关键词:
溃疡性结肠炎
溃结安康汤
肠道菌群
自噬
炎症反应
小鼠
摘要:
目的探讨溃结安康汤调控免疫、自噬及肠道菌群治疗溃疡性结肠炎的作用机制。方法采用葡聚糖硫酸钠自由饮用建立溃疡性结肠炎小鼠模型,将小鼠随机分为空白对照组、模型组、溃结安康汤组、柳氮磺吡啶(SASP)组和3-甲基腺嘌呤(3-MA)组,每组12只。各给药组分别予相应药液灌胃,空白对照组和模型组予蒸馏水灌胃,连续7 d。观察小鼠一般状况,进行疾病活动指数(DAI)评分,HE染色观察结肠组织形态,ELISA检测结肠组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β、IL-6、IL-8、IL-10含量,RT-qPCR和Western blot分别检测结肠组织LC3、Beclin-1、p62 mRNA及蛋白表达,16S rDNA测序分析肠道菌群结构变化。结果与空白对照组比较,模型组小鼠体质量减少(P<0.05),DAI评分升高(P<0.05),结肠长度缩短(P<0.05),结肠黏膜严重损伤,炎性细胞浸润较明显,结肠组织TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8含量升高(P<0.01),IL-10含量降低(P<0.01),结肠组织LC3和Beclin-1 mRNA表达降低(P<0.05,P<0.01),p62 mRNA和蛋白表达升高(P<0.01),LC3Ⅱ/LC3Ⅰ和Beclin-1蛋白表达降低(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,溃结安康汤组、SASP组小鼠体质量增加(P<0.05),DAI评分降低(P<0.05),结肠长度增加(P<0.05),结肠黏膜病理损伤减轻,结肠组织TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8含量降低(P<0.05,P<0.01),IL-10含量升高(P<0.01),结肠组织LC3和Beclin-1 mRNA表达升高(P<0.05,P<0.01),p62 mRNA和蛋白表达降低(P<0.05,P<0.01),LC3Ⅱ/LC3Ⅰ和Beclin-1蛋白表达升高(P<0.05,P<0.01)。16S rDNA测序结果显示,模型组小鼠肠道菌群多样性及均匀度降低,厚壁菌门、放线菌门、Patescibacteria门相对丰度降低(P<0.05),拟杆菌门、疣微菌门、变形菌门相对丰度升高(P<0.05),杆菌纲、红蝽菌纲相对丰度降低(P<0.05),拟杆菌纲、梭状芽孢杆菌纲、疣菌纲相对丰度升高(P<0.05),利吉拉杆菌属、杜波菌属相对丰度降低(P<0.05),未分类的Muribaculaceae属、Lachnospiraceae_NK4A136_group属、阿克曼菌属、未分类的Lachnospiraceae属相对丰度升高(P<0.05);与模型组比较,溃结安康汤组和SASP组肠道菌群多样性和均匀度增加,厚壁菌门相对丰度升高(P<0.05),拟杆菌门、疣微菌门相对丰度降低(P<0.05),拟杆菌纲、杆菌纲相对丰度升高(P<0.05),疣菌纲相对丰度降低(P<0.05),未分类的Muribaculaceae属、利吉拉杆菌属相对丰度升高(P<0.05),Lachnospiraceae_NK4A136_group属、阿克曼菌属相对丰度降低(P<0.05)。结论溃结安康汤可显著改善溃疡性结肠炎小鼠结肠黏膜损伤,其作用机制可能与调节自噬水平及肠道菌群紊乱有关。