关键词：
火鸡组织滴虫
体外
体内
抑制效果
中药提取物
摘要：
组织滴虫病(Histomoniasis)是由单尾滴虫科组织滴虫属的火鸡组织滴虫(Histomonas meleagridis,***)引起的鸡形目禽类的一种原虫病,以盲肠肿胀、肝脏坏死和排硫磺样粪便为主要特征。该病多发生于火鸡,导致火鸡的高发病率和死亡率,鸡、鹌鹑、珍珠鸡和孔雀中也存在本病的流行。近年来,随着我国规模化养禽业的不断发展,组织滴虫病在我国很多地区有不同程度发生,部分鸡群死亡率达到20～30%,给养禽业造成巨大危害。该病目前尚无有效疫苗,有机砷和硝基咪唑等化学药物虽然在组织滴虫病的防治过程中发挥了巨大作用,但存在潜在的致癌性,出于公共卫生的考虑已被禁用或限制使用,导致该病流行日益严重,防治陷入困境。中药提取物以其低毒、低成本、无耐药性等优势在畜牧业生产中日益受到重视,本研究在火鸡组织滴虫体外分离培养体系和动物感染模型已成功建立的基础上,首先验证了青蒿素体内外抗火鸡组织滴虫活性,因其毒副作用不适合临床推广使用,又选取出10种具有抗原虫作用的中药提取物,分别进行体外抑制试验,针对体外有效抗虫药物进一步开展体内动物保护试验,进而选出体外和体内均有效的中药提取物,为其临床用于组织滴虫病的防控提供一定的参考依据。
1、青蒿素在体外和体内对火鸡组织滴虫的抑制效果
在体外培养的虫体中加入不同浓度的青蒿素,同时设立DMSO对照和替硝唑药物对照,将虫体置于40℃恒温培养箱中厌氧培养,每隔12h取样于血球计数板计数,观察药物对虫体的抑制效果。结果显示,各浓度青蒿素均能抑制火鸡组织滴虫的体外增殖,药物浓度和作用时间与虫体的抑制率成正相关,作用48h且浓度高于3mg/mL时可完全抑制虫体生长,1 mg/mL作用84 h为体外最低有效浓度。
体内抑制试验分为青蒿素不同剂量用药组、地美硝唑药物组、攻虫对照组和空白对照组,每组10只海兰褐壳蛋鸡,饲养至15d时,用药组和攻虫对照组每羽经泄殖腔接种剂量为2×105的火鸡组织滴虫JSYZ-F株,空白对照组接种等量空白培养基。攻虫后药物各组按照预定的浓度混饲给药,每天各组给予同种等量的饲料和饮水,15 d后全部称重、扑杀。以临床症状、发病率、病死率、脏器病变计分、平均增重、相对增重率作为体内抑制效果的评价指标。结果表明,各药物组的发病率和病死率均低于攻虫对照组,症状轻微、剖检均无感染火鸡组织滴虫的特征性病变。就增重而言,青蒿素各组平均增重显著高于攻虫对照组。青蒿素低剂量组(0.5 g/kg)发病率最低,相对增重率为83.34%,为3个青蒿素用药组中保护效果最好。本试验证实青蒿素在体外和体内均有一定的抗火鸡组织滴虫活性,但体内试验表明各剂量青蒿素对动物机体具有一定的毒副作用,会引起神经系统症状,不适于广泛临床应用,因此还需要对其他中药提取物进行扩大筛选,以寻求到广泛适用于临床防治组织滴虫病的候选中药。
2、10种中药提取物对火鸡组织滴虫的体外抑制效果
将不同浓度梯度的10种商品化中药产品或水提物分别加入预准备的M199培养基中,然后接种稳定传代生长的火鸡组织滴虫进行培养,每隔12 h进行虫体计数,观察药物对体外培养的火鸡组织滴虫的抑制效果,并确定有效药物的体外最低有效抑虫浓度。研究结果表明,鱼腥草素钠、大黄素、蛇床子素、白头翁均具有一定的体外抗火鸡组织滴虫的作用,体外最低有效抑制浓度分别为0.25 mg/mL、0.5 mg/mL、1 mg/mL、25 mg/mL,其中以鱼腥草素钠的有效作用浓度最低,效果最显著;补骨脂素、没食子酸、苦参碱、茜草素、金莲花仅在高剂量用药时具有一定的抗虫活性,但均不能完全抑制虫体体外生长,表现的抑制效果较差;花椒基本无抗火鸡组织滴虫活性。不同中药提取物抑制火鸡组织滴虫体外生长的活性存在差异,对于有效中药提取物而言,随着药物浓度增加和作用时间延长,对虫体的抑制效果越明显;而抑制效果较差的中药提取物,高浓度也无法完全抑制虫体体外生长。上述结果为进一步开展鸡体内中药提取物抑虫试验奠定了基础。
3、大黄素、蛇床子素、鱼腥草素钠对火鸡组织滴虫的体内抑制效果
选用已被证明具有体外抗火鸡组织滴虫活性的大黄素、蛇床子素和鱼腥草素钠开展体内动物保护试验。将饲养至15 d的SPF白来航鸡称重,每组10只共12组。用药组和攻虫对照组均经泄殖腔途径感染火鸡组织滴虫,空白对照组接种等量空白培养基。攻虫后各药物组按照体外试验结果确定的浓度给药,地美硝唑药物组以1 g/kg混饲给药。每天各组给予同种等量的饲料和饮水,观察临床症状,15 d后将鸡称重、扑杀,观察盲肠和肝脏的病变情况。以临床症状、发病率、病死率、平均增重、相对增重率和脏器病变计分作为体内抑制效果的评价指标。结果显示,用药后各组均无病死情况。大黄素用药组个别鸡出现发病症状,以低剂量组表现的增重和脏器保护效果最好,平均增重和相
欢迎来到三峡大学图书馆！
