关键词： 表面增强拉曼光谱   黄曲霉毒素B1   纳米材料   信号放大  

摘要： 黄曲霉毒素B1(AFB1)相对于玉米赤酶烯酮(ZEN)等真菌毒素,是毒性最强的天然有害次级代谢产物,被列为第一类致癌物。通过直接或间接方式严重威胁人类的身体健康。间接方式指湿热条件诱发花生等农产品被污染,在热处理和巴氏杀菌等常规食品加工中难以被破坏,而现有技术快速监控微量毒素仍具有挑战性。经人体长期食用,严重时导致肝细胞癌。所以,构建新型检测方法具有重要应用价值。作为提供分子结构信息的光谱技术,表面增强拉曼光谱(SERS)指激发光照射金属纳米材料产生增强的表面电磁场,分子的弱拉曼信号被放大多个数量级。基于高灵敏和抗荧光背景干扰等优势,SERS在食品安全的痕量检测中成为研究热点。但稳定性差的SERS信号易降低灵敏度。因此,本论文以改善检测定量信号为主,结合纳米材料和酶促反应的信号放大优势,采用适配体对靶标的高选择性,构建简单高效的SERS传感器,实现了花生中低浓度AFB1的快速监控。具体如下:1.基于磁性纳米花作为SERS基底的分离纯化优势,构建一种单信号稳定探针检测AFB1的标记型SERS传感器。拉曼信号分子4-巯基苯甲酸(4-MBA)内嵌于核壳金银纳米星(Au-4MBA@Ag NSs),修饰AFB1适配体作为高灵敏信号探针,金银合金和各向异性纳米粒子的尖端效应引起SERS信号显著增强。同时,四氧化三铁@二硫化钼纳米花(FeO@Mo S NFs)作为磁性基底。二者通过Mo S纳米片与核酸链的非共价作用实现组装,利用短时间磁分离富集4-MBA拉曼信号。在检测体系中,AFB1与适配体特异性结合诱导部分探针脱离基底,造成拉曼信号(I)线性减弱。结果表明,该传感方法在0.1 ng/m L至1000 ng/m L的AFB1浓度范围内呈负线性相关(拟合优度R=0.986),检测限为58.9 pg/m L,加标花生回收率为97.9%至98.7%。2.基于固有拉曼信号的氧化石墨烯(GO)作为4-MBA信号的校正内标(IS)和放大器,构建一种超灵敏检测AFB1的新型比率SERS传感器,以改善前章因单信号不可控波动引起灵敏度下降的问题。4-MBA嵌入核壳金银纳米球(Au-4MBA@Ag NPs),AFB1适配体偶联于银外壳作为SERS信号探针。氧化石墨烯薄膜作为保护层修饰在金纳米粒子/氧化铟锡玻璃上(GO/Au NPs/ITO),制备稳定内标基底,其良好便携性有利于现场检测。AFB1适配体通过π-π堆积作用吸附于GO,组装体的协同作用促进4-MBA信号放大。随AFB1浓度增加,适配体对靶标的高亲和力使探针被逐渐释放,导致4-MBA信号强度(I)下降,而GO信号强度(I)较稳定。结果表明,该传感方法基于比率值(I/I)在0.0001 ng/m L至100 ng/m L的AFB1浓度范围内呈良好负线性相关,信号归一化改善R至0.992,检测限低至0.1 pg/m L,加标花生回收率为91.6%至103.9%。3.基于氧化亚铜纳米材料的类过氧化氢酶催化反应,构建一种可靠检测AFB1的输出信号型SERS传感器。优势在于前两章基于SERS探针的间接检测法改变为酶促反应直接产生拉曼信号产物并进一步放大信号的方法。核酸序列部分互补引发材料自组装形成新型且可控的纳米复合物。本工作中,AFB1适配体及互补链分别修饰起SERS增强效应的中空金银合金纳米球(Au-Ag NPs)和起催化作用的氧化亚铜@金纳米立方体(CuO@Au NCs),经自组装形成“卫星”结构的纳米复合物。适配体更优先结合AFB1,进而调控纳米复合物自组装。在3,3’,5,5’-四甲基联苯胺/过氧化氢(TMB/HO)反应体系中,纳米复合物作为纳米酶催化生成其氧化产物ox TMB(固有的拉曼信号),扩散于组装体周围,显著增强信号强度。结果表明,该传感方法基于输出信号值(I)在0.001 ng/m L至100 ng/m L的AFB1浓度范围内呈良好负相关(R=0.991),检测限低至0.7 pg/m L,加标花生回收率为94.7%至101.4%。

关键词： 医院制剂   中药制剂   制剂生产   质量控制要点  

摘要： 规范医院制剂生产，提高制剂质量控制水平，使医院制剂规范化和标准化，是促进医院制剂发展的重点。医院中药制剂是近年来医院制剂重点发展方向，也为开发中药创新药提供更多候选药物。医院中药制剂主要以传统剂型为主，新剂型开发较少，生产与质量控制技术薄弱。为生产临床安全有效的医院中药制剂产品，本研究结合医院制剂生产与质量控制现状及实践工作经验，从医院中药制剂生产环境、人员、物料、设备、文件与配制管理、质量检验等关键环节质量控制要点进行阐述，并分类介绍医院中药制剂前处理工序，口服固体制剂、口服液体制剂、外用液体制剂以及外用半固体（固体）制剂的生产过程关键质量控制要点，为医院中药制剂生产与质量控制提供思路借鉴。

关键词： 赶黄草复方   AFB1   鸡肝损伤   炎症   氧化应激  

摘要： 西南地区地属湿热气候,黄曲霉菌在粮食和饲料中广泛存在。黄曲霉毒素B1（AFB1）是黄曲霉菌最主要的毒素之一,可导致动物肝脏损伤、生长抑制、营养不良、免疫力下降。现在许多国家对食品中AFB1的含量都进行了严格规定,AFB1的污染可造成大量食物浪费,严重影响农业生产,引发食品危机,对经济造成巨大损失,为社会带来不必要的危害。禽类产品在食品市场上占比巨大,因此保障禽类食品安全尤为重要。目前饲料中AFB1污染仍然十分严重,且农业部禁止在饲料中添加除中药外的其他药物,对畜禽加强饲养管理以及研究新型中药复方预防鸡黄曲霉毒素B1中毒显得尤为迫切,但是通过中药复方预防AFB1诱导的鸡肝损伤方面的研究还有所欠缺。本实验室前期通过辨证论治的方法自主研发新型中药复方,赶黄草复方（Penthorum chinense Pursh compound,PCPC）,此次研究探讨赶黄草复方对AFB1致鸡肝损伤的预防效果,研究其抗炎抗氧化功能,以促进赶黄草复方的开发利用,为解决鸡AFB1中毒问题提供理论依据。1、探究了PCPC预防AFB1致鸡肝损伤的效果。通过同时在饲料中添加药物与AFB1的方法观察PCPC对鸡肝损伤的预防效果,将试验鸡分为空白组（Control）、模型组（AFB1）、茵陈蒿汤组（YCHT）、赶黄草复方高剂量组（PCPC-H）、赶黄草复方中剂量组（PCPC-M）、赶黄草复方低剂量组（PCPC-L）六组,每组30只;试验期间观察其临床体征,收集体重、采食量等数据;采集试验14 d和28 d的血清和肝脏样本,检测鸡血液中的生理生化指标,计算脏器指数,制备鸡的肝组织病理切片。结果显示,试验28 d时,与Control组鸡比,AFB1组鸡体重降低,增重减少,差异极显著（P<0.01）,AFB1组鸡采食量下降,差异显著（P<0.05）,RBC数量、HB含量降低,差异极显著（P<0.01）;AST、ALP、TBIL、Urea、UA含量上升,TP、ALB含量下降,差异极显著（P<0.01）;鸡肝脏指数上升,差异极显著（P<0.01）。AFB1组鸡肝小叶大面积坏死,结构紊乱,细胞核变性坏死增多,出现脂肪变性和水泡变性,肝细胞间有血细胞充斥,肝细胞与窦状隙之间的狄氏间隙增宽。YCHT、PCPC-H、PCPC-M、PCPC-L组鸡给予药物预防,有效的缓解了这些状况的发生,其中PCPC-H、PCPC-M组效果较好。提示PCPC可有效预防AFB1诱导的鸡肝损伤。2、探究了PCPC对鸡肝脏中SOD、MDA、ROS、H2O2及NO水平的影响。采用ELISA检测鸡肝脏中SOD、MDA、ROS、H2O2及NO水平。结果显示,试验28 d时,与Control组鸡比,AFB1组鸡肝脏中SOD活性显著降低,MDA、ROS、NO、H2O2水平升高,差异极显著（P<0.01）;与AFB1组鸡比,PCPC-M组鸡肝脏中SOD活性升高,PCPC-H、PCPC-L组鸡肝脏中MDA水平降低,PCPC-M组鸡肝脏中ROS水平降低,YCHT、PCPC-H、PCPC-M、PCPC-L组鸡肝脏中H2O2水平降低,YCHT、PCPC-H、PCPC-M组鸡肝脏中NO水平降低,差异极显著（P<0.01）;PCPC-H组鸡肝脏中SOD活性升高,YCHT、PCPC-M组鸡肝脏中MDA水平降低,YCHT、PCPC-H、PCPC-L组鸡肝脏中ROS水平降低,PCPC-L组鸡肝脏中NO水平降低,差异显著（P<0.05）。提示PCPC可有效调节鸡体内的氧化与抗氧化平衡。3、探究了PCPC对鸡血清中TNF-α、IL-1及IL-8含量的影响。采用ELISA检测鸡血清中TNF-α、IL-1及IL-8含量。结果显示,试验28 d时,与Control组鸡比,AFB1组鸡血清中TNF-α、IL-1、IL-8含量上升,差异极显著（P<0.01）;与AFB1组鸡比,YCHT、PCPC-H组鸡血清中TNF-α含量降低,YCHT、PCPC-H、PCPC-M组鸡血清中IL-1含量降低,YCHT、PCPC-H、PCPC-M组鸡血清中IL-8含量降低,差异极显著（P<0.01）;PCPC-L组鸡血清中IL-8含量降低,差异显著（P<0.05）。提示PCPC可降低鸡炎症水平,减轻机体炎症反应。4、探究了PCPC对鸡肝脏中Nrf2和NF-κB信号通路中重要基因的影响。采用RT-PCR的方法检测鸡肝脏中Nrf2、Keap-1、H0-1、IкBα、NF-κB p65、TLR4、MyD88 mRNA转录量。结果显示,与Control组鸡比,AFB1组鸡肝组织中Nrf2、H0-1 mRNA转录量降低,Keap-1 mRNA转录量升高,差异极显著（P<0.01）;NF-κB p65、TLR4、MyD88mRNA转录量升高,IкBαmRNA转录量降低,差异极显

关键词： 重金属镉   黄曲霉毒素B1   Hep3B   超高效液相色谱-四极杆飞行时间串联质谱   代谢组  

摘要： 重金属镉和黄曲霉毒素B1(AFB1)是2种最常见的环境致癌物,均被国际癌症研究机构(IARC)列为人类Ⅰ类致癌物。摄入这2种致癌物,会对人和动物的生命健康造成极大危害。应用代谢组学技术研究致癌物的毒性作用机制,能够无偏见、全景式地发现致癌物对机体代谢通路的影响,有利于更加深入、全面地理解致癌物对机体的损伤,找到预防和治疗致癌物损伤的作用靶点以及用于评价损伤的生物标志物。因此,本研究我们拟进行重金属镉暴露小鼠肾脏和AFB1暴露Hep3B细胞的非靶向代谢组学研究,探究重金属镉和AFB1的毒性作用机制及对机体代谢通路的影响,为预防和治疗镉及AFB1致机体损伤提供潜在靶点及实验依据。首先,我们以小鼠为研究对象,研究重金属镉在小鼠体内的蓄积及排泄途径,并根据肝肾组织中的镉浓度选择代谢组学研究对象。48只小鼠随机分为对照组,低浓度组(25 ppm)和高浓度组(100 ppm),每组16只。小鼠通过自由饮水方式摄入镉,分别在第4周和第8周将每组各8只小鼠转移至代谢笼中收集尿液和粪便,然后经麻醉处死采集小鼠的肝脏和肾脏组织。我们应用电感耦合等离子体质谱技术(ICP-MS)测定小鼠尿液、粪便、肝脏和肾脏中的镉浓度。结果显示,镉暴露后小鼠粪便中的镉浓度远高于尿液中的镉浓度。在第4周和第8周,低浓度、高浓度组小鼠粪便中的镉浓度大约是尿液镉浓度的3680～9089倍,表明机体中的镉主要随粪便排出体外。因此,与传统的测定尿镉浓度相比,我们的研究表明采用ICP-MS测定动物或人粪便中镉浓度是筛查是否有镉暴露的高灵敏方法,值得推广。此外,测定结果表明,镉进入机体后在肝脏和肾脏中大量蓄积,小鼠肾脏中的镉浓度大约是肝脏镉浓度的2倍,说明肾脏是镉最主要的靶器官。镉在肝脏和肾脏中的蓄积会引起炎症、氧化应激等,从而造成肝肾损伤。其次,我们应用超高效液相色谱-四级杆飞行时间串联质谱(UPLC-QTOFMS/MS)技术对所有小鼠肾脏组织进行了非靶向代谢组学研究。色谱分离采用反相液相色谱(RPLC)和亲水作用色谱(HILIC)两种分离方法,质谱采集应用正离子(Positive)和负离子(Negative)两种离子化方式,共4种采集模式,简称为RPLC-POS、RPLC-NEG、HILIC-POS和HILIC-NEG。每个样本用上述4种模式采集数据,数据处理用Progenesis QI软件,代谢物鉴定通过检索Metlin和人代谢组数据库(HMDB)数据库实现。应用EZinfo软件进行多元统计分析,包括主成分分析(PCA)、偏最小二乘判别分析(PLS-DA)、正交偏最小二乘判别分析(OPLSDA)和单因素方差(One-way ANOVA)分析等。根据ANOVA(p)<0.05、变量投影重要性(VIP)>1和差异倍数(FC)≥1.5或≤0.67三个条件筛选组间差异代谢物。应用软件Metabo Analyst 5.0对筛选出的差异代谢物进行通路分析。研究结果表明,镉暴露引起小鼠肾脏广泛的代谢变化。在四种模式下(RPLCPOS、RPLC-NEG、HILIC-POS和HILIC-NEG)分别鉴定的代谢物数量为1334、1040、934和756,共鉴定2287个代谢物。根据ANOVA(p)<0.05,VIP>1,FC≥1.5或FC≤0.67三个条件,给药第4周时共筛选出184个差异代谢物,给药第8周时共筛选出324个差异代谢物。将筛选出的差异代谢物进行通路分析,发现镉暴露主要引起组氨酸代谢、氨酰-t RNA合成、嘌呤代谢、半胱氨酸和蛋氨酸代谢、甘油磷脂代谢、氨基糖和核苷酸糖代谢及丙氨酸、天冬氨酸和谷氨酸代谢等通路显著变化,其中镉暴露引起的氨基糖和核苷酸糖代谢紊乱是首次报道。每个代谢通路均有多个代谢物变化,且许多代谢物的变化趋势与文献报道一致,表明我们的数据覆盖率高,结果准确可靠。许多差异显著的代谢物可用于镉暴露引起肾脏损伤的早期评价,包括3-甲基-L组氨酸、L-色氨酸和尿酸等。最后,我们应用相同的UPLC-QTOF-MS/MS技术进行了AFB1暴露Hep3B细胞的非靶向代谢组学研究。Hep3B细胞经16μM和32μM AFB1处理6天后测定代谢组变化,对照组细胞用0.1%DMSO处理。结果表明,AFB1暴露的Hep3B细胞代谢轮廓发生显著变化。四种模式(RPLCPOS、RPLC-NEG、HILIC-POS和HILIC-NEG)下分别鉴定1227、665、825和840个代谢物,共鉴定2679个代谢物。根据ANOVA(p)<0.05,VIP>1,FC≥1.5或FC≤0.67筛选差异代谢物,去除重复值,四种分析模式共筛选出392个差异代谢物。将筛选出的差异代谢物进行通路分析,发现AFB1暴露于Hep3B细胞主要引起嘌呤和嘧啶代谢、甘油磷脂代谢、氨基己糖途径和唾液酸化、脂肪酸合成和氧化、TC

关键词： 肝纤方   中药复方   RNA-seq   肝纤维化   趋化因子通路  

摘要： 目的:肝纤方（GXF）作为一种中药方剂已在临床实践中用于治疗肝纤维化,但其作用机制尚不清楚。本研究通过四氯化碳（CCl4）诱导的大鼠肝纤维化模型探讨肝纤方的抗纤维化分子作用机制。方法:通过腹腔注射CCl4橄榄油混悬液构建大鼠肝纤维化模型。通过血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（AST）水平,组织病理学变化和肝组织羟脯氨酸（Hyp）含量评估肝纤方（1.58、3.15、4.73 g/kg/day）和扶正化瘀（FZHY,阳性对照,0.47 g/kg/day）的药效。通过将肝脏RNA测序（RNA-seq）数据与最近的肝脏单细胞测序（sc RNA-seq）研究相结合,探索潜在的分子机制。通过UPLC-MS/MS鉴别肝纤方的主要化合物并在大鼠肝星状细胞系（HSC-T6）上验证潜在药效物质。结果:动物实验结果表明,肝纤方高剂量治疗可显著逆转CCl4诱导的ALT和AST水平升高,且肝纤方高剂量组对肝脏的保护作用不亚于扶正化瘀组。肝纤方高剂量治疗减轻肝组织病理学损伤,ISHAK评分显示肝硬化（F5/F6）的发生率从76.5%下降到55.6%。肝脏羟脯氨酸含量结果与组织病理学变化趋势一致。RNA-seq分析显示差异基因（DEGs）主要富集在ECM-受体相互作用和趋化因子信号通路。肝纤方有效抑制胶原沉积并显著下调CCL2以抑制肝组织中巨噬细胞的募集。整合sc RNA-seq数据显示,肝纤方有效抑制损伤肝脏中与瘢痕相关的Trem2+CD9+巨噬细胞亚群和PDGFRα+PDGFRβ+肌成纤维细胞的增殖,并通过调节TGFβ/EGFR、PDGFB/PDGFRα和TNFSF12/TNFRSF12a信号通路干扰细胞间相互作用以重塑纤维化微环境。组分鉴定结果表明肝纤方的化合物组成主要包括黄芩苷、汉黄芩苷和苦参碱等,其中黄芩苷、苦参碱和橙皮素可以在体外抑制肝星状细胞增殖。结论:本研究阐明了肝纤方对CCl4诱导肝纤维化大鼠的改善作用及潜在分子机制,值得进一步推广和应用。

关键词： 金属螯合剂   纳米材料   适配体   比色   荧光   黄曲霉毒素B1  

摘要： 黄曲霉毒素B1（Aflatoxin B1,AFB1）是所有霉菌毒素中毒性最强的,作物在收获前后都容易受到AFB1的污染。AFB1可以通过人类和动物的饮食进入食物链,导致癌症、畸形和基因突变。因此,很多国家都对食品中可检出的AFB1浓度制定了低限量的标准。纳米技术和核酸适配体的发展给AFB1的检测方法研究带来了新方向。 本文以特异性强的AFB1适配体为识别元件,纳米材料为信号输出,乙二胺四乙酸二钠（EDTA·2Na）作为信号调节器,构建了三种黄曲霉毒素B1的检测方法。三种方法不断递进,依次进行改良。主要工作内容如下: （1）以二氧化硅（Silicon dioxide,Si O2）微球作为载体,表面搭载AFB1的适配体及EDTA·2Na构建检测探针,Au3+在柠檬酸三钠还原作用下生成金纳米颗粒（Gold Nanoparticles,Au NPs）作为检测信号;金属螯合剂EDTA·2Na调控Au3+生成聚集程度不同的Au NPs,构建了AFB1的比色检测平台。在最优条件下,本方法表现出较高的灵敏度和良好的选择性,在10-3～100 ng/m L范围内具有的线性关系,检测限低至0.19 pg/m L。该法还可以用于实际样品的检测,加标回收率在92.4%～107.98%之间,平均回收率为99.11%,重复性好。 （2）首先探究了不同浓度Ag+对Cd Se QDs荧光的淬灭作用,验证了Ag+能与Cd Se QDs发生阳离子置换反应。在此基础上,用单链DNA结合蛋白代替抗体,Si O2微球作为载体,表面搭载AFB1的适配体及EDTA·2Na构建检测探针,根据EDTA·2Na对Ag+的螯合作用调控Cd Se QDs荧光,构建AFB1荧光检测平台。该方法的检测线性范围为10-4～100 ng/m L,AFB1标样的浓度与Cd Se QDs的发光强度差值负相关,检出限为0.079 pg/m L。且该方法在实际样品检测中具有良好的适用性,回收率为96.32%～102.92%,重现性稳定。 （3）根据Cd2+对荧光底物低聚Au（Ⅰ）-硫醇盐复合物的聚集诱导发光AIE作用,合成量子产率高、发光能力强的金纳米簇（Gold Nanoclusters,Au NCs）作为检测信号。同时,与AFB1核酸适配体部分互补的c DNA修饰在Si O2微球表面,与修饰了EDTA·2Na的AFB1核酸适配体互补配对制备捕获探针,基于EDTA·2Na对Cd2+的螯合作用构建了AFB1检测传感平台。结果表明,当荧光底物低聚Au（Ⅰ）-硫醇盐复合物p H为7、Cd2+溶液与低聚Au（Ⅰ）-硫醇 盐复合物溶液的反应体积比为1:4、反应时间为10 min、Cd2+浓度为0.8 m M时,Au NCs的具有最佳发光效果。在最优条件下,AFB1浓度在10-6～0.1 ng/m L范围内时,与Au NCs的荧光强度呈线性相关,检出限为2×10-7 ng/m L,用于复杂食品基质中AFB1的定量测定时平均回收率为100.96%。与其他方法相比,该方法简单快速、稳定性好,有效提高AFB1的检出限。

关键词： 黄曲霉毒素B1   嵌插   去除   DNA   光谱  

摘要： 为了揭示体外利用DNA消除黄曲霉毒素B1（AFB1）的机理,我们通过共振光散射光谱探究了AFB1和DNA相互作用及各种环境共存物质对AFB1和DNA相互作用的影响,并引入DNA结合饱和值,评估AFB1和DNA相互作用及各种环境共存物质对AFB1和DNA相互作用影响的强弱,进一步指导构建和优化基于DNA嵌插作用的DNA选择性吸附AFB1的方法。此外,我们还通过速率模型、粒子间扩散模型、等温吸附模型和热力学模型等分析DNA吸附AFB1的过程,探索和揭示DNA选择性吸附AFB1的吸附机理。结果如下:（1）温度和pH均会影响AFB1-DNA体系的共振光散射光谱的特征峰强度,30℃、pH 7.40时强度最大,此时AFB1的结合饱和值为2.04。钠离子、钙离子和维生素E存在时AFB1的结合饱和值变大,分别为2.72、3.17和2.67,表明钠离子、钙离子和维生素E促进了AFB1和DNA的相互作用。D-葡萄糖和维生素C存在时AFB1的结合饱和值变小,分别为1.33、1.68,表明D-葡萄糖和维生素C存在减弱了AFB1和DNA的相互作用。（2）在了解AFB1和DNA的相互作用强度的基础上,我们利用DNA去除水溶液中的AFB1。当DNA用量为2×10-4g/m L,30℃,孵育80 min后AFB1的去除效率为90.05%,AFB1的吸附容量为153.24 mg/g。钠离子、钙离子和维生素E存在时AFB1去除效率比初始条件下高,分别为93.25%,95.48%,93.08%。D-葡萄糖和维生素C存在时AFB1去除效率比初始条件下低,分别为78.90%,82.36%。环境共存物质对结合饱和值的影响和对AFB1去除效率的影响一致,表明利用结合饱和值可以指导优化AFB1去除条件。（3）为了进一步探究水溶液中DNA吸附AFB1的过程,我们研究了吸附机理。采用Langmuir、Freundlich、Dubinin-Radushkevich模型对平衡等温线进行了线性回归分析,Freundlich等温线符合吸附过程。热力学参数和也进行了分析,发现吸附过程是自发的、放热的。采用拟一级、拟二级动力学模型描述动力学数据,AFB1的吸附更适合用拟二级动力学模型描述。吸附过程受表面扩散和孔隙扩散的双重控制。（4）在水溶液去除AFB1的优化条件下,将DNA去除AFB1的方法应用到花生油中的去除,其中加入AFB1标准品的金龙鱼花生油中AFB1的去除率为90.23±1.67%,吸附容量为145.03 mg/g,鲜榨的花生油中AFB1的去除率95.33±1.28%,吸附容量高达224.31 mg/g。此外,研究了DNA溶液和花生油的体积比例对去除效果的影响,DNA溶液体积占总体积比例越大去除效果越好。综上所述:本文为建立一种基于AFB1-DNA嵌插结合用于花生油中AFB1污染的新型消除方法奠定基础。

关键词： 农产品   黄曲霉毒素B1   伏马毒素B1   纳米酶   催化性能   即时检测  

摘要： 农产品质量与安全事关国运民生，而真菌毒素污染是影响农产品质量与安全最主要的风险，尤其是黄曲霉毒素 B1 (AFB1) 与伏马毒素 B1 (FB1)。其污染广、毒性强、危害大，严重威胁人民的生命健康。因此，开发快速检测技术是及时防止真菌毒素进入食物链的必要手段，但当前的快速检测技术主要瓶颈为稳定性差、灵敏度低、同步检测难，且无法满足现场快速精确定量的要求。针对上述挑战，本研究合成了催化性能优异、稳定性高的纳米酶信标材料，构建了对 AFB1 与 FB1 的高灵敏现场快速检测技术。具体研究结果如下：　　1. 以 MnO2 NSs 纳米酶标记抗原 FB1-BSA 合成了免疫信标抗原，建立了基于 MnO2 NSs 直接竞争纳米酶联免疫检测 FB1 的方法。在包被单克隆抗体浓度为 0.5 μg/mL、pH 为 7.4 与 10 mM PBS 缓冲溶液等最优的条件下，该方法 LOD 为 0.63 ng/mL，加标回收率为85.31-108.16%，与 LC-MS/MS 检测 FB1 结果具有很好的相关性 (R2=0.9892)，解决了传统酶联免疫检测技术的稳定性差、灵敏度低及成本高等难题。　　2. 通过氧化还原法制备了具有氧化酶样活性的 MnO2 NSs 纳米酶，构建了 AFB1 纳米酶免疫试纸条快检技术。利用 MnO2 NSs 纳米酶与 AFB1 单克隆抗体之间的静电吸附作用，合成了纳米酶免疫信标探针，其中， MnO2 NSs 与 AFB1 单克隆抗体偶联率达到 80%。通过拟合Michaelis-Menten 方程以计算 MnO2 NSs 纳米酶催化动力学的 Vmax 与 Km 参数，结果表明 Vmax 为 1.46×10-7 M/s与 Km 为 0.114 mM，从而证实了 MnO2 NSs 纳米酶催化速度快，亲和力高。信号放大前，该方法 LOD 为0.109 ng/mL，vLOD为0.2 ng/mL，消线值为 5 ng/mL;信号放大后，该方法 LOD 为 0.015 ng/mL，vLOD为 0.05 ng/mL，消线值为 200 ng/mL，与信号放大前结合分析，可形成 7 个多区段检测范围，与 LC-MS/MS 检测结果具有较好的相关性 (R2=0.9868)。因此，该方法的检测性能可满足不同组织或国家对农产品中 AFB1 限量要求，可对污染 AFB1 农产品快速实现现场多区段筛查，并指导其分级利用。　　3. 成功合成了具有过氧化物酶活性的Fe SAN，建立了单原子纳米酶免疫试纸条即时同步检测 AFB1 与 FB1 的技术。本研究通过对 MOF 前驱物热解以制备不同比例的 x wt% Fe SAN (x=0, 1, 5, 10)，表征结果显示，5 wt% Fe SAN 重叠度低，尺寸大小适中，最适合作为生物传感分析中的信标材料。然后采用 XAS 分析，结果表明 5 wt% Fe SAN 中 Fe 价态介于 Fe (+2) 和 Fe (+8/3) 之间，Fe-N 的配位数为 4.2 ± 0.3，证实了 Fe 元素以原子分散的形式存在。利用 DFT 理论计算了 Fe-NX-C 配位结构 (X=1，2，3，4，5，6) 的形成能与催化路径，结果表明，Fe-N4-C 配位结构最稳定，也阐明了 5 wt% Fe SAN 是通过催化 H2O2 产生羟基自由基而氧化底物 TMB 的催化路径。在信号放大前，该方法中 AFB1 和 FB1 的 LOD 分别为 0.0445 ng/mL 与 0.157 ng/mL;在信号放大后，该方法 AFB1 和 FB1 的 LOD 分别为 0.0028 ng/mL与 0.0139 ng/mL，分别与 LC-MS/MS 检测结果具有很好的相关性 (R2=0.9917) 与 (R2=0.9926)。因此，该方法不仅提高了传统试纸条检测灵敏度，降低了检测成本，而且具有同步快速与多区段检测等优势，可对农产品中 AFB1 和 FB1 进行现场即时检测。

关键词： 中药特色传承项目   医院制剂   应用策略  

摘要： 中药制剂在医院发展中占据着较高的地位，将中药特色传承项目应用于医院制剂中，不仅可以促进医院制剂的发展，还能使中药文化得到有效传承。目前，我国对于医院制剂提出的要求已经发生了改变，如果医院在临床治疗中应用市场无供应的制剂会引发不良事件发生。同时，我国医院工业处于不断进步与发展中，制药企业生产的药品质量及种类可有效满足当前社会的实际需求，并且也为医院制剂的发展开辟了新的道路，为临床治疗用药及临床特色制剂的发展提供了良好地发展空间。

关键词： 姜黄素   黄曲霉毒素B1   氧化应激   炎症   干预  

摘要： 黄曲霉毒素B1(Aflatoxin B1,AFB1)是黄曲霉菌和寄生曲霉菌的代谢产物,会引起食源性中毒、诱发肝癌,因其毒性强烈、无特效药且容易污染暴露而被列入“Ⅰ类致癌物质清单”,成为阻碍动物生产、影响人类健康以及造成巨大经济损失的世界性难题。如何有效保护AFB1亚慢性中毒对人或动物造成的危害已成为研究热点。AFB1亚慢性中毒会导致动物生产性能下降,引发氧化应激、炎症反应等损伤。姜黄素是从中药姜科植物姜黄等根茎中分离提取的活性化合物,具有易提取、成本低、无毒副作用等特点;具有良好的抗氧化、抗炎症、促进动物生长等生物学效应。本试验主要研究不同剂量姜黄素对AFB1亚慢性中毒小鼠的保护作用,目的是为姜黄素的进一步开发利用以及有效防控AFB1中毒提供理论依据和措施。在本试验中,将60只6周龄C57BL/6小鼠适应性饲养7日后随机分成6组,即空白对照组、AFB1组(0.75 mg/kg AFB1)、高剂量保护组(150 mg/kg姜黄素+0.75 mg/kg AFB1)、中剂量保护组(100 mg/kg姜黄素+0.75 mg/kg AFB1)、低剂量保护组(50 mg/kg姜黄素+0.75 mg/kg AFB1)和姜黄素对照组(150 mg/kg姜黄素)。通过小鼠的体重变化、精神状态和全身症状评分、血液生理常规参数指标、血清生化指标、病理解剖学检查、脏器指数(肝脏、肾脏、脾脏和肺脏)、组织显微病变(肝脏、肾脏、脾脏、肺脏和十二指肠)、血清氧化应激指标(T-AOC、T-SOD、CAT、GSH和MDA)、血清炎症因子含量以及肝脏炎症相关基因表达量的测定,评估不同剂量姜黄素对AFB1亚慢性中毒小鼠保护作用。试验研究结果如下:(1)临床观察和病理学检查。AFB1组小鼠体重显著低于空白对照组,并出现明显的精神抑郁和全身症状;病理学检查发现AFB1组小鼠的肝脏、肾脏和脾脏指数显著增大,肝脏有灰白色坏死斑点,胆囊体积增大,肝组织结构紊乱,细胞空泡样变性,肝窦炎性细胞浸润;脾组织白髓区细胞松散不整齐,与红髓区界限较模糊且红髓区充血明显;肾小管上皮细胞变性死亡,肾小囊腔间隙增大,肾小球萎缩。相比AFB1组,高、中剂量保护组染毒小鼠体重显著增高,肝脏、肾脏和脾脏指数显著降低,且组织损伤变化得到显著缓解;姜黄素对照组与空白对照组无显著差异。(2)血液生理生化指标变化。与空白对照组相比,AFB1组小鼠血液白细胞数量显著增加,红细胞数、血红蛋白含量和血小板数量显著降低,血清转氨酶(ALT、AST、γ-GT和ALP)活性显著升高,血清总蛋白和白蛋白含量显著减少以及血清中代谢物(BUN、CREA和UA)含量显著增加,表明AFB1组小鼠发生肝损伤和肾脏代谢功能异常。与AFB1组小鼠相比,高、中剂量的姜黄素能逆转AFB1所致的保护组小鼠白细胞数量、血清转氨酶活性和血清中代谢产物的升高以及均显著降低,红细胞数、血红蛋白含量、血小板数、血清总蛋白和白蛋白含量均显著升高的降低,表明姜黄素可以有效减轻AFB1亚慢性中毒对小鼠的血液生理生化指标的影响而发挥保护作用,但与空白对照组或姜黄素对照组有显著差异。低剂量保护组染毒小鼠与AFB1组小鼠差异不显著。(3)氧化应激和炎症反应。AFB1组小鼠血清中抗氧化酶CAT、SOD酶活性、T-AOC和GSH含量显著下降,MDA含量显著升高,血清炎症因子(IL-1β、IL-6、TNF-α和IFN-γ)含量以及肝脏炎症基因(IL-1β、IL-6、TNF-α、i NOS和NF-κB)表达量显著升高,说明AFB1诱导小鼠发生氧化应激和炎症反应,而高、中剂量保护组小鼠血清CAT、SOD酶活性、T-AOC和GSH含量显著升高,MDA显著下降,血清IL-1β、IL-6、TNF-α和IFN-γ含量以及IL-1β、IL-6、TNF-α、i NOS和NF-κB基因表达量显著下降,表明姜黄素可以通过显著增强染毒小鼠的抗氧化和抗炎能力而起保护作用,低剂量组小鼠虽然也有一定程度的减轻,但与AFB1组差异不显著。综上所述,本试验结果表明AFB1亚慢性中毒会导致小鼠生长性能下降、精神抑郁和全身症状,肝、肾和脾脏组织损伤,血液中生理细胞数量异常,血清转氨酶活性升高,肾脏代谢功能异常,抗氧化酶活性降低,过氧化物和炎症因子含量增加,肝脏炎症基因表达上升,而高、中剂量姜黄素对染毒小鼠发生的损伤具有良好的保护效果,但不能彻底消除。低剂量姜黄素(50 mg/kg)对AFB1亚慢性中毒无显著保护效果。本研究为动物真菌毒素中毒防控及新型饲料添加剂开发提供理论依据。