关键词:
扶正通络解毒方
慢性萎缩性胃炎
“炎-癌”转化
胃功能激素
炎症反应
癌症通路
小鼠
摘要:
目的探讨扶正通络解毒方(FTJF)干预慢性萎缩性胃炎(CAG)“炎-癌”转化的作用机制。方法(1)通过检索TCMSP、HERB及Swiss Target Prediction数据库,筛选出FTJF方中各中药的活性成分及其作用靶点;通过GeneCards、OMIM、Drugbank、TTD和DisDeNet数据库检索、筛选获得CAG“炎-癌”转化相关疾病靶点;使用Venny 2.1在线平台对FTJF活性成分作用靶点与CAG“炎-癌”转化疾病靶点取交集,获得FTJF干预CAG“炎-癌”转化的潜在作用靶点。通过Cytoscape 3.9.1软件构建“药物-活性成分-靶点”网络,并筛选出核心活性成分;通过STRING数据库进行潜在作用靶点蛋白互作(PPI)网络分析,筛选核心靶点;通过DAVID数据库对潜在作用靶点进行基因本体(GO)功能及京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析。(2)采用N-甲基-N-亚硝基脲(MNU)化学诱导法复制CAG“炎-癌”转化小鼠模型。将C57BL/6小鼠随机分为空白组、模型组及FTJF低、中、高剂量组(生药量9.56、19.11、38.22 g·kg^(-1)),每组10只,灌胃给药,每日1次,持续8周。采用苏木精-伊红(HE)染色法及阿利新蓝/过碘酸雪夫(AB/PAS)染色法观察胃黏膜组织病理变化;ELISA法检测血清胃功能激素胃蛋白酶原Ⅰ(PGⅠ)、胃蛋白酶原Ⅱ(PGⅡ)、胃泌素17(G-17)和炎性因子白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(L^(-1)β)的水平;q-PCR法检测胃黏膜组织肿瘤蛋白p53(TP53)、髓细胞增生原癌基因(MYC)、表皮生长因子受体(EGFR)基因表达水平。结果(1)共筛选得到199种活性成分,795个作用靶点,2074个疾病相关靶点,FTJF干预CAG“炎-癌”转化的307个潜在作用靶点。分析得到槲皮素、芹菜素、木犀草素、熊果酸等核心活性成分;TP53、AKT1、GAPDH、MYC、EGFR、VEGFA、TNF、JUN、CASP3、INS等核心靶点;KEGG通路富集分析主要涉及癌症通路、乙型肝炎、PI3K/Akt信号通路等。(2)与空白组比较,模型组小鼠胃黏膜结构严重破坏,细胞排列紊乱,可见大量炎性细胞浸润,细胞明显空泡样变,腺腔形成大小不等的黏液湖,有分泌酸性黏液的肠化生腺体形成;部分黏膜呈锯齿样或U型管样,两个或多个腺腔单层上皮变为多层无规则排列、无管腔结构的细胞团,表现出组织异型性;血清PGⅠ水平显著降低(P<0.001),PGⅡ、G-17、IL-6、TNF-α、IL-1β水平均显著升高(P<0.001);胃黏膜组织TP53 mRNA表达显著下调(P<0.001),MYC、EGFR mRNA表达显著上调(P<0.05,P<0.01)。与模型组比较,FTJF各剂量组小鼠胃黏膜组织细胞形态异常情况均有所好转,炎性浸润区域减少,空泡样变、黏液湖及组织异型性减少;血清PGI水平显著升高(P<0.05,P<0.001),PGⅡ、IL-6、TNF-α水平均显著降低(P<0.05,P<0.01,P<0.001);胃黏膜组织TP53 mRNA表达显著上调(P<0.05,P<0.01),MYC、EGFR mRNA表达显著下调(P<0.05,P<0.01)。FTJF中、高剂量组的血清G-17、IL-1β水平显著降低(P<0.05,P<0.01,P<0.001)。结论FTJF可能通过槲皮素、芹菜素等多种活性成分,调节胃功能激素分泌水平、减轻炎症反应、下调癌症信号通路,发挥干预CAG“炎-癌”转化的作用。