关键词： 糖尿病肾病   氧化应激   当归红芪超滤膜提取物   Keap1/Nrf2信号通路   大鼠  

摘要： 目的 观察当归红芪超滤膜提取物对糖尿病肾病（DKD）模型大鼠Keap1/Nrf2信号通路相关因子表达的影响，探讨其治疗DKD氧化应激损伤的作用机制。方法 70只SPF级雄性SD大鼠随机选取10只为空白组，其余60只高糖高脂饲料喂养4周后一次性腹腔注射链脲佐菌素制备DKD模型。将成模大鼠随机分为模型组、阳性对照组（GKT137831 30 mg/kg）和中药高、中、低剂量组（当归红芪超滤膜提取物6、3、1.5 g/kg），分别予相应药物灌胃，空白组和模型组予等体积纯净水灌胃，每日1次，连续12周。检测大鼠随机血糖、体质量及24 h尿蛋白含量（24 h-UTP），生化检测血肌酐（SCr）、血尿素氮（BUN）及血清三酰甘油（TG）、总胆固醇（TC）、白蛋白（ALB）含量，HE染色、Masson染色观察肾组织形态，ELISA检测血清活性氧（ROS）、谷胱甘肽（GSH）、丙二醛（MDA）含量，Western blot检测肾组织尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4(Nox4)、Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1(Keap1)、核因子E2相关因子2(Nrf2)、谷氨酸-半胱氨酸调节亚基（GCLM）、谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)蛋白表达。结果 与空白组比较，模型组大鼠各时点随机血糖明显升高（P<0.01）,24 h-UTP明显升高（P<0.01）,SCr、BUN及血清TG、TC含量明显升高（P<0.01）,ALB含量明显降低（P<0.01）；肾组织排列疏松，结构紊乱，肾小球固缩，肾小管上皮细胞脱落，胶原纤维沉积增多；血清ROS、MDA含量明显升高（P<0.01）,GSH含量明显下降（P<0.01）；肾组织Nox4、Keap1蛋白表达明显升高（P<0.01）,Nrf2、GCLM、GPX4蛋白表达明显降低（P<0.01）。与模型组比较，各给药组给药6、8、10、12周随机血糖降低（P<0.01）,24 h-UTP降低（P<0.01），阳性对照组和中药高、中剂量组SCr、BUN及血清TG、TC含量降低，ALB含量升高（P<0.01,P<0.05）；肾小管、肾小球病变均有改善，胶原纤维增生减少；血清ROS、MDA含量降低，GSH含量升高（P<0.01,P<0.05）；肾组织Nox4、Keap1蛋白表达降低（P<0.01）,Nrf2、GCLM、GPX4蛋白表达升高（P<0.01）。结论 当归红芪超滤膜提取物可有效减轻DKD大鼠肾组织损伤，其机制可能与调控Keap1/Nrf2信号通路，抑制氧化应激反应有关。

关键词： 宫颈癌   Pin1   细胞增殖   细胞凋亡   Akt   SREBP1  

摘要： 目的 探究下调肽基脯氨酰基顺反异构酶（Pin1）表达对宫颈癌细胞增殖和凋亡的影响及机制。方法 利用TNMplot在线平台、R2基因组学分析和可视化平台（R2）分析Pin1与固醇调节元件结合转录因子1(SREBP1)mRNA在正常宫颈组织和宫颈癌组织中表达情况及两者相关性；免疫组化法检测宫颈癌组织和宫颈炎组织的临床标本中Pin1与SREBP-1蛋白的表达情况并分析其相关性；Western blot检测宫颈癌细胞和正常宫颈上皮细胞中Pin1的表达量。实验分为对照组（sh-NC）、Pin1敲减组A(shPin1-A)和Pin1敲减组B(shPin1-B)，用慢病毒转染人子宫颈鳞癌细胞（SiHa）构建低表达Pin1的稳转细胞系，用Western blot测定细胞中Pin1的表达水平以验证转染效率。采用细胞计数试剂（CCK-8）和流式细胞术检测Pin1下调后SiHa细胞的增殖能力和凋亡水平。用Western blot检测细胞中蛋白激酶B(Akt)、磷酸化的蛋白激酶B(p-Akt)、SREBP1及凋亡和增殖相关蛋白Bax、Bcl-2和c-Myc的表达。结果 TNMplot和R2分析结果显示，相较正常宫颈组织，宫颈癌组织中Pin1和SREBP1的mRNA均呈高表达（P<0.05）。免疫组化结果显示，相较宫颈炎组织，宫颈癌组织中Pin1和SREBP1均高表达且两者呈正相关（r=0.652,P<0.05）。Western blot结果显示，Pin1蛋白在宫颈癌SiHa细胞中表达最高（P<0.05）。与sh-NC组比较，shPin1-A组和shPin1-B组Pin1、p-Akt、SREBP-1、c-Myc、BCL-2蛋白表达量减少（P<0.05）,Bax蛋白表达量增多（P<0.05）。与shNC组比较，shPin1-A组和shPin1-B组细胞增殖能力显著降低（P<0.05），细胞总凋亡率显著增加（P<0.05）。结论 下调Pin1可通过Akt/SREBP1信号轴抑制宫颈癌细胞的增殖，并诱导宫颈癌细胞凋亡，提示Pin1可能是治疗宫颈癌的潜在靶点。

关键词： 细胞角蛋白19   β-catenin   核转位   细胞增殖   宫颈癌   细胞周期  

摘要： 目的 研究细胞角蛋白19(KRT19)通过β-catenin调控宫颈癌细胞增殖的分子机制。方法 通过GEPIA在线数据库分析KRT19在宫颈癌等多种肿瘤组织中的表达情况。采用嘌呤霉素压力筛选获取KRT19稳定过表达的HeLa-KRT19细胞系和KRT19稳定干扰表达的SiHa-shKRT19细胞系，采用Western blot和细胞免疫化学检测细胞中KRT19、β-catenin和细胞周期相关蛋白Cyclin D1的表达，细胞计数、MTT、流式细胞术分别检测细胞增殖和细胞周期的变化。结果 GEPIA在线数据库分析的结果显示，KRT19在人宫颈癌患者肿瘤组织中高表达（P<0.05）。KRT19在HeLa细胞中低表达，在SiHa细胞中高表达；成功构建KRT19稳定表达的HeLa细胞系和干扰表达的SiHa细胞系。与HeLa-GFP相比，HeLa-KRT19细胞中β-catenin核转位增加，细胞周期相关蛋白Cyclin D1的表达上调（P<0.05）,G0/G1期的细胞比例减少（P<0.05），细胞增殖增加（P<0.05）；与SiHa-GFP相比，SiHa-shKRT19细胞中β-catenin核转位减少，细胞周期相关蛋白Cyclin D1的表达下调（P<0.05）,G0/G1期的细胞比例增加（P<0.05），细胞增殖降低（P<0.05）。结论 通过促进β-catenin的核转位，KRT19可以激活Cyclin D1蛋白的表达并促进宫颈癌细胞的体外增殖。

关键词： 人参皂苷Rd   Derlin-1   内质网应激   非酒精性脂肪性肝炎  

摘要： 目的：观察人参皂苷Rd对肝细胞Derlin-1/PERK/eIF2α/CHOP信号通路的影响，从而阐明其调控内质网应激治疗非酒精性脂肪性肝炎（NASH）的分子机制；方法：采用CCK8法检测人参皂苷Rd的肝细胞毒性，随后通过游离脂肪酸诱导HepG2构建NASH细胞模型，并给予人参皂苷Rd和内质网抑制剂进行干预。分别采用油红O染色、生化检测、免疫荧光、酶联免疫吸附试验、蛋白印迹法和实时荧光定量PCR检测人参皂苷Rd对甘油三酯、肝功能、氧化应激、细胞因子和Derlin-1/PERK/eIF2α/CHOP信号通路中关键分子表达的影响；结果：与模型组相比，人参皂苷Rd能够显著抑制HepG2细胞中TG的含量和AST与ALT的水平，增加GSH的含量和SOD的活性，降低MDA的含量和ROS的平均荧光强度，差异均具有统计学意义（P＜0.01）。此外，人参皂苷Rd能够显著抑制HepG2细胞中TNF-α、IL-1β、CCL2和CXCL1的含量，下调ATF4、CHOP蛋白的表达和降低p-PERK/PERK和p-eIF2α/eIF2α的比值，与模型组比较，差异均具有统计学意义（P＜0.01）。不仅如此，人参皂苷Rd干预还能显著抑制Derlin-1蛋白和mRNA的表达，与模型组比较，差异均具有统计学意义（P＜0.01）；结论：人参皂苷Rd通过抑制Derlin-1/PERK/eIF2α/CHOP信号通路的激活，从而抑制内质网应激，达到治疗NASH的作用。

关键词： 骨关节炎   膝   软骨   关节   骨形态发生蛋白质2   软骨寡聚基质蛋白质   白细胞介素1   白细胞介素6   肿瘤坏死因子α  

摘要： 目的分析膝骨关节炎（KOA）合并软骨损伤患者血清骨形态发生蛋白-2（BMP-2）、软骨寡聚基质蛋白（COMP）水平与关节功能和全身炎症反应的关系。方法该研究为回顾性分析。选择烟台毓璜顶医院2022年1月至2023年12月收治的KOA患者258例为研究对象，所有患者行关节镜检查，根据是否合并软骨损伤，将118例合并软骨损伤的患者纳入A组，将140例未合并软骨损伤的患者纳入B组，比较两组关节功能（WOMAC骨性关节炎指数、lysholms膝关节功能评分）、血清BMP-2、COMP、全身炎症反应［白细胞介素（IL）-1、IL-6、肿瘤坏死因子α（TNF-α）水平］，并绘制受试者工作特征（ROC）曲线分析血清BMP-2、COMP水平对KOA合并软骨损伤的诊断效能，并采用Pearson相关性分析上述血清指标与患者WOMAC骨性关节炎指数、lysholms膝关节功能评分以及血清IL-1、IL-6、TNF-α水平间的相关性。结果A组血清BMP-2水平、lysholms膝关节功能评分均明显低于B组［（9.18±1.65）ng/L比（11.43±2.51）ng/L，t=8.34、P < 0.001；（80.06±8.34）分比（86.94±7.21）分，t=7.11、P < 0.001］，A组血清COMP、IL-1、IL-6、TNF-α水平及WOMAC骨性关节炎指数均高于B组，差异均有统计学意义［（6.88±2.34）μg/L比（5.04±1.01）μg/L，t=-8.34、P < 0.001；（43.18±7.81）ng/L比（35.96±5.02）ng/L，t=-8.96、P < 0.001；（34.03±6.68）ng/L比（28.75±5.61）ng/L，t=-6.90、P < 0.001；（13.17±1.89）ng/L比（11.24±1.01）ng/L，t=-10.44、P < 0.001；（137.18±18.95）比（121.14±13.58），t=-7.90、P < 0.001］。ROC曲线分析显示，血清BMP-2、COMP水平对KOA合并软骨损伤诊断的ROC曲线下面积（AUC）分别为0.773、0.811；Pearson相关性分析显示患者血清BMP-2水平与WOMAC骨性关节炎指数和血清IL-1、IL-6、TNF-α水平间呈负相关（r=-0.52、-0.42、-0.40、-0.57，均P < 0.05），与lysholms膝关节功能评分呈正相关（r=0.51，P < 0.05）；患者血清COMP水平、WOMAC骨性关节炎指数与血清IL-1、IL-6、TNF-α水平间呈正相关（r=0.48、0.45、0.37、0.54，P < 0.05），与lysholms膝关节功能评分呈负相关（r=-0.51，P < 0.05）。结论血清BMP-2、COMP水平对KOA合并软骨患者具有一定诊断价值，上述指标水平与关节功能和全身炎症反应间均有一定相关性，有望成为临床判断KOA患者病情进展的指标。

关键词： 人参皂苷Rd   非酒精性脂肪性肝炎   巨噬细胞极化   炎症反应  

摘要： 目的：本研究旨在阐明人参皂苷Rd对巨噬细胞TLR4/TRAF6/NF-κB/iNOS通路及M1型极化的影响，从而明确其治疗非酒精性脂肪性肝炎（NASH）的分子机制；方法：小鼠单核巨噬细胞白血病细胞RAW264.7随机分为空白组、模型组、人参皂苷Rd低剂量、高剂量组和抑制剂组。除空白组外，余下各组采用脂多糖诱导构建模型后给予相应的药物进行干预。分别采用酶联免疫吸附试验检测炎症因子（TNF-α、IL-6和IL-1β的）的含量；采用流式细胞术检测M1型巨噬细胞的百分比；采用蛋白印迹法和生化法检测TLR4/TRAF6/NF-κB/iNOS通路、自噬、ROS/p38/Nrf2通路中相关分子的表达；采用透射电镜检测巨噬细胞自噬水平的变化；结果：与模型组相比，人参皂苷Rd组中炎症因子TNF-α、IL-6和IL-1β的含量和M1型巨噬细胞的比例均显著降低，TLR4、TRAF6、iNOS和细胞核p65蛋白的表达显著下调，细胞质p65蛋白的表达显著上调，差异均具有统计学意义（P＜0.01）。此外，人参皂苷Rd能显著增加巨噬细胞中SOD的活力和GSH的含量，降低MDA的含量，上调巨噬细胞中Beclin1蛋白的表达和LC3II/LC3I的比值，下调细胞质p62、Nrf2蛋白的表达和p-p38/p38的比值，下调p-p38/p38的比值和Nrf2蛋白的表达，与模型组比较差异均具有统计学意义（P＜0.01）。结论：人参皂苷Rd通过抑制TLR4/TRAF6/NF-κB/iNOS通路的激活从而抑制巨噬细胞M1型极化，从而改善NASH相关性炎症。此外，人参皂苷Rd还通过抑制ROS/P38/Nrf2轴促进自噬，从而抑制巨噬细胞M1型极化，增加抗炎效果。