关键词:
卵巢颗粒细胞
烟酰胺单核苷酸
线粒体
氧化性应激
细胞凋亡
摘要:
目的探讨烟酰胺单核苷酸(nicotinamide mononucleotide,NMN)对过氧化氢(hydrogen peroxide,H_(2)O_(2))诱导人卵巢颗粒细胞系(COV434)损伤的保护作用及可能的作用机制。方法体外培养COV434细胞,采用不同浓度H_(2)O_(2)孵育细胞2 h,CCK-8筛选H_(2)O_(2)有效干预剂量,建立H_(2)O_(2)诱导的COV434细胞损伤模型。NMN预处理COV434细胞24 h后,使用CCK-8检测细胞存活率。将COV434细胞分为Control组、H_(2)O_(2)组、NMN+H_(2)O_(2)组,H_(2)O_(2)组采用0.5 mmol/L H_(2)O_(2)处理细胞2 h;NMN+H_(2)O_(2)组采用800μmol/L NMN预处理细胞24 h后再用0.5 mmol/L H_(2)O_(2)处理2 h。检测各组细胞活性氧类(reactive oxygen species,ROS)、线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,MMP)、三磷酸腺苷(adenosine triphosphate,ATP)情况。通过Western印迹法检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达及通路Nrf2/HO-1蛋白的表达。结果与Control组相比,H_(2)O_(2)组细胞活力下降,ROS产生增多,MMP、ATP水平下降,细胞核Nrf2水平及HO-1表达升高,细胞质Nrf2及Bcl-2/Bax蛋白水平均降低(P<0.05)。与H_(2)O_(2)组相比,NMN+H_(2)O_(2)组细胞活力明显提高,ROS产生减少,MMP、ATP水平升高;细胞核Nrf2、HO-1及Bcl-2/Bax表达均显著升高,细胞质Nrf2表达显著降低(P<0.05)。结论NMN预处理对H_(2)O_(2)诱导的COV434细胞氧化损伤具有保护作用,其机制可能与线粒体功能保护以及激活Nrf2/HO-1通路有关。