关键词:
马赛分枝杆菌
菌体蛋白
免疫原性
结核分枝杆菌
摘要:
目的 初步探讨马赛分枝杆菌菌体蛋白的免疫原性,以期为以马赛分枝杆菌为基础的免疫学方面的应用拓展奠定基础。方法 经超声破碎方式提取马赛分枝杆菌菌体蛋白,将获得的菌体蛋白单独或与DP佐剂[二甲基三十六烷基铵(dimo-thylidioctyl ammonium bromide,DDA)与聚肌胞苷酸(polyinosinic-polycytidylic acid,PolyI:C)混合]混合后,分别经皮下免疫雌性BALB/c小鼠,阴性对照组小鼠注射等量无菌PBS,每组8只,共免疫3次,间隔14 d;末次免疫后14 d,采血并取小鼠脾脏,ELISA法检测小鼠血清中IgG、IgG1和IgG2a抗体水平;Luminex技术检测小鼠致敏脾淋巴细胞分泌的IL-2、IFNγ、TNF-α、IL-12、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(granulocyte-macrophage colony stimulating factor,GM-CSF)、IL-17A、IL-4、IL-6和IL-10水平;流式细胞术检测小鼠脾淋巴细胞中中央记忆T细胞(central memory T cells,TCM)/IFNγ^(+)细胞的比例变化;生长抑制试验检测菌体蛋白免疫对结核分枝杆菌H37Rv在小鼠脾淋巴细胞内增殖的影响。结果 菌体蛋白及其与混合佐剂免疫小鼠均能诱导产生IgG、IgG1、IgG2a血清抗体。与阴性对照组相比,菌体蛋白及其与混合佐剂免疫小鼠组小鼠脾淋巴细胞IL-12分泌水平均无显著变化(0.60≤t≤2.41,P均>0.05),菌体蛋白混合佐剂免疫组小鼠脾淋巴细胞经菌体蛋白和结核菌素纯蛋白衍生物(purified protein derivative,PPD)刺激后分泌的IFNγ、TNF-α、IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、GM-CSF和IL-17水平均显著上升(3.77≤t≤23.46,P均<0.05);菌体蛋白免疫组小鼠脾淋巴细胞经菌体蛋白和PPD刺激后分泌的IL-2、IL-4水平均显著上升(5.36≤t≤13.26,P均<0.05),TNF-α水平仅在PPD刺激时显著增加(t=4.15,P<0.05),IL-10水平在刺激后显著下降(t分别为3.04、4.10,P均<0.05),IL-6水平仅在菌体蛋白刺激时显著增加(t=8.34,P<0.05)。与阴性对照组相比,菌体蛋白混合佐剂免疫组小鼠脾淋巴细胞经PPD和菌体蛋白刺激时,CD4^(+)TCM/IFNγ^(+)和CD8^(+)TCM/IFNγ^(+)细胞比例均显著增加(2.63≤t≤5.96,P均<0.05)。与阴性对照组相比,结核分枝杆菌H37Rv在菌体蛋白免疫及菌体蛋白混合佐剂免疫组小鼠脾淋巴细胞内的增殖差异无统计学意义(t分别为2.29、1.10,P均> 0.05)。结论 马赛分枝杆菌菌体蛋白具有良好的免疫原性,能诱导倾向Th2型的免疫反应,与增强细胞免疫反应的佐剂联用可提高其诱导细胞免疫反应的水平。