改变,提示Cav-1可能参与了AFB1引发的肝毒性。在此基础上,我们一方面通过下调或过表达Cav-1分析其在AFB1引起的肝损伤中的作用,另一方面从对氧化应激的调控途径上分析其作用机制。一、Cav-1在AFB1引发的肝细胞毒性中的作用研究方法:采用人正常肝细胞(L-02),通过细胞增殖实验、流式细胞术、免疫荧光、免疫蛋白印迹等方法检测AFB1作用后引起的肝毒性情况;通过转染质粒或siRNA分别过表达或下调肝细胞中Cav-1分子的表达,检测过表达或下调Cav-1对于AFB1处理引起的肝损伤的影响。此外选取了肝癌细胞系Huh7和HepG2两种细胞,通过下调Cav-1的表达分析其对细胞活性和凋亡的影响,以分析Cav-1是否在不同的肝细胞中发挥相似的作用。实验结果:AFB1能够在肝细胞中发挥毒性作用,表现为细胞活力下降,细胞凋亡增加,细胞内氧化应激水平升高(活性氧水平和MDA含量增加)。进一步发现AFB1能够引起Cav-1的表达增加,并引起Cav-1分子的细胞定位明显改变。在此基础上,下调肝细胞中Cav-1的表达后检测AFB1引发的肝细胞毒性,发现肝细胞活力下降明显减轻,细胞凋亡显著减少,氧化应激水平明显降低,而过表达Cav-1后,与上述结果相反。在肝癌细胞系Huh7和HepG2两种细胞中重复上述实验,得到了相似的结果。结论:AFB1可通过诱发氧化应激造成肝细胞损伤,导致肝细胞凋亡。在这一过程中,肝细胞中Cav-1蛋白分子发挥着重要的作用,AFB1促进了Cav-1的表达,促进了氧化应激。下调Cav-1的表达能够抑制AFB1诱发的氧化应激,提升细胞活力,减少细胞凋亡,提示Cav-1可能是参与AFB1引发肝细胞氧化应激的关键分子。二、Cav-1在AFB1引发的肝细胞毒性中的作用机制实验方法:从抗氧化应激关键通路Keap1-Nrf2信号通路入手,首先通过Western Blot检测Cav-1下调或过表达后对Nrf2及下游抗氧化应激重要分子HO-1与NQO-1表达的影响。进而通过免疫共沉淀、荧光酶素等方法检测Cav-1与Nrf2之间的相互作用,以及Cav-1对于Keap1-Nrf2信号通路的影响。此外,通过Western Blot和免疫荧光等分析Cav-1对AF

关键词： 医疗机构   中药制剂   研发现状  

摘要： 在整个市售药品体系中,医疗机构制剂为其重要补充,越发受到社会的重视与关注.现阶段,在研发医疗机构制剂方面,处在一种比较缓慢的发展状态,仍存在一些对制剂研发造成影响的因素.为了能够更加全面、深入的了解医疗机构制剂的研发现状,本文以本市医疗机构为研究对象,对其开展全面调研,调查其制剂研制开发情况,提出具体的解决对策.

关键词： 复方中药   植物枯萎   病原菌   影响分析  

摘要： 随着我国社会经济的快速发展,我国各个领域都取得了很大的进步,在农业领域也是如此,天然植物源农药的研究受到广泛的关注,传统中药是植物源,他们既能够治疗疾病,也能够杀灭植物害虫,从天然的植物源中找出活性物质来代替农药,减少了农药对人体的伤害,对环境的污染也会大大减少,本文就对复方中药提取物对植物枯萎病原菌的影响进行分析。

关键词： 黄曲霉毒素B1   罗曼蛋鸡   免疫器官   转录组   差异表达基因   共表达网络  

摘要： 黄曲霉毒素B1(AFB1)对家禽的生长发育构成重大风险,且残留在肉类产品中的AFB1也会危害人类健康。本研究通过给予拌有0mg/kg(对照)、0.3mg/kg(低毒)、0.6mg/kg(中毒)和1.2mg/kg(高毒)AFB1的饲料饲喂165日龄的罗曼蛋鸡35天后,对不同浓度等级进行毒性效应评估,不同浓度分组的蛋品质的分析发现AFB1使蛋黄比例增加、蛋白降低、蛋径长(cm)缩短、蛋形指数变低、蛋壳强度和中端蛋壳厚度变低(P<0.05)。通过对肝脏病理学和细胞凋亡的观察,肝脏伴有脂肪沉积、细胞核破坏、组织间隙增加以及肝脏细胞凋亡。鸡蛋的产生需要大量的脂类,这些结果提示AFB1对肝脏的致毒性损伤影响了鸡蛋的蛋品质。同时对其免疫器官脾脏、法氏囊以及肝脏进行lncRNA、miRNA、mRNA高通量测序以深入挖掘AFB1的毒理机制。主要研究结果如下:(1)高毒的AFB1对罗曼蛋鸡的肝脏、脾脏和法氏囊的蛋白编码基因和miRNA的表达水平有影响。与对照组相比,1.2mg/kg的AFB1组中肝脏1927个蛋白编码基因和45个miRNA发生差异表达,这些差异表达的蛋白编码基因和异表达的miRNA共同富集在脂肪代谢、凋亡自噬密切相关的通路中。最终共筛选出9个肝脏凋亡自噬基因和脂肪代谢基因(ULK2、RHEB、SGK1、BCL6、AP3S1、ENPP2、PPARG、LYPLA1、NFATC2),这些基因与11个差异表达的miRNA(gga-miR-301a-3p、gga-miR-301b-3p、gga-miR-107-5p、gga-miR-142-3p、gga-miR-142-5p、gga-miR-1454-3p、gga-miR-365-3p、gga-miR-190a-3p、gga-miR-32-3p、gga-miR-140-5p、gga-miR-138-5p)具有靶向关系。(2)高毒的AFB1会影响脾脏6333个蛋白编码基因和42个miRNA出现差异表达。这些差异表达的miRNA靶基因和蛋白编码基因功能富集共同出现在m TOR信号通路、Fox O信号通路、Erb B信号通路、胞吞作用和单纯疱疹感染等。这些信号通路主要与炎症和癌症发生有关,其中4个炎症基因PIK3R1、TAB2、PDGFRA、BMPR2相互作用导致脾脏部分免疫功能缺失,而NKD1,PIK3R1下调推测AFB1有致脾脏癌变的倾向。(3)法氏囊在高毒的AFB1条件下,有296个蛋白编码基因表达水平发生改变,其功能富集在先天免疫反应、炎症反应、和一些信号通路如细胞因子-细胞因子受体相互作用途径、p53信号通路和Ig A生成的肠道免疫网络等,其中IL4I1显著被上调,可能造成母鸡的法氏囊B细胞输出降低导致法氏囊的免疫功能障碍。另外,19个miRNA表达水平改变,最终推测法氏囊可能通过gga-miR-19b-5p靶向OTUD1增强自身免疫减少AFB1的毒害。(4)高毒的AFB1还对罗曼蛋鸡的肝脏长非编码RNA(lncRNA)的表达水平有影响。我们总共鉴定出867个差异表达的lncRNA,其中在295个差异表达lncRNA附近100kb范围内找到369个顺势式调控差异表达蛋白编码基因,计算295个lncRNA和369个mRNA的皮尔逊相关系数(PCCs),发现216个lncRNAsmRNAs对。最后共筛选8个lncRNA可能与ADH6、PPARG、ACSL4、PPARD、FADS2、GABARAPL1(ATG8)、BCL6、CSNK1E的相互作用与脂肪肝和细胞凋亡相关。(5)基于肝脏lncRNA-miRNA-mRNA调控网络分析,发现高毒的AFB1会使PPARG、BCL6表达失调。一方面该基因受TU10057和TU45776顺式调控,此外其也是gga-miR-301a-3p、gga-miR-301b-3p和gga-miR-190a-3p的靶基因。因此,这个互作调控关系可能助于解释AFB1引发肝脏的脂肪沉积和细胞凋亡的机理。综上所述:AFB1对免疫器官转录组的影响主要集中在与免疫、炎症等方面,对脾脏的致毒效应还表现在一些基因参与了癌症发生的信号通路中。另一方面,我们在转录组中找到了解释肝脏脂肪沉积和肝细胞凋亡发生有关的mRNA与lncRNA调控网络。总之,我们的研究结果丰富了AFB1引发机体中毒后基因组表达调控的信息,为今后改善家禽健康提供研究思路。

关键词： 黄曲霉毒素B1   结合模式   结合强度   DNA结合饱和值   影响因素   理论  

摘要： 为研究黄曲霉毒素B1与游离DNA结合模式及结合强度,本文通过多种分析方法研究了AFB1与DNA的相互作用机理,通过共振光散射法计算出AFB1与DNA相互作用的结合饱和值,并研究了多种因素如pH、温度、离子强度及其他环境共存物对AFB1-DNA体系的影响。研究了黄曲霉毒素B1与鲱鱼精DNA的体外相互作用机理。DNA热变性温度测定实验结果表明,DNA的热变性温度Tm提高了约13.1℃,是由于DNA双螺旋结构变得更加致密和稳定,是AFB1分子嵌入到了DNA分子的碱基对之间导致的。紫外-可见光谱表明,DNA结构发生了变化,并形成了一种新的AFB1-DNA配合物,其相互作用方式为嵌入模式。荧光猝灭光谱还表明,AFB1与溴化乙锭（EB）之间存在竞争性相互作用,形成了AFB1-DNA复合物,与EB相比可以判断其作用模式为嵌入模式。与Circular Dichroism光谱中245nm处的负峰信号增强和270nm处的正峰信号变化表明,DNA碱基对之间的堆积情况发生了变化,且B-DNA含量增加,也证明AFB1分子是通过嵌入模式而进入到DNA碱基对之间的,且275nm附近存在明显的剂量依赖性增大的负峰,表明AFB1可能属于DNA嵌入剂。琼脂糖凝胶电泳结果表明,DNA分子携带者AFB1分子向正极移动,在泳道中发蓝色光芒,说明其结合模式为嵌入。所有这些结果表明,在体外,DNA与AFB1的相互作用模式为嵌入模式。AFB1分子与DNA在体外是可以自发发生相互作用的,其作用模式为嵌插,这表明通过DNA选择性结合黄曲霉毒素并采用油水分离或磁珠吸附方法分离AFB1-DNA体系来消除黄曲霉毒素是具有一定的可行性。根据荧光数据分析及双对数回归曲线结果表明,AFB1与EB-DNA的结合常数为5.58L/mol,且DNA分子中EB结合的位点大约被1个AFB1分子所取代,结合常数较弱;通过Scatchard方程法计算得到AFB1与DNA的结合常数和结合位点,也证实其结合模式为嵌入模式,与紫外滴定法计算得到结果基本上一致。热力学数据表明,AFB1-DNA的形成是一种无酶氧化的能够自发发生结合反应的反应,其主要驱动力是范德华力和氢键作用力。共振光散射光谱研究表明,AFB1、溴化乙锭、补骨脂素和异补骨脂素与DNA结合饱和值分别为15.59、2.14、0.74和0.74。AFB1与的DNA结合能力弱于EB,但强于PSO和ANG。对AFB1与DNA之间的结合强度研究为通过DNA选择性结合黄曲霉毒素达到消除目的提供定量参考。通过共振散射光谱法研究影响AFB1与DNA相互作用的因素,生理条件pH7.40、30℃、较低离子强度、为AFB1-DNA体系形成的最适条件,DNA BSV值达到3.17。强酸强碱条件不利于AFB1-DNA体系的形成,温度、阳离子对体系RLS信号强度较为敏感,葡萄糖、烟酸、氨基乙酸能够使得体系RLS信号强度增强,但却会降低DNA BSV值,L-赖氨酸、甘油、尿素、葡聚糖以及复合蛋白酶会对实验造成较大的影响。在AFB1-DNA体系分离的过程中应尽可能设置在pH 7.40、30℃,减少分离过程中阳离子及其他杂质的存在。对AFB1分子与DNA结合强度及其影响因素的研究,能够为AFB1-DNA体系的形成及其分离过程提供了更加合适的条件。

关键词： AFB1   植物乳杆菌   肝损伤   Nrf2信号通路   NF-κB信号通路  

摘要： 黄曲霉（Aspergillus flavus）和寄生曲霉（Aspergillus parasiticus）产生的代谢产物对人体和动物体的健康构成严重威胁,特别是黄曲霉毒素B1（AFB1）具有强烈的肝毒性,遗传毒性和免疫毒性而得到广泛的关注。长期摄入受AFB1污染的食物可致癌,致畸和致突变,因而国际癌症研究机构（International Agency for Research on Cancer,IARC）将AFB1列为第一类致癌物。乳酸菌（Lactobacillus）已经被证实有益于宿主的健康而受到广泛的应用。大量的研究表明乳酸菌可快速并高效的吸附AFB1,同时乳酸菌具有一定的抗氧化能力,调节宿主肠道屏障功能,增强宿主免疫功能等益生特性,但国内外对于乳酸菌缓解AFB1毒性的系统性研究鲜有报道。因此本研究中,首先在体外测定了分离自中国传统发酵食品的30株植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）对AFB1的吸附能力,并明确乳酸菌表面参与吸附过程的活性成分。进一步进行体内实验,探究植物乳杆菌C88对AFB1诱导的肝损伤模型的小鼠的解毒机制。在体外筛选的30株的植物乳杆菌菌株中,植物乳杆菌C88对AFB1的吸附能力最强,吸附率达到59.44%,因此选择植物乳杆菌C88进行后续实验。为了明确AFB1吸附过程中涉及的细胞组分,从植物乳杆菌C88中提取胞外多糖和含有肽聚糖的细胞壁分离物,并测定其对AFB1吸附能力。并对植物乳杆菌C88分别进行酶处理和化学试剂处理,测定处理后的植物乳杆菌C88对AFB1吸附能力的变化。结果表明,植物乳杆菌C88细胞壁的成分——肽聚糖表现出较强的吸附AFB1的能力,但胞外多糖以及细胞壁的蛋白均不参与吸附过程。探究植物乳杆菌C88对AFB1诱导的肝损伤模型的小鼠的解毒机制,将90只雄性ICR小鼠分为6组,包括对照（灌胃生理盐水）,活的或热灭活的C88组(灌胃4.0×1010 CFU/kg bw活的或热灭活的植物乳杆菌C88),AFB1组（灌胃300μg/kg bw AFB1）,治疗组给予等浓度的活的或热灭活的植物乳杆菌C88以及AFB1。灌胃单一剂量AFB1后,小鼠粪便中检测到AFB1的排泄;在接受植物乳杆菌C88的治疗组,特别是热灭活的植物乳杆菌C88的治疗组中,小鼠粪便中AFB1排泄量增加,提示植物乳杆菌C88有效降低肠道对AFB1的吸收,减少组织中AFB1的积累。此外,细胞色素P450（CYP 450）1A2和CYP 3A4是AFB1转化成强致癌物AFB1-8,9-环氧化物过程的关键酶,植物乳杆菌C88抑制的CYP 1A2和CYP 3A4表达,减少尿液中的AFB1生物标志物AFB1-N7-鸟嘌呤（AFB1-N7-Gua）的含量,且活的植物乳杆菌C88的抑制效果更显著。提示植物乳杆菌C88能够抑制AFB1在小鼠肝脏中通过Ⅰ相反应转化形成AFB1-8,9-环氧化物的过程,从而干预AFB1的毒性。与对照组相比,AFB1显著降低小鼠肝脏和血清中总抗氧化能力（T-AOC）,总超氧化物歧化酶（T-SOD）活性,谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性,过氧化氢酶（CAT）活性,增加脂质过氧化物（LPO）含量和丙二醛（MDA）含量,下调谷胱甘肽S-转移酶（GST）A3和核转录因子Nrf2的表达。植物乳杆菌C88和AFB1共处理的治疗组可以扭转上述变化。中和实验证实,植物乳杆菌C88通过Nrf2途径增强了抗氧化酶的活性并提高了GST A3的表达,从而缓解AFB1诱导的氧化应激。此外,植物乳杆菌C88显著降低血清中丙氨酸氨基转移酶（ALT）,天冬氨酸氨基转移酶（AST）,碱性磷酸酶（ALP）,总胆固醇和甘油三酯水平,增加小鼠血清中总蛋白和白蛋白水平,缓解了AFB1导致的肝损伤。组织病理学研究证实了血清中生理指标的变化。同时,植物乳杆菌C88通过显著降低促炎因子水平缓解AFB1导致的炎症反应,包括降低血清中的白细胞介素-1β（IL-1β）,IL-6,IL-8,干扰素-γ（IFN-γ）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）。此外,植物乳杆菌C88通过减弱Toll样受体2（TLR2）和TLR4的表达,显著下调核转录因子因子NF-κB信号通路,通过上调NF-κB抑制剂（IκB）从而抑制NF-κB的核转位。中和实验证实,植物乳杆菌C88通过下调TLR2/NF-κB和TLR4/NF-κB信号通路,一定程度上降低了促炎因子的表达。此外,植物乳杆菌C88降低了肝脏中凋亡相关基因Bax和Caspase-3的水平,增高Bcl-2的含量,降低了脂肪酸合成酶受体（Fas）,Fas相关死亡结构域（FADD）,TNF受体相关死亡结果域（TRADD）和Caspase-8的转录,通过调节线粒体途径和细胞死亡受体途径,缓解肝细胞DNA片段化,改

关键词： 大曲   黄曲霉毒素B1   响应面法   提取工艺   优化  

摘要： 该研究利用单因素试验和响应面法对大曲中黄曲霉毒素B1(AFB1)的提取条件进行优化,分别考察了甲醇体积分数、超声波提取功率、提取时间和提取温度对AFB1提取效果的影响。结果表明,大曲中AFB1的最佳提取工艺为甲醇体积分数55%、超声波功率为200 W、提取时间为25 min、提取温度30℃。在此最优条件下,AFB1得率为2.58μg/kg,可为大曲中AFB1的提取提供简便、准确、可靠的分析方法。

关键词： 中药制剂   黄霉素   妊娠母猪   仔猪   生长繁殖性能  

摘要： 为研究中药制剂"胃脾健"替代黄霉素对母猪生长繁殖性能的影响,选用150头妊娠母猪分组试验,并测定仔猪的各项生长性能指标。结果可见,在相同的饲养条件下,胃脾健组的各项生长繁殖指标均好于黄霉素组,母猪生产繁殖性能和仔猪的生长发育性能显著提高,说明中药制剂"胃脾健"可完全替代黄霉素在母猪生长繁殖中的应用。这为畜禽生长繁育中减量化使用抗生素、控制动物及动物性产品中的兽药残留提供了有力的依据。