关键词： 高蛋白日粮   痛风   尿酸   黄嘌呤氧化酶   鸡   中药  

摘要： [目的]旨在探索高蛋白日粮致鸡肝肾损伤及复方中药制剂对其干预的效果。[方法](1)黄嘌呤氧化酶(XOD)抑制剂的筛选:对16种中药进行了水提和醇提,检测提取物对XOD活性的体外抑制作用,筛选出效果较好的中药加味组方。(2)高蛋白日粮饲喂试验:将150羽20日龄白羽肉杂鸡随机均分成5组,对照组饲喂基础日粮,2、3、4、5组在基础日粮中添加豆粕使粗蛋白含量分别达到22%、25%、28%和31%,试验期14 d。每隔7d从各组随机抽取5只鸡称重后采集血清,检测血清尿酸(UA)水平和XOD活性,记录各组痛风发病和死亡情况。(3)中药复方制剂干预高蛋白日粮致鸡痛风试验:将90羽20日龄健康白羽肉杂鸡随机均分成3组,I组饲喂基础日粮,Ⅱ、Ⅲ组在基础日粮中添加豆粕使粗蛋白达到31%,Ⅲ组另添加1%自拟中药复方制剂,每隔7d从每组随机抽取5只鸡静脉采血,检测血清部分指标。第14 d试验结束时,从各组随机抽取5只鸡,解剖观察肝和肾的病理变化,制作切片观察其组织学变化。[结果](1)对XOD抑制效果较好的中药水提物为黄柏、土茯苓、槐花、高良姜和山慈菇,醇提物为土茯苓、瞿麦、槐花、牛膝和山慈菇。(2)高蛋白日粮饲喂试验:与对照组相比,试验第7d,4、5组鸡的体重极显著降低(P<0.01);第5组XOD活性显著升高(P<0.05)。试验第14d,第5组鸡体重极显著降低(P<0.01),第5组XOD活性和4、5组的血清UA水平显著升高(P<0.05),3、4、5组鸡均有痛风发生,以5组死亡率最高。(3)中药复方制剂干预高蛋白日粮致鸡痛风试验:与对照组相比,试验第7 d和14 d,Ⅱ组鸡的体重极显著降低(P<0.01),血清UA水平显著升高(P<0.05),天门冬氨酸转氨酶(AST)活性极显著升高(P<0.01);试验第14 d,Ⅱ组鸡血清肌酐(CREA)水平及XOD、丙氨酸转氨酶(ALIT)活性显著升高(P<0.05)。Ⅱ组部分鸡肝脏发黄、有坏死灶和炎性细胞浸润,肝细胞索排列紊乱、细胞空泡变性;部分鸡肾脏肿胀,切开断面.流出白色糊状物,输尿管充满尿酸盐;肾小球萎缩,肾小管上皮细胞变性、坏死,有的肾小管脱离基底膜。添加中药复方制剂有效干预了高蛋白日粮对鸡的不良影响,Ⅲ组鸡试验第7d和14 d的体重极显著低于I组(P<0.01),血清指标都低于Ⅱ组而与Ⅰ组间无显著差异,其中,第14d的XOD、ALT、肌酐、肌酸激酶显著低于Ⅱ组(P<0.05),AST在第7d显著(P<0.05)、第极显著(P<0.01)低于Ⅱ组。Ⅲ组也有少数鸡肝脏微黄,肝细胞索排列轻微紊乱,有的鸡肾脏肿胀,但切面未见白色糊状尿酸盐。试验期间Ⅱ组有3只鸡死于痛风,其他两组无死亡。[结论]饲喂高蛋白饲料导致鸡血清尿酸水平升高,并使肝、肾的结构和功能不同程度受损,饲料中添加中药复方制剂有效干预了这种不良作用。

关键词： 重连口服液   羚羊感冒口服液   淋巴细胞   流式细胞学  

摘要： 目的本研究旨在运用流式细胞法,探讨重连口服液与羚羊感冒口服液对急性上呼吸道感染患者外周血中淋巴细胞的影响。方法选择急性上呼吸道感染患者60例,随机分为两组,在常规治疗的基础上分别加用重连口服液(20mL,每天3次)、羚羊感冒口服液(10mL,每天3次),治疗5天。在治疗前和治疗后5天后采取外周血样本。流式细胞学检测人体内成熟T淋巴细胞(CD3+)、抑制性/细胞毒性(CD3+/CD8+)T淋巴细胞亚群和辅助性/诱导性(CD3+/CD4+)、T淋巴细胞亚群的百分比和绝对计数的变化。结果经过5天的治疗,重连口服液疗效明显,相关检测项目数据均有不同程度上升。结论重连口服液通过提高Th/Ts比值,调节患者的免疫失衡而发挥作用。

关键词： 赭曲霉毒素A   黄曲霉毒素B1   试纸条   量子点   荧光猝灭   多残留检测  

摘要： 真菌毒素的污染广泛出现在谷物等粮食中,对谷物及其制品的营养价值和安全性造成了严重影响,目前对于真菌毒素的检测方法主要有薄层色谱法、高效液相色谱法、液相色谱-串联质谱法、酶联免疫吸附法、免疫层析法等。其中免疫层析法较其他方法具有简便快捷的优势,更加适应现场进行高效灵敏大批量检测。为了提高谷物的安全性,本文针对真菌毒素中危害性最强的赭曲霉毒素A(OTA)和黄曲霉毒素B1(AFB1),分别建立了单一目标物和多目标物的量子点荧光免疫层析试纸条快速检测方法,包括检测OTA的量子点荧光免疫层析试纸条快速检测方法,检测AFB1的量子点荧光猝灭免疫层析试纸条快速检测方法,同时检测OTA和AFB1的量子点荧光猝灭免疫层析试纸条快速检测方法。通过Protein A-Sepharose 4B纯化柱对OTA和AFB1兔抗血清进行纯化,获得浓度分别为1.4mg/mL、2.0mg/mL的多克隆抗体;通过活化酯法将鸡卵白蛋白(OVA)分别与OTA半抗原和AFB1半抗原偶联制备得到相应的包被抗原,将羧基化量子点(QDs)分别与OTA抗体和OVA连接制备得到QDs-Ab和QDs-OVA荧光探针;通过物理吸附作用将胶体金(AuNPs)与抗体(Ab)分别进行连接制备得到AuNPs-Ab。通过对试纸条C线和T线包被物质的浓度、样品稀释液的种类、硝酸纤维素膜的种类、荧光探针和工作液的添加量分别进行优化,在最佳反应条件下,OTA量子点标记免疫层析试纸条检测方法的检测限为0.5 μg/L,在玉米、大米、大麦和燕麦样品中OTA的检测限为5 μg/kg;OTA量子点荧光猝灭免疫层析试纸条检测方法的检测限为0.1μg/L,在玉米、大米、大麦和燕麦样品中的OTA检测限为1μg/kg;AFB1量子点荧光猝灭免疫层析试纸条检测方法的检测限为0.2 μg/L,在玉米、大米、大麦和燕麦样品中的AFB1检测限为2μg/kg。在单一目标物检测OTA和AFB1基础上,根据最优反应条件,建立了 OTA和AFB1多残留量子点荧光猝灭免疫层析试纸条检测方法,其OTA和AFB1检测限分别为0.1μg/L、0.2 μg/L,在玉米、大米、大麦和燕麦样品中的OTA和AFB1检测限分别为1.5 μg/kg、3 μg/kg。通过交叉反应测得试纸条检测方法特异性良好,通过商品化试剂盒验证了 OTA量子点荧光免疫层析试纸条检测方法的准确性,通过GB 5009.22-2016中高效液相色谱-柱前衍生法验证了 AFB1量子点荧光猝灭免疫层析试纸条的准确性。

关键词： HPLC   酸枣仁配方颗粒   黄曲霉毒素B1  

摘要： 目的:研究酸枣仁配方颗粒中是否含有黄曲霉毒素B1建立HPLC液相方法进行黄曲霉毒素B1的检查.方法:采用高效液相色谱法,色谱柱为Waters C18(250×4.6nm,5μm),流动相初始比例为乙腈-甲醇-水(10:25:65);光化学柱后254nm;衍生检测器为荧光检测器,激发波长365nm,发射波长450nm.相邻两个峰的分离的应大于1.5[1].结果:酸枣仁配方颗粒加样回收率为90.7％;RSD为1.2％;含黄曲霉毒素B1的酸枣仁制备的酸枣仁配方颗粒中检出黄曲霉毒素B1,阴性样品无干扰.结论:建立HPLC法测定酸枣仁配方颗粒中是否含有黄曲霉毒素B1.

关键词： 黄曲霉毒素B1   核酸适配体   指数富集配体的系统进化技术   纳米金比色  

摘要： 黄曲霉毒素B1（Aflatoxin B1,AFB1）是以二呋喃环和氧杂萘邻酮为基本结构的一类化合物,是一种毒性极强的真菌毒素,被世界卫生组织癌症研究机构划定为Ⅰ类致癌物,可引起肝癌等多种疾病,极易污染花生、玉米、小麦等农产品及其食品,快速灵敏的AFB1检测方法的研发及应用是防止其食品安全事件发生的基础。核酸适配体是一段能与靶标分子高亲和力、特异性结合的单链寡核苷酸序列,具有稳定的二级结构和特殊的三维构象,被誉为“化学抗体”,可通过指数富集配体的系统进化技术从体外筛选获得。本试验利用非固定氧化石墨烯法筛选AFB1适配体,并以所获得的AFB1适配体为特异性识别探针,纳米金为指示剂,建立了一种AFB1的比色检测方法,为食品安全提供技术支持。AFB1特异性适配体的氧化石墨烯-SELEX筛选。基于氧化石墨烯可通过π-π共轭吸附单链寡核苷酸ssDNA,而对已结合靶标的ssDNA吸附能力较弱的特性,设计了针对AFB1核酸适配体的筛选方案。首先构建一个全长为80bp,两端为固定序列、中间含40bp随机序列的ssDNA随机文库。将预处理的随机文库与AFB1孵育,然后加入氧化石墨烯溶液吸附未结合靶标的ssDNA,已结合靶标的形成AFB1-ssDNA复合物,离心后保留在上清液中,经乙醇沉淀回收所得ssDNA做为模板,经PCR扩增后回收产物并纯化,获得每一轮筛选出的备选适配体。通过10轮筛选,其中第六轮和第八轮增加了其他真菌毒素的筛选。将第八轮和终轮筛选产物克隆测序共获得45条ssDNA序列,挑选具有代表性6条序列进行亲和力分析试验,其解离常数（Kd）分别为16.29、27.88、18.54、23.11、47.94、22.31nmol/L。选用亲和力较高的AFB-5、AFB-8进行特异性分析试验,结果显示所筛选的适配体能特异性吸附AFB1,特异性良好。基于核酸适配体和纳米金变色效应建立了AFB1的可视化检测方法。单分散的纳米金粒子在溶液中呈酒红色,纳米金粒子与适配体在静电作用下相互结合,能使纳米金抵抗盐诱导,避免团聚变色。当溶液中加入AFB1时,适配体与AFB1特异性结合,在竞争作用下将原本与纳米金结合的适配体争夺下来,使纳米金与适配体分离,在NaCl作用下出现团聚。通过优化试验条件,得到最佳盐浓度和适配体浓度,该方法检出限为0.025ng/mL,线性范围为0.025～10ng/mL,且在520nm下AFB1浓度与OD值有良好的线性关系,其回归方程为y=-0.00709x+0.46142（R2=0.9979）。通过特异性试验和对大米样品加标回收,加标回收率为83%105%,证明本方法的可行性。

关键词： 黄曲霉毒素B1   基体标准物质   制备技术研究   不稳定纯品物质   定量冻干分装技术  

摘要： 众所周知,黄曲霉毒素是天然存在的毒性最强的物质之一,而且主要污染玉米、小麦、大米、花生等粮食谷物,因此分析测定黄曲霉毒素的含量水平对保障食品质量安全具有极其重要的意义。研制黄曲霉毒素基体标准物质是保证食品中黄曲霉毒素分析测试数据准确可靠的基础,对于黄曲霉毒素的监测具有重要作用,目前国内相关标准物质的缺乏以及国外制备技术的缺陷导致现有的标物难以满足应用需求。针对这一现状,创建一套新型的黄曲霉毒素基体标准物质的制备技术就显得尤为重要。对于有机纯度标准物质,目前固体分装时原料浪费,移取不完全以及溶液分装难以长期稳定等问题严重影响标准物质的应用。针对这些缺陷,本文尝试采用新型冻干制备技术实现纯度标准物质的定量分装,将纯品标准物质的分装改为在液态溶剂体系中冻干定量分装,在使用环节通过复溶实现完全移取。本论文主要研究了花生中黄曲霉毒素B1基体标准物质的制备技术以及不稳定纯度标准物质定量分装冻干制备技术。主要结论如下:1.本文建立了一套新型的黄曲霉毒素B1基体标准物质的制备技术,选择以高油脂、高蛋白的花生作为基体,以黄曲霉菌接种的花生代替天然霉变的花生以保证基体内毒素的均一性和稳定性,筛选的菌株编号为CGMCC No.3.4408,筛选的接种花生为济宁花生,筛选的高抗性花生为花育51,采取110℃,10分钟和120℃,20分钟的组合灭菌方式,γ射线辐照的剂量为2 kGy,刀式研磨机预研磨,液氮-超离心研磨作为粉碎方式,2%单甘脂作为乳化剂,0.02%的乙氧喹啉、山梨酸钾和多菌灵作为稳定剂,棕色玻璃瓶充氮外加铝箔袋抽真空作为包装方式,-20℃作为保存条件。该方法能有效改善基体标准物质的均匀性和稳定性。2.本文研究了 4种不稳定的农药(丙硫克百威、毒死蜱、甲基嘧啶磷、敌敌畏),建立和评估一种新型纯度标准物质定量分装冻干制备技术,甲基嘧啶磷和敌敌畏冻干复溶回收率分别为0和21.4%,丙硫克百威和毒素蜱的回收率达到101.5%和103.3%,其中丙硫克百威及毒死蜱两种农药的应用效果良好,冻干复溶回收完全。丙硫克百威和毒死蜱冻干复溶后样品瓶间均匀性引入的相对标准不确定度均能较好的满足标准物质的量值准确度要求。通过40℃下加速稳定性实验,发现丙硫克百威溶液标准物质的稳定性在40℃下保存3天即出现变化,而冻干样品的稳定性良好;毒死蜱溶液标准物质的稳定性在40℃下保存15天后量值略有下降,而冻干样品的稳定性良好。因此可以得出结论:与溶液样品相比,冻干样品稳定性显著改善。

关键词： 活血化瘀   中药制剂   脊髓型颈椎病   临床效果  

摘要： 目的探析对脊髓型颈椎病患者联合活血化瘀中药制剂治疗的干预效果。方法取笔者所在医院2016年至2018年收治脊髓型颈椎病患者80例为分析对象,根据对患者治疗方案差异将其每组40例分为对照组与观察组,对应为常规脊髓型颈椎病保守治疗、联合活血化瘀中药制剂治疗。对不同方案治疗下患者相关临床数据进行统计学对比以归纳活血化瘀中药制剂对此类疾病的临床价值。结果治疗效果评价,观察组患者优良率显著高于对照组且有统计学意义(P<0.05);相对于治疗后,两组患者颈项部功能及疼痛情况等均有改善,观察组改善幅度显著优于对照组且有统计学意义(P<0.05);两组患者治疗期间均无发生因治疗方案引发相关不良反应,顺利完成治疗。结论为脊髓型颈椎病患者制定治疗方案时可考虑联合活血化瘀中药制剂,可进一步改善患者活动范围,缓解疼痛,安全性高,值得推广。

关键词： 黄曲霉毒素B1   玉米赤霉烯酮   仔猪   生长性能   解毒   复合益生菌   霉菌毒素降解酶   肠道微生物区系   蛋白质组学  

摘要： 霉菌毒素在人类食品和动物饲料中无处不在。而在众多的霉菌毒素中,AFB1和ZEA被认为是是饲料和饲料原料中主要霉菌毒素污染物,它们不仅对动物健康造成损害,造成巨大的经济损失,而且还对人类生命安全也构成威胁。其中黄曲霉毒素B1（AFB1）是最致命的,它具有肝毒性、致畸性和致癌性。因此,被国际癌症研究机构（IARC）定为Ⅰ类致癌物。玉米赤霉烯酮（ZEA）具有类雌激素的作用,是雌激素强度的十分之一,它可以提高雌性动物的雌激素水平,从而引起动物的生殖生理和生殖器官的功能和形态发生变化,导致细胞毒性和遗传毒性。因此,食品和饲料中的霉菌毒素污染问题已经引起人们的广泛关注,但是人们对健康的评估往往局限于一种或一类霉菌毒素,而忽略了多种霉菌毒素之间的叠加、协同和拮抗作用,因此霉菌毒素对人类和动物健康的损害要比评估的严重得多。近些年来,生物降解霉菌毒素因为具有安全、有效、专一性强、可操作性强等特点,已经引起人们广泛关注。因此本试验首先通过体外优化组合,得到能同时降解AFB1和ZEA的由三种益生菌和霉菌毒素降解酶组成的霉菌毒素生物降解剂;然后在细胞水平上研究霉菌毒素生物降解剂对AFB1和ZEA引起的仔猪空肠上皮细胞损伤的保护作用;再通过仔猪动物饲养试验,研究霉菌毒素生物降解剂对AFB1和ZEA引起仔猪中毒的缓解作用;接着利用16S rDNA高通量测序技术对仔猪空肠和粪便中的微生物菌群丰富度和多样性进行分析;最后利用蛋白质组学技术对仔猪肝脏蛋白质变化及与霉菌毒素降解相关通路进行分析,为系统研究霉菌毒素生物降解剂对缓解AFB1和ZEA引起动物机体的毒性作用机制和降低AFB1和ZEA对仔猪健康和生长性能的影响提供参考依据。主要结果如下:（1）霉菌毒素生物降解剂的制备:通过响应面——中心组合试验设计,筛选优化同时降解AFB1和ZEA的益生菌组合最佳比例,然后与霉菌毒素降解酶进行配伍,得到同时降解AFB1和ZEA的霉菌毒素生物降解剂的最佳配比。试验结果表明单一枯草芽孢杆菌降解AFB1和ZEA的降解率分别是38.38%和42.18%（P<0.05）。但是,当枯草芽孢杆菌与干酪乳杆菌和产朊假丝酵母按照中心组合设计优化得出的比例1:1:1配伍后,对AFB1和ZEA两种毒素的降解率分别提高到45.49%和44.90%（P<0.05）。最后按照1:1:1配伍的三种益生菌与霉菌毒素降解酶按照3:2进行配伍,对AFB1和ZEA的降解率达到63.95%和73.51%（P<0.05）。试验结果表明,通过响应面中心组合试验设计获得同时降解AFB1和ZEA的霉菌毒素生物降解剂是可行的,为下一步试验奠定了基础。（2）AFB1和ZEA对仔猪空肠上皮细胞（IPEC-J2）和小鼠肝细胞（AML12）的损伤作用:AFB1和ZEA对IPEC-J2和AML12小鼠肝实质细胞损伤不同,对IPEC-J2的细胞毒性:ZEA>AFB1,对AML12的细胞毒性:AFB1>ZEA。AFB1和ZEA对两种细胞的毒性存在时间和剂量依赖效应,而且在低浓度时,AFB1与ZEA之间存在协同作用（PAFB1×ZE<0.05）。当两种毒素（AFB1浓度为40μg/L,ZEA浓度为500 μg/L）同时作用于IPEC-J2细胞24 h时,对细胞毒性也表现为协同作用,为下一步试验建立细胞中毒模型奠定基础。（3）霉菌毒素生物降解剂对AFB1和ZEA诱导的仔猪肠上皮细胞危害的缓解作用:本试验采用复合益生菌的无菌体细胞上清液（CFSCP）和霉菌毒素降解酶（MDE）相结合,测定其对由AFB1和ZEA引起的IPEC-J2细胞毒性损伤的缓解作用。结果表明,AFB1与ZEA同时作用于细胞,具有抑制细胞活力的协同作用（P<0.05）。细胞活力随霉菌毒素浓度的增加而降低,并且随着反应时间的延长而增加（P<0.05）。加入40μg/L AFB1和500μg/L ZEA后,坏死细胞率显著提高（P<0.05）,但加入可CFSCP+MDE可显著降低坏死细胞率并提高细胞的成活率（P<0.05）。加入CFSCP+MDE后显著降低与细胞凋亡、屏障功能和营养物质转运功能相关的基因Bax、GLUT2、ASCT2和IL6的相对mRNA丰度（P<0.05）。本研究为减轻霉菌毒素毒性提供了有效的研究方法,为保持肠道细胞的正常结构和功能提供参考依据。（4）霉菌毒素生物降解剂缓解仔猪AFB1和ZEA的中毒症状,该试验选择日龄为42±2日龄仔猪150头,按照体重随机分成五个组,每个组设3个重复,每个重复10头。对照组（A组）饲喂正常饲粮、B组（单独AFB1组）、C组（单独ZEA组）、D组（AFB1+ZEA组）和E组（AFB1+ZEA组+霉菌毒素生物降解剂）,饲喂期60d。饲养试验结果表明,与单独含有AFB1和ZEA毒素组（负对照组）相比,添加霉菌毒素生物降解剂组仔猪平均

关键词： 中药制剂   面部湿疹   接触性皮炎   临床疗效  

摘要： 目的:分析中药制剂用于治疗面部湿疹及接触性皮炎的临床疗效。方法:于我院皮肤科2018年3月至2019年2月期间收治的湿疹和接触性皮炎患者中,随机择取112例患者开展研究,其中湿疹和接触性患者各有112人,将其随机划分为两组,实验组患者应用中药制剂治疗,一般组患者应用硼酸制剂治疗,比较两组患者临床疗效。结果:实验组患者面部湿疹治疗有效率为92.86%,高于一般组患者,组间差异具有统计学意义(P<0.05);实验组患者接触性皮炎治疗有效率为82.14%,高于一般组患者,组间差异有统计学意义(P<0.05)。结论:应用中药制剂治疗面部湿疹患者及接触性皮炎患者临床疗效较好,建议配合优质护理。