关键词:
加味升降散
糖尿病肾病
线粒体自噬
PTEN诱导的激酶1(PINK1)/E3泛素蛋白连接酶(Parkin)
摘要:
目的:探讨加味升降散通过激活线粒体自噬来改善糖尿病肾病(DKD)的作用机制。方法:选取60只7~8周龄的SPF级SD雄性大鼠,采用高糖高脂饮食联合链脲佐菌素(STZ)腹腔注射建立DKD模型,模型建立后随机分为正常组,模型组,加味升降散低、中、高剂量组(7.7、15.4、30.8 g·kg^(-1))及厄贝沙坦组(0.384 g·kg^(-1)),每组予以等体积生理盐水和相应浓度药物灌胃,连续给药28 d。检测各组大鼠的血糖、体质量、肾脏质量,通过全自动血液分析仪测定血清中肌酐(SCr)、尿素氮(BUN)含量;酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定大鼠尿液中尿微量白蛋白(mALB)、血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素-6(IL-6)的含量;苏木素-伊红(HE)、过碘酸-雪夫(PAS)染色和透射电镜法观察肾脏组织的病理变化;蛋白免疫印迹法(Western blot)测定大鼠肾脏组织线粒体自噬相关蛋白的表达;免疫荧光共定位法检测微管相关蛋白1轻链3β(LC3B)和细胞色素C氧化酶亚基Ⅳ(COXⅣ)的共表达情况。结果:模型组大鼠与正常组比较,肾重指数、血糖及24 h mALB明显升高(P<0.05,P<0.01);SCr、BUN水平均显著升高(P<0.01),血清中的TNF-α、IL-1β和IL-6水平显著上调(P<0.01);大鼠的肾脏组织显示出肾小球肥大、系膜区增宽、系膜区沉积增多、足细胞足突扁平融合,自噬小体数量减少伴随线粒体肿胀,肾小管上皮细胞出现空泡变性,肾间质伴有炎症细胞浸润;肾脏组织中自噬标志蛋白LC3B、PTEN诱导的激酶1(PINK1)、E3泛素蛋白连接酶(Parkin)蛋白表达明显降低(P<0.05,P<0.01),选择性自噬接头蛋白(p62)表达显著增加(P<0.01);免疫荧光信号强度降低、LC3B与COXⅣ的共表达降低。与模型组比较,加味升降散各剂量组和阳性药组大鼠肾重指数、血糖及24 h mALB明显下降(P<0.05,P<0.01);SCr、BUN水平明显下降(P<0.05);血清中的TNF-α、IL-1β和IL-6水平明显降低(P<0.05,P<0.01);肾脏组织肾小球肥大减轻、系膜区沉积减少、足突融合减轻,自噬小体数量增多,线粒体肿胀得到改善;加味升降散各剂量组肾脏中的LC3 B、PINK1、Parkin蛋白表达量明显增加,p62蛋白表达明显减少(P<0.05,P<0.01);免疫荧光信号强度增强,LC3B与COXⅣ的共表达增加。结论:加味升降散通过调节PINK1/Parkin信号通路,激活线粒体自噬,缓解DKD大鼠体内炎症反应,发挥对肾脏的保护作用。