关键词:
肾康注射液
糖尿病肾病
内质网应激
db/db小鼠
肾痿
摘要:
目的:探究肾康注射液通过葡萄糖调节蛋白78/转录因子C/EBP同源蛋白(GRP78/CHOP)信号通路调控内质网应激,减轻足细胞凋亡,延缓糖尿病肾病的作用机制。方法:动物实验选取10只12周龄db/m小鼠作为正常组,30只12周龄db/db小鼠随机分组为模型组、肾康注射液组(15.6 mL·kg^(-1))及达格列净组(1.6 mg·kg^(-1))。观察小鼠一般状况,给药前检测各组小鼠空腹血糖,尿白蛋白/尿肌酐比值(ACR)和24 h尿蛋白定量;药物干预12周后,检测小鼠空腹血糖,总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度胆固醇(LDL)、ACR、24 h尿蛋白定量、血肌酐(SCr)及血尿素(UREA);苏木素-伊红(HE)染色法、过碘酸雪夫(PAS)染色法和透射电镜观察肾组织病理形态;免疫组织化学法检测小鼠肾组织中裂孔膜蛋白(Nephrin)、GRP78、CHOP、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)的表达;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测小鼠肾组织GRP78、CHOP、Bcl-2、Bax和Nephrin蛋白的表达,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测小鼠肾组织中Nephrin、GRP78、CHOP、Bcl-2和Bax mRNA的表达水平。结果:给药前与正常组比较,肾康注射液组与达格列净组中db/db小鼠体质量明显升高、血糖、24 h尿蛋白定量、ACR均显著升高(P<0.01);给药12周,与模型组比较,肾康注射液组的小鼠一般状态明显改善,体质量呈下降趋势,血糖显著降低(P<0.01),血脂TC、TG和LDL明显降低(P<0.05,P<0.01),24 h尿蛋白定量、ACR均明显下降(P<0.05),SCr、UREA显著降低(P<0.01)。与模型组比较,肾康注射液组病理结果显示小鼠肾组织系膜细胞增生、炎症细胞浸润减少及肾小管空泡样变减轻,电镜显示足突融合和基底膜增厚减轻。免疫组织化学结果显示肾康注射液组的肾组织中GRP78、CHOP及Bax蛋白表达水平显著减少(P<0.01),Nephrin及Bcl-2蛋白表达量显著增加(P<0.01)。Western blot结果显示肾康注射液组Nephrin及Bcl-2表达明显增加(P<0.05,P<0.01),GRP78、CHOP及Bax的蛋白表达明显降低(P<0.05,P<0.01)。Real-time PCR结果显示,肾康注射液组GRP78、CHOP及Bax mRNA的表达下调(P<0.01),Nephrin及Bcl-2 mRNA的表达上调(P<0.01)。结论:肾康注射液通过调控GRP78/CHOP信号通路,抑制内质网应激反应及足细胞凋亡,减轻肾小球滤过屏障损伤,减少蛋白尿的发生,改善肾功能,从而延缓DKD进展。