关键词： 黄曲霉毒素B1   赭曲霉毒素A   纳米抗体多聚体   荧光免疫分析   铁蛋白  

摘要： 赭曲霉毒素A(Ochratoxin A,OTA)和黄曲霉毒素B(Aflatoxin B,AFB)作为某些丝状真菌产生的次级代谢产物广泛存在于农作物生产的各个阶段,具有强致癌、致畸、致突变作用,严重威胁着人类和动物的健康。因此对农作物中OTA和AFB风险物质进行快速检测和有效监控具有重要意义。基于免疫学的真菌毒素分析检测方法具有灵敏、简便快捷等特点,然而以传统单克隆抗体作为免疫识别元件,其繁琐的制备纯化步骤以及高昂成本给商业化免疫检测方法的开发带来沉重负担。纳米抗体(Nanobody,Nb)是目前已知的具有抗原结合能力的最小抗体片段,具有水溶性好、低成本、表达产率高等性质,自身易于基因改造的优势更是赋予了纳米抗体许多有趣的功能和特性,目前越来越多的纳米抗体被应用于食品安全分析、医学诊断等领域。本研究利用原核表达体系和基因工程手段制备了不同功能的抗AFB和抗OTA纳米抗体,并探究了真菌毒素纳米抗体五聚体在免疫分析方法中的应用。主要研究内容如下:1.基于真菌毒素纳米抗体五聚体建立双重荧光免疫层析方法经原核分别表达抗OTA纳米抗体VHH28和抗AFB纳米抗体G8与霍乱毒素B亚基(Cholera toxin B subunit,CTB)的融合蛋白,得到两种纳米抗体五聚体。间接竞争ELISA(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)测定两种蛋白半数抑制浓度(IC)值分别为0.19 ng/m L和2.60 ng/m L,之后将其作为传统单克隆抗体的替代物,以量子点微球(Quantum dot nanobeads,QBs)作为信号输出元件,构建了纳米抗体五聚体介导的双重荧光免疫层析试纸条,在最优测试条件下,肉眼判读试纸条检测OTA和AFB的灵敏度分别为0.5 ng/m L和0.75ng/m L。该试纸条与其他真菌毒素无交叉反应,加标实验和储藏稳定性测试结果表明该荧光免疫层析试纸条具有良好的准确度及稳定性,并且在玉米、小麦和大米实际样本检测中该荧光试纸条与UPLC方法的检测结果相一致。2.基于抗OTA纳米抗体五聚体构建均相FRET检测体系在获得抗OTA纳米抗体五聚体的基础上,以量子点(Quantum dots,QDs)作为荧光供体,花状纳米金(Gold nanoflowers,Au NFs)作为受体,构建了以纳米抗体五聚体为抗体识别元件的荧光共振能量转移(Fluorescence resonance energy transfer,FRET)均相免疫检测体系,分别探讨了供受体抗原抗体标记比例、受体投入体积和均相缓冲液条件对能量转移效率的影响。在最佳条件下,该方法检测灵敏度为5 pg/m L,线性检测范围为5-1000 pg/m L,特异性检验表明该检测方法具有较好的特异性,批内加标回收率为(64.31%-103.45%),批内变异系数为(0.69%-16.81%),批间加标回收率为(62.94%-95.00%),批间变异系数为(1.14%-14.76%)。3.抗OTA纳米抗体与铁蛋白亚基融合蛋白的原核表达及其活性分析分别将抗OTA纳米抗体VHH28融合在铁蛋白(Ferritin,Fep)亚基的C端和N端,构建了p ET15b-Fep-VHH28和p ET15b-VHH28-Fep融合表达载体后将其分别转化至Escherichia coli Rosetta(DE3)宿主菌中诱导表达,得到融合蛋白Fep-VHH28和VHH28-Fep,间接ELISA结果表明只有VHH28-Fep融合蛋白能与OTA-BSA结合,建立基于VHH28-Fep蛋白的间接竞争ELISA标准曲线,其IC值为2.47 ng/m L。对两种融合蛋白同源建模结果分别与OTA进行分子对接,结果表明VHH28纳米抗体在Fep蛋白亚基两端融合表达后其活性受到不同程度影响。

关键词： 全株玉米青贮   玉米籽粒   生物降解   黄曲霉毒素B1   呕吐毒素   玉米赤霉烯酮  

摘要： 近年来,随着畜牧业蓬勃发展,饲草料高效安全利用一直是畜牧领域研究热点。饲草料在生产、运输及贮存过程中易受霉菌污染,导致霉菌毒素如黄曲霉毒素B1(Aflatoxin B1,AFB1)、呕吐毒素(Deoxynivalenol,DON)和玉米赤霉烯酮(Zearalenone,ZEN)等超标。动物采食霉菌毒素超标的饲草料,会出现一系列中毒症状,如食量下降、饲草料转化效率降低、生产性能下降、免疫抑制甚至死亡。因此,高效降低饲草料霉菌毒素含量已成为饲草料行业亟待解决问题。本研究通过探究不同添加量(1%,5%,10%)芽孢杆菌及酵母菌对全株玉米青贮和玉米籽粒霉菌毒素脱毒效果,以期为微生物法降低饲草料霉菌毒素问题提供理论基础和技术支撑。主要研究内容如下:(1)芽孢杆菌和酵母菌体外发酵对全株玉米青贮中常见霉菌毒素脱毒效果试验材料为AFB1和DON超标的全株玉米青贮,试验设置芽孢杆菌(TD-1、TD-2、TD-3)和酵母菌(XD)处理组,添加菌液浓度为1%、5%和10%(基于鲜重),对照组无添加,水分控制在40%,恒温40℃下有氧发酵72 h,分别在24 h、48 h和72 h取样,测定不同添加量芽孢杆菌或酵母菌对全株玉米青贮中霉菌毒素含量影响,并计算对应脱毒率。结果表明:添加四种菌液均能降低全株玉米青贮中AFB1和DON含量,随着发酵时间增加,芽孢杆菌和酵母菌对霉菌毒素脱毒率也随之变化。添加5%的TD-3芽孢杆菌发酵24 h对AFB1脱毒效果最好,脱毒率为48.61%;添加10%的XD酵母菌发酵24 h对DON脱毒效果最好,脱毒率为59.23%。(2)芽孢杆菌和酵母菌体外发酵对玉米籽粒中常见霉菌毒素脱毒效果试验材料为AFB1、DON和ZEN超标的玉米籽粒,试验设置芽孢杆菌(TD-1、TD-2、TD-3)和酵母菌(XD)处理组,添加菌液浓度为1%、5%和10%(基于鲜重),对照组无添加,水分控制在40%,恒温40℃下有氧发酵72 h,分别在24 h、48 h和72 h取样,测定不同添加量的芽孢杆菌或酵母菌对玉米籽粒中毒素毒素的影响,并计算对应脱毒率。结果表明:四种菌液可不同程度降低玉米籽粒中霉菌毒素含量,且芽孢杆菌降解效果优于酵母菌,其中TD-1芽孢杆菌对玉米籽粒中AFB1、DON和ZEN脱毒效果最好,添加5%的TD-1芽孢杆菌菌液发酵48 h后,对AFB1脱毒率可达67.59%,DON脱毒率可达73.03%;添加10%的TD-1芽孢杆菌菌液发酵48 h后ZEN脱毒率可达65.71%。(3)芽孢杆菌和酵母菌对全株玉米青贮及玉米籽粒营养成分含量影响试验一和试验二中不同添加量芽孢杆菌和酵母菌后,好氧发酵24 h、48 h和72 h后,全株玉米青贮及玉米籽粒,取样后测定营养成分含量。结果表明:同一发酵时间,不同处理组的不同添加量对全株玉米青贮/玉米籽粒营养成分含量具有交互作用;且随着发酵时间增加,粗蛋白质和可溶性碳水化合物含量会有降低,粗灰分、中性洗涤纤维和酸性洗涤纤维含量没有显著影响(P>0.05)。综上所述,试验所用芽孢杆菌和酵母菌,可显著降低全株玉米青贮和玉米籽粒中所含AFB1、DON和ZEN毒素含量,其中对全株玉米青贮中AFB1和DON最高脱毒率分别可达48.61%和59.23%,对玉米籽粒中AFB1、DON和ZEN最高脱毒率分别可达67.59%、73.03%和65.71%

关键词： 黄曲霉毒素B1   表面修饰   磁性固相萃取   SiO2@Fe3O4   Mg/Zn-MOF74@Fe3O4   聚苯乙烯微球   微通道电阻免疫传感器  

摘要： 谷物是维持人类生命活动的重要组成部分,也是最容易受到真菌毒素污染的食品之一。黄曲霉毒素作为曲霉菌产生的真菌毒素,是迄今为止发现的最强致癌物,即使AFB在谷物中以极微量存在,其毒性也不容忽视。此外,谷物含有较多的淀粉和脂肪,这无疑增加了AFB提取富集和准确检测的难度。因此,亟需建立一种高效的样品预处理方法和高灵敏度的检测方法对谷物中痕量AFB进行分析。本研究对四氧化三铁(FeO)分别进行表面键合和表面包覆型修饰,得到具有良好分散性、均匀性和磁响应性的磁分离富集材料,结合微通道电阻免疫传感器,用于谷物中AFB的快速、准确检测。主要研究内容如下:1.微波辅助水热法合成FeO磁性纳米颗粒采用微波辅助水热法成功制备了FeO磁性纳米颗粒。研究了不同合成条件对FeO粒径均匀性、分散性和磁性能的影响,并通过一系列手段对FeO进行了表征。实验结果表明,最佳条件下合成的FeO呈现形状规则的球形,平均粒径约为300 nm,且在586 cm和3400 cm附近出现了Fe-O和-OH的吸收峰;测得的X射线衍射峰与标准完全对应;饱和磁化强度为65.13 emu/g。上述表征结果说明FeO粒径均匀、分散性好、磁性较好,且合成时间可由经典水热法的12-24 h缩短到1 h。2.基于Mg/Zn-MOF74@FeO磁固相萃取材料的微通道电阻免疫传感器检测谷物中黄曲霉毒素B的研究利用溶剂热法在FeO表面组装了双金属有机骨架材料(Mg/Zn-MOF74@FeO),将该材料作为磁固相萃取载体,结合微通道电阻免疫传感器进行检测。结果表明,合成的Mg/Zn-MOF74@FeO平均粒径为380-480 nm,对AFB的吸附容量约为8.921 mg/g,稳定性和重复使用性较好。所构建方法检测AFB的线性范围为10 pg/m L～20 ng/m L,检出限为4.75 pg/m L,加标回收率在78.13%～116.60%之间,且变异系数≤15.83%。在小麦盲样测试中,该方法与高效液相色谱法具有较好的一致性,在25～30 min内即可完成定量。3.基于Antibody-SiO@FeO免疫磁富集的微通道电阻免疫传感器检测谷物中黄曲霉毒素B的研究利用改进stober法在FeO表面偶联抗体作为免疫磁分离载体Antibody(Ab)-SiO@FeO,从而直接捕获提取液中的AFB,结合微通道电阻免疫传感器对目标物质进行定量分析。结果表明,SiO@FeO磁性纳米材料的平均尺寸约为280 nm,包覆层厚度约为20-30 nm,对AFB的吸附容量约为68.283 mg/g。检测结果显示AFB在10 pg/m L～50 ng/m L范围内线性关系良好,检出限为4.12 pg/m L,加标回收率在79.68%～110.67%之间,变异系数≤12.62%,且实际样品的检测结果与高效液相色谱法具有良好的一致性。该材料对AFB的吸附容量更大,无需洗脱,操作方便,在20 min内即可完成定量,与微通道电阻免疫传感器联用可简化操作程序,提高检测效率,实现AFB的高灵敏度、准确、便捷检测。

关键词： 磁性共价有机骨架   黄曲霉毒素B1   T-2毒素   吸附等温线   吸附动力学  

摘要： 真菌毒素是由各种真菌（主要是曲霉、镰刀菌和青霉）产生的有毒次级代谢产物。黄曲霉毒素是由黄曲霉产生的一种次级代谢产物,具有剧毒、免疫抑制和强致癌性。黄曲霉毒素B1（Aflatoxin B1,AFB1）是对多种生物体毒性、致癌性、致畸性和致突变性最强的黄曲霉毒素。T-2毒素是毒性最强的A型单端孢霉毒素,具有致畸性和弱致癌性。AFB1和T-2毒素会污染水和谷物并通过食物链进入人体,对机体造成伤害。因为食品基质成分复杂、目标物为痕量级,因此迫切需要研制可高效吸附AFB1和T-2毒素的吸附剂。共价有机骨架（Covalent organic framework,COFs）是新型的多孔晶体材料,具有比表面积大、热/化学稳定性好、孔径可调等优点。本文合成了新型Fe3O4@COFs材料,结合高效液相色谱串联质谱（High performance liquid chromatography tandem mass spectrometry,LC-MS/MS）作为检测手段,实现了对水中AFB1的吸附去除和食品中T-2毒素的吸附富集。主要研究内容及结果如下:（1）Fe3O4@COFs材料的合成。首先采用室温法和水热法分别合成了COFs和氨基化Fe3O4磁性纳米粒子,然后采用三种方法合成Fe3O4@COFs材料。方法一为通过戊二醛将COFs和Fe3O4磁性纳米粒子进行偶联合成Fe3O4@COFs材料。通过电子显微镜、N2吸附解吸曲线、傅立叶变换红外光谱等表征手段证明了复合材料的成功合成。基于Brunauer-Emmett-Teller模型（BET）的吸附数据,计算出比表面积为1293.32 m2g-1。方法二采用聚丙烯酸（Polyacrylic acid,PAA）对Fe3O4磁性纳米粒子进行表面修饰,通过EDC/NHS活化羧基后与COFs进行偶联合成Fe3O4@COFs材料。通过电子显微镜等表征手段证明了复合材料的合成,基于BET模型的吸附数据,计算出比表面积为545.41 m2g-1。方法三采用沉淀聚合法合成Fe3O4@COFs材料,对其进行透射电镜表征发现COFs形态结构发生严重变形,且整体团聚严重,与预期差别较大,因此不采用此种方法合成的Fe3O4@COFs材料进行下一步实验。理论上比表面积越大越有利于吸附,因此选择了方法一合成的Fe3O4@COFs材料进行下一步实验。（2）Fe3O4@COFs对水中AFB1的吸附去除。将合成的Fe3O4@COFs作为吸附剂从水中吸附和去除AFB1。通过吸附等温线和吸附动力学研究了Fe3O4@COFs对AFB1的吸附性能,结果表明,Fe3O4@COFs能有效吸附AFB1,吸附可在10 min内完成,去除效率可达90%以上,最大吸附量达到了420μg mg-1,吸附动力学模型拟合发现化学吸附是主要的限速步骤。可重用性实验表明Fe3O4@COFs至少可重复使用8次。通过分子模拟发现,COFs与AFB1之间存在“π-π”堆积和氢键多重相互作用。将Fe3O4@COFs应用于实际水样中,结果表明Fe3O4@COFs在去除实际水样中AFB1方面具有良好的应用效果。（3）Fe3O4@COFs对食品中T-2毒素的吸附富集。将合成的Fe3O4@COFs用作吸附剂,通过磁性固相萃取从食品中吸附富集T-2毒素。吸附行为表现出快速的吸附速率和较高的吸附容量。对实验中的萃取条件进行了优化,最后选择了Fe3O4@COFs用量为0.7 mg,洗脱剂为乙腈和甲酸的混合溶液,洗脱时间为30 min进行后续实验。通过吸附等温线和吸附动力学研究了Fe3O4@COFs对T-2毒素的吸附性能,结果表明,Fe3O4@COFs能有效吸附T-2毒素,吸附可在30 min内完成。可重用性实验结果表明Fe3O4@COFs可重复使用10次以上。通过分子模拟发现,COFs与T-2毒素之间存在“π-π”堆积和氢键的多重相互作用。将磁性COFs用于食醋中T-2毒素的吸附,吸附率达到90%以上,加标回收率为83.44%～88.60%,说明其具有良好的应用效果。

关键词： 中药提取物   和厚朴酚   烟草疫霉   抑菌机理   防治效果  

摘要： 烟草黑胫病是由烟草疫霉（Phytophthora nicotianae）引起的重要病害,严重影响着烟草的产量与质量,流行时可造成毁灭性灾害。生产中多以化学防治为主,但是化学药剂大多存在易残留、易产生抗药性等缺点;植物源杀菌剂因具有低残留、易降解、环保等优点,成为近年来的研究热点,在发展可持续性农业方面具有显著优势和良好的发展前景。以烟草疫霉为主要靶标,本研究开展抑菌植物提取物筛选、和厚朴酚抑菌机理及盆栽防效等相关试验,获得如下试验结果: 采用微波-超声萃取法和生长速率法,从8种中药材中提取并筛选出4种对烟草疫霉有显著抑制效果的植物提取物;进一步采用硅胶柱层析技术分离纯化追踪活性物质,通过UPLC-MS/MS技术得到881种化合物,经筛选验证发现和厚朴酚可显著抑制烟草疫霉的菌丝生长。此外,和厚朴酚显著抑制其它8种植物病原菌,其EC50在3.56-33.85μg/m L之间,发现其在马铃薯、茄子、葡萄、樱桃番茄、黄瓜等的保鲜上具有显著效果。 通过结晶紫-刚果红染色、扫描电镜和透射电镜观察,菌丝体相关酶活和能量代谢相关指标的测定以及转录组学数据分析等一系列试验,探究和厚朴酚对烟草疫霉的作用机理,结果表明,和厚朴酚破坏烟草疫霉的菌丝形态和细胞壁结构,增加细胞膜通透性,造成细胞内容物外泄,导致糖、蛋白质和相对电导率升高。此外,和厚朴酚增加超氧化物歧化酶（SOD）的活性,造成H2O2积累,导致细胞毒性增强,胞内活性氧（ROS）水平上升;降低过氧化氢酶（CAT）和ATP酶的活性;转录组学分析验证CAT相关基因下调,抑制三羧酸循环代谢通路,导致ROS积累,q RT-PCR进一步证实了结果。 采用温室盆栽试验和土壤微生物高通量测序等方法,探究和厚朴酚对烟草黑胫病的影响,结果表明,和厚朴酚降低烟草黑胫病的发病率和病情指数,显著提高对烟草黑胫病的防治效果;和厚朴酚显著降低细菌群落丰富度,降低镰孢菌的丰度,增加假裸囊菌的丰度;同时促进纤维素降解,有利于烟草植株的生长。上述试验为研发和厚朴酚作为广谱性植物源杀菌剂奠定研究基础。

关键词： 藜麦   中红外光谱   产地鉴别   掺假   多元统计分析   黄曲霉毒素B1  

摘要： 藜麦营养价值全面,价格较高,易导致其掺假。因此,发展一种准确快速鉴别掺假藜麦的光谱方法,对粮食安全和公共健康安全具有重要意义。本文将红外光谱和多元统计分析相结合应用于藜麦产地鉴别、藜麦粉掺假鉴别、新陈度鉴别和黄曲霉毒素B污染鉴别,完成的工作如下:1.用三步红外光谱法(FTIR、SD-IR和2D-IR)和主成分分析(PCA)、偏最小二乘判别分析(PLS-DA)相结合,进行了藜麦产地的红外光谱鉴别研究。光谱结果显示不同产地的藜麦在糖类及蛋白质物质含量及结构上有差异。PCA分析实现了将不同产地的藜麦数据聚类,PLS-DA分析对藜麦的产地分类结果取得了92.50%的验证精度和90.00%的预测精度,通过混淆矩阵对PLS-DA预测结果进行综合评价分析,分别取得94.18%、94.81%和99.70%的精确度、召回率和特异性。研究结果表明三步红外光谱法结合多元统计分析方法可实现藜麦产地鉴别。2.开展了掺假藜麦粉的红外光谱鉴别研究。通过ATR-FTIR光谱结合PCA分析、判别分析(DA)、回归分析(PLSR和PCR)对设置的7种藜麦粉掺假类型进行研究。光谱结果显示,掺假物比重增加的掺假藜麦粉在红外光谱的相关特征峰上显示出强度差异,PCA分析可实现对纯藜麦粉和掺假藜麦粉的聚类,但不能对其具体掺假浓度类别进行定性鉴别。以PC作为新变量导入DA中进行PCA-DA分析,结果显示PCA-DA分析对掺假藜麦粉的鉴别精度均达到90.00%以上。PLSR分析较PCR分析具有更好效果,可用于藜麦粉掺假浓度的定量分析,PCA-DA分析结合PLSR回归分析可实现藜麦粉掺假的定性鉴别和掺假浓度定量分析。3.开展了陈化藜麦的新陈度红外光谱鉴别研究。通过农家储存方式制备陈化时间为0.5年、1年、1.5年、2年、2.5年和3年的藜麦样本。光谱结果显示陈化过程中藜麦贮藏物质脂质和糖类在陈化过程先减后增,而蛋白质则一直减少。2D-IR图显示糖类物质是藜麦陈化过程中的变化敏感因子。PCA分析可将不同陈化程度藜麦聚类区分,载荷图显示其主要判别依据是糖类物质的差异。SIMCA分析结果显示成功对陈化1.5年以上的藜麦样本鉴别分类。研究结果表明:通过光谱分析结合PCA、SIMCA分析可实现藜麦陈化过程中贮藏物质变化规律研究和其新陈度的检测鉴别。4.开展了受黄曲霉毒素B(AFB)污染的藜麦红外光谱鉴别研究。设置了三个AFB污染程度的藜麦样本类别,并设置纯净且未被污染过的藜麦作对照组,通过光谱分析结合PCA分析、SVM分析和PLSR分析进行研究。光谱显示随着AFB污染加剧,藜麦中与蛋白质及脂质相关的峰产生变化。PCA分析可对不同污染度的藜麦大致聚类区分。通过PCA分析筛选有效PC变量,导入至SVM分类方法中作为新变量进行分析。PCA-SVM分析分别取得了98.91%的分类精度、98.91%的验证精度和95.83%的预测精度。PLSR回归分析方法取得了较好的R值和RMSE值(R=0.9941、R=0.9892、R=0.9706;RMSEC=0.1023、RMSECV=0.1401、RMSEP=0.2367;RPD=4.1573)。研究结果表明红外光谱结合PCA分析、SVM分类方法、PLSR回归方法可实现受AFB污染的藜麦的鉴别研究。论文工作表明,红外光谱技术可用于藜麦掺假鉴别研究,可为藜麦质量安全监控检测手段提供参考。

关键词： 褐篮子鱼   中药提取物   行为影响   耗氧率   排氨率   酶活性  

摘要： 近年来,鱼类繁殖领域的技术水平不断提升,鱼类养殖对象与规模也在持续扩大,同时养殖生产集约化水平越来越高,而环境带来的变化使得生长发育变得缓慢,繁殖能力越来越低,各种疾病的致死率越来越高,这些问题持续困扰着鱼类繁殖和养殖企业,因此,降低环境刺激对鱼的负面影响具有重要意义。传统药物长期大量使用会污染环境、导致养殖鱼类药物残留,不仅影响使用效果,还严重影响水产品品质,危害消费者健康。中草药作为纯天然产物,对自然环境不会造成污染;此外,中草药是我国传统医药领域内最为常见的药品,目前已有上千年的临床应用史,并且在发展过程中经历了长时间筛选,所保留下来的大都是有益无害的种类,再加上合理配伍使用,对动物的毒副作用小、无残留,安全性远远高于抗生素及化学药物,符合水产品绿色无公害的发展方向。试验所用复合中药提取物（以下简称中药提取物）组方以酸枣仁汤为基础加减化裁,制成水煎剂使用。褐篮子鱼是目前养殖较为普遍的篮子鱼种类,但褐篮子鱼抗应激能力较弱,在外界环境刺激时反应强烈,背鳍迅速张开,高密度时易互相扎伤形成体表损伤,且因其背鳍有毒,捕捞更易造成工作人员受伤。近年来,因其藻类摄食效率高,用于生态修复的研究越来越多,本文以褐篮子鱼为研究对象,探索中药提取物对褐篮子鱼代谢及抗抗氧化酶活力的影响,试验由以下三部分组成:1.中药提取物对褐篮子鱼行为的影响以平均体重44.55±3.48g的褐篮子鱼为研究对象,利用目前水产养殖使用最多的药物丁香酚和MS-222作为对比,分析中药提取物对褐篮子鱼行为的影响,试验分三组,每组测试5个浓度中药提取物[1.5、3、4.5、6和7.5%（v/v）]、丁香酚[3、6、9、12和15 mg/L]和MS-222[4、8、12、16和20 mg/L]),记录行为表现及起效和复苏时间。结果显示,随着药物浓度增加,起效时间缩短,完全复苏时间延长。达到适宜运输行为状态的药物浓度为4.5%的中药提取物、6mg/L的丁香酚和8mg/L的MS-222,在上述药物浓度下诱导褐篮子鱼至适宜运输状态所用时间中药提取物＞MS-222＞丁香酚,完全复苏时间中药提取物＞丁香酚＞MS-222。根据试验结果比较,试验所用中药提取物对褐篮子具有一定镇定效果,但药物作用缓和,达到相同镇定效果所用时间较长,且所用剂量较大。2.中药提取物对褐篮子鱼生理代谢的影响（1）通过纵向比较,观察同一种药物随着浓度的增大,褐篮子鱼耗氧率和排氨率是否呈现比列的变化,从而反映出此种药物对篮子鱼的刺激剧烈程度。比较中药提取物（0、1.5、3、4.5、6和7.5%）、丁香酚（0、3、6、9、12和15 mg/L）和MS-222（0、4、8、12、16和20 mg/L）作用1.5h对褐篮子鱼生理代谢的影响。试验结果显示,在1.5h试验中,中药提取物组耗氧率随浓度增加呈现先升高后降低的趋势,在浓度为1.5%时耗氧率高于对照组,但差异不显著（p＞0.05）;排氨率随浓度增加呈现显著降低的趋势（p＜0.05）,在6%时对褐篮子鱼排氨抑制最强,浓度增加至7.5%时褐篮子鱼排氨率无显著差异。丁香酚组和MS-222组随浓度增加均呈现先升高后降低的趋势,丁香酚和MS-222分别在3mg/L和4mg/L时,褐篮子鱼耗氧率均显著高于对照组（p＜0.05）,随着药物浓度增加,耗氧率显著低于对照组（p＜0.05）,说明丁香酚和MS-222在低浓度时引起了褐篮子鱼的应激反应。（2）通过横向比较,观察一定药物浓度（中药提取物[4.5%]、丁香酚[6mg/L]和MS-222[8mg/L]）连续作用4h和1h复苏期时,不同药物的作用效果随着时间延长而变化的特征及对褐篮子鱼生理代谢的影响。试验结果显示,连续作用4h期间,1/4h时褐篮子鱼耗氧率丁香酚＞对照组＞中药提取物＞MS-222,且差异显著（p＜0.05）,随着时间延长,2h时褐篮子鱼耗氧率对照组＞中药提取物＞丁香酚＞MS-222,但三种药物组间差异不显著（p＞0.05）,此后,中药提取物作用下褐篮子鱼耗氧率变化差异不显著（p＞0.05）,丁香酚和MS-222作用下褐篮子鱼耗氧率仍有显著于中药提取物的降低趋势（p＜0.05）,表明中药提取物具有降低褐篮子鱼耗氧率的作用,但对褐篮子鱼耗氧率的影响小于丁香酚和MS-222。三种药物作用下褐篮子鱼排氨率均显著低于对照组（p＜0.05）,在1/4h时中药提取物显著高于丁香酚和MS-222（p＜0.05）,在1h时中药提取物组排氨率下降最多,与丁香酚和MS-222组具有显著性差异（p＜0.05）,1h之后各组间排氨率无显著差异,说明中药提取物具有一定的降低褐篮子鱼耗氧率的作用,且对排氨抑制最强。（3）在1h复苏阶段初期,中药提取物组耗氧恢复显著提前于其他两组（p＜0.05）,排氨率显著滞后于其他两组（p＜0.05）。3.中

关键词： 黄曲霉毒素B1   普鲁士蓝   金纳米簇   核酸适配体   生物传感  

摘要： 近年来,真菌毒素引发的食品安全问题频频进入大众视野,对人和动物的生命健康构成严重威胁。黄曲霉毒素B1（Aflatoxin B1,AFB1）是毒性最强的真菌毒素,实现对食品中AFB1的快速、准确、高灵敏检测对保障人类生命健康具有重要意义。在众多检测AFB1的方法中,基于纳米材料的生物传感法具有高效、便捷、灵敏的优势,基于核酸适配体（Aptamer,Apt）的生物传感法具有特异性高、成本低的优势。但是,这些方法普遍存在信号输出单一、准确性不高的局限性。将纳米材料和Apt的优势相结合,开发一种多模信号输出的生物传感方法有望进一步提高检测结果的准确性。鉴于此,本文以普鲁士蓝纳米粒子（Prussian blue nanoparticles,PBNPs）和金纳米簇（Gold nanoclusters,AuNCs）为主体,合成了PBNPs-PEI@AuNCs新型纳米材料,开发了一种新型Apt生物传感检测方法,实现了AFB1的准确、高灵敏检测。主要研究结果如下:1.合成了PBNPs-PEI@AuNCs新型纳米材料用柠檬酸辅助合成了羧基修饰的PBNPs,用谷胱甘肽辅助合成了羧基修饰的AuNCs,以PBNPs为载体、PEI作为交联剂,通过羧氨反应将AuNCs结合在PBNPs表面,合成了PBNPs-PEI@AuNCs新型纳米材料。PBNPs-PEI@AuNCs由AuNCs均匀的包覆在PBNPs表面构成,颗粒呈立方体形状,尺寸在50±5 nm左右。PBNPs-PEI@AuNCs具有三重特性,其经Na OH分解后在600 nm处有荧光发射、可以催化3,3',5,5'-四甲基联苯胺和双氧水反应发生颜色变化、能将808 nm NIR激光能量转换成热量。2.构建了基于PBNPs-PEI@AuNCs多模信号检测AFB1的传感策略将PBNPs-PEI@AuNCs结合AFB1特异性Apt,制备了集目标物捕获与信号输出于一体的PBNPs-PEI@AuNCs@Apt探针,探针可输出荧光、比色、产热三重信号。探针特异性捕获AFB1被截留,收集探针溶液进行三重信号分析,得到荧光信号线性范围为10-14～10-8g/m L,检测限为0.64×10-14g/m L;比色信号线性范围为10-14～10-8g/m L,检测限为0.55×10-14g/m L;产热信号线性范围为10-12～10-8g/m L,检测限为0.96×10-12g/m L。通过加标回收、实际样品检测以及与商业化ELSA试剂盒检测结果对比,得到试验结果表明该方法满足分析检测要求。

关键词： 黄曲霉毒素B1   海鲈   生长性能   组织结构   毒素残留量  

摘要： 试验旨在研究饲料中添加黄曲霉毒素B1(AFB1)对海鲈生长性能、体成分、肝脏组织结构及毒素残留量的影响。选择初体重为（2.90±0.02）g的海鲈480尾，随机分为4组，每组3个重复，每个重复40尾鱼。在基础饲料中分别添加0（不添加AFB1,G0组）、0.1(G0.1组)、0.5 mg/kg(G0.5组)和1.0 mg/kg(G1.0组)的AFB1，配制4组试验饲料。采取饱食投喂，试验周期为56 d。结果表明：与G0组相比，G1.0组海鲈的末体重、增重率和特定生长率呈线性和二次方效应显著下降（P<0.05）,G0.5组和G1.0组海鲈的摄食量、肥满度和肠体比显著下降（P<0.05）,G0.1组、G0.5组和G1.0组海鲈的脏体比和肝体比显著下降（P<0.05）。各组间存活率、饲料系数、蛋白质效率及全鱼中水分、粗蛋白、粗脂肪和灰分含量无显著差异（P>0.05）。AFB1可诱导海鲈肝脏组织损伤，且随着饲料中AFB1含量增加，肝细胞出现变性、坏死及脂肪空泡化的程度越严重。海鲈肝脏中AFB1的残留量高于肌肉，随着饲料中AFB1添加量的增加，肝脏中AFB1残留量显著升高（P<0.05）。综上所述，饲料中添加0.1～1.0 mg/kg AFB1可降低海鲈生长性能，诱导肝脏组织损伤。AFB1在肝脏中的残留量高于肌肉，且与饲料中AFB1添加量呈正相关。