关键词： 中药饮片   中药材   饮片质量   中药制剂   董事长   产学研一体化  

摘要： 蔡宝昌,男,1952年生于上海,南京中医药大学原副校长、教授、博士生导师,南京海昌中药集团董事长。日本国立富山医科药科大学药学博士,美国XBL高级访问学者,国家一级重点学科中药学学科带头人,全国百千万人才工程国家级人选、国家级有突出贡献中青年专家,享受政府特殊津贴。

关键词： 乳酸菌   高密度培养   黄曲霉毒素   吸附   动力学   热力学  

摘要： 黄曲霉毒素（Aflatoxin,AFT）是由黄曲霉（aspergillus flavus）寄生曲霉（***）等真菌产生的次生代谢产物,它是一类化学结构类似的化合物,均为二氢呋喃香豆素的衍生物。黄曲霉毒素广泛存在于饲料及食品中。黄曲霉毒素B1是黄曲霉毒素中毒素最强的一种,它会引起一系列急性中毒症状,还具有致癌毒性、基因毒性、生殖毒性、免疫毒性以及神经毒。目前对于AFB1的脱毒方法主要可分为三类:物理脱毒、化学脱毒和生物脱毒。其中物理脱毒和化学脱毒方法不仅投资大、成本高,而且有些会破坏食品中的营养成分。生物脱毒方法因其具有绿色清洁,高效和成本低的优点而引起了广泛关注。乳酸菌是一类广泛存在于人体肠道中的,被视作公认为安全的食品级微生物。本课题对实验室贮藏的乳酸菌进行了对AFB1吸附能力的比较,运用高效液相色谱法测定并计算了其吸附率。结果表明,四株乳酸菌均对AFB1具有吸附能力,其中,实验室贮藏的一株植物乳杆菌Lactobacillus plantarum P1的吸附率最高。为后续实验提供充足的实验菌体,提高乳酸菌菌体的生长率,节约生产的成本,本实验对Lactobacillus plantarum P1的生长条件进行了优化。运用Bioscreen C全自动微生物生长曲线分析仪绘制Lactobacillus plantarum P1的生长曲线,结果表明该菌在5～15 h处于生长对数期。本实验选用培养15 h的Lactobacillus plantarum P1进行实验。通过单因素实验得到最佳单因素条件为:初始接种量3%、初始pH为6、培养温度为37℃、番茄汁添加量为4%、盐浓度为1%。在此基础上设计Plackett-Burman（PB）试验以筛选对乳酸菌生长影响最为显著的因素,结果表明对Lactobacillus plantarum P1的生长影响最为显著的三个因素为:初始pH、初始接种量和培养温度。接下来对这三个因素进行了响应面实验分析,最终由方差分析得知该二次回归模型（P<0.0001）极显著,失拟项（P=0.7718>0.05）不显著,模型的校正确定系数R2Adj=0.9588,因此可以解释乳酸菌活菌数的变化情况。通过模型预测得到菌株Lactobacillus plantarum P1的最佳生长条件为:初始pH为6.1,初始接种量为2.9%,培养温度为37.1℃,预测在此条件下Lactobacillus plantarum P1的活菌数预测可达到10.73 lg（cfu/mL）。最后通过验证实验证明了该模型具有有效性。以Lactobacillus plantarum P1为吸附剂,研究了该菌对AFB1的吸附特性。结果表明:随着AFB1浓度增加,Lactobacillus plantarum P1对AFB1的吸附率逐渐降低。随着菌体浓度的增加,Lactobacillus plantarum P1对AFB1的吸附率逐渐增加,Lactobacillus plantarum P1对AFB1的吸附是一个快速的过程,在30 min左右即可达到最高,而后结合不牢的AFB1出现解析现象,使吸附率有所降低,吸附3 h吸附率达到平衡。随着吸附温度的增大,Lactobacillus plantarum P1对AFB1的吸附率呈增长趋势,且温度对吸附的影响显著。人工肠胃液下的吸附率有一定的降低,热处理致死后的Lactobacillus plantarum P1对AFB1的吸附率有明显增加。用Langmuir、Freundlich、Redlich-Peterson和Temkin四种常用模型拟合植物乳杆菌P1对AFB1的吸附过程,结果发现该吸附过程最符合Langmuir方程,说明该吸附存在单分子层吸附,并且通过分析分离因子RL可知,AFB1浓度越高,越有利于吸附的进行。再通过和Elovich方程、Lagergren准一级吸附动力学方程和Lagergren准二级吸附动力学方程三种模型构建植物乳杆菌P1吸附AFB1的吸附模型,发现该吸附过程最符合Elovich动力学方程,说明吸附过程存在非均相扩散。

关键词： 黄曲霉毒素B1   小窝蛋白-1   肝细胞损伤   氧化应激   自噬  

摘要： 研究背景与目的黄曲霉毒素(aflatoxins,AFTs)是食物和食品中最常见的真菌代谢产物,属于二氢呋喃香豆素的衍生物,被国际癌症研究机构归为I类致癌物。在黄曲霉毒素的几个亚型中,黄曲霉毒素B1(aflatoxin B1,AFB1)毒性最大,在人体和动物体内也最为常见,肝脏是其主要的靶器官。AFB1进入体内后要发挥活性,首先必须通过细胞色素P450(Cytochrome P450)酶系统的转化,生成高度活性的中间产物AFB1-8,9-环氧化合物(AFB1-8,9-epoxide,AFBO),AFBO则能够与DNA、RNA、蛋白质等大分子结合,进而阻断基因的转录与翻译,影响基因表达。在这一过程中,AFBO代谢会大量消耗谷胱甘肽(glutathione,GSH),造成细胞内活性氧累积,产生脂质过氧化反应,引发DNA和蛋白损伤,诱导基因突变或细胞凋亡。可见在AFB1代谢过程中所引发的氧化应激是其致肝细胞损伤的直接原因。目前临床上治疗AFB1中毒也主要是采用体外补充抗氧化剂的方法。然而,目前关于AFB1引起氧化应激的机制及其中发挥作用的关键分子尚不清楚。因此,探寻AFB1致肝细胞氧化应激作用中的关键分子有望为AFB1临床治疗提供新靶点。小窝蛋白-1(Caveolin-1,Cav-1)是Caveolin家族成员之一,位于细胞膜和内体膜,主要通过自身磷酸化作用参与胆固醇转运、大分子内吞等过程。Cav-1能够调节细胞内多条信号转导通路,如受体酪氨酸激酶、Src家族酪氨酸激酶(Src,Fyn等)、内皮型一氧化氮合酶及一些下游信号分子H-Ras、MEK、ERK、PI3K/AKT等。Cav-1既是一种抑癌蛋白,又是一种癌蛋白,这种双重作用依据细胞类型、癌症发展阶段的不同而不同,也是近年来研究的热点问题。Cav-1也被发现与各种应激有关,包括氧化应激、紫外照射、放射治疗,以及与应激相关信号有关。最新证据表明,Cav-1是一种氧化应激相关蛋白,氧化应激可以影响Cav-1的膜转运。在氧化应激条件下,Cav-1磷酸化与细胞凋亡和细胞附着密切相关,而Cav-1的双重作用在氧化应激中也有体现,如有研究发现磷酸化Cav-1蛋白表达增加具有抗凋亡作用,可促进氧化应激后细胞存活。也有研究发现Cav-1表达减少或缺失能够显著抑制肺组织中性粒细胞趋化、黏附和上皮细胞/内皮细胞凋亡,减轻弥漫性肺泡损伤、肺血管内皮屏障损伤及肺水肿程度。我们前期研究发现AFB1作用过程中能够引起肝细胞中Cav-1的表达升高以及Cav-1分子定位的改变,提示Cav-1可能参与了AFB1引发的肝毒性。在此基础上,我们一方面通过下调或过表达Cav-1分析其在AFB1引起的肝损伤中的作用,另一方面从对氧化应激的调控途径上分析其作用机制。一、Cav-1在AFB1引发的肝细胞毒性中的作用研究方法:采用人正常肝细胞(L-02),通过细胞增殖实验、流式细胞术、免疫荧光、免疫蛋白印迹等方法检测AFB1作用后引起的肝毒性情况;通过转染质粒或siRNA分别过表达或下调肝细胞中Cav-1分子的表达,检测过表达或下调Cav-1对于AFB1处理引起的肝损伤的影响。此外选取了肝癌细胞系Huh7和HepG2两种细胞,通过下调Cav-1的表达分析其对细胞活性和凋亡的影响,以分析Cav-1是否在不同的肝细胞中发挥相似的作用。实验结果:AFB1能够在肝细胞中发挥毒性作用,表现为细胞活力下降,细胞凋亡增加,细胞内氧化应激水平升高(活性氧水平和MDA含量增加)。进一步发现AFB1能够引起Cav-1的表达增加,并引起Cav-1分子的细胞定位明显改变。在此基础上,下调肝细胞中Cav-1的表达后检测AFB1引发的肝细胞毒性,发现肝细胞活力下降明显减轻,细胞凋亡显著减少,氧化应激水平明显降低,而过表达Cav-1后,与上述结果相反。在肝癌细胞系Huh7和HepG2两种细胞中重复上述实验,得到了相似的结果。结论:AFB1可通过诱发氧化应激造成肝细胞损伤,导致肝细胞凋亡。在这一过程中,肝细胞中Cav-1蛋白分子发挥着重要的作用,AFB1促进了Cav-1的表达,促进了氧化应激。下调Cav-1的表达能够抑制AFB1诱发的氧化应激,提升细胞活力,减少细胞凋亡,提示Cav-1可能是参与AFB1引发肝细胞氧化应激的关键分子。二、Cav-1在AFB1引发的肝细胞毒性中的作用机制实验方法:从抗氧化应激关键通路Keap1-Nrf2信号通路入手,首先通过Western Blot检测Cav-1下调或过表达后对Nrf2及下游抗氧化应激重要分子HO-1与NQO-1表达的影响。进而通过免疫共沉淀、荧光酶素等方法检测Cav-1与Nrf2之间的相互作用,以及Cav-1对于Keap1-Nrf2信号通路的影响。此外,通过Western Blot和免疫荧光等分析Cav-1对AF

关键词： 黄曲霉毒素B1   肝脏   保加利亚乳杆菌   鼠李糖乳杆菌   NF-κB   炎症反应  

摘要： 黄曲霉毒素B1(AFB1)是一种广泛存在于自然界中的霉菌毒素,具有强毒性和强致癌性。AFB1污染常见于食品和饲料原料中,对食品工业和农牧业的发展构成了重大威胁,并间接危害人类健康。近年来,饲料原料采购选择和品控的严格要求使霉菌毒素污染得到了一定程度的控制,但玉米、豆粕、配合饲料中霉菌毒素的检出率仍处于较高水平。因此,寻求有效的黄曲霉毒素解毒剂已刻不容缓。为了降低黄曲霉毒素的危害,许多研究者提出了用益生菌对AFB1进行解毒的方法。我们在前期的预实验中发现,复合乳酸菌CS能够有效缓解AFB1导致的雏鸡肝损伤,但其中发挥主要作用的菌株及其作用机制尚不清楚。因此,本试验中我们挑选乳酸菌CS中两种主要的菌株,保加利亚乳杆菌和鼠李糖乳杆菌,来探讨它们对AFB1中毒的拮抗作用及保护机制。在本研究中,为了探讨保加利亚乳杆菌和鼠李糖乳杆菌对AFB1诱导的肝脏炎症反应的保护作用及分子机制,我们分别从体内试验和体外试验进行研究。一、体内试验:将健康雄性昆明小鼠随机分为五组,通过灌胃的方式用AFB1(300μg/kg)、保加利亚乳杆菌(10 mg/只)、鼠李糖乳杆菌(10 mg/只)持续处理8周。试验结束后统计小鼠体重及肝指数数据,剖检观察肝脏组织病理变化,采集血清检测肝功、肾功指标以及炎性因子变化,采集肝脏检测NF-κB和炎性因子表达量。二、体外试验:用不同浓度的保加利亚乳杆菌和鼠李糖乳杆菌分别刺激小鼠肝细胞(AML12),筛选对细胞活性没有影响的最适乳酸菌浓度,然后用AFB1、BAY11-7082(NF-κB抑制剂)、最适浓度的保加利亚乳杆菌和鼠李糖乳杆菌将细胞分成六个不同的处理组,每个处理组又分别刺激1 h、2 h、4 h和12 h。刺激结束后收集细胞及细胞培养上清,分别检测细胞中NF-κB信号通路相关蛋白、炎性因子表达量以及培养上清中炎性因子的浓度。体内试验结果显示:AFB1暴露小鼠肝组织出现明显病变,肝细胞部分坏死;肝指数显著增加(P<0.05);血清肝功指标AST、ALT含量显著上升(P<0.05),肝功指标TP及肾功指标BUN、CREA含量显著降低(P<0.05);血清炎性因子IL-1β、TNF-α、IL-6水平显著升高(P<0.05,P<0.01),IFN-γ水平极显著下降(P<0.01);肝脏炎性因子TNF-αmRNA表达量以及炎症信号通路中NF-κBp65 mRNA和蛋白表达量均极显著上调(P<0.01),IκBα蛋白表达量极显著降低(P<0.01)。然而,添加保加利亚乳杆菌或鼠李糖乳杆菌都不同程度的逆转了AFB1导致的上述指标的变化。在体外试验中,最终选择的对AML12细胞活性没有显著影响的乳酸菌刺激剂量分别为:保加利亚乳酸菌1.2 mg/mL,鼠李糖乳杆菌0.5 mg/mL。体外试验结果显示:鼠李糖乳杆菌显著减少了AFB1诱导的AML12细胞胞外炎性因子的分泌;保加利亚乳杆菌和鼠李糖乳杆菌都显著抑制了AML12细胞中AFB1导致的NF-κB的激活和表达以及IL-1β、TNF-α的mRNA表达量。体外试验最终结果与体内试验结果基本一致。以上结果表明,AFB1暴露可导致肝脏炎性损伤,而保加利亚乳杆菌和鼠李糖乳杆菌均可通过调节NF-κB信号通路的活性来拮抗AFB1诱导的肝损伤和炎症反应,减少炎性因子的分泌量。同时也说明保加利亚乳杆菌和鼠李糖乳杆菌具有拮抗AFB1毒性的潜力,可进行深入研究并将其转化为饲料添加剂来降低霉菌毒素对畜牧业的危害。

关键词： 酶联免疫法   超高效液相色谱-串联质谱法   食用植物油   黄曲霉毒素B1  

摘要： 本研究以食用植物油为研究对象,优化黄曲霉毒素B1酶联免疫检测的前处理方法,再进一步比较不同品牌的试剂盒的优劣,得出的优化前处理方法搭配稳定性高、准确度好的试剂盒,同时与超高效液相色谱-串联质谱法做比对,得出本研究的可行性,为以后的食用植物油检测提供依据。并用优化前处理后的酶联免疫法,对各种食用植物油的黄曲霉毒素B1进行检测,并通过大批量检测数据对不同区域、不同生产日期的大批量食用植物油的黄曲霉毒素B1污染进行统计分析。得出结论如下:使用超高效液相色谱-串联质谱这一权威仪器考察回收率,选择出最优的前处理条件,再用最优的前处理条件用各品牌酶联免疫试剂盒进行检测,以及与各试剂盒的推荐前处理条件作比较,用选择出最优的前处理条件整合到各试剂盒作为试剂盒的通用前处理方法,从而优化整合酶联免疫法。酶联免疫前处理的优化与整合,采用称取5g样品,70%甲醇水溶液,不添加助提取溶剂,超声功率60W,萃取20min进行前处理,在6000r/min下离心10min,吸清液过0.22μm针式过滤头过滤,作为最优的酶联免疫前处理的优化与整合。用超高效液相色谱-串联质谱法为基准作比对,优化整合酶联免疫前处理,使得酶联免疫法检测黄曲霉毒素B1的稳定性、准确性、实用性更强。比较各试剂盒间的差异,选出结果更准确、更稳定的酶联免疫试剂盒。在优化的试验条件下,酶联免疫法在0～50μg/L的浓度范围内具有良好的线性关系,线性系数为0.9993,检出限为1.0μg/kg,优化后的酶联免疫法适用于植物油中黄曲霉毒素B1的定量分析。用已整合优化后的方法,对各种食用植物油的黄曲霉毒素B1进行检测,并通过大批量检测数据对不同区域、不同生产日期的大批量食用植物油的黄曲霉毒素B1污染进行统计分析。得到以下结论:在大城市中,超市与粮油店的食用油绝大部分均为知名品牌的定型包装食用植物油,所以质量会有较大的保证。另外,从食堂与餐馆的结果可推测,在学校食堂以及大型的餐馆中,还是会选用更为安全的食用植物油;在一些中小型餐馆中,大部分的餐馆的食用植物油还是较为安全的,只不过一些中小型餐馆为了牟利,购买散装花生油或者质量不达标的植物油,引起黄曲霉毒素B1超标。对于这样的中小型餐馆需要政府加大监管力度,保证食用植物油的安全性。选取食用植物油,应该避免选择散装以及自榨的花生油,这类花生油由于环境卫生状况得不到有效监控,没有精加工工艺去除黄曲霉毒素B1,比较容易出现黄曲霉毒素B1超标的情况,在超市购买定型包装的以及选择知名品牌的食用植物油,食用植物油的安全性能得到更好地保证。

关键词： 功能性消化不良   HPLC指纹图谱   CXWS   中药提取物  

摘要： 组分中药CXWS是中医辨证理论指导下,结合现代药理学研究方法,经过组方配伍筛选研究、提取工艺研究和制剂工艺研究而制成的组分中药新药。本方由柴胡、白芍、枳壳、香附、延胡索和甘草六味中药有效部位提取物组成,用于治疗气滞型胃脘痛。本研究针对功能主治对该组分中药开展了功能性消化不良的药效学研究,基于指纹图谱技术建立柴胡提取物、白芍提取物、延胡索提取物及甘草提取物企业内控标准,开展组分中药制剂的指纹图谱研究,并对指纹图谱的共有峰进行了归属性研究。***对功能性消化不良治疗作用的研究。通过采用夹尾激怒法和慢性应激法(断食,断水)相结合的方式诱导功能性消化不良大鼠模型,进行胃排空和小肠推进实验,统计胃排空率和小肠推进率。随后腹主动脉取血离心分离血清,根据试剂盒说明书测定血清胃肠激素相关指标。结果显示:与模型组相比,CXWS剂量组雌雄FD大鼠的胃排空率和小肠推进率均显著升高,血清中大鼠胃促生长素(Ghrelin)、胃动素(motilin,MTL)水平显著升高,血管活性肠肽(vasoactive intestinal peptide,VIP)水平显著降低,与空白组相比,CXWS剂量组雌雄FD大鼠的各项指标无显著差异。综上,CXWS可有效改善雌雄FD大鼠胃肠运动功能,调节胃肠激素分泌水平,CXWS治疗功能性消化不良药效明确。***中中药提取物指纹图谱研究。采用高效液相色谱法,通过对洗脱程序、色谱柱、波长、柱温、流速等的考察确立色谱条件,通过对提取溶剂种类、浓度、用量、提取方法、提取时间等的考察确立供试品溶液处理方法,进而建立CXWS涉及的中药提取物指纹图谱。结果表明:柴胡提取物指纹图谱,标定12个共有峰,10批次柴胡提取物相似度在0.922～0.959之间;白芍提取物指纹图谱,标定9个共有峰,10批次白芍提取物相似度在0.997～1.000之间;延胡索提取物指纹图谱,标定10个共有峰,10批次延胡索提取物相似度在0.930～0.980之间;甘草提取物指纹图谱,标定10个共有峰,10批次甘草提取物相似度在0.924～0.969之间。以上结果表明,研究中所建立的柴胡提取物、白芍提取物、延胡索提取物、甘草提取物指纹图谱,相似度良好,方法可靠,可作为CXWS各中药提取物的企业内控标准。***指纹图谱建立及共有峰归属分析。采用高效液相色谱法,建立CXWS指纹图谱,并明确其共有峰归属。结果表明:CXWS指纹图谱,共标定22个共有峰,10批次CXWS相似度在0.985～0.996之间,色谱行为良好,通过与对照品、提取物以及阴性样品的对照分析,确认8、16、18、19、20、21号峰来源于柴胡提取物,5、6、12号峰来源于白芍提取物,11、12号峰来源于延胡索提取物,1、2、4、7、10、13、14、15、17号峰来源于甘草提取物,3号峰来源于柴胡和白芍提取物,9号峰来源于柴胡和甘草提取物。以上研究结果表明,本研究建立的指纹图谱特征性强、相似度良好,CXWS化学成分,完善了CXWS质量控制体系。

关键词： 板蓝根   PRRSV抗体   后备母猪   荧光定量RT-PCR   PRRSV残留毒  

摘要： 猪蓝耳病即猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS),该病是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)引起的,以妊娠母猪流产、各种年龄段猪的呼吸障碍为特征的一种传染病,该病频繁爆发给全球养猪业造成了相当大的经济损失。临床上对于该病的免疫预防主要使用PRRSV弱毒疫苗,但存在散毒问题,而且有疫苗毒株毒力返强的潜在危险,因此,寻求减轻甚至净化猪体内残留毒的方法是防治PRRSV感染的关键。本实验将板蓝根颗粒、板蓝根颗粒配合黄芪多糖、板青颗粒配合黄芪多糖作为免疫调节剂,与PRRSV弱毒疫苗配合使用,通过对PRRSV抗体及体内PRRSV残留毒变化的检测,探究其对于注射PRRSV弱毒疫苗的猪只的抗体影响及体内PRRSV残留毒的净化作用,旨在为板蓝根颗粒作为免疫增强剂提供理论依据,为以后的相关研究以及猪群免疫保健方案的制定作一参考。1.板蓝根对免疫猪血清中PRRSV抗体调节作用研究目的:研究板蓝根颗粒、板蓝根颗粒配合黄芪多糖、板青颗粒配合黄芪多糖对PRRSV弱毒苗免疫抗体的影响。方法:在免疫PRRSV弱毒疫苗后分别以板蓝根颗粒、板蓝根颗粒配合黄芪多糖、板青颗粒配合黄芪多糖饲喂后备母猪,在免疫30d后采血检测血清中抗PRRSV抗体水平。结果发现,板蓝根颗粒配合黄芪多糖作为免疫调节剂,可以稳定抗体水平,降低S/P值强阳性猪只抗体水平(S/P值>2.8),减轻散毒风险,且效果明显优于板青颗粒配合黄芪多糖。2.板蓝根对猪血液中PRRSV病毒核酸载量的影响目的:通过检测饲喂板蓝根颗粒、板蓝根颗粒配合黄芪多糖、板青颗粒配合黄芪多糖的带毒猪体内PRRSV病毒核酸载量的变化,初步揭示板蓝根颗粒、板蓝根颗粒配合黄芪多糖净化PRRSV残留毒的作用。方法:免疫前及免疫30d后采血,以荧光定量RT-PCR技术检测PRRSV抗体S/P值高于2.5的试验猪中PRRSV病毒核酸载量。结果表明:使用板蓝根颗粒、板蓝根颗粒配合黄芪多糖粉作为免疫调节剂PRRSV病毒核酸载量呈现下降趋势,使用板青颗粒配合黄芪多糖粉作为免疫调节剂PRRSV病毒核酸载量下降的幅度要明显低于板蓝根颗粒组和板蓝根颗粒配合黄芪多糖粉组。说明板蓝根颗粒、板蓝根颗粒配合黄芪多糖能有效降低血液中PRRSV病毒核酸的载量,净化母猪体内PRRSV残留毒,改善猪群健康状况。

关键词： 医院口服中药制剂   微生物限度检查   影响因素   整改策略  

摘要： 目的分析医院口服中药制剂微生物限度检查的影响因素与整改策略。方法将我院口服中药制剂在进行微生物限度检查,寻找生产过程中易产生微生物的方法步骤,探索微生物检查的影响因素,并制定相关的整改策略。结果在口服中药制剂生产过程中,人员、物料、制作工艺、设备、厂房以及净化系统等多种因素都会导致微生物限度检查不过关。结论为了提高口服中药制剂生物限度检查合格率,提高药物质量和制剂制作水平,需要对生产工艺和人员操作进行规范,提高制剂制作人员的专业水准,按时维护设备。

关键词： 黄曲霉毒素B1   分离鉴定   铜绿假单胞菌   活性降解酶  

摘要： 黄曲霉毒素B(AFB)被广泛认为是I类致癌物质。如何将其从食品中去除成为一个重要的研究课题。由于物理或化学方法都有缺点,生物解毒已成为一种趋势。本研究从土壤中分离出一株高活性AFB降解菌,通过16S rDNA序列对比分析及生理生化实验鉴定其种属;同时对其生长条件进行优化;分析并纯化其主要降解活性物质;研究影响活性物质降解效率的主要因素;并对菌液及酶液实际作用的安全性和有效性进行评估,为其在实际的生产应用中提供依据。具体实验结果如下:1)采用新型香豆素-无水乙醇培养基,通过逐步提高培养基中香豆素浓度,从土壤分离出一株高活性AFB降解菌A6。通过16S rDNA序列对比分析及生理生化鉴定结果,鉴定该菌为铜绿假单胞菌。2)以装液量、温度、初始pH、接种量的单因素实验结果为依据,通过正交试验对细菌生长条件进行优化。优化生长培养条件为:发酵温度37?C,初始pH7.0,接种量为8%,装液量30 mL/100 mL。较优化前,AFB降解率得到了显著提高,菌液与AFB于37?C共作用72 h后,AFB降解率为85.69%。3)A6降解AFB的主要活性成分为一种分子量为20 kD的热稳定胞外酶,提取流程为:65%饱和度硫酸铵沉淀、30 kD、10 kD、3 kD超滤管依次梯度超滤、使用葡聚糖G-50进行凝胶层析,可将蛋白质的比活力纯化71倍。4)优化酶液的反应条件为:降解时间>120 h,AFB降解率上升至90.47%;pH值为7.0时降解率最高,在pH值为5.0?8.0范围内,均有降解能力;底物浓度范围为100μg/L?1000μg/L;温度范围为37?C?70?C,能保持71%的降解率;Zn、Mg和Fe是主要酶活抑制剂。5)与AFB标准品(86.91%)相比,72 h后AFB降解产物对HUVEC细胞抑制率下降至28.79%,同时,酶液对HUVEC细胞抑制率为15.58%,对细胞的毒性影响较小。6)A6发酵菌液及酶液未有明显的对黄曲霉菌株的生长抑制作用。7)酶液和菌液在食品基质中也能发挥较高的降解能力,酶液在固体花生基质中孵育5 d后能降解90.48%的AFB,同时,菌液固态发酵的最佳料水比为1:1.5,孵育5 d后能降解55.34%的AFB。

关键词： 速效救心丸   冠心病心绞痛   成本-效果  

摘要： 目的:分析三种中药制剂治疗冠心病心绞痛的成本-效果。方法:选取在我院就诊的冠心病心绞痛患者274例,根据用药方案不同分为A组(81例)、B组(97例)和C组(96例)。三组患者分别口服速效救心丸、复方丹参滴丸及麝香保心丸进行治疗,疗程均为30d。观察分析三组患者的治疗效果、不良反应,计算成本-效果。结果:患者均未出现明显不良反应,三种中药制剂的成本分别为112.5元、150.0元和156.0元;总有效率分别为83.95%、93.81%和90.63%,成本-效果比为1.34、1.59、1.72。结论:与复方丹参滴丸和麝香保心丸相比,治疗冠心病心绞痛采用速效救心丸较为经济有效。