关键词:
胶质母细胞瘤
木犀草素
活性氧
NF-E2相关因子2
磷脂氢过氧化物谷胱甘肽过氧化物酶
细胞凋亡
GPX4
摘要:
目的 探究木犀草素(Lut)通过核因子红细胞2相关因子2(NFE2L2)/胱氨酸-谷氨酸逆向转运蛋白(xCT)/谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)信号轴调控活性氧(ROS)水平,对胶质母细胞瘤的活力及细胞凋亡的影响。方法体外培养U87 MG和U251细胞,CCK-8实验检测不同浓度(0、6.25、12.5、25、50、100μmol/L)Lut处理48 h的细胞存活率,将48 h的半数抑制浓度作为后续实验统一处理浓度,根据细胞是否使用Lut处理,分为U87 Control组和U87 Lut组,U251 Control组和U251 Lut组;流式细胞术双染法检测细胞凋亡情况;DCFH-DA法检测细胞ROS水平变化;使用AutoDock软件验证Lut与氧化应激通路相关蛋白x-CT、GPX4、NFE2L2分子对接情况;实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测NFE2L2、GPX4 mRNA水平;Western blot法检测NFE2L2、x-CT、GPX4蛋白表达水平。结果 U87 MG和U251细胞经Lut处理48 h,细胞活力明显受到抑制作用,且随着Lut浓度增加,细胞活力降低(P<0.05);分别与U87 Control组和U251 Control组相比,U87 Lut组和U251 Lut组细胞凋亡率升高,绿色荧光强度增强,细胞内ROS水平上调(P<0.05);分子对接结果显示,Lut与NFE2L2、x-CT以及GPX4结合紧密。RT-qPCR和Western blot结果显示,分别与U87 Control组和U251 Control组比较,U87 Lut组和U251 Lut组细胞NFE2L2、GPX4蛋白和mRNA水平,x-CT蛋白表达水平降低(P<0.05)。结论 Lut通过NFE2L2/x-CT/GPX4信号轴调控ROS水平,抑制胶质母细胞瘤的活力并促进细胞凋亡。