关键词： 中药学   中药制剂分析   实验教学   探讨  

摘要： 随着中药学一流学科与一流专业“双一流”建设的开展,中药学专业核心课程的实验实践教学建设在中药学专业人才培养中的地位和作用越发凸显。文章通过对中药制剂分析实验教学体系的构建展开思考和探索,构建中药制剂分析纵向与横向相结合的立体化实验实践教学体系,以期为中医药院校高素质创新性中药学人才培养提供理论支持。

关键词： 芪参壮骨丸   股骨头坏死   中医药疗法   临床疗效  

摘要： 目的:观察中药制剂治疗股骨头坏死的疗效。方法:将我院2016年7月-2018年7月收治的股骨头坏死患者120例随机分为2组各60例,观察组60例给予我院制剂芪参壮骨丸口服。对照组60例给予健骨生丸口服。治疗3个月后比较2组患者的临床总有效率。结果:观察组患者的临床总有效率为93.3%;对照组患者的临床总有效率81.7%,差异具有显著性(P<0.05)。结论:芪参壮骨丸治疗股骨头坏死临床疗效确切。安全可靠,值得临床推广。

关键词： SPF雏鸡   IBDV   中药提取物   抗病能力   病毒载量  

摘要： 为了确定中药提取物对IBDV感染的防治效果,将150羽SPF雏鸡随机分为对照组、模型组和中药提取物高、中、低剂量组,中药提取物高、中、低剂量组分别在饮水中添加10.0、5.0、2.5 g/L的中药提取物,连续添加7 d,对照组和模型组不添加任何药物。给药后,除对照组外,其余组雏鸡分别通过滴鼻接种IBDV,攻毒后连续观察2周。统计雏鸡的成活率,荧光定量PCR检测IBDV在组织中的载量,分析病毒在脏器中的分布。结果显示:中药提取物能提高雏鸡成活率,高、中、低剂量组雏鸡成活率分别为86.67%、93.33%和70.00%,高剂量组雏鸡脾脏和法氏囊指数显著降低,中剂量组的胸腺和法氏囊指数显著降低。高、中剂量组脾脏、胸腺、法氏囊病毒载量极显著低于模型组,脾脏、胸腺病毒载量极显著低于低剂量组,法氏囊病毒载量显著低于低剂量组。表明中药提取物能提高雏鸡的成活率,促进IBDV核酸转阴,改善脾脏、胸腺、法氏囊等免疫器官状况,降低病毒在脾脏、法氏囊、胸腺的载量,且中剂量组效果优于其他剂量组。

关键词： 黄曲霉毒素B1   食管癌   p38MAPK   人正常食管上皮细胞  

摘要： 目的:利用低浓度黄曲霉毒素B1（AFB1）长期连续处理人正常食管上皮细胞（HEEC）至30代,采用p38 MAPK蛋白特异性抑制剂（SB203580）抑制染毒30代细胞的p38 MAPK信号通路,观察HEEC的生长活力、周期、凋亡等生物学功能的改变,并检测上皮-间充质转变（EMT）相关蛋白、周期相关蛋白及p38 MAPK信号通路相关蛋白表达的表达。从而探讨AFB1在HEEC恶性转化过程中,发挥的致癌作用及其与p38 MAPK信号通路的关系,进一步探索AFB1在食管癌发生过程的相关分子机制,为食管癌的病因学研究奠定基础,为防止食品中AFB1对食管的毒性提供一定的理论依据。方法:（1）低浓度AFB1长期染毒HEEC致恶性转化作用研究:HEEC暴露于含0、0.01、0.1、1、10、100、1000μmol/L的AFB1培养液24 h后,检测其对HEEC活性的影响。随后选择1μmol/L AFB1长期连续处理HEEC 30代,以未染毒的HEEC为对照组,每间隔5代,观察细胞的生长形态,采用CCK8法来检测AFB1染毒不同代数的HEEC活力的影响,采用流式细胞仪检测不同代数细胞的细胞凋亡、细胞周期,采用Transwell法检测染毒30代细胞的侵袭、迁移个数的变化。（2）p38 MAPK信号通路在HEEC恶性转化细胞株的作用研究:AFB1染毒30代的细胞暴露于0、1、10、100、1000μmol/L的SB203580 24 h,检测SB203580对细胞活性的影响。随后选择0、25μmol/L的SB203580干预AFB1染毒30代的细胞24 h后,采用CCK8法检测SB203580对细胞活力的影响,采用流式细胞仪检测SB203580对细胞凋亡、细胞周期的变化。（3）HEEC恶性转化细胞株的功能相关蛋白表达:将正常食管上皮细胞、1μmol/L AFB1染毒30代的细胞株、1μmol/L AFB1+25μmol/L SB203580的染毒30代细胞株培养24 h后,采用Western blot法检测EMT相关蛋白（E-cadherin、N-cadherin）、细胞周期相关蛋白（cyclin A2、cyclin D1及CDK2）、p38 MAPK信号通路相关蛋白（p38、p-p38）的表达。结果:1.低浓度AFB1长期染毒HEEC致恶性转化作用研究:（1）当HEEC暴露于不同浓度AFB124 h后,随着AFB1浓度不断增加,细胞活力逐渐下降,呈剂量依赖性。半数抑制浓度（IC50）为169.3μmol/L。选择对细胞损伤较小的AFB1浓度:1μmol/L,长期处理HEEC。（2）细胞形态学观察发现,随着AFB1染毒代数的增加,细胞体积变大,形态松散、细长,伴有伪足形成,出现了类似EMT改变,与对照组有明显差异。（3）CCK8检测结果显示,与对照组相比,染毒初期（第5代、第10代）细胞增殖率升高（P<0.01）,染毒中期第15代细胞差异无统计学意义（P>0.05）,染毒中期第20代、染毒后期（第25代、第30代）细胞增殖率明显升高（P<0.01）。在长期低浓度AFB1作用下,细胞的增殖能力先升高,随后降低,然后再升高,在第30代增殖能力最强。（4）细胞周期检测结果显示,与对照组相比,染毒初期（第5代、第10代）细胞G0/G1期比例增加,S期比例降低,增殖指数PI=（S+G2/M）/（G0/G1+S+G2/M）降低（P<0.05）,染毒中期（第15代、第20代）细胞G0/G1期比例、增殖指数PI差异无统计学意义（P>0.05）。染毒后期（第25代、第30代）细胞G0/G1期比例降低,S期比例增加,增殖指数PI增加（P<0.05）,在长期低浓度AFB1作用下,细胞周期经历了G0/G1期阻滞,随着AFB1染毒代数的增加,细胞周期从G0/G1期向S期转化。（5）细胞凋亡检测结果显示,随着AFB1染毒代数的增加,细胞的总凋亡率变化趋势呈阶段性。与对照组相比,染毒初期（第5代、第10代）细胞总凋亡率逐渐增加,第15代细胞总凋亡率最高,随后,细胞凋亡率呈下降趋势（P<0.05）。与对照组相比,第30代细胞总凋亡率差异无统计学意义（P>0.05）。（6）细胞迁移、侵袭实验结果显示,与对照组相比,染毒第30代细胞迁移、侵袭数量均增加,差异有统计学意义（P<0.05）。2.p38 MAPK信号通路在HEEC恶性转化细胞株的作用研究:（1）当AFB1染毒的30代细胞暴露于不同浓度的SB203580 24 h后,随着AFB1浓度升高,细胞活力呈先降低再升高再降低的趋势（P<0.01）,IC 50值为85.36μmol/L。选择IC 50值的1/3浓度:25μmol/L对AFB1染毒30代细胞进行干预。（2）CCK8检测结果显示,与染毒30代细胞组相比,SB20358

关键词： 金属有机框架   模拟酶   光学法检测   黄曲霉毒素B1   葡萄糖  

摘要： 食品质量安全检测是保障人体健康不可或缺的重要部分。面对数量庞大的检测样本,监测难度大大增加。因此,迫切地需要开发出可以高效、快速、灵敏地检测食品中各类成分的新方法。光学法以其响应速度快、干扰小、设计简单、易操作等优点被广泛应用于各类检测。由于天然酶特异的催化性能,大多方法中使用了天然酶,但天然酶的提纯困难、价格高、稳定性差、需低温保存等缺点限制了这些方法的推广。新兴材料金属有机框架在提高酶稳定性和模拟天然酶方面得到了一定的应用。所以本文基于金属有机框架材料,结合光学分析手段对食品中的葡萄糖和黄曲霉毒素B1实现了快速检测,工作包括以下两部分:1.建立了高稳定性的对食品中葡萄糖的检测方法。首先将葡萄糖氧化酶、碳点在室温条件下共同包封在类沸石咪唑酯骨架材料中,将形成的纳米复合材料作为荧光探针,用于葡萄糖的检测。在中性条件下,复合材料可以高效地催化氧化葡萄糖生成H2O2,H2O2与Co2+之间通过类芬顿反应产生自由基（·OH）,使碳点的荧光发生猝灭,从而检测葡萄糖。构建的荧光探针在最适条件下检出限为0.16μM,回收率在106.8%～110.7%。本实验中葡萄糖氧化酶,碳点共包裹的金属有机骨架纳米复合材料在室温条件合成,且在常温下具有较高的稳定性,成功用于实际样品中葡萄糖检测。2.构建了一种免疫检测的新方法,即抗体修饰具有模拟酶活性的MOFs材料作为比色探针,磁性纳米材料与抗原结合形成具有竞争性且易分离的免疫探针。HKUST-1是一种Cu-MOFs,具有良好的模拟酶活性并且合成条件温和、稳定性高、表面含有丰富的官能团易于修饰。通过常温下的简单混合合成了包裹葡萄糖氧化酶的HKUST-1,然后修饰抗体形成抗体复合物。黄曲霉毒素B1（AFB1）与修饰抗原的磁性免疫探针竞争抗体复合物,当体系中存在的AFB1不足以完全封闭住抗体的结合位点时,修饰抗原的磁性免疫探针会与之结合。磁分离后进行比色测定,若复合材料中含有比色探针,则可以高效地催化葡萄糖生成H2O2,在HKUST-1类过氧化物酶存在下,H2O2作为中间产物,立即转化为·OH,氧化TMB,在652 nm处产生吸收峰。黄曲霉毒素B1浓度与吸光度在0.01～0.1 ng/mL范围内呈线性相关,检出限为0.004ng/mL。该材料具有良好的选择性与稳定性,可用于玉米样品的检测。

关键词： 医疗机构中药制剂   发展现状   产业发展  

摘要： 健康是社会文明和国家富强的重要标志之一。十八大以来,党和政府提出了“健康中国”战略,而中医药是“健康中国”的重要组成部分,得到了国家的高度重视。党中央、国务院高度重视中医药工作,已将中医药振兴发展提升为国家发展战略,中医药产业是国家重点发展的战略性新兴产业。《中医药法》的颁布实施,出台了一系列“1+N”促进中医药传承创新发展的意见和政策举措。国务院印发《中医药发展战略规划纲要(2016-2030年)》,明确指出到2020年,中国医疗、保健、科研、教育、产业、文化各领域得到全面协调发展,中医药产业成为国民经济重要支柱之一的发展目标。《湖南省实施〈中华人民共和国中医药法〉办法》立法前调研发现,医疗机构中药制剂的供需不对称、经济效益与社会效益不失衡,逐渐趋向萎缩的局面。本文基于中医药法视角,本着破除医疗机构中药制剂产业发展政策壁垒的目的,从基本概念入手,梳理其发展历史、管理架构的历史脉络和政策措施,针对医疗机构中药制剂产业发展的制约因素,提出对策建议。本文主要分为四个部分:第一部分是绪论,明确研究背景、研究目的、研究意义、研究对象和研究方法、国内外研究现状等。第二部分是相关概念及历史沿革。第三部分是对医疗机构中药制剂现状研究,包括医疗机构中药制剂发展现状理论研究和湖南省医疗机构中药制剂的发展现状调查研究,分析其现状及未来发展趋势。第四部分主要是指出医疗机构中药制剂发展存在的问题。第五部分是扶持和促进医疗机构中药制剂发展的策略建议。

关键词： 淡豆豉   黄曲霉毒素   产毒菌   拮抗菌   UPLC–MS/MS  

摘要： 目的通过检测淡豆豉自然炮制中不同时间点黄曲霉毒素（Aflatoxin,AFT）含量、筛选鉴定和定量产AFT菌（简称产毒菌）并测定其产毒能力,考察黄曲霉毒素B1（Aflatoxin B1,AFB1）拮抗菌的拮抗能力,初步分析产毒菌和拮抗菌在AFB1消长中的作用,为探讨淡豆豉炮制中黄曲霉毒素消长机制奠定基础,并为淡豆豉或其它发酵中药和食品中黄曲霉毒素的防控措施提供科学依据。方法一、淡豆豉自然炮制中AFT含量测定1、淡豆豉自然发酵炮制:本实验室前期按2020年版《中华人民共和国药典》简称《中国药典》已建立规范的淡豆豉炮制工艺,本研究按此工艺制备淡豆豉,获取淡豆豉不同炮制时间点的样本和成品淡豆豉。2、建立超高效液相色谱串联质谱法（Ultra Performance Liquid Chromatography Tandem Mass Spectrometry,UPLC–MS/MS）,测定淡豆豉不同炮制时间点样本中AFT的含量。二、淡豆豉自然炮制中产毒菌的筛选、鉴定、定量和产毒能力1、淡豆豉自然炮制中产毒菌的筛选和鉴定（1）产毒菌的筛选和菌落计数:根据AFT在紫外光照射下可发生蓝紫色或绿色荧光的原理,筛选分离出产生蓝紫色或绿色荧光的微生物并进行菌落计数。将产荧光菌初步定义为产毒菌。（2）产毒菌的初步鉴定:通过肉眼观察菌落形态和显微镜观察镜下形态结构初步鉴定产毒菌。（3）产毒菌的分子生物学鉴定:提取各产毒菌的DNA,应用18Sr DNA序列进行PCR扩增、对扩增产物进行基因测序分析,查找模板基因序列,构建系统发育树,对产毒菌进行鉴定。2、产毒菌的产毒能力考察应用UPLC–MS/MS法测定产毒菌发酵液中AFT含量,比较它们产AFT的能力。三、考察淡豆豉炮制中AFB1拮抗菌的拮抗能力(本实验室前期从淡豆豉炮制中分离鉴定出已报道能抑制AFT产生的5株有益菌（简称拮抗菌）如枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis,JX2）、鲑色锁掷酵母菌（Sporidiobolus salmonicolor,EJ1）、黑曲霉菌（Aspergillus niger,FC2）、屎肠球菌（Enterococcus faecium,BR5）、鸟肠球菌（Enterococcus avium,9R2）,分别考察这5株菌抑制产毒菌生长和降解AFB1的的拮抗能力)1、5株待测菌对产AFT黄曲霉标准菌生长繁殖的影响平板对峙法检测待测菌对产AFT黄曲霉生长的影响:取待测菌的种子液分别接种于马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA）等距的四端,在平皿中央接种黄曲霉标准株孢子悬浮液,以只接种黄曲霉标准株孢子悬浮液的平皿作对照,常规真菌培养条件下培养一定时间后,测定各平皿中黄曲霉标准株的菌落直径,计算抑菌率。抑菌率=（对照组黄曲霉菌落直径-实验组黄曲霉菌落直径）/对照组黄曲霉菌落直径×100%。2、5株待测菌发酵上清液对产AFT黄曲霉标准株生长的影响取各待测菌的发酵上清液分别PDA培养基混匀倒入平皿中,以未加发酵上清液的PDA培养皿作为对照组,待凝固后于平皿中央接种等量的产AFT黄曲霉标准株孢子悬浮液,常规真菌培养条件下培养一定时间后,测定各平皿中黄曲霉标准株的菌落直径,计算抑菌率。抑菌率=（对照组黄曲霉菌落直径-实验组黄曲霉菌落直径）/对照组黄曲霉菌落直径×100%。3、5株待测菌对AFB1的降解能力在培养液中分别接种5株待测菌与相同浓度AFB1标准品进行摇床培养（以只加相同浓度AFB1标准品、未接种待测菌的培养液作对照）,摇床培养一定时间后,离心,取上清液,用UPLC–MS/MS检测上清液中的AFB1含量。AFB1降解率（%）=（对照组AFB1含量-试验组AFB1含量）/对照组AFB1含量×100%。结果一、淡豆豉炮制和取样淡豆豉炮制过程中每3天取样一次,“黄衣上遍”阶段分别为记为发酵0天、发酵3天、发酵6天,“再闷”阶段分别记为再闷3天、再闷6天、再闷9天、再闷12天、再闷15天和蒸后成品,编号分别为F0、F3、F6、Z3、Z6、Z9、Z12、Z15和Z蒸。二、淡豆豉自然炮制中不同时间点4种AFT（黄曲霉毒素B1,AFB1;黄曲霉毒素B2,AFB2;黄曲霉毒素G1,AFG1;黄曲霉毒素G2,AFG2）含量测定结果使用UPLC–MS/MS法测定4种AFT含量,方法学考察良好,表明此方法适合于淡豆豉中的AFT含量测定;测定结果表明AFT的含量在淡豆豉自然炮制过程中呈动态变化。1、建立了淡豆豉中4种AFT含量测定的UPLC–MS/MS方法样品处理和免疫吸附前处理请加上去使用超声提取法提取样品中的黄曲霉毒素以及使用免疫亲和柱对样品进行净化。（1）线性关系考察:以各浓度（ng/m L）标准品为横坐标x,对应的峰面积为纵坐标y,计算得出AFB1的标准曲线方程为y=402087x+7996.2,r=

关键词： 黄曲霉毒素B1   玉米赤霉烯酮   核酸适配体   纳米金   金纳米棒   类葡萄糖氧化酶活性   蚀刻效应   荧光淬灭  

摘要： 黄曲霉毒素B1（Aflatoxin B1,AFB1）和玉米赤霉烯酮（Zearalenone,ZEA）具有强烈的致癌、致畸、致突变性和免疫损伤等,可通过污染农产品、食品和饲料或者间接污染动物产品（乳、肉、蛋）等方式进入食物链,严重影响到食品安全进而对人类健康造成威胁。因此,提高对食品中AFB1和ZEA污染水平及含量的监管,建立准确有效检测AFB1和ZEA的方法对于人类健康意义重大。本课题将比色和蚀刻方法可视化的特点以及荧光方法操作简单和信号响应快等优点与特异性强的核酸适配体（Apt）相结合,借助纳米金颗粒（Au NPs）的类酶活性和荧光淬灭特性,以及金纳米棒（Au NRs）的蚀刻效应,制备了三种用于真菌毒素AFB1以及ZEA检测的适配体光学传感器。具体研究内容如下:1.利用金纳米颗粒（Gold nanoparticles,Au NPs,Au）的类葡萄糖氧化酶活性作为催化葡萄糖（Glu）产生过氧化氢（H2O2）的材料,核酸适配体作为特异性识别元件,通过Apt和AFB1竞争结合Au NPs控制Au NPs的类酶催化活性,在显色剂ABTS的作用下展现出深浅不同的可视化效果用于AFB1的检测。研究表明,金属纳米材料的类酶活性较酶本身稳定性好、成本低廉。对实验参数进行优化,得到1/4 Au为最佳催化活性,0.2 M Glu为最佳浓度,催化Glu的反应时间为30 min,反应温度为室温,最佳p H为7,最佳有机溶剂体系是10%的甲醇,最佳反应时间为10min,最佳适配体浓度为0.1μM,在最佳条件下的得到AFB1的线性范围是1～70 ng/m L,检出（LOD）为0.8 ng/m L。对加标样品进行检测,得到加标回收率为88.1%～109.26%。2.为了提高可视化检测的灵敏度和响应速度,利用辣根过氧化物酶（HRP）蚀刻蓝绿色Au NRs,呈现出青、蓝、紫、粉、无、黄的丰富颜色变化,建立了基于核酸适配体结合金纳米棒蚀刻的AFB1多色传感器检测方法。经实验优化可知,当HRP浓度为0.02μg/m L,酶活反应时间为5 min,反应在室温下进行,Au NRs:CTAB最佳比例体积为1:4,适配体浓度为0.5μM时,在0.01～0.5 ng/m L范围内AFB1浓度与紫外可见吸收光谱变化呈良好的线性相关,检出限（LOD）为0.008 ng/m L。该比色传感器对AFB1具有良好选择性。对实际样品进行加标检测,AFB1的回收率为81%-119%,相对标准偏差（RSD）均低于10%。3.为了进一步提高传感器信号的灵敏度和检测目标的多元化,羧基荧光素（FAM）标记的AFB1适配体（FAM/Apt）以及罗丹明（ROX）标记的ZEA适配体（ROX/Apt）作为荧光探针,构建了Au NPS-FAM/Apt-ROX/Apt双色荧光信号增大型适配体传感器,用于AFB1和ZEA的同时检测。优化后得到最佳工作条件:FAM-Apt-1和ROX-Apt-2为最佳适配体链;Apt与Au NPs的孵育时间为20min,反应体积为40μL;Apt与毒素的孵育时间为10 min,反应体积为50μL;PBS（p H=8.5）缓冲液为工作液,室温为工作环境,在以上最佳条件下建立标准曲线,得到AFB1的线性范围是0.01-50 ng/m L;ZEA的线性范围是0.01～200 ng/m L。AFB1和ZEA的检出限分别为8 pg/m L、6 pg/m L。该传感器对AFB1和ZEA检测具有较好的特异选择性。对实际样品进行加标检测,AFB1的回收率为81%～119%,ZEA的回收率为86%～104.6%。

关键词： 黄曲霉毒素B1   电致化学发光   氮化碳   发光淬灭  

摘要： 迄今为止,黄曲霉毒素B1是人类所发现的毒性最强的天然致癌物,分布广,危害大,严重威胁着人体和动物体的健康。在毒性评估、食品安全和环境监测领域中,新型可快速检测痕量黄曲霉毒素B1的方法成为现代社会的迫切需求。检测速度慢、检测成本高、过程复杂且需专业人员操作等问题一直困扰着传统黄曲霉毒素B1检测方法,电化学发光检测速度快、成本低廉、过程简单,是一种综合性能优异的新型检测策略。基于碳基荧光二维纳米材料氮化碳,本文拟建立一种针对黄曲霉毒素B1的电致化学发光生物传感方法,主要工作如下:1、二维石墨相氮化碳（g-C3N4）纳米片制备及其作为发光底物探究;2、黄曲霉毒素B1氮化碳/核酸适配体电致发光生物传感器构建及性能评价;3、氮化碳/核酸适配体电致发光生物传感器检测机理分析。通过上述研究,初步建立了黄曲霉毒素B1氮化碳核酸适配体电致发光生物传感器方法,实现了在石墨相氮化碳制备温度550℃、过硫酸根浓度0.1 M、检测环境pH为7.4等最优化检测条件下黄曲霉毒素B1检测,其检出限低至0.004 ng/mL,线性范围宽至0.005 ng/mL～10 ng/mL,且具备良好的特异性以及优秀的抗干扰能力。本论文为高性能霉菌毒素生物传感器设计与构建提供一定的实验依据与理论参考。图45幅,表4个,参考文献93篇。

关键词： 花青素   胃肠代谢   黄曲霉毒素B1   血清白蛋白   相互作用   斑马鱼幼鱼   氧化胁迫  

摘要： 粮食作物如大豆、玉米、花生等在种植和采收期间极易被产毒真菌污染,储藏时未完全干燥或遇到潮湿的天气为霉菌生长提供适宜的条件,会大量产毒污染农作物。黄曲霉毒素B(Aflatoxin B,AFB)是黄曲霉毒素中污染范围最大、污染程度最严重、毒性最强的一种毒素。这种天然毒素会通过呼吸道和口腔进入人体,被吸收后易引发肝部疾病。花青素(Anthocyanin)是一种来自广大植物的功能活性因子,具有抗炎、抗氧化、抗癌等预防多种疾病的作用。但花青素在自然状态下并不稳定,在人体中胃肠道的酸碱环境和消化酶的作用下进行代谢降解,真正进入血液循环发挥生理活性的绝大多数是它的代谢产物。本次研究从黑豆种皮中提取花青素,模拟人体胃肠代谢,并检测花青素的代谢产物,研究花青素及其代谢产物对AFB的毒性干预。旨在通过提高食源性功能因子—花青素的摄入,把AFB对人体的损害降低,为花青素能否作为膳食补充剂和防治AFB引起的肝损伤提供理论支撑。主要研究结论如下:1.黑豆皮花青素的制备及胃肠代谢的产物研究首先考察了流动相种类、梯度洗脱程序(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ)、洗脱流速(5、8、10、12mL/min)、进样量(0.8、1.0、1.2、1.5、1.8 mL)对黑豆皮花青素纯化制备的影响,其次模拟胃肠消化条件,在前人研究的基础上,验证花青素的胃肠代谢情况。结果表明,5%乙酸水溶液和100%乙腈对黑豆皮花青素的洗脱能力最好,最佳洗脱流速和进样量分别是8 mL/min和1.2 mL。黑豆皮花青素的主要成分是矢车菊素-3-O-葡萄糖苷(Cyanidin-3-O-glucoside,C3G),经制备液相纯化后,C3G(1 mg/mL)的色价由10.64(U/g)提高到70.26(U/g),提高近6.6倍。C3G在胃环境中相对稳定,肠环境下不稳定,其分子结构的C环断裂生成3,4-二羟基苯甲酸(Protocatechuic acid,PCA)和2,4,6-三羟基苯甲醛(Phloroglucinol aldehyde,PGA)2种主要产物。2.花青素对黄曲霉毒素B与血清白蛋白结合的干预作用研究体外模拟人体生理条件(p H 7.4,离子浓度0.1 mol/L),利用荧光光谱法研究花青素及其2种代谢产物(C3G、PCA、PGA)对AFB与HSA相互作用的影响。结果表明,C3G、PCA和PGA均能够抑制AFB与HSA的结合,抑制强弱顺序为:PGA>C3G>PCA。AFB通过非共价作用淬灭HSA的荧光,并且自发进行。PGA存在下,AFB对HSA荧光的淬灭有动态淬灭作用。PCA存在下,AFB与HSA的相互作用力类型不变,是静电作用;C3G/PGA存在下,AFB与HSA相互作用力类型是范德华力和氢键。傅里叶变换红外(FT-IR)光谱表明:HSA构象和主链结构在外源淬灭剂的作用下发生变化,α-螺旋含量降低,整体混乱度增加。3.花青素对黄曲霉毒素B致斑马鱼幼鱼毒性的保护作用研究选择斑马鱼幼鱼为实验动物模型,利用AFB诱导3 dpf(Days post fertilization,受精天数)脱膜的幼鱼建立氧化胁迫模型。然后在所选诱导浓度下,评价C3G/PCA对AFB致幼鱼毒性的保护作用。结果表明,AFB浓度达到60 ng/mL对斑马鱼幼鱼有致死作用,120 ng/mL暴露浓度下出现大批量死亡。80 ng/mL诱导浓度下,鱼体内ROS生成率最高,100 ng/mL浓度下,鱼体内细胞死亡率最高。C3G/PCA(5、10、20μg/mL)与AFB共同孵育,鱼体内ROS产生量和细胞死亡率随着给药时间的提前有相应的减少。AFB处理48 h后,鱼体匀浆上清液中ALT和AST升高,SOD、CAT和GSH降低,Caspase 9和Caspase 3活性增强;与模型组比较,C3G/PCA能够抑制ALT、AST、SOD、CAT、GSH、Caspase 9和Caspase 3的提高,表明C3G/PCA可能对通过AFB对幼鱼造成的氧化应激和细胞凋亡起到保护作用。