关键词:
浆细胞瘤转化迁移基因1
微小RNA-194-5p
神经纤毛蛋白1
缺血性脑卒中
神经炎症
细胞凋亡
摘要:
目的探讨长链非编码RNA(Long non coding RNA,LncRNA)浆细胞瘤转化迁移基因1(Plasmacytoma variant translocation gene 1,PVT1)调节微小RNA(MicroRNA,miR)-194-5p/神经纤毛蛋白1(Neuropilin-1,NRP1)轴对缺血性脑卒中神经炎症和细胞凋亡的影响。方法体外常规培养的人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y记为Control组,氧糖剥夺(Oxygen glucose deprivation,OGD)建立细胞模型,并根据不同处理方式分为Model组、sh-PVT1阴性对照(sh-NC)组、sh-PVT1组、sh-PVT1+anti-miR-194-5p阴性对照(anti-NC)组、sh-PVT1+anti-miR-194-5p组;定量逆转录聚合酶链反应(Quantitative reverse transcription polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测LncRNA PVT1,miR-194-5p,NRP1 mRNA相对表达水平;双荧光素酶实验检测LncRNA PVT1与miR-194-5p,miR-194-5p与NRP1调控关系;细胞计数(Cell counting kit-8,CCK8)实验检测细胞增殖;酶联免疫吸附试验(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测白细胞介素(Interleukin,IL)-6、IL-1β、肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)水平;流式细胞仪检测细胞凋亡;Western blot检测增殖细胞核抗原(Proliferating cell nuclear antigen,PCNA)、B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein,Bax)、NRP1蛋白表达水平。结果与Control组比较,Model组LncRNA PVT1,NRP1 mRNA及蛋白、细胞凋亡率、IL-6,IL-1β,TNF-α,Bax表达增多,而miR-194-5p、存活率、PCNA,Bcl-2表达减少(P<0.05);与Model,sh-NC组比较,sh-PVT1组LncRNA PVT1,NRP1 mRNA及蛋白、细胞凋亡率、IL-6,IL-1β,TNF-α,Bax表达减少,而miR-194-5p、存活率、PCNA,Bcl-2表达增多(P<0.05);与sh-PVT1组、sh-PVT1+anti-NC组比较,sh-PVT1+anti-miR-194-5p组LncRNA PVT1表达无明显变化,NRP1 mRNA及蛋白、细胞凋亡率、IL-6,IL-1β,TNF-α,Bax表达增多,miR-194-5p、存活率、PCNA,Bcl-2表达减少(P<0.05);双荧光素酶实验显示,miR-194-5p mimic组较mimic-NC组的荧光素酶活性降低(P<0.05)。结论敲低LncRNA PVT1可通过调节miR-194-5p/NRP1轴来抑制细胞凋亡和炎症反应,提高细胞存活率,减轻缺血性脑卒中。