关键词： 缺血性脑卒中   Bcl-2家族蛋白   细胞凋亡   中药单体   中药复方  

摘要： 缺血性脑卒中（ischemic stroke,IS）作为一种常见的脑血管疾病，其发病机制与脑部供血不足导致的脑细胞死亡密切相关。近年来，细胞凋亡已成为IS发病机制相关研究的热点。凋亡相关蛋白B淋巴细胞瘤-2（B-cell lymphoma-2,Bcl-2）家族作为调控凋亡的关键因子，主要参与内源性凋亡途径，介导线粒体膜通透性和Ca2+超载2种途径调控细胞凋亡，延缓IS的发病进程。因此该文以Bcl-2家族蛋白抗细胞凋亡为切入点，从Bcl-2家族蛋白结构特点、在IS中的抗凋亡作用、中医药调节等方面对中医药调控Bcl-2家族蛋白抗细胞凋亡防治IS的相关研究进行归纳梳理分析。结果显示，IS抗凋亡机制研究主要集中于调控Bcl-2和Bax 2种蛋白，其治疗主要以中药单体、中药提取物和中药复方为主，这些发现进一步证实了中医药防治IS的巨大潜力，为今后IS实验研究与临床治疗提供理论依据。

关键词： 胃癌前病变   细胞凋亡   细胞自噬   细胞焦亡   铁死亡   中医药  

摘要： 胃癌前病变（gastric precancerous lesions，GPL）是具有黏膜恶变可能的黏膜病理学改变，是胃癌二级预防的关键。中医药治疗GPL有其独特优势，在中医理论体系指导下，临床辨证论治疗效显著。GPL发病机制尚未完全阐明，揭示疾病治疗靶点及药物疗效机制是当前的热点及难点问题。细胞程序性死亡（programmed cell death，PCD）在GPL发生发展中起着重要作用，细胞凋亡、焦亡、自噬、铁死亡等PCD方式参与了疾病的进展。近年来愈来愈多的研究基于调控PCD程序探讨中医药治疗GPL的作用机制，结果显示中医药可以通过调控PCD过程关键基因、蛋白及相关信号因子表达抑制正常胃组织细胞恶性转化，促进恶变细胞死亡，实现黏膜局部微环境的改善和逆转。本文对近5年中医药调控PCD治疗GPL进展进行综述，以期为本病进一步药物靶点机制研究提供参考依据和新方向。

关键词： 骨髓间充质干细胞   糖尿病   骨质疏松   成骨分化   程序性细胞死亡受体1   Wnt/β-catenin信号通路   工程化组织构建  

摘要： 背景:程序性细胞死亡受体1属于免疫球蛋白基因超家族,可以调控成骨细胞分化、影响骨稳态,然而其在糖尿病性骨质疏松中的调控作用及机制尚不明确. 目的:探讨程序性细胞死亡受体1对高糖环境下大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化的调控作用及机制. 方法:①动物实验:采用随机数字法将12只SD大鼠随机分为对照组(n=6)与模型组(n=6),对照组常规喂养,模型组腹腔注射链脲佐菌素建立1型糖尿病模型,高脂饲料喂养8周建立1型糖尿病性骨质疏松模型.喂养8周后,取2组大鼠股骨,分别进行苏木精-伊红染色、micro-CT检测与程序性细胞死亡受体1、程序性细胞死亡配体1 mNRA表达.②细胞实验:将第3代大鼠骨髓间充质干细胞随机分4组处理:正常对照组、高糖模型组加入低糖培养基,PD-1沉默组转染程序性细胞死亡受体1 siRNA,PD-1沉默空载组转染siRNA-NC.转染48 h后,正常对照组更换为新的低糖培养基,高糖模型组、PD-1沉默组、PD-1沉默空载组更换为高糖培养基,培养48 h后进行成骨诱导培养.成骨诱导21 d后,分别进行茜素红染色、qRT-PCR(程序性细胞死亡受体1、RUNX2 mRNA表达)与Western blot(β-catenin、GSK-3β、p-GSK-3β与Axin2 蛋白表达)检测. 结果与结论:①动物实验:苏木精-伊红染色与micro-CT检测结果显示,模型组大鼠1型糖尿病骨质疏松造模成功.qRT-PCR检测结果显示,模型组程序性细胞死亡受体1、程序性细胞死亡配体1 mRNA表达均高于对照组(P<0.05).②细胞实验:茜素红染色结果显示,高糖模型组、PD-1沉默空载组矿化结节形成能力低于对照组、PD-1沉默组.与正常对照组比较,高糖模型组、PD-1沉默空载组程序性细胞死亡受体1 mRNA表达及GSK3β、Axin2蛋白表达均升高(P<0.05),RUNX2 mRNA表达及p-GSK3β、β-catenin蛋白表达均降低(P<0.05);与高糖模型组、PD-1沉默空载组比较,PD-1沉默组程序性细胞死亡受体1 mRNA表达及GSK3β、Axin2蛋白表达均降低(P<0.05),RUNX2 mRNA表达及p-GSK3β、β-catenin蛋白表达均升高(P<0.05).③结果表明:沉默程序性细胞死亡受体1表达可通过激活Wnt/β-catenin信号通路促进高糖条件下大鼠骨髓间充质干细胞的成骨分化.

关键词： 非酒精性脂肪性肝病   细胞焦亡   细胞凋亡   caspase-3   串扰  

摘要： 非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)是全球肝病的主要原因，包括非酒精性脂肪肝(nonalcoholic fatty liver,NAFL)、非酒精性脂肪性肝炎(non-alcoholic steatohepatitis,NASH)和晚期纤维化，可导致肝硬化，最终发展为肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)。研究表明，肝脏中脂肪酸过度累积会引发一系列肝细胞死亡并加剧NAFLD的进展，其中细胞焦亡(pyroptosis)与细胞凋亡(apoptosis)被视为NAFLD进展的关键事件。新近研究发现，半胱天冬酶-3(cysteinyl aspartate specific proteinase,Caspase-3)是调控NAFLD中细胞焦亡和凋亡的关键枢纽，活化的caspase-3不仅直接导致细胞凋亡，还可切割焦孔素E(gasdermin E,GSDME)的N端结构域，破坏细胞膜释放炎症因子介导细胞焦亡。抑制NAFLD中caspase-3的表达可减缓肝细胞中细胞损伤(如肝细胞气球样变)、促炎信号传导以及细胞凋亡水平，caspase-3可能是调控肝细胞焦亡和凋亡的关键，有望成为NAFLD防治的新靶点。

关键词： 电离辐射   肝细胞   衰老   氧化应激   核因子-κB  

摘要： [目的]探讨较低剂量X射线分次辐射诱导L02肝细胞衰老及其对氧化应激、氧化损伤和核因子-κB（NF-κB）通路蛋白等水平影响。[方法]分别采用0.1 Gy、0.2 Gy和0.5 Gy的X射线辐照L02细胞6次结束后24 h，检测细胞SA-β-gal染色、衰老基因（p53、p21）mRNA和蛋白、衰老相关分泌表型因子（IL-6、IL-8、GM-CSF、MMP-15）mRNA、活性氧（ROS）、氧化-抗氧化(MDA、GSH、SOD)、DNA氧化损伤( 8-OHdG、γ-H2AX)和NF-κB通路蛋白的水平变化。[结果]与对照组相比，辐照6次结束后24 h，各剂量组SA-β-gal染色阳性细胞数均显著增加，0.2 Gy×6和0.5 Gy×6剂量组p21、p53 mRNA和蛋白水平均显著升高（P < 0.05）；各剂量组IL-6、GM-CSF和MMP-15 mRNA水平均显著升高（P < 0.05）；0.2 Gy×6和0.5 Gy×6组IL-8 mRNA水平显著升高（P < 0.05）；各剂量组细胞ROS、MDA和GSH水平均显著升高（P < 0.01），0.5 Gy×6组SOD水平显著升高（P < 0.01）；各剂量组8-OHdG水平均显著升高（P < 0.05）；0.2 Gy×6和0.5 Gy×6组γ-H2AX表达水平和p-NF-κB p65蛋白水平均显著升高（P < 0.05），IκBα蛋白水平均显著降低（P < 0.05）。[结论]较低剂量X射线分次辐射可诱导L02肝细胞衰老并引起氧化应激、氧化损伤和NF-κB通路蛋白等水平改变。

关键词： 清毒稳心方   阿霉素心脏毒性   STING   炎症   敲除鼠  

摘要： 探究清毒稳心方对阿霉素诱导的心脏毒性的保护作用和机制，以及对环鸟苷酸-腺苷酸合成酶（cGAS）/干扰素刺激基因（STING）/核转录因子-κB（NF-κB）信号通路的调节作用。C57BL/6J小鼠随机分为对照组，模型组，普伐他汀组(40 mg·kg-1)，清毒稳心方低(1.3 g·kg-1)、中(2.6 g·kg-1)、高(5.2 g·kg-1)组，每组6只。采用尾静脉注射阿霉素的方法构建阿霉素诱导的心脏毒性（DIC）小鼠模型，造模后各组连续灌胃4周。取材后采用超声、乳酸脱氢酶（LDH）、肌钙蛋白（TNⅠ）评估其心功能，苏木精-伊红（HE）和马松（Masson）染色评估心肌组织病理情况，逆转录聚合酶链式反应检测法（RT-qPCR）检测心脏组织炎症因子白细胞介素（IL）-6、肿瘤坏死因子（TNF）-α和IL-1β炎性因子的相对表达量，网络药理学和分子对接预测清毒稳心方与DIC的关键通路，Western blot检测心肌组织STING蛋白表达。随后使用STING敲除(STINGKO)鼠构建表达抑制模型，进一步验证STING通路相关蛋白表达变化和炎症表达。结果显示，C57BL/6J动物实验中，清毒稳心方低、中、高剂量能够不同程度升高EF、FS，降低心肌损伤标志物LDH和TNⅠ，降低心脏组织中IL-6、IL-1β、TNF-α炎症mRNA水平，HE和Masson染色显示炎性细胞明显减少，心肌细胞排列较为整齐，血管周围纤维化面积减轻，其中清毒稳心方高剂量组改善效果最佳；通过网络药理学和分子对接预测清毒稳心方与DIC的关键通路是STING通路；清毒稳心方组上调磷酸化STING（p-STING）/STING蛋白。在STINGKO鼠实验中，野生型（WT）小鼠与C57BL/6J小鼠心功能评价和炎症指标检测结果一致，清毒稳心方组下调磷酸化TANK 结合激酶 1（p-TBK1）、磷酸化干扰素调节因子 3（p-IRF3）、磷酸化核因子 κB（p-NF-κB）蛋白；STINGKO组中，清毒稳心方组与模型组相比差异无统计学意义，WT组和STINGKO组模型组相比有显著差异。上述结果表明，清毒稳心方能有效减轻阿霉素诱导的心脏毒性，其机制可能与抑制cGAS/STING/NF-κB通路的炎症反应相关。

关键词： 2型糖尿病   电针   胰岛素抵抗   肠黏膜屏障   胰高血糖素样肽-1受体(GLP-1R)/蛋白激酶A(PKA)通路  

摘要： 目的：观察电针对2型糖尿病（T2DM）大鼠结肠组织胰高血糖素样肽-1受体（GLP-1R）/蛋白激酶A（PKA）信号通路的影响，探讨电针改善T2DM胰岛素抵抗及肠黏膜屏障损伤的相关机制。方法：24只SPF级雄性Wistar大鼠中，随机选取6只作为空白组，剩余18只制备T2DM大鼠模型，将造模成功的大鼠随机分为模型组、电针组与电针+抑制剂组，每组6只。电针组予电针干预，穴取“天枢” “上巨虚” “脾俞” “胃脘下俞”，同侧“上巨虚”“胃脘下俞”连接电针仪，选择疏密波，频率2 Hz/50 Hz，电流1-3 mA，每次20 min。电针+抑制剂组予电针联合腹腔注射GLP-1R抑制剂艾塞那肽，电针干预同电针组。均每日1次，每周6次，干预6周。检测各组大鼠造模前及干预前后空腹血糖（FBG）。干预后，采用ELISA法检测大鼠血清空腹胰岛素（FINS）及胰高血糖素样肽-1（GLP-1）含量，并计算胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）；HE染色法观察大鼠结肠形态；免疫组织化学法检测大鼠结肠闭锁小带蛋白-1（ZO-1）、闭锁蛋白（Occludin）的阳性表达；Western blot法检测大鼠结肠GLP-1R、PKA、GLP-1、ZO-1、Occludin蛋白表达。结果：干预后，与空白组比较，模型组大鼠FBG、血清FINS含量、HOMA-IR升高（P < 0.01），血清GLP-1含量降低（P < 0.01），结肠黏膜上皮细胞脱落，隐窝萎缩，杯状细胞数量明显减少，固有层可见炎性细胞浸润，结肠ZO-1、Occludin阳性表达降低（P < 0.01，P < 0.05），结肠GLP-1R、PKA、GLP-1、ZO-1、Occludin蛋白表达降低（P < 0.05，P < 0.01）；与模型组和电针+抑制剂组比较，电针组大鼠FBG、血清FINS含量、HOMA-IR降低（P < 0.01），血清GLP-1含量升高（P < 0.01），结肠炎性细胞浸润减轻，杯状细胞数量及黏膜上皮、隐窝结构趋于正常，结肠ZO-1、Occludin阳性表达升高（P < 0.05，P < 0.01），结肠GLP-1R、PKA、GLP-1、ZO-1、Occludin表达升高（P < 0.05，P < 0.01）。结论：电针可以降低T2DM大鼠血糖水平，改善胰岛素抵抗，修复肠黏膜屏障损伤，其机制可能与激活GLP-1R/PKA信号通路有关。

关键词： calcium homeostasis   calcium pump   BON   autoinhibition   calmodulin  

摘要： Plasma membrane-localized autoinhibited Ca2+ pumps are essential for maintaining basal cytosolic Ca2+ levels for regulating growth processes and environmental responses. These pumps are known to be activated by calmodulins to maintain Ca2+ homeostasis in plants and animals. Here, we demonstrate that the evolutionarily conserved copine protein BON1 is critical for maintaining low cytosolic Ca2+ concentrations by directly regulating two plasma membrane-localized Ca2+ pumps ACA8 and ACA10 inArabidopsis. BON1 interacts with a region within the N-terminal domain of ACA8 and ACA10, preceding the calmodulin binding sites, and stimulates ACA8 activity. This activation can occur without calmodulin binding, indicating that BON1 and calmodulin independently regulate the Ca2+ pump. Loss of BON1 function results in elevated basal cytosolic Ca2+ concentrations, which can be partially rescued by overexpressing hyperactive ACA8 or ACA10. Furthermore, we show that BON1 has one high-affinity Ca2+ binding in the VWA domain that is critical for activation of ACA8 as well as for BON1 function, suggesting a feedback mechanism for Ca2+ homeostasis at resting concentrations. Our findings suggest that this Ca2+ responsive regulatory mechanism extends beyond Arabidopsis, as we show interactions between ACA and BON proteins from algae flowering plants, pointing to an ancient regulatory mechanism for maintaining basal cytosolic Ca2+. Notably, a human plasma membrane-localized autoinhibited Ca2+ pump can also be activated by a human BON protein in a yeast functional assay system, suggesting evolutionary conservation in Ca2+ regulation across species.

关键词： 六君子汤   癌相关成纤维细胞   TGF-β/Smad2   细胞凋亡   食管癌  

摘要： 目的：肿瘤相关成纤维细胞（cancer-associated fibroblasts， CAFs）是肿瘤组织中被癌细胞激活的成纤维细胞，具有成肌纤维细胞的特性。CAFs可以为肿瘤细胞提供营养支持和侵袭通道，从而帮助肿瘤细胞的增殖、侵袭和转移。本文观察六君子汤对食管癌相关CAFs凋亡的影响，并探讨其分子机制，为六君子汤治疗食管癌的临床应用提供实验依据。方法： 1 MTT法检测不同浓度六君子汤对CAFs活性的影响。2 MTT法检测不同浓度TE-1条件培养基（即TE-1M）对CAFs活性的影响。3 Elisa检测六君子汤对各分组CAFs分泌转化生长因子-β1（TGF-β1）的影响。4 流式细胞术检测各分组CAFs凋亡水平。5 RT-qPCR检测六君子汤对各分组CAFs凋亡相关分子mRNA的表达水平的影响。6 Western Blot法检测六君子汤对各分组CAFs凋亡相关分子蛋白的表达水平的影响。结果： 1 MTT检测结果显示：与空白组相比，50μg/mL的六君子汤对CAFs的活性抑制无明显影响，其他浓度组对CAFs的活性均有抑制作用（P＜0.05）。2 MTT检测结果显示：与空白组相比，10%、20%和30%TE-1M对CAFs的增殖具有促进作用，其中20%浓度的TE-1M对CAFs的增殖作用最显著（P＜0.001），40%TE-1M（P＜0.05）及50%TE-1M（P＜0.01）对CAFs的增殖有明显的抑制作用。3 Elisa法检测结果显示：与空白组相比，模型组CAFs分泌TGF-β1含量下降（P＜0.001）；与模型组相比，六君子汤组TGF-β1含量显著升高（P＜0.001）；与六君子汤组相比，抑-六君子汤组（SB-431542抑制剂+六君子汤组）TGF-β1含量降低（P＜0.001）。4 流式细胞术检测结果显示：与空白组相比，模型组凋亡率无明显差异；与模型组相比，六君子汤组凋亡率显著升高（P＜0.001）；与六君子汤组相比，抑-六君子汤组凋亡率明显下降（P＜0.001）。5 PCR检测结果显示：与空白组相比，模型组Smad2、FAP基因表达升高（P＜0.01，P＜0.001）；与模型组相比，六君子汤组Smad2、Caspase3和FAP表达显著升高（P＜0.05，P＜0.01，P＜0.001）；与六君子汤组相比，抑-六君子汤组Smad2、Caspase3和FAP明显下降（P＜0.05，P＜0.001）。6 Western Blot检测结果显示：与空白组相比，模型组Smad2蛋白表达水平下降（P＜0.01）；与模型组相比，六君子汤组Smad2和Caspase3表达显著升高（P＜0.001），FAP蛋白表达水平升高（P＜0.05）。与六君子汤组相比，抑-六君子汤组Smad2、Caspase3明显下降（P＜0.01），FAP蛋白表达下降（P＜0.05）。结论：与食管癌细胞间接共培养条件下通过抑制TGF-β1/Smad2通路促进CAFs增殖；六君子汤可以通过TGF-β1/Smad2通路诱导CAFs凋亡。