关键词： 胍基乙酸中药制剂   生长性能   血清指标   胴体品质  

摘要： 本试验以杜×长×大三元杂交育肥猪为对象,旨在研究胍基乙酸中药制剂在提高育肥猪生长性能、免疫能力、产品品质方面的价值。试验选择日龄相同、体况良好、体重(88±0.5)kg的育肥猪36头,随机分为两组,对照组饲喂基础日粮,试验组饲喂基础日粮添加0.5%的胍基乙酸中药制剂,每组设置3个重复,每个重复6头,公母各半。控制饲养条件一致,自由采食及饮水,饲养试验开始前安排10天的预饲期,试验期为41天。试验结果表明:与对照组相比:(1)生长性能结果表明.:日粮添加0.5%胍基乙酸中药制剂可以极显著增加育肥猪平均日增重;显著提高饲料中粗灰分、粗脂肪和无氮浸出物的表观消化率,同时极显著提高了饲料干物质和粗蛋白的表观消化率;显著增加了育肥猪消化道小肠绒毛的长度和整齐度,有利于营养物质的吸收,对于小肠隐窝深度未产生显著影响。(2)血清指标表明:添加胍基乙酸中药制剂可以显著提高育肥猪血清中谷草转氨酶含量;极显著增加了 IgA、IgM含量,提高育肥猪机体免疫能力;极显著增加了血清中T-AOC、SOD、GSH-Px含量,极显著降低MDA含量,提高机体抗氧化能力。(3)胴体品质试验表明:日粮添加胍基乙酸中药制剂显著降低猪肉储藏期间第24h、7d、10d的肌肉亮度值,极显著降低猪肉储藏期第24h、4d滴水损失率,显著降低第7d、10d滴水损失率,提高猪肉系水能力,同时显著降低第10d猪肉中TVB-N含量。极显著提高肝脏组织中T-AOC、SOD、GSH-Px含量,极显著降低MDA含量,提高肝脏抗氧化能力;极显著投稿猪肉中粗脂肪含量,显著提高猪肉中蛋氨酸含量。(4)对经济效益的影响:经统计,日粮添加胍基乙酸中药制剂可以提高养殖户经济收益平均每头75.32元,同时不会增加粪便中的氮、磷元素排放量。

关键词： 组分中药提取物   片剂   粉体学性质   抗张强度   崩解时限   主成分分析   人工神经网络   预测模型  

摘要： 片剂由于具有体积小、剂量准确、便于携带等优点,已成为临床上广泛应用的剂型之一。与其它制备方法相比,粉末直接压片法可以提高湿热敏感药物的稳定性且具有工艺简单和省时省力的优点。片剂的成型及崩解是评价片剂质量的重要标准,分别以抗张强度(TS)和崩解时限(DT)进行表征。中药提取物作为片剂直接压片过程中的重要原料,其粉体性质与片剂的质量密切相关。一方面由于中药原料的天然属性决定了其性质的不确定性,原料性质的波动必然会导致片剂质量的差异;另一方面由于目前片剂的生产仍主要依靠经验和试错法,在造成时间和原料浪费的同时,也难以保证片剂质量的均一性和稳定性。因此,对中药提取物粉体性质与片剂质量间的相关性进行研究并构建相应的质量预测模型对于片剂的质量控制具有重要意义。 中药提取物由不同类型的成分构成,具有化学成分多样、构成体系复杂的特点,将某一类成分看作是一种组分,其中多糖、皂苷和黄酮类成分是中药重要的药用组分,不同类型提取物性质不同,对片剂质量产生的影响也不同,本课题分别以黄芪、知母及黄芩提取物作为多糖、皂苷和黄酮上述三类组分的模型药物进行研究。在此基础上,探究不同类型提取物的粉体学性质,对不同组分提取物的用量及粉体性质与片剂质量间的相关性进行研究,并构建相应单一和复方组分中药提取物的粉体性质与片剂质量间的预测模型,对片剂的质量进行预测,以期在节省时间和辅料的同时,为保证中药片剂质量的均一性和稳定性提供参考。 本文主要包括以下五个方面: 第一部分,不同类型提取物粉体学性质研究。分别以黄芪、知母和黄芩提取物作为多糖、皂苷和黄酮类成分的模型药物,测定三种不同类型提取物的质量指标,将各提取物的性质转化至同一尺度作为粉体学性质的二级指标,并将其分别归纳为均一性、堆积性、流动性、可压性、稳定性和溶解性6个一级指标,采用夹角余弦法对粉体性质进行相似度评价,构建相应的物理指纹图谱,并对各提取物的粉体学性质进行分析。结果表明多糖和皂苷类提取物具有良好的均一性、堆积性、流动性及溶解性,而可压性和稳定性较差,其中,多糖类提取物的可压性最差;黄酮类提取物具有良好的稳定性和可压性,而流动性、溶解性、均一性和堆积性较差。提示不同类型提取物具有不同的物理特性,由于各提取物性质不同会对片剂质量产生不同影响,故后续应对其分类进行研究。 第二部分,多糖组分(黄芪)提取物粉体性质-片剂质量相关性研究及预测模型的构建。首先采用混料设计将不同比例的黄芪提取物与MCC、乳糖混合以制备粉体样品,然后采用Design Expert 8.0和SIMCA14.1软件对多糖组分提取物的用量及其粉体性质与片剂质量间的相关性进行研究,并采用方差膨胀因子(VIF)与R语言可视化相结合的方法对粉体性质进行多重共线性诊断,基于片剂质量的影响因素较多且彼此之间具有较强的相关性,分别采用主成分分析(PCA)和辨识关键物料属性(CMAs)的方法对模型特征数据进行提取,将重新得到的变量作为径向基函数神经网络(RBFNN)的输入层构建模型,然后在此基础上构建相应的反向传播神经网络(BPNN)、广义回归神经网络(GRNN)和多元回归分析(MRA)模型,比较不同模型预测的准确性。结果显示:(1)多糖提取物的用量与TS和DT均呈负相关,表明其压缩成型性差;MCC的用量对片剂质量的影响较大,与TS和DT均呈正相关;(2)粉体的溶解性、松密度、振实密度及孔隙率对TS影响较大,其中溶解性、松密度及振实密度与TS呈负相关,孔隙率与TS呈正相关;粉体的松密度、振实密度、孔隙率、溶解性及含水量对DT影响较大,其中松密度、振实密度、孔隙率及溶解性与DT呈负相关,含水量与DT呈正相关;(3)PCA-RBFNN模型的预测精度略优于CMAs-RBFNN模型,且相比于其它三种模型,PCA-RBFNN模型拟合度较高。其中,对于TS来说,模型的相对误差(RE)范围为1.41%～6.75%,平均相对误差(MRE)为4.08%,与PCA-GRNN、PCA-MRA和PCA-BPNN相比分别减小了1.58%、5.59%和13.06%;对于DT来说,模型的RE范围为0.22%～3.70%,MRE为1.96%,与其它三种模型相比分别减小了1.20%、9.83%和13.26%,能够准确的预测多糖组分提取物片剂质量,从而为其片剂质量控制方法的建立提供参考。 第三部分,皂苷组分(知母)提取物粉体性质-片剂质量相关性研究及预测模型的构建。首先采用混料设计制备皂苷组分粉体样品,然后对皂苷组分提取物的用量及其粉体性质与片剂质量间的相关性进行研究,并对粉体性质进行多重共线性诊断,在前期实验的基础上构建基于PCA-RBFNN的皂苷组分提取物粉体性质-片剂TS和DT的预测模型,对其片剂的质量进行预测。结果显示:(1)皂苷提取物的用量与TS和DT均呈负相关,表明其压缩成型性较差

关键词： 黄曲霉毒素   T-2毒素   赭曲霉毒素   脱氧雪腐镰刀菌烯醇   食品检测  

摘要： 真菌毒素是真菌的代谢产物，广泛存在于霉变的谷物中，一旦进入人体，将会对人体组织造成损伤，甚至出现畸形和癌变等危险。薄层色谱法具有操作复杂、回收率低的不足。因此，本文在参照国内外研究结果的基础上，对四种不同菌属的真菌毒素进行分子结构式分析，经验证，免疫亲和-高效液相色谱法在真菌毒素检测中具有操作简单、检测精度高、浪费率低、可重复性好等的优点。　　黄曲霉毒素B1免疫亲和-高效液相色谱检验方法的验证。经甲醇-水溶液的提取，通过免疫亲和柱的净化和富集后，进行黄曲霉毒素B1的检测。结果显示，色谱峰面积与含量之间的线性关系良好，检出限为0.03μg/kg，加标回收率为91.3%~102.8%，不同样品的标准偏差RSD为1.12%~5.23%。　　T-2毒素激发波长为381nm，发射波长为470nm。乙腈、水的比例为75:25;流速：1mL/min;进样量：20μL;色谱柱：C18，4.6×150mm，5μm;最低检出限为5μg/kg，回收率为90.5%~97.9%，不同浓度样品的标准差为0.63%~4.11%。　　赭曲霉毒素A的色谱峰面积与含量之间呈良好线性关系，检出限为0.3μg/kg，回收率为83.8%~94.9%，不同浓度样品的标准差为2.06%~6.03%。通过上述分析结果可知，免疫亲和柱-高效液相色谱检测法对于赭曲霉毒素A毒素的检验具有操作简单，准确率和回收率高，精准度良好，重复性强等特点，适合于谷类、酒类和调味品中赭曲霉毒素A的测定。　　脱氧雪腐镰刀菌烯醇的色谱峰面积与含量之间的线性关系良好，检出限为100μg/kg，加标回收率为82.5%~90.3%，不同样品的标准偏差RSD为1.69%~4.60%。　　对淄博市2017-2019年食品安全抽检工作进行分析：2017-2019年黄曲霉毒素B1不合格的批次占比分别为0.16‰、0.33‰、0.31‰，抽检产品中黄曲霉毒素B1的不合格率很低。坚果炒货、谷物制品和食用植物油是黄曲霉毒素B1容易超标的产品类别。目前，黄曲霉毒素B1在淄博市食品安全中风险较低。

关键词： 黄曲霉毒素B1   生物降解   氧化酶   基因表达   突变体  

摘要： 黄曲霉毒素主要是由黄曲霉和寄生曲霉产生的一种次级代谢产物,广泛存在于霉变的粮食、坚果和饲料当中,具有严重的肝毒性,致癌、致畸和致突变性,与食品安全和人类健康问题等密切相关。在多种黄曲霉毒素结构类似物中,尤其以黄曲霉毒素B1（AFB1）毒性最大,污染最为常见。因此,寻找有效的黄曲霉毒素降解脱毒方法,对食品安全与公共卫生具有重要意义。生物脱毒法,因其具有高效性、特异性,且不易造成食物营养物质流失及风味改变,而被人们广泛关注。目前,国内外研究主要集中在微生物解毒菌株的筛选及降解物质的分离、鉴定这两个方面,对于生物酶的筛选及AFB1的降解特性研究却鲜有文献报道。微嗜酸寡养单胞菌CW117是本实验室通过微生物富集技术,分离获得的一株多功能曲霉类真菌毒素高效降解菌株。前期研究发现,菌株CW117是可以降解赭曲霉毒素A和黄曲霉毒素B1两种毒素的双功能菌株。本研究是在实验室前期已有基础上,对可能参与AFB1降解代谢的氧化酶类进行预测筛选,通过所筛选氧化酶的异源表达的重组酶,进行体外活性验证,以及采用基因敲除法完成体内活性验证的方式,来探索微嗜酸寡养单胞菌CW117菌株中各类氧化酶系对AFB1的降解功能。1)漆酶缺失对菌株CW117降解AFB1的影响。采用自杀质粒p K18mobsac B介导的同源重组方法,对菌株CW117中已发现的可降解AFB1的漆酶（lc1和lc2）进行敲除。研究结果发现,漆酶基因lc1和lc2敲除后,缺失突变菌株CW117△lc1和CW117△lc1-lc2的降解效率与原始菌株之间无统计学差异（p>0.05）,表明在菌株CW117中还存在其他更有效的AFB1的降解基因（或降解物质）。2)筛选、验证各氧化酶基因体外降解能力。结合国内外对微嗜酸寡养单胞菌公布的基因组信息及文献报道,筛选出7个可能具有降解AFB1功能的氧化酶,包括过氧化物酶（Prx2）、双加氧酶（DIO）、酸式还原酮双加氧酶（ARD）、色氨酸2,3-双加氧酶（TDO）、4-羟基苯丙酮酸双加氧酶（HPPD117）、类荧光素酶单加氧酶（LLM,或黄素依赖性氧化还原酶）、铜抗性体系多铜氧化酶（LC2）。参考已公布的基因组信息为基础,设计特异性引物,克隆目标基因,通过p GEX-4T-1和p ET-32a异源表达载体,对以上氧化酶基因进行异源原核表达,验证其异源表达的重组酶对AFB1的降解活性。结果发现,从CW117筛选出的7个氧化酶中仅有HPPD117对AFB1具有显著的降解功能,但降解效率较低。重组酶r HPPD117的粗酶液与AFB1共同孵育72 h后,对AFB1的降解效率约为14%。但是,基因hppd117的转化菌株*** BL21（p GEX-4T-1/hppd117）,经诱导表达培养后的无细胞上清（不含重组酶）对AFB1的降解效率可达到89%。该结果与菌株CW117对黄曲霉毒素降解特点一致,即AFB1的降解活性物质主要分布于菌株的无细胞上清。然而,重组表达酶r HPPD117主要分布在*** BL 21的培养细胞中,但重组酶对AFB1的降解能力较低,因此推测在无细胞上清中的降解物质应该是由hppd117介导的其它物质,在基因表达过程中产生的其他产物（可能为非蛋白类物质）。3)lc1和hppd117双缺失菌株对AFB1降解的影响。在体外降解活性验证基础上,采用自杀质粒p K18mobsac B介导的同源重组方法,对突变子CW117△lc1中hppd117基因进行基因敲除。以漆酶基因（lc1）缺失突变株CW117△lc1为出发菌株,进一步构建hppd117基因缺失菌株CW117△-2,结果发现双基因缺失突变体对AFB1的降解作用,与单缺失菌株并无统计学差异。但是,在菌株培养不同时间后,所制备的无细胞上清液对AFB1的降解实验中发现,双突变株培养培养12 h和16 h后,制备的无细胞上清液对AFB1的降解能力与单突变株CW117△lc1存在统计学差异,培养12 h时上清液与对照菌株的降解效率的统计学差异为p<0.01,培养16 h时上清液与对照菌株的降解效率的统计学差异为p<0.05,其它培养时间点对AFB1的降解效率均具有不同的统计学差异。4)三基因缺失菌株及其对AFB1降解的影响。再以CW117△-2为出发菌株,在此基础上敲除基因llm,获得三基因缺失突变株CW117△-3;但突变株CW117△-3与CW117△-2相比,两个突变子及培养上清降解活性未观察到有统计学差异（p>0.05）。本研究结果发现,微嗜酸寡养单胞菌CW117中经原核表达的漆酶（LC1）和4-羟基苯丙酮酸双加氧酶（HPPD117）对AFB1具有显著的降解能力,但二者对AFB1的降解能力有限。含hppd117基因的转化子,经诱导表达培养后的无细胞上清液对AFB1显示了高效的降解能

关键词： 负离子   中药   硒锗   生产性能   肉品质   血清指标  

摘要： 试验旨在研究负离子中药制剂、硒锗制剂及其组合对生长育肥猪生产性能、屠宰性能、肉品质、血清生化指标、肉质相关基因表达量及盲肠菌群多样性分析等的影响。试验选取80头平均体重在39.87±2.18kg的杜×长×大三元杂交猪,按照随机分组的原则分为对照组、试验I组、试验Ⅱ组、试验Ⅲ组,共4组,每组20头,每组5个重复,每个重复4头。其中对照组饲喂基础日粮,试验I组在基础日粮中添加0.5%负离子中药硒锗组合制剂,试验Ⅱ组在基础日粮中添加0.5%酵母硒锗制剂,试验Ⅲ组在基础日粮中添加0.5%负离子中药制剂。试验期共90天,包括预饲期10天,正式期80天。试验开始前记录猪初始体重,试验结束后,对猪进行称重,并采集饲料样、粪样、肉样、血样等,进行猪生产性能、屠宰性能、肉品质、血清生化指标、肉品质相关基因表达量、菌群多样性及经济效益等的分析。试验结果表明:生产性能:(1)与对照组相比,试验各组FW、ADG、ADFI呈显著或极显著提高(P<0.05、P<0.01),试验I、Ⅲ组料肉比呈显著降低(P<0.05)。(2)与对照组相比,试验各组DM、EE、CP消化率呈显著提高(P<0.05),其中试验I组DM消化率达极显著水平(P<0.01),且试验I组DM消化率显著高于试验Ⅱ、Ⅲ组(P<0.05)。(3)与对照组相比,试验Ⅰ、Ⅲ组背膘厚呈极显著降低(P<0.01),试验Ⅱ组背膘厚呈显著降低(P<0.05);与对照组相比,试验各组瘦肉率、眼肌面积呈显著或极显著高于对照组(P<0.05;P<0.01),且试验Ⅰ组瘦肉率显著高于试验Ⅱ、Ⅲ组(P<0.05)。肉品质方面:(4)与对照组相比,试验各组猪肉中干物质、粗蛋白含量均呈显著或极显著提高(P<0.05;P<0.01),且试验Ⅰ组粗蛋白含量呈显著高于试验Ⅱ、Ⅲ组(P<0.05);试验Ⅰ组粗脂肪含量显著高于对照组(P<0.05);试验Ⅰ组硒含量、锗含量分别显著、极显著高于对照组(P＜0.05;P<0.01),与试验Ⅱ组无差异(P＞0.05)。(5)与对照组相比,试验各组猪肉蒸煮失水率、离心失水率、剪切力均呈显著或极显著低(P<0.05;P<0.01)。(6)与对照组相比,试验各组滴水损失、PH、TVBN的影响主要表现在贮藏中后期,对颜色变化的影响主要在贮藏前期。(7)与对照组相比,试验Ⅰ组鲜味氨基酸的含量呈显著提高(P<0.05),试验Ⅰ、Ⅲ组试验各组PUFA含量呈极显著提高(P<0.01),试验Ⅱ组PUFA含量呈显著提高(P<0.05),试验Ⅰ组UFA含量呈极显著提高(P<0.01)。肉品质相关基因:(8)与对照组相比,试验Ⅰ组中H-FABP显著提高(P<0.05),试验Ⅰ、Ⅱ组FABP4显著降低(P<0.05),试验各组ACSL1、MyoG、MyoD1均显著或极显著提高(P<0.05;P<0.01),试验Ⅰ组MSTN显著降低(P<0.05),试验Ⅰ、Ⅲ组AMPD1显著升高。血液指标方面:(9)与对照组相比,试验各组CHO、TG、LDL均呈显著或极显著降低(P<0.05;P<0.01);与对照组相比,试验各组HDL呈极显著提高,试验Ⅰ组达极显著水平,且试验Ⅰ组显著高于试验Ⅱ、Ⅲ组(P<0.05)。(10)与对照组相比,试验Ⅰ、Ⅲ组TP显著提高(P<0.05),试验各组GLO含量极显著提高(P<0.01),试验各组BUN显著降低(P<0.05)。(11)与对照组相比,试验各组GH、IGF-1、T3、T4含量显著提高(P<0.05),S.S含量显著降低(P<0.05)。(12)试验各组IgG含量显著高于对照组(P<0.05)。(13)与对照组相比,试验各组CAT、SOD、T-AOC含量均呈显著或极显著提高(P<0.05;P<0.01),MDA含量均呈显著或极显著降低(P<0.05;P<0.01),且试验Ⅰ组T-AOC含量显著高于试验Ⅱ、Ⅲ组(P<0.05)。肠道结构及菌群:(14)与对照组相比,试验Ⅰ、Ⅲ组猪各小肠肠段中的绒毛高度均显著或极显著提高(P<0.05;P<0.01),试验Ⅱ组仅十二指肠绒毛高度显著提高(P<0.05),试验Ⅰ、Ⅱ组V/C值呈显著提高(P<0.05)。(15)试验各组直肠乳酸杆菌、双歧杆菌数量均显著或极显著高于对照组(P<0.05;P<0.01),试验各组大肠杆菌数量显著降低(P<0.05)。(16)与对照组相比,试验各组变形菌门显著降低(P<0.05),试验Ⅰ组达极显著水平(P<0.01),试验各组乳杆菌属显著提高(P<0.05),试验Ⅰ组达极显著水平(P<0.01);试验各组志贺氏菌属显著低于对照组(P<0.05);与对照组相比,试验Ⅰ组OUT、ACE显著升高(P<0.05),试验各组Shannon值显著或极显著升高(P<0.05;P<0.01),试验Ⅰ组Simpson值显著降低

关键词： 黄曲霉毒素B1   锰过氧化物酶   乳酸克鲁维酵母  

摘要： 黄曲霉毒素B1（Aflatoxin B1,AFB1）是一种天然的高毒性次级代谢产物,广泛存在于自然界,易污染花生、玉米、大米等谷物,被世界卫生组织的癌症研究机构（IARC）划定为Ⅰ类致癌物。AFB1对人和家畜的健康安全都产生了极大的威胁,因此研究AFB1的降解脱毒对食品和饲料加工工业具有重要意义。锰过氧化物酶（Manganese peroxidase,MnP）能够裂解AFB1呋喃环上的8,9位双键,将AFB1氧化生成AFB1-8,9环氧化物,经Mn P氧化产生的环氧化物会自发水解为AFB1-8,9-二氢二醇,从而达到对AFB1降解脱毒的目的。本文在食品级乳酸克鲁维酵母（Kluyveromyces lactis）中实现了三种不同来源的锰过氧化物酶的分泌表达,并对降解AFB1效果最优的重组菌的诱导条件和反应条件进行优化,从而实现直接利用其发酵液高效降解AFB1。具体研究如下:1、本研究实现了将三种不同来源的Mn P在食品级乳酸克鲁维酵母中的分泌表达,成功构建了重组酵母GG799（p KLAC1-Phsmnp）、GG799（p KLAC1-Plomnp）和GG799（p KLAC1-Phcmnp）,发现构建成功的三个重组菌发酵液对AFB1降解率分别为35.55±3.30%,40.02±1.77%和50.52±3.69%,其中重组菌GG799（p KLAC1-Phcmnp）发酵液对AFB1的降解效果最好,和另外两个重组菌对AFB1的降解存在显著差异。2、本研究对重组菌GG799（p KLAC1-Phcmnp）诱导表达条件进行了优化,最优的诱导表达条件为:诱导温度为30°C,氯高铁血红素（Hemin）浓度为1.0 mmol/L,诱导时间为96 h,Mn SO4浓度为1.0 mmol/L,转速为200 rpm,初始培养基p H为6.5,半乳糖浓度为50.0 g/L。在该条件下诱导表达,重组菌GG799（p KLAC1-Phcmnp）发酵液对AFB1的降解率为67.40±0.74%,与优化前相比,降解率提高了16.88%。3、本研究对重组菌GG799（p KLAC1-Phcmnp）发酵液降解AFB1反应条件进行了优化,最优的反应条件为:反应体系中pH为4.5,反应温度为40°C,Mn SO4浓度为1.2mmol/L,葡萄糖添加量为2.5 mmol/L,反应时间为40 h,发酵液中PhcMnP含量为3.0g/L,葡萄糖氧化酶添加量为1.5 U/mL。在该条件下进行降解反应,发现重组菌GG799（pKLAC1-Phcmnp）发酵液对AFB1的降解率为75.71±1.21%,与优化前相比,降解率提高了8.31%。4、本研究还对重组菌GG799（p KLAC1-Phcmnp）发酵液降解AFB1后生成的产物进行分析。发现大量m/z 346.681的[M+H]+离子,推测认为是分子式为C17H14O8的化合物,即AFB1-8,9二氢二醇。5、本文还研究了重组菌GG799（p KLAC1-Phcmnp）发酵液降解花生样品中AFB1的降解效果,发现其对不同程度AFB1污染的花生样品降解率均达到74.5%以上。6、本文构建的重组菌GG799（pKLAC1-Phcmnp）连续传代6次,前5代菌株发酵液对AFB1的降解效果与原始菌株发酵液对AFB1的降解效果无显著性差异（P>0.05）,且降解率均达到72.0%以上,因此,本文构建的基因工程菌稳定性较好。

关键词： 中药制剂分析   综合设计性实验   教学研究  

摘要： 中药制剂分析是中药类专业的一门专业课程,培养学生综合运用所学知识分析中药制剂质量的能力,是一门实践性和综合性较强的课程。综合设计性实验是中药制剂分析重要的实践教学内容,本文以河南中医药大学为例,分析了中药制剂分析综合设计性实验教学中存在的问题,并提出了相应的改革措施。

关键词： 泡腾片   粘冲   流化包裹   儿童中药制剂   矫味  

摘要： 目的:利用处方与颗粒设计改善泡腾片所用有机酸颗粒的性能,在此基础上,通过加入通用型矫味处方的方式研制出一种矫味用泡腾片,以改善儿童中药复方口服制剂的不良气味和口感,进而提高此类口感不良中药制剂的临床依从性。方法:(1)素片的处方研究:以压缩性、吸湿性和崩解时限为指标,筛选合适的泡腾酸源、碱源以及高剪切湿法制酸、碱颗粒时所用的填充剂与粘合剂。(2)素片的颗粒设计:在(1)的基础上,流化包裹一系列不同型号的PVP(K17、K25和K30)于颗粒表面以制得表面改性的酸、碱颗粒。比较这些颗粒混合后所制得的泡腾片剂与原湿法制粒组以及湿法制粒与PVP物理混合物组在粘冲程度、抗张强度和吸湿性上的差异。(3)矫味泡腾片的制备及适用性研究:在(1)和(2)的基础上,在制粒时将矫味处方加入颗粒处方中,使用旋转压片机压制出矫味泡腾片。先以健康志愿者人工评价法(打分范围:0～4;0:无味道,4:味道极其强烈)对常用60种儿童中药口服制剂的口感和气味进行打分评价,建立口感数据库。针对不同类型的中药口服制剂,进行矫味泡腾片的适用性研究,采用人工口尝法和电子舌评价法相结合的方式来综合评价其矫味效果。结果:(1)筛选出泡腾酸源、碱源分别为柠檬酸与碳酸氢钠,二者之比为:1.1:1.0～1.3:1.0;制备酸、碱颗粒的填充剂均为乳糖,酸、碱源与填充剂的用量范围为:5:3～5:5;制备酸、碱颗粒的粘合剂为13%PVP-K30(w/v),粘合剂在每900 g酸、碱颗粒的用量范围分别为:64～84 g和70～110 g。(2)流化包裹PVP之后,酸、碱颗粒的性能得到了显著提升。一方面,使制得泡腾片剂的粘冲程度较原湿法制粒组和湿法制颗粒与PVP物理混合物组明显减轻,且改善程度与PVP包裹用量成正相关。另一方面,所制得泡腾片剂的吸湿速率常数较原湿法制粒组和物理混合物组降低了25.37%～49.25%,同时其抗张强度提高了1.62～2.01倍。(3)通过健康志愿者人工评价,所测儿童中药口服制剂的气味较为刺激,口感较为苦、涩,苦度评分在0.3～4.0之间;其苦味程度可分为低、中、高3种等级。以三氯蔗糖为甜味剂的普通矫味片能显著掩盖低等苦度制剂中的苦味;以纽甜和三氯蔗糖组合为甜味剂的强效矫味片能有效掩盖大部分中、高等苦度制剂中的苦味。电子舌测定结果表明:所随机选取的矫味前后的3种低等和3种中、高等苦度的样品,在PCA图上均有一定程度的区分,与人工评价结果保持一致。结论:通过处方研究和颗粒设计相结合的手段显著提升了泡腾片所用颗粒的关键性能,从而有效地解决了泡腾片剂的粘冲问题,减小了片剂的吸湿程度以及增强了片剂的抗张强度;在此基础上所制备出的两种类型矫味泡腾片实现了显著掩盖大部分市售儿童中药口服制剂的苦、涩味以及刺激性气味的目的,有望提高儿童患者的临床给药依从性,从而确保制剂疗效的发挥,具有较高的市场应用价值。

关键词： 黄曲霉毒素B1   碳纳米管   竞争法   侧流层析试纸条  

摘要： 黄曲霉毒素B1(AFB1)是毒性极强的生物致癌剂,对肝脏组织的破坏性极强,经常接触会导致慢性中毒,有诱发癌症的风险。AFB1容易在高温和潮湿的环境中滋生,污染粮食作物及农畜产品。近年来,我国食药监管局对市场上的谷物、粮油等食品进行抽检时,常有AFB1检出量超标的情况。AFB1一旦滋生难以通过日常的烹饪去除,因此需开发出能快速、灵敏对AFB1进行现场检测的方法来预防中毒事件的发生。侧流层析技术是一种耗时短、操作简便的可视化检测技术,本研究基于竞争法的抑制机理,以碳纳米管代替胶体金来标记抗体,构建了可现场检测AFB1的高灵敏度侧流层析试纸条,并评价其性能。(1)优化碳纳米管标记的侧流层析试纸条的制备条件。首先,酸化多壁碳纳米管(MWCNTs),制备出MWCNTs和AFB1抗体的偶合物。优化后的MWCNTs酸化条件为:使用30-50 nm的MWCNTs在5.4 mL浓硫酸和1.8 mL浓硝酸中超声反应3小时。选择EDC、NHS活化法与AFB1单克隆抗体相连,确定MWCNTs-McAb偶合物中抗体的添加量为20 μg/mL,缓冲液中PVP的添加量为1%,选择170 s膜作为试纸条NC膜的材料,并在NC膜上喷划浓度为2.5 mg/mL的AFB1-BSA作为试纸条的检测线。(2)进一步探究试纸条的分析特性,结果表明本研究构建的试纸条在最优条件下有很高的灵敏度,肉眼可检测到0.25 ng/mL的AFB1,对0.005-0.5 ng/mLAFB1的检测结果有着良好的线性关系,线性回归方程为y=34.615x+0.6803,计算出的最低检测限为0.0052 ng/mL,且不与其他毒素产生交叉反应,多次检测结果一致性高,能在室温下保存两个月不变质。因此该试纸条具备优良的分析性能,可以满足对AFB1的快速现场检测要求。

关键词： 痤疮   中药提取物   大肠杆菌   表皮葡萄球菌   五倍子复方   抑菌机制  

摘要： 痤疮是一种毛囊皮脂腺单位的慢性炎症性皮肤病,主要表现为丘疹、粉刺、囊肿、结节、脓疱及瘢痕等。因其损美性强、发病率高,而使之成为公众日益关注的疾病,因此有必要给予一定的药物干预治疗。现代医学治疗效果并不理想,且副作用大,因此迫切需更为安全有效的治疗手段,而中医药在治疗痤疮上具有显著优势。中药外治法在痤疮治疗中有其独特优势,不仅避免了药物口服对胃黏膜的刺激,且使用便捷。外用治疗痤疮的中药种类有很多,使用具有协同或相加作用的单味药配伍而成的复方治疗效果优于单味药。微生物异常增殖在痤疮发生发展中起到重要作用,且痤疮中医病机在临床上主要表现为肺经蕴热、毒热互结和湿热蕴结,因此有必要对痤疮相关致病菌有较好抑菌或杀菌作用的中药在中医辨证论治的基础上进行合理的组方及配伍研究。五倍子具有抗菌、抗炎、抗氧化、抗病毒、抗衰老等药理作用,其中五倍子单宁酸的收敛、抑菌、抗炎作用与痤疮的治疗密切相关,故应用五倍子单宁酸及其复方治疗痤疮具有一定的研究价值。本文通过痤疮病因病机的探究及治疗痤疮中药文献的挖掘,根据痤疮辨证论治的特点,以表皮葡萄球菌和大肠杆菌为对象,筛选出具有收涩敛疮、解毒消痈、活血化瘀等作用的有效复方,并对五倍子复方抑菌作用机理进行初步研究。本文的试验方法及结果如下:1、中药的筛选及比较两种最小抑菌浓度(MIC)的测定方法。通过治疗痤疮相关文献的初步筛选,得到除五倍子单宁酸之外的黄芩、黄连、赤芍、蒲公英、桑叶、桑白皮、苦参和牡丹皮八种中药,并以表皮葡萄球菌和大肠杆菌为试验菌种进行抑菌实验。结果表明试管二倍稀释法测定MIC较滤纸片法敏感性更高;五倍子单宁酸对表皮葡萄球菌和大肠杆菌的抑菌作用均强于塔拉单宁酸;除塔拉单宁酸外的9种中药提取物对两种细菌的综合抑菌能力依次为五倍子单宁酸>黄芩>蒲公英>牡丹皮>赤芍>黄连>桑叶>桑白皮>苦参。2、最优五倍子复方配伍配比研究。根据中药方剂配伍原则及各中药提取物对痤疮相关致病细菌的综合抑菌能力,选择五倍子单宁酸及黄芩、蒲公英、牡丹皮、赤芍和黄连提取物为试验原料,采用滤纸片法对痤疮相关致病细菌进行体外抑菌试验,以抑菌圈直径为评价指标进行正交试验优化,确定五倍子复方的最优配伍配比。结果发现赤芍、黄连、五倍子单宁酸、黄芩、蒲公英和牡丹皮提取物的浓度按照配比为3.6:1.25:1.0:5.0:2.5:0.75组成的五倍子复方对大肠杆菌和表皮葡萄球菌的抑菌效果最佳,其抑菌圈直径分别为9.69mm和19.34mm。该复方以五倍子为君药,蒲公英、黄连为臣药,黄芩为佐药,牡丹皮、赤芍为使药,全方有清热解毒、活血化瘀、敛疮生肌之效。3、五倍子花蜜配合最优五倍子复方的抑菌作用评价研究。采用牛津杯法测定五倍子花蜜和紫荆条蜜的抑菌活性,并采用滤纸片法测定五倍子花蜜配合最优五倍子复方后新复方的抑菌活性和试管二倍稀释法测定其MIC。结果发现五倍子花蜜对两种细菌的抑制活性均强于紫荆条蜜,且20%五倍子花蜜可增强最优五倍子复方的抑菌作用;五倍子花蜜剂型复方对大肠杆菌和表皮葡萄球菌的抑菌圈直径分别为10.11mm和21.68mm,MIC分别为22.03和1.38mg/m L。结果表明五倍子花蜜作为复方的赋形剂,不仅起到调和诸药作用,还能增强最优五倍子复方的抑菌活性。4、五倍子花蜜剂型复方对痤疮主要致病细菌的抑菌机制初探。采用分光光度计测定五倍子花蜜剂型复方对细菌胞外钾离子、镁离子、AKP及胞内总蛋白含量的影响。结果发现五倍子花蜜剂型复方可以使胞外钾离子、镁离子和AKP含量增加,并降低了胞内总蛋白的合成。由此推测五倍子花蜜剂型复方主要是通过破坏大肠杆菌和表皮葡萄球菌的细胞壁和细胞膜的结构,增加其渗透性和通透性导致胞内物质外泄,同时使胞内总蛋白质合成量下降,进而抑制菌体生长。本研究首次将具有武陵山区特色的中药五倍子及五倍子花蜜,在中药方剂“君臣佐使”的配伍理论指导下,进行科学筛选及配伍,最终得到对痤疮相关致病细菌有较好抑菌作用的最佳配伍方剂。通过机制研究发现该复方主要通过破坏痤疮主要致病细菌细胞膜和细胞壁的结构,增加其通透性和渗透性导致胞内物质外泄,同时使胞内蛋白质合成量下降,从多方面抑制细菌的生长,说明该复方的抑菌作用机制较为全面。为今后临床治疗痤疮的外用制剂开发、功能性护肤品的研发以及该复方的深入机制研究奠定了一定的基础。