关键词:
糖尿病肾病
黄芪多糖
沉默信息调节因子
氧化应激
细胞凋亡
中药提取物
中西医结合
摘要:
目的探究黄芪多糖(APS)对沉默信息调节因子(SIRT1)的调控作用,及其对高糖诱导足细胞氧化应激和凋亡的影响及机制。方法高糖诱导MPC5细胞构建足细胞损伤模型,用不同浓度APS分别处理正常培养的MPC5细胞和损伤模型细胞,CCK8检测细胞活性评估APS的细胞毒性和最佳干预浓度。将损伤模型足细胞分为对照组、模型组、APS组、SIRT1抑制剂组(EX527)及SIRT1抑制剂+APS组(EX527+APS)。q RT-PCR和Western Blot法检测细胞中SIRT1、叉头蛋白O3a(Fox O3a)m RNA和蛋白表达;CCK8检测各组细胞增殖;流式检测细胞凋亡;流式细胞术检测活性氧(ROS)含量;ELISA法检测超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)的含量,Western Blot法检测细胞中B淋巴细胞瘤2(Bcl-2)、Bcl-2关联X蛋白(Bax)和细胞外信号调节激酶(ERK)1/2、p-ERK 1/2p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)蛋白表达。结果低浓度APS无明显细胞毒性,其最佳干预浓度为200μg/m L。与对照组比较,模型组细胞增殖能力下降,凋亡率上升,ROS和MDA的含量、FoxO3a、Bax、p-ERK1/2与ERK1/2比值、p38MAPK的表达上升,SIRT1表达和SOD含量下降(P<0.05,P<0.01)。与模型组比较,APS组细胞增殖能力上升,凋亡率下降,ROS和MDA的含量、FoxO3a、Bax、p-ERK1/2与ERK1/2比值、p38MAPK的表达下降,SIRT1表达和SOD含量上升(P<0.01),而EX527组变化趋势相反(P<0.05,P<0.01)。与EX527组比较,EX527+APS组细胞增殖能力上升,凋亡率下降,SIRT1表达、SOD含量及Bcl-2表达增加(P<0.01),ROS水平、MDA含量、Bax、FoxO3a、p-ERK1/2与ERK1/2比值及p38MAPK表达减少(P<0.01)。结论APS抑制高糖诱导的MPC5细胞凋亡和氧化应激反应,其作用机制可能与APS促进SIRT1表达抑制ERK1/2与p38MAPK通路的激活有关。