关键词:
益气活血固肾颗粒
糖尿病肾病
Nox4
炎症
氧化应激
肾脏纤维化
小鼠
摘要:
目的 探讨益气活血固肾颗粒对糖尿病肾病(DN)模型小鼠的治疗作用及其抑制炎症和氧化应激的相关机制。方法 将40只C57BL/6雄性小鼠随机分为正常组、模型组、益气活血固肾颗粒组(585 mg·kg^(-1))、二甲双胍组(100 mg·kg^(-1))。采用高脂饲料喂养结合腹腔注射链脲佐菌素(STZ)建立糖尿病肾病小鼠模型。造模成功后,按上述剂量给药,每日1次,连续10周。测量小鼠体质量、血糖、血脂等糖脂代谢水平及脏器系数、血清肌酐、尿素氮、蛋白尿等肾功能指标;采用Masson、PAS、HE染色观察小鼠肾脏病理变化;采用ELISA法检测小鼠炎症因子白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平,用试剂盒测定氧化应激指标过氧化氢酶(CAT)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)水平;采用RTPCR及Western Blot法检测肾组织中纤维化指标肌动蛋白(α-SMA)、转化生长因子β2(TGF-β2)、E-钙粘着蛋白(E-cadherin),以及炎症通路指标炎性小体(NLRP3)、1L-1β、炎性半胱氨酸蛋白酶(Caspase-1)和氧化应激通路指标Kelch样ECH关联蛋白1(Keap1)、核因子E2相关因子2(Nrf2)及炎症和氧化关联靶点NADPH氧化酶4(Nox4)的基因和蛋白表达。结果 与正常组比较,模型组小鼠体质量、血糖、肝脏系数、肾脏系数、血尿素氮(BUN),尿蛋白(UAE)、血肌酐(Scr)、尿蛋白/尿肌酐(ACR)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白(LDL-C)、MDA、IL-1β、IL-6、TNF-α水平显著上升(P<0.001),脾脏系数、尿肌酐(Ucr)、高密度脂蛋白(HDL-C)、CAT、SOD、GSH水平明显降低(P<0.001),肾脏中α-SMA、TGF-β2、NLRP3、Caspase-1、1L-1β、 Keap1、 Nox4 mRNA及蛋白表达水平显著上升(P<0.01, P<0.001),肾脏中E-cadherin和Nrf2mRNA及蛋白表达水平显著降低(P<0.05,P<0.001)。与模型组比较,益气活血固肾颗粒组和二甲双胍组小鼠体质量、血糖、肝脏系数、肾脏系数、BUN、UAE、Scr、ACR、TG、TC、LDL-C、MDA、IL-1β、IL-6、TNF-α水平显著下降(P<0.05,P<0.01,P<0.001),脾脏系数、Ucr、HDL-C、CAT、SOD、GSH水平明显上升(P<0.05,P<0.01,P<0.001),肾脏中α-SMA、TGF-β2、NLRP3、Caspase-1、1L-1β、Keap1、Nox4的mRNA及蛋白表达水平显著下降(P<0.05,P<0.01,P<0.001),肾脏中E-cadherin和Nrf2的mRNA及蛋白表达水平显著升高(P<0.05,P<0.01,P<0.001)。结论 益气活血固肾颗粒可以通过调控Nox4介导的NLRP3/Caspase-1和Nrf2/Keap1信号通路抑制炎症和氧化应激,改善肾脏纤维化,从而达到治疗糖尿病肾病的效果。